Técnica de Análise Instrumenta L - Espetroscopia Molecular

Mtodos Instrumentais
Espectroscopia
Ana Rosa Garcia

2009
ndice
I.
Introduo ...................................................................................................................................................... 3 I.1. I.2. O Que a espectroscopia.........................................................................................................................3 O Espectro electromagntico ....................................................................................................................4
I.2.1. Propriedades da luz ............................................................................................................................4 I.2.2. Parmetros das ondas ........................................................................................................................4 I.2.3. Energia da radiao ............................................................................................................................5 I.2.4. Regies do espectro electromagntico...............................................................................................5 II. Os Espectros .................................................................................................................................................. 6 II.1. Tipos de estudos espectroscpicos ..........................................................................................................7 II.2. Rudo espectral .........................................................................................................................................8 II.2.1. Rudo qumico .....................................................................................................................................9 II.2.2. Rudo instrumental ..............................................................................................................................9 II.3. Maximizao da razo Sinal/Rudo .........................................................................................................10 II.4. Processamento de sinal ..........................................................................................................................11 II.4.1. Operaes aritmticas do sinal.........................................................................................................11 III. Espectroscopia de Absoro Molecular.................................................................................................... 15 III.1. Bases tericas .........................................................................................................................................15 III.1.1. Regras de seleco ..........................................................................................................................16 III.2. Absorvncia e transmitncia ...................................................................................................................17 III.3. Anlise qualitativa....................................................................................................................................18 III.3.1. Decomposio de bandas de espectros ...........................................................................................18 III.4. Anlise quantitativa .................................................................................................................................19 III.4.1. Lei de Lambert-Beer .........................................................................................................................20 III.4.1.1 Hiptese de Lambert ..................................................................................................................20 III.4.1.2 Hiptese de Beer ........................................................................................................................20 III.4.2. Anlise de um sistema de multicomponentes - Misturas ..................................................................21 III.4.3. Anlise de misturas binrias: Sistemas com dois componentes ......................................................22 III.4.3.1 Espectros bem resolvidos ..........................................................................................................22 III.4.3.2 Sobreposio espectral ..............................................................................................................23 III.4.3.2.1 Anlise a dois comprimentos de onda ..............................................................................23 III.4.3.2.2 Anlise por regresso linear a vrios comprimentos de onda ..........................................24 III.4.3.2.3 Ponto isosbstico..............................................................................................................24 III.4.4. Desvios lei de Lambert-Beer..........................................................................................................25 III.4.4.1 Lei limite .....................................................................................................................................25 III.4.4.2 Desvios qumicos .......................................................................................................................25 III.4.4.2.1 Equilbrio cido-base: cido fraco em soluo .................................................................25 III.4.4.2.2 Formao de dmeros.......................................................................................................26 III.4.4.2.3 Formao de complexos...................................................................................................26 III.4.4.3 Desvios Instrumentais ................................................................................................................27 III.4.4.4 Condies experimentais mais adequadas ................................................................................28 III.5. Escolha de um mtodo de anlise ..........................................................................................................29 1
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IV. Espectroscopia de Absoro Molecular UV/vis........................................................................................ 31 IV.1. Bases tericas .........................................................................................................................................31 IV.2. Instrumentao ........................................................................................................................................33 IV.2.1. Tipos de Espectrofotmetros ............................................................................................................33 IV.2.2. Fontes de Radiao ..........................................................................................................................35 IV.2.3. Selectores de comprimento de onda ................................................................................................38 IV.2.4. Clulas (porta-amostra) ....................................................................................................................41 IV.2.5. Detectores .........................................................................................................................................42 IV.3. Titulaes espectrofotomtricas ..............................................................................................................44 V. Espectroscopia de Emisso Molecular...................................................................................................... 47 V.1. Teoria da Fotoluminescncia ..................................................................................................................47 V.1.1. Variveis que afectam a fluorescncia .............................................................................................50 V.2. Espectros de emisso e de excitao .....................................................................................................53 V.2.1. Bandas de difuso de Rayleigh e de Raman....................................................................................53 V.2.2. Concentrao e intensidade de fluorescncia ..................................................................................54 V.3. Quimiluminescncia ................................................................................................................................55 V.3.1. Produtos quimiluminescentes ...........................................................................................................57 V.4. Instrumentao ........................................................................................................................................57 V.4.1. Fluormetros e fosformetros .............................................................................................................58 V.4.2. Luminmetros ...................................................................................................................................59 V.5. Mtodos de derivatizao........................................................................................................................60 VI. Espectroscopia de Infravermelho .............................................................................................................. 61 VI.1. Bases tericas .........................................................................................................................................61 VI.1.1. Molculas Diatmicas: modelo do oscilador harmnico ...................................................................61 VI.1.2. Molculas Diatmicas: modelo do oscilador anarmnico .................................................................62 VI.1.3. Molculas poliatmicas .....................................................................................................................63 VI.1.4. Regras de seleco ..........................................................................................................................63 VI.1.5. A simetria molecular e o momento dipolar de transio ...................................................................64 VI.2. Anlise Qualitativa ...................................................................................................................................65 VI.2.1. Correlao entre os espectros de infravermelho e a estrutura molecular ........................................65 VI.3. Anlise Quantitativa.................................................................................................................................67 VI.4. Instrumentao ........................................................................................................................................68 VI.4.1. Espectrofotmetros dispersivos ........................................................................................................68 VI.4.2. Espectrofotmetros com transformada de Fourier............................................................................68 VI.4.3. Fontes de radiao ...........................................................................................................................71 VI.4.4. Detectores .........................................................................................................................................71 VI.4.5. Sistema ptico...................................................................................................................................74 VI.4.6. Porta-amostras..................................................................................................................................74 VI.4.7. Tipos de anlise por FTIR .................................................................................................................74 VII. Anexo I .......................................................................................................................................................... 76 VII.1. Outro modo de deduzir a lei de Lambert-Beer: .......................................................................................76 VIII.Bibliografia ................................................................................................................................................... 77
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I. Introduo
As tcnicas de anlise instrumental tm sofrido avanos significativos no sentido de as tornar cada vez mais sensveis e precisas, de modo a que as anlises (medidas) possam ser efectuadas rapidamente e com elevado grau de confiana. As anlises instrumentais em qumica, cada vez mais sofisticadas, tm permitido aprofundar o conhecimento sobre a natureza das interaces que conduzem a alteraes qumicas, e identificao de espcies, mesmo vestigirias, de grande complexidade. A maior parte do equipamento pode ser adquirido pronto a utilizar, no necessitando o operador de muito conhecimento tcnico sobre os componentes que o constituem, ou sobre o modo como estes funcionam. No entanto, a utilizao do equipamento como se de uma caixa negra se tratasse pode ser muito limitativa, pois nada mais se pode obter do que aquilo que os fabricantes entenderam necessrio para o equipamento. Esta atitude, na anlise qumica moderna, que obriga ao desenvolvimento de mais e melhores tcnicas de anlise para responder aos actuais desafios, no pode ser a de quem utiliza os equipamentos quer se tratem de laboratrios de anlise ou mesmo investigao. Existe cada vez mais a necessidade de adaptar aos equipamentos (instrumentos) base novos elementos, de modo a optimizar e rentabilizar a sua utilizao O conhecimento de cada um dos componentes do instrumento, e do modo como estes funcionam e se relacionam entre si, torna-se portanto premente. Alteraes, que podem ser mais ou menos profundas, permitem desenvolver novos tipos de anlises, e/ou alargar o potencial de utilizao dos equipamentos. Por ltimo, mas no menos importante, apenas quando se compreende tecnicamente o funcionamento do instrumento com se efectuou a anlise possvel fazer uma avaliao correcta dos resultados, que so o objectivo final de todo o trabalho desenvolvido.
