Injeção contendo dióxido de cloro e

método para fazer o mesmo

Abstrato
É divulgada uma injeção contendo dióxido de cloro em aplicações
terapêuticas, como regeneração de células-tronco in vivo,
antitumoral e antienvelhecimento. A injeção de dióxido de cloro
da presente invenção tem um alto efeito farmacológico e um
baixo efeito tóxico ou colateral, permitindo a ablação de tumores
e promoção da regeneração tecidual in situ. Particularmente, a
injeção de dióxido de cloro estimula uma resposta imune através
da ablação de tumores-alvo, fazendo com que o sistema
imunológico iniba ou elimine tumores distais ou tumores
metastáticos. Um método para fazer a injeção de dióxido de cloro
é ainda fornecido.

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção refere-se a uma injeção contendo dióxido de

cloro em aplicações terapêuticas, como regeneração de células-
tronco in vivo, antitumoral e antienvelhecimento e, em particular,
a uma preparação de injeção com alto efeito farmacológico e
baixo efeito tóxico ou colateral e capaz de armazenamento a
longo prazo, e um método para fazer o mesmo.

ANTECEDENTES DA PRESENTE INVENÇÃO

A Publicação do Pedido de Patente Chinesa No. CN103040860A

revela que a administração direta de uma injeção contendo cloro
pode iniciar a eficácia de células-tronco in vivo para tratar
doenças relacionadas. A Publicação do Pedido de Patente
Chinesa No. CN103720709A revela que é possível limpar células
senescentes de tecidos alvo e células tumorais ablacionadas com
administração direta. Conforme divulgado em CN103720709A,
uma injeção contendo conteúdo de cloro é manipulada para
funcionar como preparação antienvelhecimento e antitumoral,
ou seja, para o tratamento de envelhecimento e cânceres. Ambos
os documentos acima descrevem o uso de uma solução de cloro
como uma injeção para o tratamento das doenças relacionadas.
No entanto, geralmente, se a injeção for mantida como uma
solução por um longo período de tempo, a concentração de
dióxido de cloro gasoso eficiente na solução é limitada; se a
injeção para preparada no local antes do uso, o precursor de
dióxido de cloro e outros reagentes não podem ser removidos,
de modo que mais impurezas serão incluídos na solução
preparada de cloro e, como resultado, a solução na forma de
injeção pode não atender aos requisitos de segurança.

Geralmente, a emissão de dióxido de cloro em uma solução

aquosa é muito limitada. A solubilidade do dióxido de cloro a 20°
C é de cerca de 2,9 g/L. Se o dióxido de cloro for sustentável em
uma solução salina, a solubilidade do dióxido de cloro é menor
do que a do dióxido de cloro em água pura. Portanto, na técnica
anterior, é difícil preparar uma solução de dióxido de cloro com
uma concentração superior a 3 mg/ml e armazenar a solução de
dióxido de cloro por um longo período de tempo. No entanto,
quando a solução de dióxido de cloro é usada como desinfetante
para eficiente, geralmente não é necessária uma solução de
dióxido de cloro de alta concentração, portanto, é necessário
preparar uma solução de dióxido de cloro de alta concentração
no passado. Quando a solução de dióxido de cloro é usada como
injeção, os versados na técnica nunca pensaram em aumentar a
concentração da solução de dióxido de cloro. Por exemplo, as
preparações contendo dióxido de cloro, conforme divulgado nos
dois pedidos de patente acima, são preparadas em um método
no qual o dióxido de cloro gasoso é produzido pela preparação
de dióxido de cloro gasoso com uma concentração de 99,9% ou
mais (de preferência, por reação de clorito com um ácido). O
dióxido de cloro gasoso é borbulhado e dissolvido em uma
solução aquosa para obter 500 ppm a 5900 ppm (0,05% p/p, 2,9
mg/ml) de solução de dióxido de cloro. A solução pode ser usada
como uma injeção contendo apenas dióxido de cloro e aditivos
comumente usados em injeções.são preparados por um método
no qual o dióxido de cloro gasoso é produzido pela preparação
de dióxido de cloro gasoso com uma concentração de 99,9% ou
mais (de preferência, por reação de clorito com um ácido). O
dióxido de cloro gasoso é borbulhado e dissolvido em uma
solução aquosa para obter 500 ppm a 5900 ppm (0,05% p/p, 2,9
mg/ml) de solução de dióxido de cloro. A solução pode ser usada
como uma injeção contendo apenas dióxido de cloro e aditivos
comumente usados em injeções. são preparados por um método
no qual o dióxido de cloro gasoso é produzido pela preparação
de dióxido de cloro gasoso com uma concentração de 99,9% ou
mais (de preferência, por reação de clorito com um ácido).O
dióxido de cloro gasoso é borbulhado e dissolvido em uma
solução aquosa para obter 500 ppm a 5900 ppm (0,05% p/p, 2,9
mg/ml) de solução de dióxido de cloro. A solução pode ser usada
como uma injeção contendo apenas dióxido de cloro e aditivos
comumente usados em injeções.
Além disso, a solução de dióxido de cloro é normalmente
preparada no local. A Patente Chinesa No. CN103402621A revela
um método para preparar uma concentração elevada de solução
de cloreto estável de cloro misturando ditionato com clorito.
Mais geralmente, uma solução de dióxido de cloro é feita no local
misturando um precursor de dióxido de cloro (por exemplo,
clorito de sódio) com um ácido para gerar dióxido de cloro, em
que o dióxido de cloro é mantido diretamente na solução
misturada e pode ser mantido em alta concentração, por
exemplo, 2% (p/p) em um curto período. O dióxido de cloro pode
ser usado por diluição ou sem diluição. Neste caso, além do
dióxido de cloro, a solução misturada contém ainda outras
impurezas.Isso não causa efeitos adversos no uso geral dessa
solução; no entanto, como uma injeção, isso pode introduzir
fatores de risco. Normalmente, uma quantidade excessiva de
ácido é produzida para permitir uma reação completa, provocada
em um pH mais baixo da solução misturada que pode não ser
adequada para uso como uma injeção a ser injetada no corpo
humano.

