A doença de Alzheimer é a causa mais comum de demência , tipicamente apresentando uma perda

progressiva da função cognitiva e de memória . É um distúrbio complexo, com um forte componente

genético . No passado, os estudos genéticos identificados mutações em três genes - APP ( proteína
precursora de amilóide de codificação ) , PSEN1 ( que codifica a presenilina 1 ) , e PSEN2 ( que codifica a
presenilina 2 ) - como a causa da doença em várias famílias , a maioria dos quais tem início - início da
doença. Expansões em C9ORF72 são encontrados em famílias com tipos mistos de doença. Na doença de
início tardio , a forma mais comum de doença de Alzheimer , o alelo ε4 do gene da apolipoproteína E
( ApoE ) é o principal conhecida factor.1 - 5 Diversos loci genómicos foram identificados em estudos
associação de genoma de baixo risco de risco genético fatores para a doença lateonset ( implicando CLU ,
PICALM , CR1 , BIN1 , MS4A , CD2AP , CD33 , EPHA1 e ABCA7 6-9) .
Avanços nas técnicas de seqüenciamento permitiram a avaliação de exomes e genomas inteiros. Estas
técnicas têm o potencial para identificar mutações raras em famílias ou pacientes nos quais a análise de
ligação não podem ser executadas e identificar variantes raras com efeitos moderados a fortes em doenças
complexas.
Homozygous perda de função mutações em TREM2 , que codificam o receptor de disparo expressos em
células mielóides 2 de proteína , foram previamente associados com uma forma recessiva autossómica da
demência de aparecimento precoce que apresenta com quistos ósseos e consequentes fracturas chamado
Osteodistrofias lipomembranosa policístico com esclerosante leucoencefalopatia ou Nasu- Hakola
doença10 Nós recentemente identificaram mutações TREM2 homozigotos em três pacientes turcos
apresentam um fenótipo clínico associado com a demência frontotemporal e com leucodistrofia , mas sem
qualquer sintomas.11 associada ao osso Além disso, uma meta- análise de genoma resultados pooling de
ligação para início tardio da doença de Alzheimer identificou oito regiões de ligação com as associações
nominalmente significativos. Uma dessas regiões é no cromossomo 6 ( 6p21.1 - Q15 ) e inclui TREM2.12
Neste estudo , nós queríamos descobrir se variantes heterozigotos em TREM2 aumentar o risco de doença
de Alzheimer.
MÉTODOS
estudo Design
Realizamos exome ou full- seqüenciamento do genoma em amostras de 281 pacientes com doença de
Alzheimer e 504 pessoas não afectadas , com o último , incluindo 175 idosos ( > 65 anos de idade) que
estavam determinados a ser livre da doença de Alzheimer na análise neuropatológico . Nos dados
seqüência resultante , foram analisados seis genes (APP , PS1 , PS2 , PGRN , MAPT e TREM2 ) e
observou um número desproporcional de variantes no exão 2 de TREM2 em amostras de casos. Utilizou-
se polimerase em cadeia ( PCR), amplificação e sequenciação de Sanger para analisar o exão 2 de TREM2
em amostras a partir de 811 pacientes com doença de Alzheimer e 603 pessoas não afectadas . No total,
analisaram amostras de 1.092 pacientes com doença de Alzheimer e 1.107 controles , os quais eram de
origem européia ou norte-americana (Tabela 1 )
Tabela 1. O seqüenciamento de amostras de pacientes com Doença de Alzheimer e de controles.

RESULTADOS
Encontramos significativamente mais variantes no exão 2 de TREM2 em pacientes com doença de
Alzheimer do que aqueles sem a doença (P = 0,02). Além disso, observou-se seis variantes (H157Y,
R98W, D87N, T66M, Y38C e Q33X) que estavam presentes nos casos e não nos controles da série
descoberta e duas variantes que estavam presentes apenas nos controles (N68K ea L211P) TABELA 2
Destes variantes D87N foi significativamente associada doença (P = 0,02).
Nós já observou o T66M, Y38C e Q33X variantes no estado homozigoto em pacientes com síndrome
demencial-like frontotemporal. Variantes Q33X homozigotos também foram identificados em pacientes
com doença de Nasu-Hakola. A mutação Q33X quase certamente resulta na perda da função da proteína
TREM2. Assim, propomos que as variantes T66M e Y38C resultar em pelo menos alguma perda de
função. Em conjunto, estes três variantes são mais comuns em pessoas com doença de Alzheimer do que
em pessoas não afectadas (P = 0,01).
Tabela 2. Variantes encontradas em TREM2 através de Seqüenciamento de DNA em pacientes com
doença de Alzheimer e em controles de Codificação.