I.1.
O Que a espectroscopia
A espectroscopia o estudo da radiao, em funo do comprimento de onda (ou energia), que emitida, reflectida ou difundida atravs de um slido, de um lquido ou de um gs. O termo espectroscopia era inicialmente utilizado para referir um ramo da cincia no qual a luz, ou radiao visvel, era resolvida nos seus comprimentos de onda (energias), e com os quais se obtinha um espectro. Este podia ser utilizado para estudos tericos sobre a estrutura da matria ou ainda para anlises qualitativas (de identificao) e quantitativas. Posteriormente, com a utilizao mais generalizada de outras regies do espectro electromagntico, o termo espectroscopia tornou-se mais abrangente de modo a incluir os estudos efectuados com radiao com todas as energias acessveis. Actualmente, j no se pensa na espectroscopia apenas como um estudo da interaco da radiao com a matria, pois esta inclui outros tipos de interaco, como por exemplo, com ies (espectrometria de massa, ou de ies secundrios SIMS), electres (espectroscopia de excitao por electres de baixa e alta energia HREELS ou LEED) ou ondas sonoras (espectroscopia acstica). A energia pode ser transferida para o sistema (ou do sistema) sob vrias formas, tais como calor, luz, ou reaces qumicas. O processo de transferncia para o sistema de energia sob a forma de radiao designado por processo de absoro. Quando a energia libertada do sistema sob a forma de radiao (luz) designada por luminescncia. Um fenmeno de libertao de energia que alguns sistemas apresentam a temperaturas muito elevadas a incandescncia. Quando a libertao de energia ocorre devido a reaces qumicas, esse processo denominado por quimiluminescncia.
Figura 1 Esquema geral de anlises espectroscpicas
A espectroscopia permite inferir acerca de aspectos fundamentais do sistema em estudo, sendo as informaes analticas mais relevantes: (a) Molecular/Atmica (Qualitativa e/ou quantitativa); (b) Sistema Molecular (Interaces)
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I.2.
I.2.1.
O Espectro electromagntico
Propriedades da luz
A radiao a emisso e transmisso de energia no espao, sob a forma de ondas. Numa onda electromagntica existem dois componentes (segundo a teoria de Maxwell): componente do campo elctrico e componente do campo magntico.
Figura 2 Representao da onda electromagntica segundo a teoria de Maxwell
Os componentes da onda electromagntica so perpendiculares entre si, mas possuem as mesmas caractersticas: comprimento de onda e frequncia iguais, ou seja, a mesma velocidade de propagao. I.2.2. Parmetros das ondas
A velocidade de propagao de uma onda depende do meio em que se propaga e resulta do produto do comprimento de onda pela frequncia:
eq. 1
No vcuo admite-se que esta velocidade corresponde velocidade da luz (c):
v = c = 2,9979x1010 cm.s-1.
Em outro meio, que no o vcuo, a velocidade da luz sempre menor e est directamente relacionada com o ndice de refraco (n):
eq. 2
Deste modo quando h passagem de uma onda em dois meios diferentes, esta deve alterar alguma das suas propriedades (ou caractersticas), comprimento de onda ou frequncia.
Figura 3 A onda electromagntica e os parmetros que a caracterizam.
Comprimento de onda (): distncia entre dois pontos equivalentes em ondas sucessivas (unidades em cm, ou nm...). Amplitude (a): distncia, na vertical, entre o meio da onda sinosoidal e o seu mximo (ou mnimo). Frequncia (): nmero de ciclos de passagem de uma onda num determinado ponto por unidade de tempo (1 Hz = 1 ciclo/s) Nmero de ondas ( ): inverso do comprimento de onda ( =1/) e portanto as suas (unidades so o inverso das unidades do comprimento de onda, cm-1, -1 ou nm-1...)
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I.2.3.
Energia da radiao
Pela teoria quntica de Planck, quantum a mais pequena quantidade de energia que pode ser emitida (ou absorvida) na forma de radiao electromagntica, sendo a energia (E) de um quantum emitido proporcional frequncia da radiao:
eq. 3
em que h a constante de proporcionalidade (ou de Planck) e o seu valor 6,63x10 -34 J.s. A dualidade onda-corpsculo permite descrever a radiao como uma onda ou como uma partcula, ou seja, a radiao pode ter um carcter ondulatrio ou corpuscular. Assim, um foto pode ser definido como um feixe de partculas com uma determinada energia. Estas energias so em geral discretas (no se trata de um contnuo de energia), uma vez que apenas um tipo de energia pode interactuar com uma molcula especfica: quantificao de energia. A energia de um foto igual energia do quantum, pelo que E = h ou E = h(c/) no vcuo. A radiao monocromtica (uma cor) composta por um feixe de fotes com um comprimento de onda apenas, sendo por oposio a radiao heterocromtica (mais que uma cor) composta por fotes com diferentes energias (ou comprimentos de onda). A intensidade da radiao proporcional ao nmero de fotes propagados no feixe por unidade de tempo. Esta caracterstica da radiao no tem necessariamente uma relao directa com a energia. I.2.4. Regies do espectro electromagntico
A primeira experincia fundamental sobre a natureza da luz foi realizada por Newton, em 1666, ao decompor por meio de um prisma a luz branca do sol nas suas componentes de cores diferentes.
Figura 4 Decomposio da luz visvel por um prisma.
Em 1800, William Herschel ao determinar a temperatura de cada uma das cores na qual a luz solar se divide ao ser refractada por um prisma, verificou que a parte mais quente da radiao ocorre na zona invisvel depois da banda vermelha regio que designou por infravermelho.
Figura 5 Montagem da experincia original de Herschel
Na mesma altura Johann Ritter verificou que a reaco fotoqumica do cloreto de prata mais eficiente com radiao com frequncias superiores risca violeta, tendo designando esta regio invisvel ao olho humano por regio do ultravioleta. No incio do sculo XIX, ficam deste modo identificadas as trs regies espectrais mais utilizadas, at aos nossos dias, em anlises de rotina. Na figura seguinte esto representadas as diferentes regies espectrais e as suas caractersticas mais importantes.