SUMÁRIO DA PRESENTE INVENÇÃO

Foi descoberto por experimentos que uma injeção contendo uma
baixa concentração de cloro de cloro não pode fornecer efeitos
terapêuticos notáveis, por exemplo, na promoção da terapia,
antienvelhecimento, tratamento do câncer, ou não apresenta
efeitos terapêuticos em comparação com uma injeção contida
uma alta concentração de dióxido de cloro (por exemplo, 0,5-20
mg/ml de dióxido de cloro). Além disso, a produção de uma
solução de dióxido de cloro com uma concentração de cerca de
2% (p/p) em meios aceitos o precursor de dióxido de cloro não
reagido e outros reagentes para a solução de dióxido de cloro.
Por exemplo, a solução de dióxido de cloro que é preparada
misturando clorito de sódio com ácido cítrico contém clorito de
sódio, citrato de sódio, cloreto de sódio, etc., além do dióxido de
cloro. Esta pode não ser uma solução isotônica, e as impurezas
excessivamente incluídas neste documento tornarão a injeção
insegura. Enquanto isso, o pH da solução pode estar muito baixo
devido ao excesso de ácido, o que assume um risco à segurança.
Foram encontrados os seguintes defeitos da técnica anterior: as
injeções de dióxido de cloro com maior segurança são menos
óbvias ou de baixo efeito farmacológico devido a uma
concentração mais baixa de dióxido de cloro; enquanto as
injeções de dióxido de cloro com maior efeito farmacológico têm
efeitos tóxicos ou colaterais óbvios devido a várias impurezas e
baixo pH causados pela reação mista para gerar dióxido de cloro.
A presente invenção fornece uma solução para resolver os
problemas acima.

Tendo em vista os defeitos da técnica anterior, existe a

necessidade de desenvolver uma injeção contendo dióxido de
cloro, que alcance um compromisso entre o efeito farmacológico
e o efeito tóxico ou colateral da preparação de dióxido de cloro,
melhorando assim o efeito farmacológico da preparação de
dióxido de cloro e reduzindo seu efeito tóxico ou colateral. Mais
particularmente, tal injeção compreende uma alta concentração
de dióxido de cloro sem quaisquer impurezas adicionais, e o pH
também é aceitável para a injeção. Aparentemente, um método
comum é dissolver mais dióxido de cloro em uma solução de
injeção. No entanto, é sabido que a solubilidade do dióxido de
cloro à temperatura ambiente é de apenas 2,9 g/L e, portanto, a
produção de uma injeção contendo uma concentração maior de
dióxido de cloro requer um trabalho mais criativo.

A fim de obter um efeito farmacológico mais notável do dióxido

de cloro e eliminar as manchas de impurezas e baixo pH, foram
realizados estudos e experimentos intensivos. Os resultados
mostram que i) gás de dióxido de cloro pode ser preparado por
um método para preparar gás de dióxido de cloro com uma
concentração de 99,9% ou mais; ii) introduzindo o gás carbônico
de cloro em um meio de baixa temperatura (por exemplo, não ar
abaixo de 11° C., ou borbulhando o gás carbônico de cloro em
uma solução salina fria abaixo de 11° C. ou uma solução
contendo outros aditivos farmaceuticamente comumente usados
em injeções) e depois dissolvendo o dióxido de cloro no meio de
baixa temperatura, a concentração do dióxido de cloro
sustentável não é limitada pela solubilidade do dióxido de cloro.
Desta maneira,

Além disso, foi surpreendentemente descoberto que a injeção

contendo uma alta concentração de dióxido de cloro da presente
invenção não apenas produz um efeito farmacológico na
vizinhança dos tecidos injetados, mas também estimula a
resposta imune do sistema imunológico, por exemplo, por
ablação de tumores, para inibir ou eliminar tumores distais ou
tumores metastáticos. Este fenômeno farmacológico é
inesperado para os versados na técnica, ou seja, a injeção tem
um papel positivo no sistema imune e exerce um efeito
farmacodinâmico sistêmico através do sistema imune.

A presente invenção fornece uma solução de dióxido de cloro

(injeção) tendo uma concentração de dióxido de cloro que
excede sua solubilidade; em que a concentração de dióxido de
cloro na injeção é de 3 mg/ml, ou seja, 100% (p/p), e está livre de
outras substâncias (ou seja, impurezas) causadas durante a
reação de geração do gás de oxigênio cloro. Aqui, as impurezas
incluem precursores de dióxido de cloro, preparados e outros
reagentes. Por exemplo, quando clorito de sódio e ácido cítrico
reagem para gerar dióxido de cloro gasoso, a injeção de cloro
gasoso da presente invenção não contém impurezas adicionais
que são causadas diretamente pela reação, como clorito de
sódio, ácido cítrico e citrato de sódio. Na injeção de dióxido de
cloro, a concentração de dióxido de cloro é de preferência 5-25
mg/ml, mais preferencialmente 8-20 mg/ml.

A solução de dióxido de cloro é armazenada como uma injeção

ao abrigo da luz a -20° C. a 11° C. por um longo período de
tempo. De preferência, a solução de dióxido de cloro é
armazenada ao abrigo da luz a -18° C a 9° C. Mais
preferencialmente, a solução de dióxido de cloro é armazenada
ao abrigo da luz a 2° C a 8° C.

A solução de dióxido de cloro como uma injeção pode ser diluída

para uma concentração alvo antes do uso com uma solução
diluída contendo aditivos farmaceuticamente aceitáveis
comumente usados em injeções e, em seguida, injetada no
corpo.

Além disso, a presente invenção fornece um método para

produzir uma injeção de dióxido de cloro com uma alta
concentração de dióxido de cloro.

O método inclui:
1) produzir um gás de dióxido de cloro com uma concentração de
99,9% ou mais por um método padrão;
2) introdução do gás dióxido de cloro em um meio a baixa
temperatura de -20° C a 11° C por meio de um duto; e
3) quando o meio for um meio gasoso, coletar dióxido de cloro
para obter uma injeção de dióxido de cloro com uma
concentração de dióxido de cloro aproximada de 100%; e,
quando o meio é um meio líquido, elevar a temperatura do meio
líquido contendo dióxido de cloro para menos de 20°C para obter
a injeção contendo dióxido de cloro após o dióxido de cloro ser
uniformemente dissolvido no meio líquido.

Os métodos para produzir gás de dióxido de cloro de alta pureza

são conhecidos pelos especialistas na técnica; por exemplo,
reação do precursor de dióxido de cloro (clorito) e um ácido para
gerar dióxido de cloro gasoso; ou misturar e fazer reagir ditionato
com clorito para gerar dióxido de cloro gasoso.

