Enhance production of diterpenoids in

yeast by overexpression of the fused

enzyme of ERG20 and its mutant
mERG20

Hua Donga , Shan Chena , Jianxun Zhua , Ke Gaoa ,

Wenlong Zhaa , Pengcheng Linb , Jiachen Zia
Introdução
• Ao longo dos anos compostos da família dos diterpenos, extraídos de plantas,
têm sido descobertos e associados a vários benefícios farmacológicos.
• Um dos diterpenos mais conhecidos atualmente é o Taxol, um fármaco natural
utilizado no tratamento do cancro da mama.
• Via do mevalonato
• GGPP é o precursor comum de diterpenos

Fig.1: Otimização do metabolismo de terpenóides de S. cerevisiae BY4741.

 Materiais e Métodos
• S.cerevisae BY4741 foi usada como hospedeira para a expressão do gene e as células
DH5α foram utilizadas para a clonagem de genes.
• Isolamento e manipulação de DNA
• Amplificação dos genes tHMG1, UPC2, BTS1, ERG20 e do promotor PHXT1
• Análise de compostos extraídos de culturas de levedura por GC-MS
Tabela 1: As estirpes de levedura envolvidos neste estudo

Resultados
• GGPP é facilmente hidrolisado a GGOH
• Aumento da via do mevalonato
• Cópias de tHMG1 e UPC2-1 foram integradas no cromossoma de S. cerevisae
de modo a obter DH01
• Culturas analisadas por GC-MS -> presença de GGOH, farnesol e esqualeno

Fig. 3: Análise quantitativa do conteúdo de GGOH nos

Fig.2: Análise GC-MS dos extratos DH03 e DH04 extratos de culturas de leveduras por GC-MS
 Resultados

Fig. 4: Deteção de copalilol nos extratos DH14–DH16 por GC–MS.

Fig. 5: Conversão de GGPP em diterpenos cíclicos por diTPSs.

 Conclusão
 Metabolismo dos terpenóides da
levedura foram otimizados, tendo
como foco os genes responsáveis ​
pela biossíntese dos diterpenóides.
 Aumento da produção de GGPP
 Alta expressão das enzimas
fundidas resultou em rendimentos
mais altos de GGPP
 Aumentar a produção de
diterpenos na levedura.