Inativação de Adenovírus Entérico e Calicivírus Felino Por Dióxido de Cloro - Microbiologia Aplicada e Ambiental

03/05/2023, 09:36 Inativação de Adenovírus Entérico e Calicivírus Felino por Dióxido de Cloro | Microbiologia Aplicada e Ambiental
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ABSTRATO
Experimentos de inativação de dióxido de cloro (ClO 2 ) foram conduzidos com adenovírus tipo 40 (AD40) e
calicivírus felino (FCV). Os experimentos foram realizados em água tamponada e livre de demanda de
desinfetante sob condições de pH e temperatura alto e baixo. Os valores de Ct (a concentração de
ClO 2 multiplicada pelo tempo de contato com o vírus) foram calculados diretamente a partir de
experimentos em escala de bancada e da aplicação do modelo de fator de eficiência Hom (EFH). Os
intervalos AD40 Ct para inativação de 4 log ( Ct 99,99% ) a 5°C foram >0,77 a <1,53 mg/litro × min e
>0,80 a <1,59 mg/litro × min para pH 6 e 8, respectivamente. Para experimentos AD40 de 15°C, >0,49
a <0,74 mg/litro × min e <0,12 mg/litro × min CtFaixas de 99,99% foram observadas para pH 6 e 8,
respectivamente. As faixas de FCV Ct 99,99% para experimentos a 5°C foram >20,20 a <30,30 mg/litro
× min e >0,68 mg/litro × min para pH 6 e 8, respectivamente. Para experimentos de FCV a 15°C, as
faixas de Ct 99,99% foram >4,20 a <6,72 e <0,18 mg/litro × min para pH 6 e 8, respectivamente. A inativação viral foi
maior em pH 8 do que em pH 6 e em 15°C do que em 5°C. A comparação dos valores de Ct e das
curvas de inativação demonstrou que o modelo EFH descreveu muito bem os dados do
experimento em escala de bancada. As faixas Ct 99,99% observadas em escala de bancada e os
valores Ct 99,99% do modelo EFH demonstraram que o FCV é mais resistente a ClO 2do que AD40
para as condições estudadas. Manual de orientação da Agência de Proteção Ambiental dos EUA Os
valores de Ct 99,99% são superiores aos valores de Ct 99,99% calculados a partir de experimentos em
escala de bancada e da aplicação do modelo EFH.
De acordo com os Padrões Nacionais de Água Potável Primária da Agência de Proteção Ambiental
dos EUA (EPA), os vírus entéricos devem ser removidos ou inativados em 4 toras (99,99%) da fonte
de água por filtração e desinfecção ou por uma combinação dessas tecnologias (48 ) . Os patógenos
virais podem contornar os processos convencionais de filtração devido ao seu pequeno tamanho,
https://journals.asm.org/doi/10.1128/aem.71.6.3100-3105.2005 1/25
tornando a desinfecção uma importante barreira de tratamento entre os consumidores de água

potável e a gastroenterite viral. Embora o cloro seja o desinfetante mais comum nos Estados Unidos
para o tratamento de água potável e águas residuais, são necessários desinfetantes alternativos para
reduzir patógenos altamente resistentes ao cloro, como o Cryptosporidium parvum . A desinfecção
com luz UV é eficaz na redução de oocistos de Cryptosporidium (6 , 34 ), sendo, portanto, um
desinfetante alternativo atraente ao cloro para tratamento de água potável. Evidências recentes, no
entanto, mostraram que a luz ultravioleta é ineficaz na redução do adenovírus entérico em doses
comumente aplicadas por sistemas de tratamento de água ( 45 ). Além disso, a desinfecção da água
com luz ultravioleta não deixa resíduos para proteção da água potável depois que ela sai da estação
de tratamento. Para reduzir efetivamente os vírus em 99,99% e manter um desinfetante residual no
sistema de distribuição, é necessário um desinfetante secundário.
ClO 2 é uma alternativa ao cloro como desinfetante primário ou pode servir como desinfetante
secundário para sistemas de tratamento UV. As vantagens da desinfecção com ClO 2 incluem (i)
oxidação de ferro e manganês (reduz a descoloração da água finalizada), (ii) sem formação de
trialometano, (iii) sem reação com amônia, (iv) menos afetado pelas condições de pH típicas da
água potável do que o cloro, (v) um residual relativamente persistente, e (vi) redução de sabores e
odores causados por compostos orgânicos e sulfurosos ( 1 , 5 ). Desvantagens do ClO 2desinfecção
incluem (i) formação de haletos orgânicos, (ii) formação de clorito e clorato, e (iii) produção de
gosto e odores em concentrações de >0,5 mg/litro (5 ) . No entanto, este forte oxidante é uma
alternativa útil e atraente ao cloro pelas vantagens listadas acima e sua capacidade aumentada
relatada de reduzir microorganismos patogênicos na água. Estudos anteriores relataram que o ClO
2 efetivamente inativa vários vírus na água e esgoto ( 14 , 21 , 39 , 43 ), mas informações limitadas