Na etapa 2, o gás dióxido de cloro pode ser introduzido

diretamente em um meio gasoso, como ar ou nitrogênio, ou
pode ser borbulhado em uma solução diluída (por exemplo,
solução salina) contendo aditivos farmaceuticamente aceitáveis
que são comumente usados em injeções. Além disso, o dióxido
de cloro é introduzido no meio de baixa temperatura em uma
abordagem de cima para baixo. Particularmente, em -20° C. a 0°
C., um meio gasoso pode ser usado; e de -2° C a 11° C, pode ser
utilizada uma solução líquida que possa ser utilizada como
injeção; por exemplo, de 1° C a 5° C, usa-se solução salina.

A presente invenção fornece ainda uma injeção contendo uma

alta concentração de dióxido de cloro e um método para
preparar a injeção. Convencionalmente, o dióxido de cloro de
alta concentração é uma solução de dióxido de cloro preparado
misturando simplesmente vários reagentes, ou seja, várias
substâncias (especialmente precursores de xarope de cloro e
absorvidos) causados durante a reação para gerar gás de cloro
não são removidos ou o pH da solução é extremamente baixo.
Como resultado, a solução de dióxido de cloro não é segura para
o corpo humano quando usada como injeção. Foi provado que a
solução de dióxido de cloro geralmente preparada como uma
injeção é altamente tóxica para os animais testados. Enquanto
isso, procurou-se que a concentração da solução de dióxido de
cloro preparada pela introdução do gás de dióxido de cloro
gerado em uma solução é limitada. À temperatura ambiente, a
concentração é inferior a 2,9 mg/ml. Se esta solução para usada
como uma injeção, a solução basicamente não tem efeito
farmacológico claro. A injeção contendo uma alta concentração
de dióxido de cloro e o método de preparação da mesma
fornecida pela presente invenção podem efetivamente resolver
os dois defeitos da técnica anterior, pelo qual o efeito
farmacológico do dióxido de cloro é maximizado sem efeito
tóxico ou colateral devido às impurezas eo pH baixo. Além disso,

DESCRIÇÃO DETALHADA DA PRESENTE INVENÇÃO

A presente invenção será ainda descrita abaixo em conjunto com
as modalidades.

O problema da técnica anterior foi encontrado por experimentos:

as injeções existentes contendo dióxido de cloro contêm uma
baixa concentração de dióxido de cloro para que o efeito
farmacológico esperado não possa ser alcançado, ou contêm
substâncias causadas antes ou depois da reação para gerar
dióxido de cloro para que o injeções para uso no corpo humano
não são seguras. Existem dois métodos para preparar uma
injeção contendo dióxido de cloro mencionados na técnica
anterior.
1. O primeiro método é introduzir o gás de dióxido de cloro de
alta pureza preparado em uma solução aquosa. No entanto,
devido à limitação da solubilidade, a solução preparada de cloro
geralmente tem uma concentração abaixo de 2,9 g/L. Em uma
modalidade, foi descoberta por experimentos que, em termos de
efeito farmacológico, uma injeção contendo 2 g/L de dióxido de
cloro é obviamente menos eficaz do que uma injeção contendo
15 g/L (ou 15 mg/ml) de dióxido de carbono cloro .
2. O segundo método é misturar um precursor de dióxido de
cloro (por exemplo, clorito de sódio) com um ácido (por exemplo,
ácido cítrico) para produzir uma solução de dióxido de cloro com
uma concentração de 1% a 10% (p/p) em um curto período de
tempo. Em uma modalidade, tal injeção de dióxido de cloro com
uma concentração de 1,5% (p/p) tem efeito tóxico óbvio nos
animais testados. Em outra modalidade, após o pH da solução
mista ser regulado para 7 pela adição de um regulador de pH, a
concentração de dióxido de cloro é reduzida para 1% (p/p), mas
esta injeção ainda tem efeito tóxico óbvio nos animais testados.
[0026]
A presente invenção fornece uma injeção contendo uma solução
de dióxido de cloro com uma concentração superior à sua
solubilidade, em que a concentração da solução de dióxido de
cloro é de 3 mg/ml, ou seja, 100% (p/p). Na injeção, a
concentração de dióxido de cloro é de preferência 5-25 mg/ml,
mais preferencialmente 8-20 mg/ml. A injeção contém apenas
dióxido de cloro e aditivos que são comumente usados em
injeções.
[0027]
Além disso, a injeção não contém vários precursores de dióxido
de cloro que são geralmente usados para preparar reagentes de
dióxido de cloro ou não-dióxido de cloro. Os precursores de
dióxido de cloro podem incluir, por exemplo, cloretos de metais
alcalinos e cloretos de metais alcalino-terrosos. Os cloretos de
metais alcalinos podem incluir, por exemplo, clorito de sódio,
clorito de potássio e clorito de lítio. Os cloretos de metais
alcalino-terrosos podem incluir, por exemplo, clorito de cálcio,
clorito de magnésio e clorito de bário. Os reagentes sem dióxido
de cloro podem incluir, por exemplo, citrato de sódio com uma
concentração superior a 1% de cloreto de sódio, citrato de
potássio ou sulfato de sódio.
[0028]
Em uma modalidade, a injeção contendo uma alta concentração
de dióxido de cloro na presente invenção pode eliminar tumores
diretamente e pode inibir tumores distais e tumores metastáticos
estimulando uma resposta imune do sistema imunológico. Isso
indica que a injeção contendo uma alta concentração de dióxido
de cloro na presente invenção não só tem efeito farmacológico in
situ em um tecido alvo, mas também tem efeito farmacológico
de construir ou promover a imunidade do sistema imunológico
sistêmico.
[0029]
Além disso, os aditivos comumente usados em injeções são
transportadores sólidos ou líquidos farmaceuticamente
aceitáveis, por exemplo, incluindo, entre outros, solventes,
estabilizadores, co-solventes, emulsificantes, agentes de
turvação, agentes tampão, agentes isotônicos, corantes,
matrizes, agentes espessantes, excipientes, lubrificantes,
adesivos, desintegrantes, condicionadores, agentes espumantes,
resina superabsorvente, surfactantes, intensificadores de
penetração, reguladores de pH e semelhantes.
[0030]
Especificamente, os exemplos incluem: água desionizada;
açúcares ou álcoois de açúcar tais como lactose, açúcar branco,
frutose, glicose e manose; celulose, como celulose cristalina,
metilcelulose, ethyecelulose, hidroxipropil celulose, hidroxipropil
celulose pouco substituída, hidroxipropil metil celulose, ftalato
de hidroxipropil metil celulose, succinato de acetato de
hidroxipropil metilcelulose, hidroximetil celulose, carboximetil
celulose de cálcio, carboximetil celulose de sódio, carboximetil
celulose de sódio reticulado, hidroximetil etil celulose e acetato
ftalato de celulose e seus derivados; amido tal como amido de
milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata,
ciclodextrina e amilopectina, e seus derivados;proteínas naturais
(algas, uncilagem vegetal, proteínas e afins) como ágar, alginato
de sódio, goma arábica, gelatina, colágeno, shell-lac, goma
tragacanta e xantana; polímeros sintéticos, tais como
polivinilpirrolidona, copolímero aminoalquilmetil acrílico,
copolímero de ácido metacrílico, copolímero hidroxilvinílico,
álcool polivinílico e dimetil polissiloxano; óleo tal como azeite,
óleo de cacau, cera de carnaúba, sebo bovino, óleo endurecido,
óleo de soja, óleo de sésamo, óleo de camélia, óleo de linhaça,
parafina, parafina líquida, cera de abelha, vaselina branca, óleo
de coco e cera microcristalina;substâncias gordurosas como ácido
esteárico, estearato de alumínio, estearato de cálcio, estearato
de magnésio, citrato de trietilo, triacetato de glicerol, triglicérido
de ácido gordo de cadeia média, estearina e miristato de
isopropilo e seus derivados; álcoois e polióis tais como etanol,
glicerol, álcool estearílico, cetanol, propanodiol e
polietilenoglicol;substâncias inorgânicas e compostos de sais
metálicos, como óxido de zinco, hidrogenofosfato de cálcio,
carbonato de cálcio precipitado, silicato de alumínio sintético,
anidrido silícico, caulim, gel de hidróxido de alumínio seco,
hidrotalcita sintética, óxido de vitamina, talco, bentonita, silicato
de alumínio e magnésio, sulfato de alumínio e potássio,
subgalato de bismuto, subsalicilato de bismuto, lactato de cálcio,
citrato de sódio, cloreto de sódio e hidrogenocarbonato de
sódio;tensoativos como éster de ácido graxo de sacarose,
estearato de polioxila, óleo de rícino polioxietileno hidrogenado,
polioxipropileno polioxipropileno glicol, sesquioleato de
sorbitano, trioleato de sorbitano, monoestearato de sorbitano,
monopalmitato de sorbitano, monolaurato de sorbitano,
polissorbato, monoestearato de glicerina, dodecil sulfato de
sódio e polidocanol; intensificadores de penetração, como
dimetil sulfóxido e seus sintéticos, compostos atônicos, derivados
de pirrolidona, compostos alcoólicos e compostos orgânicos;
pigmentos; perfumes; etc., mas não se limitando a isso.
[0031]
Além disso, o valor de pH da injeção é de 4 a 8;
preferencialmente, 5 a 7,5.
[0032]
Além disso, a solução de dióxido de cloro é armazenada como
uma injeção longe da luz a -20° C. a 11° C. por um longo período
de tempo. De preferência, a solução de dióxido de cloro é
armazenada ao abrigo da luz a -18° C a 9° C. Mais
preferencialmente, a solução de dióxido de cloro é armazenada
ao abrigo da luz a 2° C a 8° C.
[0033]
Um método para produzir a injeção contendo uma solução de
dióxido de cloro com uma concentração que excede sua
solubilidade da presente invenção inclui as seguintes etapas:
1) produzir um gás de dióxido de cloro com uma concentração de
99,9% ou mais por um método padrão; e
2) introduzir o gás dióxido de cloro em um meio a uma
temperatura baixa de -20° C a 11° C por meio de um duto.
[0036]
Os métodos para a produção de gás de dióxido de cloro de alta
pureza são conhecidos pelos especialistas na técnica; por
exemplo, reação do precursor de dióxido de cloro (clorito) e um
ácido para gerar dióxido de cloro gasoso; ou misturar e fazer
reagir ditionato com clorito para gerar dióxido de cloro gasoso.
Na etapa 2, o gás dióxido de cloro pode ser introduzido
diretamente em um meio gasoso, como ar ou nitrogênio, ou
pode ser borbulhado em uma solução diluída (por exemplo,
solução salina) contendo aditivos farmaceuticamente aceitáveis
que são comumente usados em injeções. Além disso, o dióxido
de cloro é introduzido no meio de baixa temperatura em uma
abordagem de cima para baixo. Particularmente, em -20° C. a 0°
C., um meio gasoso pode ser usado; e de -2° C a 11° C, pode ser
utilizada uma solução líquida que possa ser utilizada como
injeção; por exemplo, a 1° C. a 5° C., uma solução salina é usada
[0038]
Controlando o tempo, uma solução de dióxido de cloro com uma
