Alfredo Carlos S.D.

Barros
Goiânia, 14/5/2014
 SIMPÓSIO INTERNACIONAL

8 e 9 de agosto de 2014
Hotel Unique – São Paulo, SP

Henry M. Kuerer
Cirurgião
Michael D. Alvarado M D Anderson Cancer Center
Cirurgião Houston, EUA
UCSF Breast Care Center
San Francisco, EUA Mark Robson
Geneticista
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
Nova York, EUA
Eric P. Winer Eleftherios P. Mamounas
Oncologista Cirurgião
Dana-Farber Cancer Institute UCSF Breast Care Center
Boston, EUA San Francisco, EUA

www.simposiocancerdemama.com.br
 Epigenética

Genótipo Fenótipo

• Interface entre o ambiente e o genoma

• Ausência de transcrição sem mutação
• Silenciamento genético
 EPIGENÉTICA

Definição

Estudo das alterações da regulação

gênica não relacionadas com
mudanças na sequência de
nucleotídeos na molécula de DNA. Conrad Waddington

Canalization of the development and

the inheritance of acquired characters.
Nature 1942; 50: 563-5
MECANISMOS EPIGENÉTICOS RELACIONADOS
AO CÂNCER

Metilação do DNA

DNA

Remodelação da cromatina
(modificação das histonas)
H2A, H2B, H3 e H4

H1

RNA
5’ 3’
Interferência na expressão
U U U A A G A G C G U G U GG G A A G C genética (micro RNAs)
 H H
C H C H
N C DNA N C
metil transferase
C C C C
O N N H O N N H
H H

citosina 5-metil-citosina

EFEITOS DA HIPERMETILAÇÃO DA CITOSINA

• DNA não codificador

• Silenciamento gênico
• Bloqueio de transcrição
Herman et al.
Gene silencing in cancer in association with promoter hypermethylation.
N Engl J Med 2003; 349: 2042-54
HIPERMETILAÇÃO DE CpG
 HIPOMETILAÇÃO DO DNA

• Instabilidade gênica

• Progressão tumoral

• Ativação de genes (ciclina D2, H-ras)

• Perda de “imprinting”
INTERFERÊNCIA DA HIPERMETILAÇÃO
DE CpG NO CÂNCER DE MAMA

Gene metilado Alteração funcional

BRCA1 Reparo do DNA
CDH1 Adesão celular
TMS1 Apoptose
ESR1 Sinalização hormonal
SNCG Crescimento celular

Heyn e Esteller
DNA profilling in the clinic: aplications
and challenges.
Nature Rev 2013; 13: 679-92
COMO A METILAÇÃO DO DNA INATIVA A
TRANSCRIÇÃO GÊNICA
Mecanismos
Ação direta
• A metilação da citosina
bloqueia a ligação de fatores
de transcrição na região
promotora do DNA.

Ação indireta
• A metilcitosina atrai
proteínas ligantes (MlCP2),
que recrutam HDACs que
removem acetil da lisina nas
caudas das histonas.
 METILAÇÃO DO DNA E CÂNCER

Hipermetilação de CpG

Inativação de Inativação de
genes supressores genes de reparo

Hipometilação Global

Ativação de Instabilidade
Oncogenes cromossômica
METILAÇÃO DO DNA E INICIAÇÃO
DO CÂNCER DE MAMA
 ENVIRONMENTAL AND HERITABLE
FACTORS IN THE CAUSATION OF CANCER
Lichtenstein e col.
N Engl J Med 2000; 343: 78-85
• 44.788 pares de gêmeos

• Suécia, Finlândia, Dinamarca

• 9512 com pelo menos 1 câncer

Risco de câncer de mama

Câncer de mama
até os 75 anos
Gêmeas 2 irmãs 1 irmã % Gêmeas %
MZ 42 505 8.3 MZ 13
DZ 52 1023 5.0 DZ 9
• Papel secundário da hereditariedade
Conclusões • Papel principal para o meio ambiente
 HUMAN EPIGENOME
PROJECT

Objetivos

HEP • Identificar, catalogar e

interpretar padrões de
metilação de DNA

Consórcio de firmas
• EUA - França
• Inglaterra - Alemanha

www.epigenome.org
FORMAS DE CROMATINA

• Eucromatina
• Heterocromatina

Fator
Transcritor
 HISTONAS
Pequenas proteínas encontradas nos cromossomos
eucarióticos, que atuam como suporte para a molécula
de DNA.
Tipos: H1, H2A, H2B, H3 e H4

NUCLEOSSOMO
2 moléculas de cada
histona
H2A, H2B, H3 e H4

DNA

H1
H1
Octâmero de histonas
166 pares de base
 MODIFICAÇÃO DAS HISTONAS E
REMODELAÇÃO DA CROMATINA

Co-ativadores/ Carga positiva

Modificação Efeito na
co-repressores líquida no
nas histonas cromatina
da transcrição domínio N-terminal

Incorpora acetil
HATs
em lisina  Abre

Retira acetil
HDACs
de lisina  Fecha

Incorpora metil
HMTs
na lisina  Fecha
 microRNAs
Conceito
• RNAs não codificadores, de cadeia única com
19 a 22 nucleotídeos.