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Figura 6 Relao entre as diferentes regies do espectro electromagntico e o comprimento de onda da radiao correspondente.
II. Os Espectros
Um espectro pode ser definido como a representao grfica da variao do sinal que chega ao detector em funo da energia da radiao incidente (espectros de absoro) ou emergente (espectros de emisso). A interaco da radiao com uma molcula (ou tomo) vai provocar uma alterao da energia global da molcula, esta passa de um estado fundamental (de menor energia) para nveis de energia mais elevados. Ao absorver a energia de um foto a molcula (ou tomo) passa para um estado excitado:
o tempo de permanncia no estado excitado depende no tipo de molcula e da transio, mas ao fim de um tempo h passagem de novo para o estado fundamental,
A transio para o estado fundamental ocorre sempre com libertao de energia (en), embora esta energia possa ser muito diversa: trmica, radiante, qumica... O estudo dos diferentes nveis energticos de uma molcula, nos mltiplos pormenores da sua complexa organizao, implica o varrimento e a anlise de uma gama muito vasta de comprimentos de onda (ultra-violeta, visvel, infravermelho...).
Figura 7 Exemplo de espectros de absoro molecular
A obteno de um espectro completo, ou seja, a anlise da influncia de toda a radiao do espectro electromagntico sobre a amostra, levanta problemas experimentais: (i) no existe uma
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fonte de radiao (nica) para toda a gama de comprimentos de onda; (ii) cada regio do espectro electromagntico necessita de componentes especficos (no espectrofotmetro) para a sua deteco. Assim, esta caracterizao ideal, no pode ser efectuada de um modo simples, exigindo um conjunto mais ou menos vasto de experincias e espectrofotmetros. Os espectros permitem efectuar dois tipos de anlise: qualitativa e quantitativa. Anlise qualitativa, consiste na interpretao do espectro no sentido de identificar e/ou caracterizar as espcies presentes na amostra. Anlise quantitativa, tem como objectivo, sabendo as espcies presentes na amostra, determinar a quantidade (concentrao) de cada espcie.
II.1. Tipos de estudos espectroscpicos

Nas molculas (ou tomos) podem ser induzidas diferentes transies energticas: nucleares, ou electrnicas, ou vibracionais (apenas em molculas)... Estas transies so dependentes da radiao utilizada, ou seja, cada perturbao s induzida por comprimentos de onda especficos devido ao facto da sua energia se encontrar quantificada. A quantificao de energia implica ainda que os nveis de energia so discretos e no um contnuo de energias, sendo por isso caractersticos para cada molcula (ou tomo). O tipo de espectroscopia de absoro depende do tipo de transio envolvida e de acordo com a gama de frequncias onde absorve no espectro electromagntico:
(1) Se a absoro acompanhada por uma transio de um nvel rotacional para outro nvel rotacional ento a radiao na gama das micro-ondas no espectro electromagntico e a tcnica a espectroscopia rotacional (ou de micro-ondas); (2) Quando a transio ocorre entre nveis vibracionais, a radiao na gama espectral do infravermelho e a tcnica conhecida como espectroscopia de infravermelho; (3) No caso da transio alterar na molcula a configurao electrnica dos electres de valncia,
ento a radiao na gama do ultra-violeta e/ou visvel, e a tcnica conhecida como espectroscopia ultra-violeta/visvel (ou UV-vis) ou de absoro electrnica.
Figura 8 As diferentes regies do espectro electromagntico e a natureza das alteraes provocadas pela radiao correspondente
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Os mtodos espectroscpicos baseiam-se em alguns fenmenos comuns. A resposta do sistema (matria) quando perturbado pela radiao incidente pode conduzir a um processo de: Absoro: Passagem de um tomo ou molcula de um estado de energia mais baixo para um estado de energia mais elevado, quando o quantum de energia coincide com o de uma transio permitida. , em geral as molculas tendem a voltar rapidamente ao estado fundamental com libertao de calor ( ), feita a medida da intensidade de radiao que as molculas utilizam para passar do estado fundamental para o estado excitado Emisso: Passagem de um tomo ou molcula de um estado de energia mais elevado para o estado fundamental (de energia mais baixo) por um processo radiativo. Existem dois processos de excitao das molculas, (a) por interaco com a radiao (igual ao processo de absoro) , neste caso trata-se de fluorescncia ou fosforescncia, ou (b) por aco de outros processos que no a radiao (por exemplo por aquecimento a temperaturas muito elevadas) ; sendo efectuadas medidas de intensidade de radiao com energia h emitida pela amostra. Quimiluminescncia: A libertao de energia sob a forma de luz por um processo de envolvendo uma reaco qumica, esta designada por quimiluminescncia. Um exemplo, a reaco quimiluminescente resultante da reaco de um produto combustvel com um oxidante, esta reaco d origem a produtos no estado excitado que emitem luz. No entanto, este processo de desexcitao radiativa pode ser confundido com a emisso por incandescncia, uma vez que s temperaturas a que ocorre a reaco, o calor libertado promove a formao de quantidades mais ou menos elevadas de partculas incandescentes. Disperso ou difuso: Nestes processos no h uma absoro de radiao mas a interaco com o analito (amostra) resulta em alteraes de energia da radiao difundida, . Os dois processos mais conhecidos so a difuso de Raleigh e Raman.
II.2.
