433871-Fisiologia e Metabolismo Microbiano

INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E
TECNOLOGIA DO RIO GRANDE DO NORTE
Campus Macau
Curso de Licenciatura em
Biologia
MICROBIOLOGIA
IFRN/Macau - Curso de Biologia - Microbiologia- Profa Llian Vieira (lilian.vieira@ifrn.edu.br)
FISIOLOGIA E
METABOLISMO
MICROBIANO
Fisiologia Microbiana:
Nutrio e Crescimento
Nutrio Microbiana
Componentes necessrios s clulas
Meios de Cultura
Condies Ambientais
Crescimento Populacional
Ciclo de Crescimento
NUTRIO
MICROBIANA
NUTRIO MICROBIANA
Todos os organismos vivos compartilham
algumas necessidades nutricionais em comum:
carbono, nitrognio e gua.
Os elementos qumicos
principais
para
o
crescimento das clulas
incluem C, H, O, N, P e
S e so denominados
de macronutrientes.
NUTRIO MICROBIANA
Cultivo in vitro: quando se conhece as
exigncias nutricionais .
Cultivo in vivo: quando exigncias
nutricionais especficas so desconhecidas.
Para o cultivo in vitro so utilizados meios

de cultura que simulam e at melhoram as
condies naturais.
O carbono um dos elementos mais

importantes
para
o
crescimento
microbiano todos requerem carbono.
NUTRIO MICROBIANA
MACROnutrientes:
necessrios
em
grande
quantidade. Tem papel importante na estrutura e
metabolismo.
MICROnutrientes: quantidades mnimas. Funes
enzimticas e estruturais das biomolculas.
Uma clula tpica
Componentes necessrios
clulas
s
Fonte
de Carbono
Compostos
heterotrficos):
orgnicos
(microrganismos
- Carboidratos
- Lipdeos
- Protenas
Deles se obtm energia e unidades bsicas

para o crescimento celular.
Utilizao
de
CO2
(microrganismos
autotrficos) a fonte de energia provm da luz.
s clulas
Fonte de Nitrognio
o elemento mais abundante depois do C,
cerca de 12%.
Molculas
orgnicas
(aminocidos,
protenas, etc.)
Molculas inorgnicas (NH3, NO3-, N2)
s
clulas
Hidrognio
Principal elemento dos compostos orgnicos e
de diversos inorgnicos (gua, sais e gases).
Funes do H:
Manuteno do pH;
Formao de ligaes de H entre molculas;
Serve como uma fonte de energia nas reaes
de oxi-reduo da respirao.
s clulas
Oxignio
Elemento comum encontrado nas molculas
biolgicas
(aminocidos,
nucleotdeos,
glicerdeos ...).
obtido a partir das protenas e gorduras.
Na forma de oxignio molecular (O 2),
requerido por muitos (aerbios)
processos de gerao de energia.
para
os
clulas
s
Outros
macronutrientes:
P
Snese de cidos nuclicos, ATP;
S
Estabilidade de aminocidos, componente de
vitaminas;
K
Atividade de enzimas;
Mg Estabilidade dos ribossomos;
Ca Estabilidade da parede celular;
Na Requerido por microrganismos marinhos;
Fe
Papel-chave na respirao, componente dos
citocromos e das protenas envolvidas no transporte de
eltrons.
clulas :
s
Micronutrientes
Traos dos seguintes METAIS so necessrios
na composio de um meio de cultura:
Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B
Exercem funo estrutural em vrias enzimas
Nem sempre sua adio necessria.
Meios sintticos com compostos de alto
grau de pureza e gua ultra pura podem
apresentar deficincias desses elementos.
MEIOS DE
CULTURA
Solues de nutrientes para promover o
crescimento de microrganismos.
No existe um meio de cultura universal, e
sim vrios tipos de meios para diversas
finalidades.
Para
obter
sucesso
no
cultivo
de
microrganismos necessrio o conhecimento
de suas exigncias nutricionais, para que os
nutrientes sejam fornecidos de forma e
proporo adequada.
Como
determinar
uma
composio inicial para um meio
de
cultivo:
Passo
1: utilizar dados da composio elementar
Elemento
Composio
elementar mdia
(% do peso seco)
Bactria
Fungo
Carbono
52
51
hidrognio
Nitrognio
13
8,5
Fsforo
2,5
0,4-4,5
Enxofre
0,6
0,1-0,5
Potssio
2,5
0,2-2,5
Sdio
0,75
0,02-0,5
Clcio
0,55
0,1-1,4
Magnsio
0,25
0,1-0,5
Cloro
0,5
Ferro
0,1
0,15
Relao C:N mdia
4:1
6:1
Relao C:N:P:S
85:23:4:1
MEIOS DE
CULTURA
Ex: Para
produzir 10 g
de clulas
bacterianas
so
necessrios
de 1,3 g
(13%) de N.
(% do peso seco)
Elemento
Bactria
Fungo
Carbono
52
51
hidrognio
Nitrognio
13
8,5
Fsforo
2,5
0,4-4,5
Enxofre
0,6
0,1-0,5
Potssio
2,5
0,2-2,5
Sdio
0,75
0,02-0,5
Clcio
0,55
0,1-1,4
Magnsio
0,25
0,1-0,5
Cloro
0,5
Ferro
0,1
0,15
Relao C:N mdia
4:1
6:1
Relao C:N:P:S
85:23:4:1
MEIOS DE
CULTURA
10 g de clulas bacterianas
Com relao ao carbono considerar tambm frao