concentração de 3 mg/ml (ou seja, 100% (p/p)) ou dióxido de
cloro puro pode ser preparada pelas etapas acima. De acordo
com os requisitos atuais, a solução de dióxido de cloro ou dióxido
de cloro puro pode ser diluída para uma concentração alvo e
então usada como uma injeção para o tratamento de doenças.
[0039]
A injeção contendo dióxido de cloro da presente invenção pode
ser administrada por qualquer meio de administração a um
tecido desejado. Por exemplo, a administração da injeção pode
ser intravenosa, intravenosa, intra-arterial, intramuscular,
subcutânea, intradérmica, intracardíaca, intraperitoneal,
intratecal, intra-articular, punção, retal, sublingual, nasal,
transdérmica, via inalação ou tópica a um órgão alvo ou tecido,
etc., mas não está limitado a isso.
[0040]
Qualquer uma das preparações em Regras Gerais sobre
Preparações na Farmacopeia da China pode ser usada como uma
forma de dosagem estendida da injeção contendo dióxido de
cloro na presente invenção. No método da presente invenção,
exemplos da forma de dosagem da injeção contendo dióxido de
cloro como droga incluem: injeções (incluindo suspensões e
emulsões) aplicadas diretamente no corpo; pomadas (incluindo
pomada graxa, pomada de emulsão (creme) ou pomada solúvel
em água); inalantes, preparações líquidas (incluindo colírios ou
gotas nasais), supositórios, adesivos, cataplasmas ou loções para
uso externo; ou comprimidos (incluindo revestimentos de açúcar,
películas e revestimentos de gel), cápsulas, grânulos, pós
(incluindo pós de graduação fina), pílulas, xaropes e pastilhas; e
similar.
MODALIDADES
Modalidade 1: Preparação de uma Injeção Contendo 15 mg/ml
de Dióxido de Cloro
[0041]
28% de solução de clorito de sódio e 50% de solução de ácido
cítrico foram misturados em um reator e, em seguida,
apresentados em uma solução salina contendo 0,9% de cloreto
de sódio a 1°C por meio de um duto, com uma entrada do duto
imersa na solução salina. O reator foi aquecido a uma
temperatura constante de 85° C por 30 minutos, e dióxido de
cloro foi borbulhado na solução salina que foi mantida sempre à
temperatura constante de 1° C por um dispositivo externo. Após
30 minutos, a solução misturada foi colocada para um recipiente
fechado e, em seguida, colocada a menos de 20° C. Depois que o
dióxido de cloro e a solução salina foram misturadas
uniformemente, a solução misturada foi colocada em uma
geladeira de 2° C a 8°C. ° C. para armazenamento.Pelas medições,
a solução de dióxido de cloro tem uma concentração de 15
mg/ml.
Modalidade 2: Testes de Toxicidade das Injeções Contendo
Dióxido de Cloro
[0042]
Preparação da injecção contendo dióxido de cloro: A injecção A
com uma concentração de cerca de 1,5% foi preparada
misturando um precursor de dióxido de cloro com um ácido.
Especificamente, uma solução equivocada contendo clorito de
sódio na concentração de 7,47% e cloreto de sódio na
concentração de 1,59% foi preparada com água deionizada para
obter uma primeira solução; e uma solução de ácido cítrico com
uma concentração de 16,7% foi preparada com água deionizada
para obter uma segunda solução. O mesmo volume de soluções
foi retirado dos recipientes de diferentes soluções, misturados, e
a solução foi deixada em repouso por 3 a 5 minutos. Por
medições, a concentração de dióxido de cloro era de cerca de
1,5%, o pH era de cerca de 2,1 e deveria ser usado para injeção
em 30 minutos.A injeção B é misturar um precursor de dióxido
de cloro com um ácido e depois adicionar hidróxido de sódio
para regular o pH para 7. de 1,59% foi preparado com água para
obter uma primeira solução; e uma solução de ácido cítrico com
uma concentração de 16,7% foi preparada com água deionizada
para obter uma segunda solução. O mesmo volume de soluções
foi retirado dos recipientes de diferentes soluções, misturados, e
as soluções foram deixadas em repouso por 3 a 5 minutos.
Adicionou-se 10% de solução de hidróxido de sódio para ajustar
o pH a 7. Pelas medições, a concentração de cloro de cloro era de
cerca de 1% e deveria ser usado para injeção em 30 minutos.
[0043]
Animais: camundongos Kunming (metade macho e metade
fêmea), 18 g a 22 g, SPF.
[0044]
Dosagem, via de administração e método: três grupos cada um
com cinco camundongos machos e cinco camundongos fêmeas,
que foram injetados por via subcutânea com as injeções A, B e C
na dose de 0,3 ml por animal (alta) e na dose de 0,1 ml por
animal ( baixo) por sete dias sucessivos, sendo então observado o
comportamento dos animais.
Resultados
[0045]
Para o grupo de injeção A, Dia 1: morreram 9 camundongos com
uma dose de 0,3 ml por animal (alta) e 5 camundongos com uma
dose de 0,1 ml por animal (baixa); Dia 2, 1 camundongo com uma
dose de 0,3 ml por animal (alta) morreu e 5 camundongos com
uma dose de 0,1 ml por animal (baixa) morreram.
[0046]
Para o grupo de injeção B, Dia 1: 7 camundongos com uma dose
de 0,3 ml por animal (alta) morreram e 4 camundongos com uma
dose de 0,1 ml por animal (baixa) morreram; Dia 2, 2
camundongos com uma dose de 0,3 ml por animal (alta)
morreram e 2 camundongos com uma dose de 0,1 ml por animal
(baixa) morreram; Dia 3: 1 camundongo com uma dose de 0,3 ml
por animal (alta) morreu e 3 camundongos com uma dose de 0,1
ml por animal (baixa) morreram; Dia 5: nenhum camundongo
com uma dose de 0,3 ml por animal (alta) morreu e 1
camundongo com uma dose de 0,1 ml por animal (baixa) morreu.
[0047]
Para o grupo da injeção C, do primeiro ao sétimo dia, nenhum
camundongo morreu.
[0048]
Conclusão: a injeção C é relativamente mais segura. É indicado
que a solução de dióxido de cloro como uma injeção preparada
pela mistura de clorito de sódio com um ácido por um método
convencional não é segura principalmente devido à presença de
outras impurezas além do dióxido de cloro após a mistura e ao
baixo pH. Portanto, a injeção contendo dióxido de cloro da
presente invenção é relativamente mais segura ou menos tóxica.
Modalidade 3: Testes de eficácia das injeções contendo dióxido
de cloro
[0049]
Injeção de dióxido de cloro: injeção A contendo dióxido de cloro
com uma concentração de 2 mg/ml de dióxido de cloro foi
preparado à temperatura ambiente por um método convencional
Não qual o dióxido de cloro gasoso foi gerado por um método
padrão para preparar o dióxido de cloro cloro gasoso com uma
concentração de 99,9 % ou mais (reagindo clorito com um ácido).
Fazendo borbulhar e dissolvendo o dióxido de cloro gasoso numa
solução salina à temperatura ambiente, prepare uma solução de
dióxido de cloro com uma concentração de 2 mg/ml (cerca de
2000 ppm).A injeção B contendo 8 mg/ml de dióxido de cloro e
solução salina foi diluída uma solução com uma concentração de
15 mg/ml de dióxido de cloro preparada pelo método da
Modalidade 1. A injeção C contendo 15 mg/ml de dióxido de
carbono cloro e uma solução salina solução foi preparada pelo
método na Modalidade 1.
[0050]
Animais: camundongos machos C57, 16-18 g, SPF, fornecidos
pelo Tested animal Center do Chinese Analysis Institute for Drugs
and Biological Products.
[0051]
Método experimental: cada um dos camundongos foi inoculado
por via subcutânea com 3 × 106 células de melanoma B16 em
sua axila direita posterior e os camundongos foram divididos
aleatoriamente em quatro grupos, cada um com 10
camundongos. A partir do oitavo dia após a inoculação do
melanoma, para três grupos de injeção intratumoral, os
camundongos foram injetados intratumoralmente com as
respectivas injeções A\B\C b nas respectivas doses de 2\8\15
mg/ml e 0,2 ml por animal a cada quatro dias, totalizando 3
vezes. Para o grupo de tumor modelo como controle, os
camundongos foram injetados com 0,9% de injeção de água
sanitária de sódio (na dose de 0,2 ml por animal). O experimento
durou 20 dias.Os animais (dez camundongos) dos grupos
experimentais foram sacrificados no quarto dia após a
administração final. Os camundongos sacrificados foram pesados
e os tumores foram completamente removidos dos
camundongos e pesados.
[0052]
Método estatístico: O peso e os dados de peso do tumor foram
expressos comox±S. A comparação entre os grupos foi realizada
pelo teste t, onde p<0,05: diferença significativa; e p<0,01:
diferença muito significativa.
[0053]
Determinação da eficácia da droga: taxa de influência do
tumor={1-(peso médio do tumor T do grupo de
administração/peso médio do tumor C do grupo de controle)} ×
100%