Rudo espectral
As medidas experimentais nunca so completamente exactas e/ou precisas, mesmo quando se utilizam equipamentos sofisticados, vm afectadas por erros. Estes podem ser divididos em duas classes (ou tipos): erros sistemticos, os quais conduzem a medidas sempre mais elevadas ou inferiores s do valor correcto com uma percentagem ou valor constante; e erros aleatrios, que provocam variaes no constantes em cada medio ou em cada momento. Este ltimo tipo de erro muitas vezes designado como rudo, numa analogia com o rudo acstico. Em espectroscopia, as medidas (espectros) so, em geral, constitudas por dois sinais. Um dos sinais contm a informao sobre o analito (o que se pretende analisar). O segundo sinal, o rudo, com variaes aleatrias e em geral sobreposto ao primeiro, informao adicional no tem qualquer interesse para a anlise e contribui para uma pior exactido e/ou preciso da anlise. O que distingue o rudo do sinal o facto de o rudo no ser reprodutvel de uma medida para outra (quer em posio, quer em amplitude) enquanto que o sinal genuno pelo menos parcialmente reprodutvel (a sua posio no deve variar). Um rudo elevado nas medidas efectuadas, pode tambm ter como consequncia um aumento do limite de deteco (e claro, do limite de quantificao tambm). A amplitude do rudo usualmente definida como o desvio padro do sinal medido (s), pelo que a razo sinal/rudo (S/N) pode ser obtida do valor mdio das medidas efectuadas ( ) pela seguinte expresso:
eq. 4
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A razo sinal/rudo muitas vezes utilizada como indicador da qualidade do espectro, sendo uma medida fivel a que apresenta um valor de S/N maior ou igual a trs. Os espectros podem apresentar dois tipos de rudo: qumico, variveis que afectam a estabilidade qumica do sistema em estudo (ex. temperatura, presso ou humidade); e instrumental, associado a cada um dos componentes do sistema de medida (ex. oscilaes da fonte de radiao, interferncias electrnicas) II.2.1. Rudo qumico O rudo qumico deriva de um conjunto de variveis no controladas que afectam a qumica do sistema em anlise. Variaes de presso ou temperatura, so alguns dos parmetros que podem induzir alteraes significativas no equilbrio qumico. Outros exemplos so: alteraes de humidade relativa que podem conduzir variao de concentrao; vibraes que podem promover a estratificao especialmente em amostras slidas; variaes na intensidade da luz que afecta materiais fotosensveis, ou ainda, vapores que possam interactuar contaminando amostras e reagentes. O rudo qumico e o seu efeito dependem muito dos mtodos de anlise, apresentando alguma especificidade (interferncias) para os diferentes mtodos e tcnicas que se utilizam. II.2.2. Rudo instrumental Os instrumentos de medida, ou espectrofotmetros, so constitudos por cinco componentes base: fonte de radiao, porta amostras transparente radiao, componente que isole a regio espectral a analisar, detector, e processador de sinal. Cada componente pode sofrer interferncias elctricas e electrnicas que provocam flutuaes do sinal, deste modo quanto mais complexo for o sistema de medida maior ser a probabilidade do espectro vir afectado por rudo. Na figura seguinte apresentase esquematicamente os componentes mais importantes e geometria utilizados em espectroscopia de absoro e de emisso.
Figura 9 Esquema de um sistema para espectroscopia ptica de absoro. Figura 10 Esquema geral para espectroscopia ptica de emisso.
O rudo que se observa num espectro pode derivar de uma srie de factores mais ou menos complexos, e nem sempre possvel individualizar e caracterizar completamente cada uma das fontes de rudo. No entanto, alguns tipos de rudo instrumental so mais comuns e mais fceis de identificar, entre os quais pode referir-se quatro tipos: rudo ambiental, rudo trmico (ou de Johnson), rudo de Shot e rudo de Flicker. (a) Influncia do meio ambiente (ou rudo ambiental) O rudo ambiental uma mistura de diferentes formas de rudo que resultam da vizinhana do laboratrio onde o equipamento se encontra. Na figura 10 podem ser observados vrios tipos de rudo ambiental detectados num laboratrio. A ocorrncia deste tipo de rudo resulta do facto dos circuitos elctrico/electrnico do espectrofotmetro serem potencialmente uma antena para captar radiao electromagntica que depois convertem em sinal elctrico.
Figura 11 Sinais detectados no laboratrio de uma Universidade

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(b) Rudo trmico (ou de Johnson) Este tipo de rudo causado pela agitao trmica de electres ou de outros transportadores de carga em resistncias, condensadores, detectores de radiao ou em qualquer outro elemento resistivo que exista nos espectrofotmetros. A sua intensidade dada por:
eq. 5
em que, k a constante de Boltzman (1.38x10-23 j/K), T a temperatura (K), R a resistncia (ohms) do elemento resistivo, e f (Hz) a largura de banda da frequncia, que pode ser determinada pelo inverso do tempo de resposta (tr, em s) para uma alterao brusca de input:
eq. 6
Este tipo de rudo espectral existe em qualquer elemento resistivo mesmo na ausncia de corrente e apenas desaparece ao zero absoluto, ou seja, impossvel de eliminar. (c) Rudo de Shot Devido ao movimento de electres ou outros transportadores de carga atravs de uma juno, pode resultar em rudo espectral. Num circuito electrnico as junes correspondem a interfaces com condutores tipo n e p, ou ao vcuo entre o ctodo e o nodo numa fotoclula. A sua intensidade dada por:
eq. 7
em que, f (Hz) a largura de banda da frequncia, e a carga do electro (-1.60x10-19 C), e I a intensidade mdia da corrente. (d) Rudo de Flicker Este tipo de rudo est directamente relacionado com a frequncia f (Hz), e a sua intensidade pode ser obtida atravs da seguinte relao:
eq. 8
Os factores de que resulta este tipo de rudo so pouco conhecidos, mas sendo inversamente proporcional frequncia de trabalho, particularmente significativo para frequncias inferiores a 100 Hz.
II.3.
Maximizao da razo Sinal/Rudo
Na maior parte das medidas, tal como j foi referido, o rudo independente do sinal (N constante), sendo uma condio necessria que para garantir
uma anlise conclusiva. A obteno de nveis de rudo aceitveis de fcil na maior parte dos estudos espectroscpicos. No entanto, quando se pretendem fazer determinaes em limites de deteco e/ou quantificao muito baixos a amplificao do sinal (relativamente ao rudo espectral) sem dvida o aspecto mais importante da anlise. Existem vrios modos de diminuir o valor do rudo sem que o sinal seja afectado significativamente, entre este mtodos os mais importantes so: instrumental, clculo ou experimentais.
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Figura 12 A relao sinal rudo num espectro de absoro na regio do infravermelho
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Instrumental: utilizao de filtros, ou moduladores ou outros acessrios que diminuem o rudo de fundo sem afectar o sinal. Clculo: estes mtodos, que substituem com vantagem alguns acessrios, tornaram-se importantes com o desenvolvimento dos computadores e microprocessadores, tm por base algoritmos computacionais. Estes mtodos so rotinas dos programas de controle e aquisio de dados dos espectrofotmetros permitindo a diminuio do rudo de fundo, atravs do clculo de mdias, filtros digitais, suavizao de curvas (por aplicao de funes) e tcnicas de correlao. O processamento de sinal ser um pouco mais desenvolvido nas seces seguintes. Experimental: aumentar o nmero de acumulaes (leituras) em cada ponto e utilizar o valor da sua mdia. Sendo o rudo aleatrio (varia com o comprimento de onda) e o sinal constante (no varia com o comprimento de onda), verifica-se que a razo sinal/rudo varia com a raiz quadrada do nmero de acumulaes (n):
eq. 9
Nos espectrmetros convencionais dispersivos (tambm designados de varrimento), tem um custo em tempo muito elevado para o traado de um espectro porque estas anlises requerem um grande nmero de acumulaes. Contudo, nos espectrmetros com transformada de Fourier, em que todos os elementos de resoluo (ou seja, a gama espectral analisada) so medidos em simultneo, o tempo de medida diminui significativamente, permitindo escolher a razo sinal/rudo mais adequada anlise. De um modo geral, o tempo necessrio para a obteno de um espectro com 1500 elementos de resoluo num espectrofotmetro com transformada de Fourier o tempo equivalente para a obteno de um nico espectro nos aparelhos convencionais. O espectrofotmetro com transformada de Fourier, e o seu modo de funcionamento, ser descrito no captulo da espectroscopia de infravermelho.