estão disponíveis sobre a redução de calicivírus e adenovírus na água potável.
A EPA, mandatada pela Lei da Água Potável Segura, publicou a Lista de Candidatos a
Contaminantes de Água Potável (CCL) em 1998 ( 12 ). Esta lista inclui contaminantes químicos e
microbianos que são conhecidos ou previstos para ocorrer em sistemas públicos de água. Esses
contaminantes estão sob consideração regulatória, uma vez que pouca ou nenhuma informação
sobre saúde, consumo, tratamento de águas residuais ou metodologia analítica está disponível
atualmente. Vírus entéricos e calicivírus estão incluídos no CCL e foram investigados neste estudo.
Membros do gênero calicivírus humano, norovírus (NVs), são a principal causa de gastroenterite
aguda não bacteriana ( 11 , 28 ) e foram identificados como agentes etiológicos de surtos de

veiculação hídrica ( 20 , 29 , 31 , 32 ). Os calicivírus variam em diâmetro de 27 a 40 nm e possuem
um genoma de RNA de fita simples e uma estrutura de capsídeo icosaédrica. Os sintomas

comumente relatados incluem diarréia e vômito. Surtos anteriores causados por gelo contaminado
por NV e moluscos cozidos sugeriram que esses vírus são capazes de resistir a condições
ambientais adversas ( 16). Sua capacidade de resistir às práticas atuais de desinfecção de água
potável é amplamente desconhecida, uma vez que não existem sistemas conhecidos de cultura de
células de animais ou mamíferos que determinem a infectividade de NV. Devido a essas
dificuldades, dois estudos alternativos, um estudo de alimentação humana e um estudo baseado
em PCR, foram realizados anteriormente ( 30 , 41 ). No entanto, resultados conflitantes entre esses

estudos dificultaram as conclusões sobre a resistência NV ao cloro. Mais recentemente, um
substituto de NV, o calicivírus felino (FCV), tem sido usado como substituto para a inativação de NV
em vários estudos de desinfecção ( 9 , 36 , 42 , 44 , 45 ). Como o FCV tem organização genômica ( 7
,26 ) e arquitetura do capsídeo ( 38 ) semelhante à dos NVs e pode ser facilmente cultivada em
cultura de células, é um substituto apropriado para NV. Os experimentos de inativação de cloro
realizados com FCV resultaram em conclusões semelhantes às relatadas no estudo baseado em NV

PCR. Os resultados desses dois estudos sugerem que o cloro é eficaz na redução desses calicivírus
em 4 logs em concentrações de cloro comumente aplicadas ( 44 ).
Como NVs, os adenovírus entéricos, adenovírus entérico 40 (AD40) e AD41, também são causas
importantes de gastroenterite aguda autolimitada, especialmente em crianças <4 anos de idade (23
) . Variando de 70 a 90 nm de tamanho, esses vírus são consideravelmente maiores que os norovírus
e sua estrutura de capsídeo é complexa. O icosaedro do adenovírus contém 240 hexônios, 12
pentons e 12 fibras que se estendem de cada base do penton; seu genoma consiste em DNA linear
de fita dupla. Os adenovírus entéricos são eliminados em grande número nas fezes ( 2 ), são
normalmente eliminados nas fezes por longos períodos e a infecção pode ser causada por um baixo
número de partículas virais ( 16 , 23). Os adenovírus entéricos têm maior estabilidade ambiental do
que outros vírus entéricos ( 10 ), portanto, sua presença no esgoto e nas águas superficiais os torna
prováveis contaminantes no abastecimento público de água ( 24 , 25 ). Além disso, adenovírus e
norovírus entéricos foram identificados como dois dos agentes etiológicos causadores de
gastroenterite aguda em um surto de veiculação hídrica na Finlândia ( 31 ), e surtos de

faringoconjuntivite de veiculação hídrica devido à natação foram relatados para adenovírus não
entéricos ( 13 , 37 ). Os adenovírus entéricos são suscetíveis ao cloro ( 44 ), mas são muito
resistentes à luz ultravioleta ( 45 ).
Com base em estudos anteriores de desinfecção viral, a EPA publicou o Manual de Orientação para
Conformidade com os Requisitos de Filtração e Desinfecção para Fontes Públicas de Água ( 46 ). Os

valores de Ct , que são a concentração do desinfetante ( C ) multiplicada pelo tempo de contato ( t )
entre o desinfetante e o microrganismo, para inativação viral de 2 a 4 log por ClO 2 e outros
desinfetantes de água em diferentes condições de pH e temperatura, estão listados em o manual.
Os valores de Ct para inativação viral são baseados em experimentos conduzidos com o vírus da
hepatite A (HAV). O manual de orientação Ctvalores (em miligramas por litro, multiplicados pelo
número de minutos) orientam os serviços públicos de água para garantir que as práticas de
desinfecção atendam aos requisitos regulamentares de inativação de log microbiano. No entanto,

os valores de ClO 2 Ct podem não ser adequados para calicivírus e adenovírus cuja suscetibilidade a
esse desinfetante é amplamente desconhecida.
Os objetivos deste estudo foram (i) comparar a inativação viral por ClO 2 para AD40 e FCV em água
sob condições de pH alto e baixo (pH 8 e 6) e temperatura (15°C e 5°C), ( ii) usar um modelo de
desinfecção descrito anteriormente para determinar os valores de Ct para cada vírus e condição
experimental e (iii) comparar os valores de Ct previstos com os valores de Ct do manual de
orientação da EPA e as práticas de desinfecção comumente aplicadas nos Estados Unidos.
MATERIAIS E MÉTODOS
Propagação e ensaio de vírus.