Resultados

TABELA 1
Efeito da injeção intratumoral de dióxido de cloro na metastática
melanoma B16 em camundongos
Tumor
Número administração Tumor induzida
Dose de rota/Administração Peso (X ± s, g) peso avaliar
Grupos (mg/ml) animais freqüência Antes Depois (X ± s,
g) (%)
modelo — 10 Q4D it × 3 17,9 ± 0,7 3,98 ± 0,41 —
ao controle 19,7 ± 0,9
Injeção A 2.0 10 Q4D it × 3 17,7 ± 0,4 3,01 ± 1,43 24.37*
19,4 ± 1,8
Injeção B 8,0 10 Q4D it × 3 17,8 ± 0,5 1,01 ± 0,23 74,62**
19,5 ± 1,3
Injeção C 15,0 10 Q4D it × 3 17,9 ± 0,6 0,41 ± 0,34 89,69**
19,6 ± 1,0
Notas:
Q4D significa administrar uma vez a cada 4 dias;
*p < 0,05, e
**p < 0,01.

Conclusão: quando uma injeção contendo dióxido de cloro foi

usada para tratar tumores malignos, a taxa de seguimento do
tumor depende da dose, e a injeção tem um efeito de reflexo
mais evidente nos tumores com uma dose superior a 8 mg/ml.
Portanto, a injeção contendo dióxido de cloro na presente
invenção tem efeito farmacológico mais desejável.
Modalidade 4: Efeito da Injeção Contendo Dióxido de Cloro na
Inibição de Tumores por Ablação de Tumores e Estimulação da
Resposta do Sistema Imunológico
[0056]
Injeção de dióxido de cloro: a injeção A com uma concentração
de 2,5 mg/ml de dióxido de cloro foi preparada à temperatura
ambiente por um método convencional no qual o dióxido de
cloro gasoso foi gerado por um método padrão para a
preparação de dióxido de cloro gasoso com uma concentração de
99,9% ou mais (reação de clorito com um ácido). Fazendo
borbulhar e dissolvendo o dióxido de cloro gasoso numa solução
salina à temperatura ambiente, preparou-se uma solução de
dióxido de cloro com uma concentração de 2,5 mg/ml (a cerca de
2500 ppm). Uma injeção B é uma injeção contendo 8 mg/ml de
dióxido de cloro e uma solução salina. Uma solução com uma
concentração de 15 mg/ml de dióxido de cloro foi preparada pelo
método da Modalidade 1 e então diluída para uma concentração
de 8 mg/ml com a solução salina.
[0057]
Animais: camundongos machos C57, 16-18 g, SPF, fornecidos
pelo Tested animal Center do Chinese Analysis Institute for Drugs
and Biological Products.
[0058]
Método experimental: cada um dos camundongos foi inoculado
por via subcutânea com 1 × 106 células B16 em sua axila
posterior direita e inoculado por via intravenosa com 5 × 105
células B16 para construir um modelo de metástase pulmonar.
Os camundongos foram divididos aleatoriamente em 4 grupos,
cada um com 9 camundongos. A partir do oitavo dia após a
inoculação do melanoma, para três grupos de injeção
intratumoral, os camundongos foram injetados
intratumoralmente com as respectivas injeções A\B \C na dose
de 2,5\8\15 mg/ml e 0,2 ml por animal a cada quatro dias , no
total 4 vezes. Para o grupo de modelo de tumor como controle,
os camundongos foram injetados com 0,9% de solução de
injeção de cloreto de sódio (na dose de 0,2 ml por animal). O
experimento durou 28 dias. No 21º dia, 3 camundongos em cada
grupo foram detectados para fatores de células inflamatórias. No
28º dia, todos os animais (6 camundongos) foram sacrificados, e
seus tecidos pulmonares foram removidos. O número de
metástases de B16 nos tecidos pulmonares foi contado e o tumor
foi completamente removido e pesado. A taxa de inibição do
tumor foi calculada.
[0059]
Método estatístico: O número de metástases pulmonares e o
peso do tumor foram expressos comox±S. A comparação entre os
grupos foi realizada pelo teste t, o valor de p menor que 0,05
indica diferença significativa, onde p<0,05: diferença significativa;
e p<0,01: diferença muito significativa.
[0060]
Determinação da eficácia da droga: taxa de influência do
tumor={1-(peso médio do tumor T do grupo de
administração/peso médio do tumor C do grupo de controle)} ×
100%

