Licenciatura: Biotecnologia Medicinal

1.º ano – 2.º semestre

Bioquímica II

Extração, quantificação e determinação do grau de pureza do DNA de Banana

Objectivo: Este trabalho tem como objetivo extrair e quantificar o DNA da banana.

Procedimento experimental
Reagentes:
- Banana
- Solução de extracção (vol. final 50 mL):
1 g de NaCl
5 mL Detergente da loiça
- Álcool 95% gelado
- Tampão TE (vol. final 5 mL)
Tris-HCl [10mM], pH 8,0; MM = (157,60 g/mol)
EDTA [1mM]; MM = (372,24 g/mol)

Equipamento
- Pipeta de Pasteur
- Tubo de Ensaio
- Proveta
- Almofariz
- Papel de filtro.

Parte 1:
1 – Descascar a banana
2 – Pesar 10 g.
3 - Macerar a banana num almofariz.
4 – Adicionar 40 mL da solução de extração
5 – Filtrar a mistura (7mL), para um tubo de ensaio limpo.
6 – Adicionar à solução, 7 mL de etanol 95%, lentamente.
7 – Inverter o tubo com cuidado até o aparecimento do DNA precipitado.
8 – Pescar os filamentos esbranquiçados, enrolando-os com a ponta da pipeta de Pasteur.
9 - Retirar o DNA e lavar com cerca de 30 ml de etanol (Falcon/tubo) a 70% gelado.
10 - Colocar 150μl de tampão TE e adicionar o DNA.

Parte 2:
1. Diluir 20μl da suspensão contendo DNA em 980μl de H2O (1/50). Determinar a absorvância a
260 e a 280nm:

Abs260=

Abs280=

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1.º ano – 2.º semestre
Bioquímica II

Se 1 unidade de DO corresponde a 50μg/ml de DNA em cadeia dupla. Calcule concentração de

DNA extraído:

Concentração (μg/ml ) da solução diluída=

Concentração (μg/ml) da solução inicial=

Massa de DNA (μg)=

Pela relação entre as absorvências a 260nm (DNA) e a 280nm (proteínas e outros

contaminantes) pode determinar o grau de pureza da suspensão de DNA. Esta relação deve ser
de 1,8 – 2.

Abs260/Abs280 =

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