AD40 (estirpe Dugan), FCV (estirpe F9), linha celular de carcinoma hepático primário (PLC/PRF/5) e
linhas celulares renais felinas Crandell Reese foram obtidas da American Type Culture Collection
(Rockville, MD). Os estoques de AD40 e FCV foram propagados, enumerados, concentrados e
purificados para reduzir a demanda de desinfecção da mesma maneira descrita por Thurston-
Enriquez et al. ( 45 ). Todos os estoques virais foram armazenados a 4°C até o uso. A determinação
do título viral antes e depois da desinfecção com cloro foi realizada testando diluições de 5 ou 10
vezes em quadruplicado em bandejas de cultura de tecidos de 24 poços com as células apropriadas
em suspensão (44 ) .
Produção e medição de ClO 2 .
O ClO 2 foi gerado pelo método iodométrico ( 4 ). As concentrações de ClO 2 da solução estoque e
em água tamponada e desinfetante sem demanda (BDF) durante os experimentos de desinfecção
foram medidas de acordo com o método DPD 10126 da Hach (Loveland, CO) com um
espectrofotômetro Hach DR2000.
Protocolo experimental.
Vidrarias e água BDF foram preparadas. O protocolo experimental foi realizado de acordo com os
protocolos utilizados por Thurston-Enriquez et al. ( 45 ). Resumidamente, a água BDF foi mantida a
uma temperatura constante (5°C ou 15°C) em banho-maria refrigerado. O ClO 2 foi adicionado no
volume necessário para atingir uma dose inicial de desinfetante próxima a 0,50 mg/litro ou 1,0
mg/litro. As doses de dióxido de cloro aplicadas nos experimentos de desinfecção deste estudo
variaram de 0,47 a 1,01 (Tabela 1 ). Quatro béqueres de reação experimentais foram analisados para
cada condição experimental. O primeiro béquer, contendo apenas água BDF e ClO 2, foi medido em
15 s para determinar a dose inicial de desinfetante (em 15 s) na ausência de demanda de
desinfetante do estoque viral. O segundo e o terceiro béqueres de reação foram inoculados com um
dos vírus estudados, FCV ou AD40, em concentrações que permitissem a detecção de pelo menos 2
logs de inativação viral. O segundo e o terceiro béqueres também foram inoculados com ClO 2e
imediatamente agitado. O segundo béquer foi amostrado para determinar a concentração de
desinfetante no início (15 s) e no final de cada experimento de desinfecção. Essas medições foram
necessárias para determinar a demanda de desinfetante de cada preparação viral e a decomposição
do desinfetante durante cada experimento. Para determinar a inativação viral, amostras de 2 ml
foram retiradas do terceiro béquer em tempos pré-determinados ao longo da reação. Essas

amostras de 2 ml foram imediatamente inoculadas em tubos de coleta contendo 20 μl de solução
estéril de tiossulfato de sódio a 10% para extinguir qualquer atividade desinfetante residual. O
quarto béquer de reação, ou béquer de controle, continha apenas vírus e água BDF e foi
considerado representativo das concentrações virais por mililitro de água BDF nos béqueres dois e
três. Este béquer de controle foi necessário para (i) determinar a concentração inicial de vírus para
cada experimento e (ii) avaliar se a inativação do vírus ocorreu nas condições testadas de água, pH
e temperatura do BDF (na ausência de desinfetantes). As amostras virais foram mantidas em gelo
durante o experimento e então armazenadas a 4°C até o ensaio.
Modelagem cinética e valores de Ct .
As constantes de decaimento do cloro ( k ′) para cada experimento foram calculadas usando a
função Solver no Microsoft Excel 2000 (Microsoft Corp.) para regredir a equação cinética de
primeira ordem (equação 1 ) usando o método dos mínimos quadrados.
\[ C =C0 e x p ( − k t ) \]
′
(1)
onde C e C 0 são os resíduos de ClO 2 (em miligramas por litro) no tempo t (em minutos) e no tempo
0,25 min (medição mais próxima possível do tempo zero), respectivamente; k ′ é a constante de taxa
de decaimento do desinfetante de primeira ordem (por minuto) ( 19 ). Os valores de decaimento do
desinfetante ( k ′) estão listados na Tabela 1 para cada conjunto de experimentos de desinfecção.
Os parâmetros do modelo do fator de eficiência Hom (EFH) (Tabela 1 ) e os valores de Ct (Tabela 2 )

foram calculados aplicando o modelo EFH (equação 2 ) aos dados obtidos de experimentos de
desinfecção em escala de bancada ( 19 ). O modelo EFH é uma aproximação analítica do modelo