II.4.
Processamento de sinal
O acoplamento dos instrumentos analticos a computadores com o intuito de obter dados on-line tornou-se numa prtica corrente nos modernos laboratrio de anlises qumicas. O processamento de sinal computorizado aumentou a velocidade de aquisio de dados, ou seja do traado dos espectros, permitindo estudos cinticos e medidas de espcies com tempos de vida curtos. A utilizao de microprocessadores cada vez mais rpidos, e de acessrios especficos disponveis em larga escala, permite neste momento a obteno de resultados na forma digital de um modo rpido e simples. No formato digital os dados apresentam grandes vantagens em relao sua forma anterior, pois, em qualquer altura possvel proceder a um tratamento rigoroso, atravs de anlises matemticas ou mtodos numricos (em geral recorrendo a algoritmos computacionais), ou ainda efectuar um processamento de sinal de modo a melhorar os resultados obtidos. Existe disponvel um nmero significativo de programas, muitas vezes sub-rotinas dos programas de aquisio de dados que controlam os equipamentos, com os quais possvel: reduzir o rudo espectral, aumentar a resoluo entre bandas ou picos, compensar artefactos do sinal devidos ao aparelho de medida, testar hipteses, optimizar estratgias de medidas a efectuar, diagnosticar problemas nas determinaes, ou mesmo decompor sinais complexos nos seus elementos individuais. Este ltimo tipo de tratamento de resultados de primordial importncia para a anlise qualitativa, pois permite, na maior parte dos casos, identificar os componentes (total ou parcialmente) em misturas mais ou menos complexas. II.4.1. Operaes aritmticas do sinal O processamento de sinal mais usual, com utilizao de funes pouco complexas, aquele que envolve aritmtica simples ponto a ponto: adio, subtraco, multiplicao ou diviso, de dois sinais (espectros), ou de um sinal e uma constante. Apesar de aparentemente simples, este tratamento de resultados pode ser muito til em espectroscopia. A mdia de um conjunto de medidas pode ser obtida por adio ponto a ponto, aplicada a um conjunto de sinais (ou espectros) obtidos por anlise repetida da mesma amostra. Sempre que este
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tipo de tratamento de dados pode ser aplicado, o resultado final apresenta uma melhoria considervel da qualidade do sinal. Na figura seguinte apresentado o resultado da adio ponto por ponto de uma medida efectuada por dez leituras da mesma amostra, de notar o aumento significativo da razo sinal/rudo.
Figura 13 (A) Espectro de uma amostra. (B) Resultado da aplicao da adio ponto a ponto de dez espectros da amostra.
A subtraco de espectros, ou de sinal, pode tambm contribuir para uma melhoria do sinal. Esta operao (ou tratamento de resultados) particularmente importante quando o sinal medido resultado de uma sobreposio de dois (ou mais) sinais derivados de espcies distintas. O caso mais simples quando o branco, ou seja a matriz ou o solvente, apresentam um sinal na mesma gama de energias que o analito ou analitos que se pretendem estudar. Neste caso uma simples subtraco (se for uma operao vlida para o sinal que se mede) pode clarificar o sinal. Na figura seguinte apresentado um exemplo do resultado da subtraco entre dois espectros.
Figura 14 (A) Espectros de uma amostra (a azul) e do branco correspondente (a cinzento). (B) Resultado da aplicao de uma subtraco ponto a ponto do espectro do branco ao espectro da amostra. Nota: no indicada a escala do sinal nem de comprimentos de onda, por ser uma representao no real, contudo deve ter-se em conta que o valor do sinal em (B) deve ser sempre inferior ao sinal em (A), enquanto que os comprimentos de onda a que aparecem os dois mximos (absoluto e relativo) no devem variar.
Ao subtrair os dois espectros ponto-a-ponto, ou seja aps retirar ao espectro da amostra (a azul) o sinal correspondente ao branco, a anlise bastante mais fcil, uma vez que a posio dos mximos mais clara, logo as medidas de intensidade das duas bandas mais precisas. A comparao directa pode ser muito dificultada quando as concentraes do analito nas duas amostras so muito diferentes (ver figura A seguinte). Assim, a subtraco directa entre dois espectros pode ser uma operao matemtica muito conveniente mas pouco til. Em alguns casos para distinguir diferenas de forma em espectros provenientes de duas amostras, ou comparar o espectro obtido para a amostra com o de padres conhecidos, a diviso ponto-a-ponto dos dois sinais torna-se o mais adequado. Esta diviso pode ser efectuada utilizando os espectros normalizados, a um ponto ou aos seus mximos, se este possurem a mesma forma o resultado da diviso ser aproximadamente uma constante, sendo as variaes aleatrias, centradas num determinado valor, impostas pelo rudo espectral (ver figura B seguinte).
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Figura 15 (A) Espectros de uma amostra, a azul com maior concentrao de analito e a cinzento com uma concentrao mais baixa. (B) Resultado da diviso ponto a ponto dos dois espectros. Nota: no indicada a escala do sinal nem de comprimentos de onda, por ser uma representao no real
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III. Espectroscopia de Absoro Molecular

III.1. Bases tericas
As molculas so sistemas complexos e a interpretao da informao espectroscpica obtida experimentalmente requer a utilizao de modelos moleculares. Os parmetros utilizados nestes modelos podem ser diferentes dependendo dos tipos de espectroscopia, ou seja, dos espectros que se pretendem analisar. A base para a distino dos modelos a utilizar assenta sobre dois fenmenos: as energias de transio, conceito esttico; ou os tempos de vida das transies, conceito dinmico. Estes parmetros caractersticos, diferentes ordens de grandeza para as transies electrnicas, vibracionais e nucleares (ou outras). Em espectroscopia, os parmetros (ou caractersticas) mais importantes so os nveis de energia. A energia tanto dos tomos como das molculas esto quantificadas, ou seja, a energia apenas pode ter alguns valores discretos no podendo ser caracterizada como um contnuo (no pode assumir um valor qualquer), tal como esquematizado na Figura 16. Este facto implica que no seja possvel descrever os nveis de energia atravs da mecnica clssica (leis de Newton), sendo portanto necessrio recorrer mecnica quntica. escala quntica a energia do sistema descrita por funes de onda, com coordenadas espaciais e temporais, (x,y,z,t), sendo obtida pela resoluo da equao de Schrdinger:
eq. 10
em que E a energia quntica do sistema e H o operador Hamiltoniano da propriedade em estudo. Matematicamente possvel separar (factorizar) a funo de onda total de um tomo ou molcula nas componentes (coordenadas) electrnica e nuclear, pela aproximao de Born-Oppenheimer. Esta possibilidade deve-se ao facto de que as diferenas de massa entre os electres e o ncleo (tendo em conta que ambos esto sujeitos a foras de magnitude semelhante) os electres se movem muito mais rapidamente que os ncleos. Assim, possvel tratar Figura 16 Representao esquemtica dos nveis o movimento dos electres considerando os ncleos fixos, simplificando a resoluo da equao pois o de energia de uma molcula poliatmica. nmero de coordenadas menor. De notar que, mesmo com esta aproximao a resoluo da equao de Schrdinger muito complicada e s possvel resolver completamente para molculas ou tomos com nmero reduzido de electres. Considerando ainda esta aproximao, o movimento dos ncleos nas molculas pode ainda ser separado nos seus movimentos rotacionais (rot) e vibracionais (vib), tomando a funo de onda total ( tot) a forma:
eq. 11
o que permite escrever a energia total do sistema como uma soma de contribuio da energia resultante dos trs tipos de movimento.