Das variantes na TREM2 associados com a doença de Alzheimer , a variante R47H mostrou a associação
mais forte ( P < 0,001 ) . Na meta-análise de três conjuntos de estudos de associação de genoma da doença
de Alzheimer ( EADI , ANM e Gerad ) (Tabela S2 e S1 na Figura Suplementar apêndice) de dados
imputados , observou-se associação significativa com a doença (P = 0,002).
Dada a limitação ao imputar variantes raras , nós diretamente genotipados a variante R47H em 1994
pacientes com doença de Alzheimer e 4.062 controles ( Tabela S1 no Suplementar Apêndice ) , a série ,
que incluiu 1.887 pacientes com doença de Alzheimer e 4.061 controles não previamente seqüenciados ou
imputados . Análise de toda a série por meio de regressão logística com um modelo aditivo mostrou uma
associação forte e altamente significativa com a doença de Alzheimer (odds ratio , 5,05 , intervalo de
confiança de 95% [IC], 2,77-9,16 , P = 9,0 × 10-9 ) . Análises em participantes não previamente
genotipados ou imputados também mostrou uma forte e altamente significativa associação (odds ratio ,
4,59 , 95% CI , 2,49-8,46 , P = 1,4 × 10-7 ) .
O exame patológico de cinco cérebros com variantes que têm efeitos possivelmente patogênicos (Q33X,
R47H, e D87N) revelou que todos eram Braak fase 6 (totalmente desenvolvido a doença de Alzheimer) e
tiveram resultados normais sem características distintivas. Duas das amostras apresentaram alguma
doença Lewy-body leve, e um tinha documentado proteína TAR DNA-binding 43 (TDP-43) doença
(Figura 1).
Em dois casos, foram observadas algumas anormalidades da substância branca leves, mas estes não foram
fora do intervalo seria de esperar de um caso típico de doença de Alzheimer.
São mostrados os achados patológicos em amostras contendo D87N variante (Painéis de A a D) e R47H
variante (Painéis E através L) obtidas a partir de pacientes com doença de Alzheimer. Um portador da
variante D87N tinham placas maduros ( Painel A , seta ) , juntamente com mais placas difusas e um grau
moderado de angiopatia amilóide cerebral ( Painel B ) . Amilóide Beta foi encontrado depositado nos
vasos sanguíneos leptomeníngeas . Imunohistoquímica Tau revelou placas neuríticas ( Painel C) no
hipocampo e numerosos emaranhados neurofibrilares nas regiões corticais ( Painel D). Dois portadores da
variante R47H também apresentaram características patológicas da doença de Alzheimer ( com secções
obtidas a partir de um paciente em painéis E a H e a partir do outro em painéis I a L ) , sob a forma de
placas maduras e difusas ( painéis E e J , flecha ) . Grave angiopatia amilóide cerebral era evidente , com a
presença de parênquima envolvimento capilar ( Painel F ) e deposição circunferencial de beta amilóide
( painel K ) . Também estiveram presentes placas neuríticas ( painéis G e L, de seta no painel de L ),
emaranhados neurofibrilares (Painéis H e L ) , e abundantes tópicos neuropil . No entanto, um portador da
variante R47H mostrou apenas angiopatia amilóide cerebral moderada , sem outras anomalias patológicas
(Painel I, inserção) . A análise imuno-histoquímica foi levada a cabo com a utilização de anticorpos contra
anticorpos contra beta amilóide beta amilóide ( DAKO ; 1:100 ) para identificar a proteína beta amilóide
em ambas as placas e a angiopatia amilóide cerebral , e o anticorpo AT8 ( Autogen BIOCLEAR ; 1:600 )
para identificar tau .

No controle de cérebro humano, TREM2 foi amplamente expressa, em níveis elevados na matéria branca
e abundância substancial no hipocampo e neocortex, mas em níveis baixos no cerebelo (Figura S2 no
Apêndice suplementar). Esse padrão de expressão é parcialmente coerente com as características
patológicas observadas em ambas as doenças Nasu-Hakola e doença de Alzheimer.

Análise imuno-histoquímica de Trem2 em TgCRND8 Ratos.

As lâminas de amostras de ratinhos TgCRND8 (um modelo de ratinho transgénico da doença de

Alzheimer) e da mesma ninhada com a mesma idade (controlos), em diferentes idades mostram que
Trem2 é expressa como pequenos grânulos no citoplasma de neurónios (setas) em ambos os ratinhos e os
controlos transgénicos. Em uma corrediça de uma amostra a partir de um ratinho transgénico, as placas
amilóides também estão rodeados por grânulos Trem2-positivas (Painel D, seta), e os grânulos Trem2
aumentam em número e tamanho, quando comparados com os controlos. A barra de escala representa 30
mm de Painéis A, B, C, E, e F e 60 mm de Painel D.