incompleto gama Hom (IGH). Esses modelos são considerados para descrever adequadamente a
cinética dos experimentos de desinfecção que não seguem as relações de Chick-Watson e estão
sujeitos à decomposição do desinfetante ( 19 ). Ao contrário do modelo IGH, o modelo EFH permite

que os pesquisadores descrevam a cinética de desinfecção usando funções matemáticas
disponíveis em pacotes de computador comumente usados, como o Microsoft Excel (Microsoft
Corp.) (19 ). Os modelos IGH e EFH foram empregados para descrever a cinética de desinfecção em
estudos anteriores ( 17 , 18 , 33 ) e têm sido usados para prever a inativação do adenovírus entérico
tipo 40 e do calicivírus felino pelo cloro ( 44 ).
Os valores do número viral mais provável para cada experimento, agrupados por tipo de vírus, pH e
condições de temperatura, foram ajustados no modelo EFH (equação 2 )
\[ l n N /N 0 = − kC0 t
m ′ ′
× [(1 − e x p ( − nk t / m ) / ( n k t / m ) ] \] (2)
onde t é o tempo de exposição (min), k é a constante de taxa de inativação viral (adimensional), n é

o coeficiente de diluição (adimensional), k ′ é a constante de taxa de decaimento do desinfetante de
primeira ordem (por minuto) e m é a constante para a lei da taxa de inativação que descreve o
desvio da cinética ideal de Chick-Watson (adimensional) ( 13 ). ln N / N 0 é o logaritmo natural da

taxa de sobrevivência (o número de vírus restantes no tempo tdividida pela concentração viral
inicial). O Microsoft Excel Solver (Microsoft Excel 2000; Microsoft Corp.) foi usado para minimizar
a soma dos quadrados da diferença entre o valor observado e ln N / N 0 para experimentos de

desinfecção viral realizados com o mesmo vírus e condições, para determinar os coeficientes do
modelo EFH para cada viral e conjunto de condições (Tabela 1 ). Usando GraphPad Prism versão
4.00 para Windows (San Diego, CA), as concentrações virais médias versus tempo foram traçadas
para a inativação viral observada e para valores ajustados pelo modelo EFH (Fig. 1 e 2 ) .
Um valor de Ct é determinado pela multiplicação da concentração de desinfetante ( C ) em

miligramas por litro pelo tempo ( t ) em minutos quando ocorreu uma inativação de log específico
(2, 3 ou 4 log; 99%, 99,9% ou 99,99%) . Os valores de Ct ( Ct 99,0% , Ct 99,9% e Ct 99,99% ) foram usados
para avaliar a sensibilidade viral ao ClO 2 e avaliar a capacidade do modelo EFH de ajustar os dados
obtidos em experimentos de inativação viral em escala de bancada (Tabela 2 ). Os valores de Ct
99,99% do modelo EFH foram determinados por meio da aplicação dos parâmetros do modelo EFH
(Tabela 1). Um valor de 0,0001 para k ′ (condições de deterioração desinfetante desprezível) foi
usado para os valores de EFH Ct . Este valor foi escolhido para produzir valores de linha de base Ct
e porque k ' variou entre os experimentos. A dose média de ClO 2 aplicada em experimentos
replicados também foi usada para determinar os valores de Ct do modelo EFH . As faixas de valores
de Ct foram calculadas multiplicando a concentração média de ClO 2 aplicada para cada conjunto
de experimentos replicados pelos pontos de tempo mais próximos da inativação viral de 4 log. Por
exemplo, os experimentos de AD40 conduzidos em pH 8 e 5°C tiveram uma inativação logarítmica
média de 3,41 e 4,21 em 1,5 min e 3 min, respectivamente. O ClO médio2 para este conjunto de
experimentos foi de 0,53 mg/litro. A faixa, portanto, é >0,80 a <1,59 mg/litro × min.
Análise estatística.
As concentrações microbianas médias e os desvios padrão foram calculados e representados