para energia e manuteno (heterotrficos)
Frao para biomassa: = 5,2 g de C ou 13 g de
glicose (40% de C)
Relao C:N = 5,2/1,3 = 4:1
Como
determinar
uma
composio inicial para um meio
de
cultivo:
Passo 2: otimizao
Condies Ambientais
Temperatura;
Oxignio;
pH;
Radiao
eletromagntica;
Presso
atmosfrica,
hidrosttica
osmtica.
Efeito da Temperatura no
Crescimento Microbiano
Efeito do Oxignio no Crescimento

Microbiano
Meio
gelatinoso
com
indicador redox:
Rosa quando oxidado
Incolor quando reduzido
a) Aerbio
b) Anaerbio
c) Facultativo
d) Microaerfilo
e) Anaerbio aerotolerante
CRESCIMENTO
MICROBIANO
CRESCIMENTO MICROBIANO
Em Microbiologia crescimento geralmente o
aumento do nmero de clulas.
Na maioria dos procariotos
ocorre a fisso binria:
crescimento e diviso.
Escherichia Coli - 20 minutos
Pisolithus microcarpus 2,5d
O padro de crescimento o exponencial
Tratando-se
bactrias,
algas
unicelulares
e
leveduras
que
se
multiplicam por diviso binria, temos:
Expresso matemtica do crescimento
(Progresso geomtrica de razo 2)
1
16 32 ......... X
20 21 22 23 24 25 ......... 2n
A relao entre o nmero de clulas e de
geraes pode ser expressa em uma
srie de equaes matemticas:
Sendo a populao inicial = N0
1 gerao = 2N0
2 gerao = 2 x 2N0 = 22 x N0
3 gerao = 2 x 22N0 = 23N0
n gerao = 2nN0
Populao final (N) = N0 x 2n
Populao final (N) = N0 x 2n
Aplicando-se logaritmo na equao , tem-se
que:
logN = log N0 + nlog2
n = (log N - log N0)/log2
como log2 = 0,301, obtm-se:
Nmero de geraes (n) = 3,3 log (N/ N 0)
Tempo de gerao: tempo necessrio
para a diviso das clulas.
Depende da espcie e das condies de
crescimento
g = t/n
onde:
g = tempo de gerao
t = tempo de crescimento
n = nmero de geraes dentro de um
tempo t de crescimento.
Exerccio
Sabendo-se de o tempo de gerao de E. coli de 20
minutos, partindo-se de uma nica clula quantas
clulas bacterianas sero obtidas aps 1 hora de
cultivo? E aps 2 horas de cultivo?
O Ciclo de Crescimento
A fase exponencial reflete apenas uma
parte do ciclo de crescimento de uma
populao microbiana.
O crescimento de microrganismos em um
recipiente fechado (batelada) apresenta um
ciclo tpico com todas as fases de crescimento.
1) Fase Lag
Perodo de adaptao da cultura
Mudana de meio,
complexo enzimtico;
preparao
Reparao das clulas com danos.
do
O ciclo de crescimento
2) Fase exponencial
Fase mais saudvel das clulas onde
todas esto se dividindo.
A
maioria
dos
microrganismos
unicelulares apresentam essa fase,
mas as velocidades de crescimento so
bastante variveis:
Procariticos
crescem
mais
rapidamente que os eucariticos.
Eucariticos
menores
crescem
mais rapidamente que os maiores.
3) Fase estacionria:
Num sistema fechado (tubo, frasco ou
biorreator) o crescimento exponencial no
pode ocorrer indefinidamente.
Ocorre a limitao por depleo de nutrientes
e acmulo de metablitos.
Diviso = morte crescimento lquido nulo
Ainda pode ocorrer: metabolismo energtico
e produo de metablitos secundrios
4) Fase de morte (declnio):
A manuteno de uma cultura no estado
estacionrio por longo tempo conduz as
clulas ao processo de morte.

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Deles se obtm energia e unidades bsicas

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Relao C:N mdia

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Relao C:N mdia

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Com relao ao carbono considerar tambm frao

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Efeito do Oxignio no Crescimento

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Reparao das clulas com danos.

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