eq. 12
Apesar de ser uma aproximao, na maior parte das situaes pode ser aplicada com sucesso esta separao de energias. A energia de translao pode na maior parte dos casos no ser considerada porque o seu efeito muito pequeno nas espectroscopias electrnicas, vibracionais e rotacionais. A razo porque se obtm bandas (mais ou menos largas) e no picos esta relacionada com a possibilidade de serem observadas durante as transies principais transies para outros nveis energticos includos no principal. Por exemplo, no caso das espectroscopias que envolvem transies electrnicas, alm dessas, podem ser estimuladas transies vibracionais e rotacionais.
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Quando uma molcula exposta a radiao com a energia adequada para promover a passagem de electres do estado electrnico de mais baixa energia (estado fundamental) para um estado excitado existem, de facto, muitos nveis energticos vibracionais/rotacionais que podem receber os electres (no estado electrnico de maior energia). a disponibilidade deste nmero elevado de nveis, dentro do prprio nvel electrnico, que d origem ao alargamento das bandas, como se pode ver na representao esquemtica seguinte.
Figura 17 Representao esquemtica dos nveis de energia de uma molcula poliatmica e da forma de um espectro de absoro.
O resultado final de um espectro de absoro uma curva final envolvente da estrutura fina dos subnveis includos nos nveis para que ocorre a transio. III.1.1. Regras de seleco Um estudo espectroscpico regista a alterao de uma molcula de um estado quntico para outro, sendo este processo conhecido por transio espectroscpica e do qual resulta absoro da radiao. A energia requerida a este processo proveniente da radiao electromagntica. condio necessria que a energia da radiao (h) seja suficiente para superar a diferena entre a energia de um estado ocupado (Ei) e um outro estado quntico de maior energia (Ef). Ou seja,
eq. 13
Consequentemente, quando a frequncia da radiao no satisfaz a expresso de Planck (eq. 13) a radiao ser transmitida na totalidade. O primeiro requisito para que uma transio possa ocorrer a de que exista uma diferena de populao entre os estados fundamental e excitado. Outro factor importante deriva do facto de ser utilizada a teoria quntica para descrever as propriedades de partculas pequenas, a qual por sua vez impe certas limitaes para que as transies possam ocorrer. As regras que determinam quais as transies que tm uma probabilidade finita (i.e. diferente de zero) de acontecer so chamadas regras de seleco. Apesar destas regras variarem de tcnica para tcnica, em geral, as transies entre dois estados de energia que difiram de apenas um nmero quntico so permitidas.
Figura 18 Fenmeno de transmisso e de absoro da radiao, transio entre dois nveis energticos
As regras de seleco so um pressuposto formal de quais transies so espectveis (permitidas) ou no esperadas (proibidas) de aparecer no espectro. Contudo, em muitos casos existem perturbaes do estado fundamental ou excitado, ou mecanismos alternativos dos quais resulta a observao de transies formalmente proibidas, embora nestes ltimos casos as bandas resultantes terem uma intensidade muito menor.
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III.2.
Absorvncia e transmitncia
A interaco de fotes com partculas que absorvem radiao provoca uma atenuao da intensidade do feixe. H absoro quando a intensidade da radiao emergente menor que a intensidade da radiao incidente:
Figura 19 Transmisso da radiao aps atravessar a amostra
Por definio, Transmitncia (T) a fraco de radiao incidente que transmitida aps atravessar a amostra.
ou eq. 14
Quando a intensidade do feixe emergente diminui, ou seja quando a transmitncia diminui, a um determinado comprimento de onda significa que existem espcies na amostra a absorver parte da radiao.
1 corresponde ao comprimento de onda ao qual a espcie em estudo sofre maior interferncia com a radiao. Sendo os limites dos valores de transmitncia,
0 % T 100 (ou seja 0 T 1)
T=0 quando toda a radiao incidente absorvida, e T=1 (ou 100%) quando toda a radiao incidente transmitida (I=I0), no h absoro.
Figura 20 O espectro em transmitncia
A absorvncia (A) uma grandeza inversamente proporcional transmitncia, sendo uma medida da quantidade de radiao que foi absorvida pela amostra, sendo muitas vezes designada por densidade ptica. Podemos definir a absorvncia como uma funo logartmica da transmitncia, do seu inverso. Ao contrrio do que se observava com a transmitncia, quando a intensidade do feixe emergente diminui o que se observa um aumento da absorvncia.
ou seja
A = log10
I () I0 ( )
eq. 15
O mximo de absorvncia coincide com o mnimo de transmitncia. Pelo que os limites dos valores de absorvncia so: 0A, o que significa que quando toda a radiao transmitida (I=I0) no h absoro (A=0), mas quando I=0, no h radiao transmitida, a absorvncia infinita
Figura 21 O espectro transformado para valores de absorvncia
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III.3.
Anlise qualitativa
A anlise qumica qualitativa visa numa primeira abordagem a identificao dos elementos (compostos) presentes numa amostra. No entanto, mesmo quando se trata de amostras simples, com apenas um analito, estas anlises podem ser complexas. Aps o espectrofotmetro ter recolhido os dados resultante da exposio da amostra ao feixe de radiao, esses dados so enviados para o sistema de processamento (em geral um computador) que processa os dados de intensidade para cada comprimento de onda, no sentido da obteno do espectro respectivo. Na figura seguinte apresentado o espectro de absoro do isopreno, no qual o aumento do comprimento de onda representado da esquerda para a direita no eixo dos xx e a intensidade (no caso a absorvncia) no eixo dos yy. O comprimento de onda mximo de absoro (max) pode ser utilizado para identificar grupos caractersticos ou funes de molculas, em particular quando se tratam de molculas orgnicas. Na Figura 22, claro que 222 nm corresponde ao mximo de absoro, max, do isopreno, sendo esta causada por uma transio * do sistema conjugado presente na molcula, como se esquematiza na figura seguinte.