graficamente usando GraphPad Prism, versão 4.00, para Windows (San Diego, CA). Os testes F
foram realizados usando o Microsoft Excel 2000 (Microsoft Corp.) para determinar se as diferenças
na inativação viral eram significativas ( P < 0,05) entre diferentes vírus e condições de pH e
temperatura.
RESULTADOS
Os experimentos de desinfecção com ClO 2 foram realizados pelo menos em duplicata para AD40 e
FCV sob condições de pH e temperatura alto e baixo em água BDF. O modelo EFH foi usado para
modelar a cinética de inativação do desinfetante para cada condição experimental aplicada a cada
vírus. A Tabela 1 lista as condições da água BDF aplicadas a experimentos de desinfecção viral e
estimativas de parâmetros para análise do modelo EFH.
A Tabela 2 compara os intervalos de Ct 99,99% observados em experimentos de inativação em escala
de bancada, os valores de Ct 99,99% calculados ajustando o modelo EFH aos dados de escala de
bancada e os valores de Ct 99,99% do manual de orientação da EPA . O modelo EFH ajustou-se bem
aos dados observados em escala de bancada, produzindo valores de Ct 99,99% próximos ou dentro da
faixa dos valores de Ct 99,99% observados . Os valores de AD40 e FCV EFH Ct 99,99% foram inferiores
aos valores de Ct 99,99% recomendados no manual de orientação da EPA para inativação viral na
água.
Quando as faixas de Ct 99,99% observadas e os valores de EFH Ct 99,99% foram comparados, observou-
se que o FCV é mais resistente ao ClO 2 do que o FCV para a maioria das condições estudadas. As
diferenças nas sensibilidades virais sob condições de pH 8 e 15°C, no entanto, não são claras, uma
vez que AD40 e FCV foram completamente inativados pela primeira coleta de amostra feita em 15 s.
Para todas as outras condições testadas, FCV parece ser muito mais resistente a ClO 2 do que AD40.
Os intervalos de Ct 99,99% calculados para a inativação viral são difíceis de comparar quando a
inativação de 4 log não foi observada. Em pH 8 e 5°C, a faixa FCV Ct 99,99% é >0,68, uma vez que
apenas 3,60 log de inativação foi observada no último ponto de tempo amostrado. Para este
conjunto de experimentos, 3,60 log foi inativado em 45 s. Para a inativação de FCV em pH 6 e 5°C,
no entanto, uma média de apenas 0,90 logs foi inativada por 1 min. Assim, o FCV parece ser mais
resistente em pH 6 do que em pH 8. Essa diferença é melhor refletida comparando os valores de

EFH modelo Ct 99,99% , onde a diferença nas taxas de inativação é óbvia entre a inativação de FCV
em pH 6 (20,85 mg/litro × min ) e pH 8 (1,08 mg/litro x min).
As curvas de inativação viral observadas em escala de bancada e as curvas de inativação do modelo

EFH para todas as condições de água testadas são mostradas na Fig. 1 e 2 . Os pontos de dados
listados conforme observados nos gráficos são concentrações virais médias de experimentos
replicados em escala de bancada. O ajuste dos dados de inativação viral em escala de bancada no
modelo EFH gerou curvas listadas como EFH. Foram observadas diferenças significativas ( P < 0,05)
nas taxas de inativação viral para condições de alta e baixa temperatura e -pH. Para experimentos
AD40 conduzidos a 5°C, as taxas de inativação não são significativas, começando no ponto de
tempo de 1 minuto (Fig. 1). No entanto, a taxa de inativação do AD40 foi maior em condições de pH
8 do que em condições de pH 6 nos primeiros 30 s. A cauda das curvas foi semelhante, resultando
em inativação insignificante de 1 min para o ponto de tempo de 3 min. As taxas de inativação viral
foram maiores para experimentos realizados em pH 8 do que em pH 6 (AD40, 15°C; FCV, 5 e 15°C) e
15°C do que em 5°C.
DISCUSSÃO
Até onde sabemos, este é o primeiro relato de inativação de ClO 2 de adenovírus entérico e geração
de valores de Ct para inativação de ClO 2 de AD40 e FCV em água em condições de pH e