Resultados
[0061]
MESA 2
Efeito da injeção intratumoral de injeção de dióxido de cloro em
melanoma metastático subcutâneo B16 e metástases pulmonares em
camundongos
Tumor
Número administração número de pulmão Tumor
induzida
Dose de rota/Administração metástase (X ± s, g)/ peso
avaliar
Grupos (mg/ml) animais freqüência Significado (X ± s,
g) (%)
modelo — 6 Q4D it × 4 15 ± 7 — 3,53 ± 0,45 —
ao controle
Injeção A 2.5 6 Q4D it × 4 14 ± 7 — 2,21 ± 0,53
37,39*
Injeção B 8,0 6 Q4D it × 4 3 ± 1 ** 0,71 ± 0,13 79,89**
Injeção C 15,0 6 Q4D it × 4 0 ± 0 ** 0,11 ± 0,07 96,88**
Notas:
Q4D significa administrar uma vez a cada 4 dias;
*p < 0,05, e
**p < 0,01.
[0062]
O fator celular inflamatório IL-1β (pg/ml) no sangue periférico foi
detectado pelo método ELISA, e o fator de necrose tumoral NF-α
(pg/ml/40 μg proteína) nos tecidos tumorais foi detectado pelo método
ELISA.

TABELA 3
Resultados da detecção do fator celular inflamatório IL-1β e tumor
fator de necrose NF-α em camundongos em diferentes grupos
Grupos N IL-1β (X±s) TNF-α (X ± s)
Injeção C 3 98,75 ± 10,22**170 ± 30**
Injeção B 3 79,34 ± 5,66* 145 ± 32**
Injeção A 3 64,60 ± 28,36 94 ± 32*
Controle de modelo 3 60,00 ± 9,644 35 ± 12
Notas:
*p < 0,05 e **p < 0,01.