Figura 23 Representao esquemtica da transio * na molcula do isopreno
Figura 22 Espectro de ultra-violeta do isopreno
Em qualquer espectroscopia, para proceder identificao de uma estrutura, pode ser suficiente comparar o espectro do analito em estudo com o de um padro utilizando o espectro obtido como se se de uma impresso digital se tratasse. Esta prtica de utilizao mais corrente em espectroscopia de infravermelho, uma vez que a estrutura de bandas, intensidades relativas e posio dos mximos, caracterstica de cada molcula particular. A identificao de uma estrutura pode ter graus de dificuldade muito variveis, dependendo da natureza do analito, e portanto cada problema pode exigir uma estratgia de anlise diferente. A soluo est condicionada pelas capacidades e meios existentes, e est sempre dependente da informao disponvel sobre o analito em estudo. A soluo pode ser muito simples quando se dispe de muitos dados sobre o analito, ou complexa quando no se tem qualquer informao. Neste ltimo caso, pode ser necessrio utilizar vrios tipos de abordagem e/ou utilizao de tcnicas complementares de anlise. III.3.1. Decomposio de bandas de espectros A utilizao de modelos em espectroscopia ptica advm da necessidade de extrair as propriedades pticas intrnsecas do material, assim como outra informao til, que pode ser obtida da reproduo de resultados experimentais por um modelo (ou modelos) adequado. Para entender a diversidade de resposta pticas de um determinado sistema podem ser utilizados ajustes (lineares ou no lineares) de funes matemticas aos resultados experimentais, tendo por base critrios de modulao sem imposies muito restritivas. O ajuste de curvas experimentais (ou espectros), uma tcnica standard na qual os parmetros da funo de ajuste variam de modo a descrever correctamente os valores experimentais. A abordagem seguida no ajuste consiste em assumir que os dados experimentais seguem uma determinada funo que possui um conjunto de parmetros desconhecidos. a variao destes parmetros que vai conduzir ao melhor ajuste aos dados. No caso dos espectros as funes mais utilizadas so do tipo Gauss (eq 16) e Lorentz (eq. 17).
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eq. 16
eq. 17
Em que A a rea da banda, w a largura da banda a meia altura, xc o cento (posio do mximo). Nas figuras seguintes so apresentados dois exemplos de ajuste, por Gaussianas, de bandas espectrais compostas.
A B O objectivo da decomposio de uma curva espectral matematicamente ajustar bandas individuais a um espectro, que quando combinadas (somadas) coincidem com os pontos originais. A figura anterior mostra muito claramente que as bandas obtidas experimentalmente podem ser o resultado da sobreposio de vrias bandas. Estas bandas individuais podem ser consequncia de bandas de absoro de diferentes grupos numa mesma molcula (espectro A), ou da presena de vrios tipos de analito (ou de um nico analito com interaces distintas) como no caso do espectro B. Este tratamento matemtico pode ser efectuado de um modo simples computacionalmente utilizando funes disponveis em programas grficos e de clculo, como o Excel ou o Origin, ou nos programas que controlam os espectrofotmetros. O ajuste envolve trs passos: (i) Escolha dos perfis iniciais (forma da bandas e tipo de linha de base); (ii) Escolha dos parmetros inicias de ajuste (largura de bandas, intensidades ou reas, e posio dos mximos); (iii) Minimizao dos residuais de ajuste (minimizao do desvio da curva resultante curva experimental) Em sistemas mais complexos pode ser necessrio utilizar tipos diferentes de funes para as bandas individuais, enquanto que na maior parte dos casos so utilizadas as mesmas funes para todas as bandas de ajuste. O perfil das bandas depende do tipo de espectroscopia e certos perfis so melhores em casos particulares. Contudo, de um geral corrente ajustar por Gaussianas amostras slidas, Lorentizanas para gases, enquanto para lquidos so utilizadas funes mistas de Gauss e Lorentz (denominadas funes Voight), em que a percentagem de cada tipo de funo pode ser varivel. Um outro caso particular a fluorescncia onde o ajuste por funes log-normal muitas vezes o mais indicado.
Figura 24 Resultado da decomposio de espectros de absoro em soma de Gaussianas, recorrendo ao programa PeakFitting do Origin. (A) Espectro de infravermelho da L-alanina recristalizada a pH 1, e (B) espectro de absoro UV/Vis de vanadatos depositados em celulose microcristalina.
III.4.
Anlise quantitativa
O objectivo de uma anlise qumica quantitativa a determinao da concentrao (quantidade) de um componente (ou componentes) da amostra. Este tipo de anlises envolve vrios passos e procedimentos, dos quais os mais importantes so: definio do problema, obteno de uma amostra representativa, preparar uma amostra para anlise, realizar as medidas, e por fim calcular e apresentar os resultados da determinao. A base matemtica para as anlises quantitativas a lei de Lambert-Beer, que relaciona a fraco de radiao absorvida com a concentrao do analito.
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III.4.1. Lei de Lambert-Beer A lei de Lambert-Beer relaciona a absorvncia de um analito com sua concentrao (C) e o percurso ptico (b) atravs de uma constante de proporcionalidade, o coeficiente de absortividade ou coeficiente de extino (ou absortividade molar, se as unidades forem expressas em M-1.cm-1). O coeficiente de absortividade depende da rea de captura do foto (), do comprimento de onda a que se efectua a anlise e do analito ( especifico de cada molcula ou tomo). Cada partcula tem uma rea em torno de si na qual a probabilidade de um foto, com o comprimento de onda adequado, a atravessar e ser absorvido de 100 %. Esta rea de captura, tambm designada por rea de influncia, depende da partcula (do seu tamanho) e comprimento de onda da radiao A dependncia da absorvncia com a concentrao bvia, uma vez que quanto maior for o nmero de espcies a absorver menor ser a quantidade de luz (radiao) que emerge da amostra. Esta variao tambm vlida para o percurso ptico, quanto maior for o percurso ptico maior ser a quantidade de analito que pode interactuar com o feixe de radiao e portanto maior a quantidade de luz absorvida. III.4.1.1 Hiptese de Lambert A intensidade da radiao monocromtica (I), diminui dI quando passa por um material com espessura dx, com um coeficiente de absortividade K: Assim,
eq. 18
ou seja,
eq. 19
Integrando a equao 19 entre os limites de I (I0, quando no h absoro e I, quando a radiao atravessou completamente a amostra) e de x (0 e b, a totalidade do percurso ptico),
eq. 20
a radiao transmitida dada pela forma integrada:

, ou seja, eq. 21
III.4.1.2 Hiptese de Beer Aplicao da equao de Lambert (18) a solues diludas, para um composto dissolvido num meio transparente, da qual resulta que K proporcional concentrao (C) e directamente relacionado com a rea de captura do foto.
eq. 22
de notar que I/I0 a transmitncia (T).

20
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eq. 23
Considerando
, ou
, ento
eq. 24
Sendo log(I0/I) a absorvncia (A), a quantidade de luz absorvida dada por:

eq. 25
Em que as unidades de so as unidades inversas da concentrao e do percurso ptico de modo a tornar a absorvncia adimensional. No anexo I apresentado um outro modo de abordar e deduzir a lei de Lambert-Beer. A equao anterior a forma mais utilizada da lei de Lambert-Beer, em anlises espectroscpicas, resulta numa relao linear entre as medidas de absorvncia e a concentrao do analito, como apresentado na figura seguinte.