temperatura altos e baixos. Esta informação é importante não apenas para avaliação do ClO 2 como
desinfetante secundário para sistemas de água que utilizam luz ultravioleta, mas também para
sistemas que utilizam ClO 2 como desinfetante primário. Os valores de Ct 99,99% , calculados com base em
experimentos em escala de bancada e aqueles previstos pelo modelo EFH para AD40 e FCV, sugerem que os valores de Ct do
manual de orientação da EPA ( 46) são suficientes para reduzir esses vírus em água tratada nas
condições de temperatura e pH testadas neste estudo. Considerando que a faixa de dosagem de ClO
2 empregada pela indústria de água dos Estados Unidos é de 0,07 a 2,0 mg/litro ( 47 ) e que o tempo
médio de contato é de 237 min (derivado de estações de tratamento de água que empregam
cloração) ( 49 ), os vírus estudados seria inativado em pelo menos 4 logs para a maioria das
condições de água estudadas. No entanto, usando o tempo médio de contato (237 min), a faixa de
valores de Ct seria de 16,59 a 474 mg/litro × min para sistemas de água nos Estados Unidos. O valor
de Ct 99,99% para FCV em água BDF em pH 6 e 5°C, no entanto, estava dentro desta faixa (Ct 99,99% =
20,85 mg/litro × min).
A cinética de inativação viral varia entre diferentes tipos virais, desinfetantes e condições de
desinfecção da água. Os valores de EFH modelo Ct 99,99% para experimentos de inativação de ClO 2 a
5°C foram 1,28 e 0,67 mg/litro × min para AD40 e 20,85 e 1,08 mg/litro × min para FCV para água
BDF em pH 6 e 8, respectivamente. Assim, os valores de Ct 99,99% para AD40 e FCV foram 1,9 e 19,3
vezes maiores em pH 6 do que em pH 8, respectivamente. Estudos anteriores também mostraram
que a potência do ClO 2 aumenta em níveis de pH mais altos. Foi relatado que o poliovírus tipo 1 é
inativado por ClO 2 4,6 vezes mais rápido em pH 9 do que em pH 7 ( 8 ). Em estudos relacionados, o
poliovírus ( 3), colifago f2 ( 35 ) e vírus Norwalk (norovírus), poliovírus e colifago MS-2 ( 41 ) foram
inativados mais rapidamente por ClO 2 em pH 10 do que em pH 6.
A taxa de inativação microbiana geralmente aumenta por um fator de 2 ou 3 conforme a
temperatura aumenta em 10°C ( 22 ). Resultados gerados por Cronier et al. ( 8 ) demonstram que o
poliovírus tipo 1 foi mais rapidamente inativado em água BDF pH 7 a 15°C do que a 5°C. As curvas
de inativação ilustraram que o poliovírus era aproximadamente 3,5 vezes mais resistente ao ClO 2 a
5°C do que a 15°C ( 8 ). Semelhante à inativação de AD40 e FCV por cloro ( 44 ), a eficiência de
desinfecção de ClO 2 aumentou em temperaturas experimentais mais altas. Em pH 6 e 5°C, o valor
de Ct 99,99% foi 1,39 e 2,9 vezes maior que pH 6 e 15°C para AD40 e FCV, respectivamente.
Os valores de ClO 2 Ct para AD40 e FCV são maiores do que aqueles relatados para cloro em pH 6 e 8
( 44 ). Esta é uma contradição de relatos anteriores que demonstraram aumento da inativação viral
por ClO 2 em níveis de pH elevados em comparação com o cloro ( 27 , 39 ). Por exemplo, os valores
de Ct 99,99% para inativação de rotavírus por cloro e ClO 2 em pH 10 e 5°C revelaram que o Ct 99,99%
foi de 0,14 mg/litro × min (dose de cloro de 0,1 mg/litro por 1,4 min) para cloro e ≤ 0,13 mg/litro ×
min (dose de 0,5 mg/litro de ClO 2 por 15 s ou menos) para ClO 2 ( 39). Outros estudos , no entanto,
relataram que a inativação de ClO 2 e cloro foi semelhante para poliovírus ( 8 ) e coxsackievirus (
40,47 ). Semelhante aos resultados observados no estudo atual, Shin e colegas ( 41 ) relataram que o
ClO 2 não reduziu o poliovírus tipo 1, o colifago MS-2 e o vírus Norwalk tão rapidamente quanto o
cloro livre. Harakeh et al. ( 21 ) observaram suscetibilidades variadas dos vírus a diferentes
desinfetantes. O colifago f2 foi mais resistente ao cloro, mas menos resistente ao ClO 2 do que os
enterovírus (coxsackievirus, echovirus e poliovírus). Harakeh et al. ( 21) demonstraram que a