[0063]
Os resultados mostram, em comparação com a solução
convencional de dióxido de cloro com uma concentração de 2,5
mg/ml, que a injeção contendo uma alta concentração de
dióxido de cloro na presente invenção pode aumentar
significativamente o número de fatores celulares liberados pelas
células imunes antitumorais, portanto significativamente inibindo
o crescimento de tumores de tecidos não injetados, o
crescimento de tumores distais e tumores metastáticos.
Considera-se que uma alta concentração de dióxido de cloro
pode facilitar a apoptose ou necrose das células tumorais, que
entregam antígenos específicos para estimular o reconhecimento
das células imunes e gerar uma resposta imune correspondente,
de modo que os tumores distais e os tumores metastáticos sejam
inibidos (Krysko DV, Garg AD, Kaczmarek A, Krysko O, Agostinis P,
Vandenabeele P. Morte celular imunogênica e DAMPs na terapia
do câncer.
[0064]
Conclusão: quando a injeção contendo dióxido de cloro foi usada
para tratar tumores malignos, a taxa de inibição do tumor
depende da dose, e a injeção tem um efeito de inibição mais
óbvio nos tumores com uma dose superior a 8 mg/ml. A injeção
de uma dose de 2,5 mg/ml de dióxido de cloro não tem efeito de
inibição em tumores metastáticos, enquanto a injeção de uma
dose superior a 8 mg/ml inibe significativamente tanto os
tumores em locais não injetados quanto os tumores
metastáticos. Essa inibição é exercida causando uma resposta
imune do sistema imunológico.
Modalidade 5: Testes de Preparação e Preservação de Injeção
Contendo Dióxido de Cloro
[0065]
28% de solução de clorito de sódio e 30% de solução de ácido
clorídrico foram misturados em um reator equipado com apenas
uma saída de gás. A saída de gás do reator foi conectada ao PBS
(solução avançada de fosfato para injeção) por meio de um duto.
O duto foi imerso no PBS a uma temperatura de 1° C, que foi
mantida constante com um dispositivo externo de ventilação. O
reator contendo a solução mista de clorito de sódio e a solução
de ácido clorídrico foi aquecido a 85° C. no qual o recipiente foi
alimentado (o recipiente foi alimentado abaixo da superfície
líquida da solução mista através de uma entrada de gás) e o gás
de dióxido de cloro gerado foi borbulhado no PBS frio com
mortalidade. Após um período de tempo, o dióxido de cloro e o
PBS foram transferidos para um recipiente de vidro fechado e
observado a 20°C. Depois que o dióxido de cloro e o PBS foram
misturados uniformemente, o recipiente de vidro fechado foi
armazenado em um refrigerador de 2°C a 8°C. . A solução foi
acondicionada em frascos de vidro de 10 ml como injeções e, em
seguida, mantida ao abrigo da luz de 2° C a 8° C.
[0066]
As injeções de dióxido de cloro preparadas em frascos de vidro
de 10 ml foram armazenadas em salas escuras a 5°C e 23°C. Foi
feita comparação da estabilidade da injeção de dióxido de cloro
em diferentes temperaturas. O conteúdo de ClO 2 nas amostras
após 1 dia, 22 dias e 100 dias foi medido por espectrofotometria
em 100 dias, respectivamente. Os resultados foram mostrados na
Tabela 4.
TABELA 4
Medições de ClO 2 em amostras
Armazenado a 5°C. Armazenado a 23°C.
1 dia 20 mg/ml (100%) 20 mg/ml (100%)
22 dias 19.6 mg/ml (98%) 19 mg/ml (95%)
100 dias 18.5 mg/ml (92,5%) 13.2 mg/ml (66%)
[0067]
É indicado que a injeção contendo dióxido de cloro da presente
invenção seja preferencialmente armazenada a uma temperatura
baixa de modo que a concentração de dióxido de cloro possa ser
reduzida menos ou a injeção possa ser armazenada por um
período de tempo mais longo.
Modalidade 6: Testes de Preparação e Preservação da Injeção
Contendo Dióxido de Cloro
[0068]
35% de solução de clorito de sódio e 40% de solução de ácido
sulfúrico foram misturados em um reator equipado com apenas
uma saída de gás. A saída de gás do reator foi conectada a outro
recipiente a -10° C por meio de um duto, e o duto foi inserido no
recipiente em uma abordagem de cima para baixo com apenas ar
a uma temperatura de -10° C, que foi mantida constante com um
dispositivo externo de refrigeração. Nitrogênio foi alimentado no
reator contendo a solução mista de clorito de sódio e solução de
ácido clorídrico (o nitrogênio foi alimentado abaixo da superfície
líquida da solução mista através de uma entrada de gás), e o
dióxido de cloro gerado foi borbulhado no recipiente de baixa
temperatura com azoto. Após um período de tempo, o dióxido
de cloro foi anexado ao fundo do recipiente na forma sólida ou
líquida. O dióxido de cloro foi transferido para um recipiente
fechado de vidro ou metal por um método padrão e, em seguida,
o recipiente fechado de vidro ou metal foi armazenado em uma
geladeira de -20° C a -10° C. Por medições, o dióxido de cloro
preparado foi dióxido de cloro tendo uma concentração
aproximada de 100%. O dióxido de cloro foi embalado em frascos
de vidro de 10 ml como injeções, com 0,2 g de dióxido de cloro
puro por frasco. Os frascos de vidro foram armazenados ao
abrigo da luz a -20° C. a -10° C. Quando o dióxido de cloro é
administrado a um paciente como uma injeção, o dióxido de
cloro é diluído com uma solução salina e injetado
imediatamente. Por exemplo, 10 ml de solução salina são
injetados no frasco de vidro de 10 ml com dióxido de cloro para
obter uma injeção de dióxido de cloro. Depois que o dióxido de
cloro é uniformemente dissolvido na solução salina,
[0069]
A injeção de dióxido de cloro preparada embalada em frascos de
vidro de 10 ml foi armazenada em um quarto escuro a -10° C e 5°
C. A comparação da estabilidade da injeção de dióxido de cloro
em diferentes temperaturas foi feita Peso de ClO 2 em amostras
após 1 dia , 22 dias e 100 dias foram medidos com uma balança
de precisão, respectivamente, e os resultados foram
apresentados na Tabela 5.
TABELA 5
Peso de ClO 2 em amostras
Armazenado a -10° C. Armazenado a 5°C.
1 dia 200 mg (100%) 200 mg (100%)
22 dias 198 mg (99%) 190 mg (95%)
100 dias 192 mg (96%) 168 mg (84%)
[0070]
É indicado que a injeção contendo alta concentração de dióxido
de cloro na presente invenção seja preferencialmente
armazenada em baixa temperatura. Particularmente, a injeção de
dióxido de cloro na forma não-solucional é mais estável quando
armazenada a -10° C do que armazenada a 5° C.
Modalidade 7: Preparação de Injeções Contendo 3 mg/ml, 5
mg/ml e 25 mg/ml de Dióxido de Cloro
[0071]
28% de solução de clorito de sódio e 50% de solução de ácido
cítrico foram misturados em um reator, e então introduzidos a
uma solução salina contendo 0,9% de cloreto de sódio a 1°C por
meio de um duto, com a entrada do duto imersa no solução
salina. O reator foi aquecido por 30 minutos a uma temperatura
constante de 90°C, e foi borbulhado dióxido de cloro na solução
salina que foi mantida sempre a uma temperatura de 1°C com
um dispositivo externo. Após 40 minutos, a solução mista foi
transferida para um recipiente fechado e, em seguida, colocada a
20° C. Depois que o dióxido de cloro e a solução salina foram
misturados uniformemente, a solução mista foi colocada em uma
geladeira de 2° C a 8° C . para armazenamento. Por medições,
preparou-se uma solução de dióxido de cloro com uma
concentração de 25 mg/ml. Esta solução de dióxido de cloro foi
diluída com uma solução salina para obter uma solução de
dióxido de cloro com uma concentração de 3 mg/ml e uma
solução de dióxido de cloro com uma concentração de 5 mg/ml.
A solução pode ser embalada em frascos de vidro de 10 ml como
injeções e, em seguida, armazenada ao abrigo da luz entre 2° C e
8° C.
Reivindicações (14)
Ocultar Dependente
O que é alegado é:
1 . Uma injeção contendo dióxido de cloro, em que a injeção é
composta de dióxido de cloro e um aditivo adequado para
injeções; e uma concentração de dióxido de cloro na injeção
quando usada é de 3-25 mg/ml.
2 . A injeção de reivindicação 1, em que a injeção é armazenada
longe da luz a -20° C. a 11° C.
3 . A injeção de reivindicação 2, em que a injeção é armazenada
longe da luz a -18° C. a 9° C.
4 . A injeção de reivindicação 3, em que a injeção é armazenada
longe da luz a 2° C. a 8° C.
5 . A injeção de reivindicação 1, em que a concentração de
dióxido de cloro na injeção quando usada é de 5-25 mg/ml.
6 . A injeção de reivindicação 5, em que a concentração de
dióxido de cloro na injeção quando usada é de 8-20 mg/ml.
7 . A injeção de reivindicação 1, em que a injeção de uma solução
concentrada é diluída para uso.
8 . A injeção de reivindicação 1, em que a administração da
injeção a um órgão ou tecido alvo é intravenosa, arterial,
intramuscular, subcutânea, intradérmica, intracardíaca,
intraperitoneal, intratecal, intra-articular, punção, retal,
sublingual, nasal, transdérmica, por inalação ou tópica.
9 . A injeção de reivindicação 1, em que a injeção compreende
formas de uma suspensão e uma emulsão.
10 . A injeção de reivindicação 1, em que a injeção se estende a
formas selecionadas do grupo constituído por pomada, inalante,
licor, supositório, adesivo, cataplasma, loção para uso externo,
comprimido, preparado líquido, cápsula, grânulo, pó,
comprimido, xarope e pastilha.
11 . Um método para produzir a injeção de reivindicação 1,
composta:
1) geração de gás dióxido de cloro;
2) introdução do gás dióxido de cloro em um meio a -20° C. a 11°
C. através de um duto; e
3) quando o meio é um meio gasoso, coletar dióxido de cloro
para obter uma injeção de dióxido de cloro com uma
concentração de dióxido de cloro de 99,9% ou mais; e quando o
meio é um meio líquido, elevar a temperatura do meio líquido
para menos de 20°C para obter a injeção contendo dióxido de
cloro após o dióxido de cloro ser uniformemente dissolvido no
meio líquido.
12 . O método de reivindicação 11, em que na etapa 3, o meio
líquido para absorção do gás dióxido de cloro é uma solução
salina de 1° C a 5° C.
13 . O método de reivindicação 11, em que na etapa 2, o gás
dióxido de cloro é introduzido no meio por meio do duto em uma
abordagem de cima para baixo.
14 . O método de reivindicação 11, em que o meio é um meio
líquido e um aditivo é adicionado ao meio líquido antes ou
depois da introdução do dióxido de cloro gasoso.