1993
• Moléculas de RNA não codificadoras
em larvas em nematoide.

Victor Ambros

Caenorhabditis elegans
 microRNAs
Mecanismo de ação
• Após a transcrição ligam-se a RNAm, levando à sua
degradação e repressão da mensagem.

Função
• Silenciamento genético pós-transcricional.

Premio Nobel
de Fisiologia
em 2006

Andrew Fire Craig Mello

 BIOGÊNESE DOS miRNA
Núcleo
Citoplasma
Gene
RNA
polimerase
miRNA
Drosha Dicer maduro (22nt)
Exportina

pri-miRNA RNAm
pre-miRNA
(70nt) RISC

miRNA
1 cadeia

Khoshaw e col.
J Clin Pathol 2009; 69: 422-8
 microRNAoma
Mais 1500 tipos de microRNAs em humanos
(www.mirbase.org)

microRNAs e CÂNCER
Oncogenética
Ação
Oncosupressora

Carcinoma ductal infiltrativo de mama

Elevação: miRNA 155, miRNA-21
Redução: miRNA-10b, miRNA 12b, miRNA-145
 microRNAs e CÂNCER DE MAMA

Efeitos

Redução de expressão
let-7 LNs positivos e alta proliferação

Superexpressão
miR-21 Invasão e metástase
miR-17 - 5p Supressão tumoral
miR-206 Receptores negativos
miR-335 Diminuição de agressividade
FATORES NUTRICIONAIS COM
AÇÃO EPIGENÉTICA

Folatos Hipermetilação de CpG

Cobalamina Hipermetilação de CpG

Ác. graxo Demetilação de genes

Ômega 3 supressores

Resveratrol Evita hipermetilação de BRCA1

Burdge et al.
Epigenetics: are there implications for personalized nutrition?
Curr Opin Nutr Metab Care 2012; 15: 442-7
 POLUIÇÃO AMBIENTAL E EPIGENÉTICA

Partículas no ar
Desacetilação de histomas
(níquel)

Cigarro Acetilação de histomas

Poluente
Hipermetilação do CpG
orgânicos

Pesticidas e
Hipermetilação de CpG
agrotóxicos

Dietilestilbestrol Hipermetilação de CpG

Cooney CA.
Epigenetics-DNA-based mirror of our environment.
Dis Markers 2007; 23: 121-37
 HEREDITARIEDADE DAS
ALTERAÇÕES EPIGENÉTICAS

• É a base do darwinismo

• Já foi demonstrado em moscas

• Não foi comprovada em humanos

 PERSPECTIVAS DE USO DE INIBIDORES
DE DESACETILAÇÃO DE HISTONAS NO
CÂNCER DE MAMA

• Indução de apoptose (↑ p53, ↓ Bcl-2, ↑ Bax)

• Bloqueio de divisão celular (↓ ciclina D, ↓ CDk4, ↑ p21)

• Desestabilização de oncogenes (↓ EGFR, ↓ HER-2)

• Antiangiogênese (↓ VEGF, ↓ Ang2)

 POSSIBILIDADES DE TERAPIA EPIGENÉTICA

• Agentes demetilantes do DNA

(inibidores de metiltransferases)
• Inibidores de histona desacetilases

POTENCIAIS LIMITAÇÕES

• Uso prolongado
• Bloqueio de efeito com descontinuação da droga
 PERSPECTIVAS DO ESTUDO DA
EXPRESSÃO E MANEJO DE microRNAs
Para diagnóstico
• Identificação de alto risco
• Discriminar mamografias BIRADS 3 e 4
• Nova classificação tumoral
• Fator prognóstico e preditivo de resposta

Para tratamento
• Aumentar sensibilidade à quimioterapia e/ou
hormonioterapia
• Reduzir agressivadade neoplásica
 DROGAS DE AÇÃO EPIGENÉTICA
LIBERADAS PELO FDA
2013
Inibidores de DNA metiltransferases
• 5-azacytidine (Vidaza)
– Mielodisplasia
• 5-aza-2 - deoxicitidine (Dacogen)
– Mielodisplasia

Inibidores de histona desacetilases

• Ácido hidroxâmico suberoilamida (Vonoristat)
– LMA
• Romidepsin (Istodax)
– Linfoma de células T
 TAKE HOME

• A epigenética faz a interface entre o genoma e o meio

ambiente.

• Disfunções epigenéticas podem bloquear a mensagem

codificada pelo DNA.

• Os principais mecanismos de ação epigenética são

metilação do DNA, alterações de cromatina e
microRNAs.

• As alterações epigenéticas são reversíveis e as

possibilidades preventivas e terapêuticas nesta área
são muito promissoras.