inativação viral pode diferir para um vírus desafiado por diferentes desinfetantes ou sob diferentes
condições de desinfecção. No estudo atual, o FCV foi mais resistente ao dióxido de cloro do que ao
cloro. Para a desinfecção com cloro na água, entretanto, nosso grupo observou que o AD40 foi mais
resistente que o FCV. Esses resultados apóiam as recomendações iniciais sobre o uso cauteloso de
vírus indicadores como modelos de eficácia desinfetante ( 21 ). A avaliação adequada da eficácia do

desinfetante deve incluir vírus entéricos representativos conhecidos ou considerados como
ocorrendo na água de nascente e sob várias condições típicas da água de nascente.
Muito poucos estudos foram conduzidos sobre a inativação viral entérica de ClO 2 em água. Em
comparação com alguns desses estudos anteriores, a inativação do AD40 parece ser comparável a
outros vírus. Por exemplo, os valores de AD40 Ct 99,0% estão dentro das faixas de Ct 99,0% para
poliovírus (0,2 a 0,67 mg/litro × min) e rotavírus (0,2 a 0,3 mg/litro × min) ( 15 , 43 ). No estudo atual,
o valor de EFH Ct 99,0% calculado para AD40 em pH 6 e 5°C foi de 0,38 mg/litro × min. No entanto,
para a inativação do HAV em água (pH 6), parece que o HAV ( Ct 99,99% = 16,75 mg/litro × min) é
muito mais resistente que o AD40 ( Ct99,99% = 0,83 mg/litro × min), mas menos resistente que o FCV
( Ct 99,99% = 20,85 mg/litro × min) ( 46 ).
Os valores de EFH Ct forneceram um meio para comparação de dados complicados, levando em
consideração experimentos replicados que variaram em concentração viral, dose de desinfetante,
demanda de desinfetante e cinética de inativação viral em diferentes condições de água. No geral, o
modelo EFH se ajusta bem aos dados de inativação em escala de bancada para todas as condições
testadas. Os valores de EFH Ct estavam dentro ou ligeiramente acima dos intervalos de Ct derivados
de experimentos em escala de bancada. Ao considerar que os experimentos replicados variaram
em inativação viral, dose de ClO 2 e decomposição de desinfetante, as curvas de EFH modelaram muito bem os dados de
inativação em escala de bancada. O uso deste modelo para prever com precisão Ctvalores fora do intervalo
de experimentos em escala de bancada, no entanto, precisam ser avaliados.
Todas as reações de desinfecção foram realizadas em água BDF que foi inoculada com estoques de
vírus AD40 e FCV purificados (remoção de detritos celulares) e dispersos (extração de clorofórmio).
As reações de desinfecção controlada descritas neste artigo fornecem informações básicas
necessárias para entender a eficácia do ClO 2 contra patógenos virais CCL em água tratada sob
condições de pH e temperatura altos e baixos. Estudos de inativação de cloro de FCV agregado, no
entanto, relataram valores de Ct 99% 31,0 vezes maiores do que aqueles observados para partículas
de vírus FCV dispersas ( 44 ). Além disso, os valores de Ct para inativação de cloro de AD40 e FCV
em águas subterrâneas foram maiores do que os calculados para experimentos conduzidos com
água BDF (44 ). Mais estudos são necessários para determinar se os valores de ClO 2 Ct do manual
de orientação da EPA são adequados para reduzir vírus em um estado agregado, associado a
material particulado e em águas naturais.
FIGO. 1. 
FIGO. 1 . Curvas de inativação de ClO 2 observadas e modelo EFH AD40 (as doses de ClO 2 variaram de 0,47 a 0,53 mg/litro
em água tamponada e livre de demanda).
FIGO. 2. 
FIGO. 2 . Curvas de inativação FCV ClO 2 observadas e modelo EFH (as doses de ClO 2 variaram de 0,72 a 1,01 mg/litro em
água tamponada e livre de demanda).
TABELA 1. 
TABELA 1 . Resumo das condições da água BDF e coeficientes do modelo EFH para experimentos de desinfecção
com dióxido de cloro AD40 e FCV
Condições da água BDF k′

Nº de
Vírus (min ka
ClO 2 b replicações −1
(mg/litro) °C pH )
AD40 0,51 5 6 2 0,03 8.32 0,62 0,57
AD40 0,53 5 8 2 0,04 362,0 6.01 0,60
AD40 0,49 15 6 2 0,10 5.61 0,01 0,80
AD40c 0,47 15 8 2 0,14 44,87 0,01 1.10

_
FCV 1.01 5 6 5 0,03 1,59 0,01 0,52
FCV 0,90 5 8 4 0,03 8.58 0,01 0,40
FCV 0,84 15 6 4 0,05 2.20 0,01 0,67
FCV d 0,72 15 8 3 0,07 167.01 0,01 2.17
a Os parâmetros do modelo EFH k , n e m são adimensionais.
b Concentração média de ClO 2 aplicada em experimentos repetidos.
c Vírus não detectado por ensaios de cultura de células após 15 s de tempo de contato e
≥4,21 log de inativação.
d Vírus não detectado por ensaios de cultura de células após 15 s de tempo de contato e
≥4,15 log de inativação.
MESA 2. 
TABELA 2 . Faixas de AD40 e FCV Ct 99,99% observadas em experimentos de inativação em escala de bancada,
valores de Ct 99,99% calculados ajustando o modelo EFH aos dados de escala de bancada e valores de Ct 99,99% do
manual de orientação da EPA
Condições
da água
BDF Ct 99,99% (mg/litro × min)
AD40 FCV
Faixas EFH Faixas EFH Manual de
observadas modelo observadas modelo orientação
°C pH AD40 a de FCV a da EPA
5 6 >0,77 a <1,53 1.28 >20,20 a 20.85 33,5

<30,30
5 8 >0,80 a 0,67 >0,68 (3,60 1.08 33,5

<1,59 log) b
15 6 >0,49 a 0,92 >4,20 a 7.13 16.8

<0,74 <6,72
15 8 < 0,12c 0,11 <0,18 dias 0,19 16.8
a Valores de Ct calculados usando k ′ = 0,0001 (condições de deterioração desinfetante

insignificante).
b A duração do experimento não foi longa o suficiente para atingir 99,99% de inativação. O
valor Ct corresponde à inativação de 3,60 log por 45 s.
c O valor é ≥4,21-log de inativação por 15 s.
d O valor é ≥4,15 log inativação por 15 s.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela American Water Works Association Research Foundation (projeto
442).
A menção de nomes comerciais ou produtos comerciais neste artigo tem o único objetivo de
fornecer informações específicas e não implica recomendação ou endosso do Departamento de

Agricultura dos Estados Unidos.
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Inativação de Adenovírus Entérico e Calicivírus Felino Por Dióxido de Cloro - Microbiologia Aplicada e Ambiental

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03/05/2023, 09:36 Inativação de Adenovírus Entérico e Calicivírus Felino por Dióxido de Cloro | Microbiologia Aplicada e Ambiental

tornando a desinfecção uma importante barreira de tratamento entre os consumidores de água

2 efetivamente inativa vários vírus na água e esgoto ( 14 , 21 , 39 , 43 ), mas informações limitadas

aguda não bacteriana ( 11 , 28 ) e foram identificados como agentes etiológicos de surtos de

um genoma de RNA de fita simples e uma estrutura de capsídeo icosaédrica. Os sintomas

dificuldades, dois estudos alternativos, um estudo de alimentação humana e um estudo baseado

em PCR, foram realizados anteriormente ( 30 , 41 ). No entanto, resultados conflitantes entre esses

realizados com FCV resultaram em conclusões semelhantes às relatadas no estudo baseado em NV

em 4 logs em concentrações de cloro comumente aplicadas ( 44 ).

e sua estrutura de capsídeo é complexa. O icosaedro do adenovírus contém 240 hexônios, 12

prováveis ​contaminantes no abastecimento público de água ( 24 , 25 ). Além disso, adenovírus e

gastroenterite aguda em um surto de veiculação hídrica na Finlândia ( 31 ), e surtos de

entéricos ( 13 , 37 ). Os adenovírus entéricos são suscetíveis ao cloro ( 44 ), mas são muito

resistentes à luz ultravioleta ( 45 ).

Conformidade com os Requisitos de Filtração e Desinfecção para Fontes Públicas de Água ( 46 ). Os

desinfecção atendam aos requisitos regulamentares de inativação de log microbiano. No entanto,

esse desinfetante é amplamente desconhecida.

experimental e (iii) comparar os valores de Ct previstos com os valores de Ct do manual de

orientação da EPA e as práticas de desinfecção comumente aplicadas nos Estados Unidos.

Propagação e ensaio de vírus.

Produção e medição de ClO 2 .

espectrofotômetro Hach DR2000.

15 s para determinar a dose inicial de desinfetante (em 15 s) na ausência de demanda de

imediatamente agitado. O segundo béquer foi amostrado para determinar a concentração de

necessárias para determinar a demanda de desinfetante de cada preparação viral e a decomposição

do desinfetante durante cada experimento. Para determinar a inativação viral, amostras de 2 ml

foram retiradas do terceiro béquer em tempos pré-determinados ao longo da reação. Essas

durante o experimento e então armazenadas a 4°C até o ensaio.

Modelagem cinética e valores de Ct .

As constantes de decaimento do cloro ( k ′) para cada experimento foram calculadas usando a

primeira ordem (equação 1 ) usando o método dos mínimos quadrados.

Os parâmetros do modelo do fator de eficiência Hom (EFH) (Tabela 1 ) e os valores de Ct (Tabela 2 )

desinfecção em escala de bancada ( 19 ). O modelo EFH é uma aproximação analítica do modelo

sujeitos à decomposição do desinfetante ( 19 ). Ao contrário do modelo IGH, o modelo EFH permite

disponíveis em pacotes de computador comumente usados, como o Microsoft Excel (Microsoft

onde t é o tempo de exposição (min), k é a constante de taxa de inativação viral (adimensional), n é

desvio da cinética ideal de Chick-Watson (adimensional) ( 13 ). ln N / N 0 é o logaritmo natural da

a soma dos quadrados da diferença entre o valor observado e ln N / N 0 para experimentos de

Um valor de Ct é determinado pela multiplicação da concentração de desinfetante ( C ) em

As concentrações microbianas médias e os desvios padrão foram calculados e representados

estimativas de parâmetros para análise do modelo EFH.

A Tabela 2 compara os intervalos de Ct 99,99% observados em experimentos de inativação em escala

resistente em pH 6 do que em pH 8. Essa diferença é melhor refletida comparando os valores de

As curvas de inativação viral observadas em escala de bancada e as curvas de inativação do modelo

inativados mais rapidamente por ClO 2 em pH 10 do que em pH 6.

A taxa de inativação microbiana geralmente aumenta por um fator de 2 ou 3 conforme a

enterovírus (coxsackievirus, echovirus e poliovírus). Harakeh et al. ( 21) demonstraram que a

vírus indicadores como modelos de eficácia desinfetante ( 21 ). A avaliação adequada da eficácia do

( Ct 99,99% = 20,85 mg/litro × min) ( 46 ).

Os valores de EFH Ct forneceram um meio para comparação de dados complicados, levando em

consideração experimentos replicados que variaram em concentração viral, dose de desinfetante,

demanda de desinfetante e cinética de inativação viral em diferentes condições de água. No geral, o

água tamponada e livre de demanda).

Condições da água BDF k′

AD40 0,51 5 6 2 0,03 8.32 0,62 0,57

AD40 0,53 5 8 2 0,04 362,0 6.01 0,60

AD40 0,49 15 6 2 0,10 5.61 0,01 0,80

AD40c 0,47 15 8 2 0,14 44,87 0,01 1.10

FCV 1.01 5 6 5 0,03 1,59 0,01 0,52

FCV 0,90 5 8 4 0,03 8.58 0,01 0,40

FCV 0,84 15 6 4 0,05 2.20 0,01 0,67

FCV d 0,72 15 8 3 0,07 167.01 0,01 2.17

a Os parâmetros do modelo EFH k , n e m são adimensionais.

prováveis contaminantes no abastecimento público de água ( 24 , 25 ). Além disso, adenovírus e