Figura 25 Relao entre as medidas de absorvncia e a concentrao quando vlida a lei de Lambert-Beer
III.4.2. Anlise de um sistema de multicomponentes - Misturas Uma mistura tem uma absorvncia (a um determinado comprimento de onda) que consequncia da capacidade das espcies em soluo absorver nessa gama espectral. O exemplo mais simples o caso de uma soluo com um nico analito, pois apenas necessrio considerar a clula (portaamostras), o soluto e o solvente. A absorvncia destas amostras (A) dada por: ; dando conta da relao que existe entre o branco, apenas solvente, , e a amostra , logo . Assim,
donde se conclui que a absorvncia uma grandeza aditiva, ou seja pode ser somada e subtrada, ao contrrio da transmitncia. Assim quando temos n componentes numa mistura:
eq. 26
em que a absorvncia total da amostra (mistura) a um comprimento de onda (), e absorvncia de cada um dos componentes da amostra, ao mesmo .
Aplicando a lei de Lambert-Beer, podemos escrever a absorvncia total em funo das concentraes de cada um dos componentes da mistura ( ) e dos respectivos coeficientes de absortividade , para o comprimento de onda :
eq. 27
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21
A equao mostra que para um sistema com n componentes o nmero de incgnitas 2n, pois para cada componente, alm da concentrao necessrio conhecer o coeficiente de absortividade. Um modo de resolver o problema escolher um conjunto de padres (um por cada componente da mistura) e fazer as medidas de absorvncia desses padres a n comprimentos de onda, se a lei de Lambert-Beer for vlida, a aplicao desta permite calcular o coeficientes de absortividade molar , eliminando n incgnitas. A anlise da amostra aos mesmos comprimentos de onda permite obter um sistema de n equaes a n incgnitas.
eq. 28
Actualmente, j existem espectrofotmetros que fazem leituras a vrios comprimentos de onda simultaneamente e que possuem programas especficos para anlise de amostras com nmero elevado de componentes, diminuindo deste modo o tempo de anlise de sistemas complexos. III.4.3. Anlise de misturas binrias: Sistemas com dois componentes Num sistema contendo dois analitos, e dos quais se pretende determinar a sua concentrao, a anlise feita atravs da resoluo do sistema seguinte de duas equaes a quatro incgnitas.
eq. 29
O modo de resolver o problema est relacionado com os espectros individuais de cada um dos analitos e da posio relativa dos seus mximos. Existem duas situaes possveis, ou aos mximos de cada um dos componentes apenas um dos analitos absorve, ou os espectros esto sobrepostos e, na gama espectral de validade da lei de Lambert-Beer, ambos os componentes da mistura absorvem. III.4.3.1 Espectros bem resolvidos Se os espectros dos dois componentes apresentarem uma boa separao dos seus mximos, ou seja, se no houver uma sobreposio espectral significativa, a determinao pode ser efectuada aos mximos de cada uma das espcies. No caso mais simples em que temos apenas duas espcies a absorver sem sobreposio espectral, como se representa na figura anterior, o sistema de equaes fica reduzido a,
eq. 30
Figura 26 Espectros bem resolvidos (espectros sem sobreposio espectral significativa).
se as medidas forem efectuadas aos mximos, 1=max,1 e 2=max,2, pois atravs dos espectros claro que, e .
22
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III.4.3.2 Sobreposio espectral Numa mistura binria, quando as duas espcies absorvem na mesma regio espectral, pode haver uma sobreposio completa ou parcial dos espectros desses componentes.
Figura 27 Espectros com sobreposio espectral.
Quando vrios componentes absorvem na mesma regio espectral a absorvncia medida resulta da soma da absorvncia de cada dos componentes individuais. O erro associado, tal como se pode verificar pela figura seguinte, resulta numa sobrevalorizao da concentrao calculada.
Figura 28 Erro causado por sobreposio da absoro numa mistura binria
No caso de sobreposio completa a determinao das concentraes dos componentes da mistura pode ser bastante difcil, enquanto para uma sobreposio parcial a anlise pode ser feita por vrios mtodos. Num sistema com dois componentes podemos fazer a anlise por dois mtodos diferentes: (1) anlise por regresso linear a dois comprimentos de onda; e (2) anlise a vrios comprimentos de onda. Em ambos os mtodos necessrio a obteno de leituras de trs solues: dois padres (um de cada componente) e outro da amostra (como o exemplo na figura seguinte). III.4.3.2.1 Anlise a dois comprimentos de onda
Figura 29 Espectros necessrios para a anlise de uma mistura binria
O mtodo mais simplificado, e por isso menos exacto, atravs dos valores de absorvncia do espectro da mistura e de dois padres, a dois comprimentos de onda. Os comprimentos de onda escolhidos devem corresponder aos mximos de absoro, mas podem ser outros que se julguem, por motivos experimentais, mais adequados. Dos espectros dos padres podem ser obtidos os coeficientes de absortividade de X e Y aos comprimentos de onda 1 e 2. ; e ;
que substitudos nos sistema de equaes reduz o nmero de incgnitas e permite resolver o sistema obtendo as concentraes de X e Y na mistura:
eq. 31
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III.4.3.2.2 Anlise por regresso linear a vrios comprimentos de onda Neste mtodo de anlise mais exacto, recorre-se a um ajuste linear de pontos. Tendo em conta que para a mistura a lei de Lambert-Beer toma a forma:
eq. 32
As solues padro permitem calcular os coeficientes de absortividade para os componentes X e
Y:
e que substitudos na equao referente mistura resulta na seguinte expresso:
eq. 33
Esta equao dividida pela absorvncia do padro X ao comprimento de onda ,

eq. 34
pode ser considerada como uma relao linear (y=mx+b) entre
(como y) e
(como x),
cujo ajuste, com pelo menos 5 pontos (valores de A a 5 comprimentos de onda diferentes), permite obter atravs do declive e ordenada na origem o valores da concentrao de X e Y na mistura: e .
III.4.3.2.3 Ponto isosbstico O ponto isosbstico um comprimento de onda (is) onde ocorre o cruzamento de todos os espectros, a existncia deste ponto tem um particular interesse analtico, pois os coeficientes de absortividade so iguais para as espcies que absorvem nessa regio. Para a determinao do ponto isosbstico devem ser utilizadas no mnimo 5 solues. De um modo geral, este ponto devido presena de duas espcies em equilbrio qumico, a alterao das concentraes relativas resulta em variaes espectrais como representado na figura seguinte.
Figura 30 Cruzamento de espectros, por variao da concentrao da amostra: ponto isosbstico
No ponto isosbstico o nmero de equaes pode ser reduzido para metade, contudo apenas permite calcular com facilidade a concentrao total das espcies em soluo, quando estas se formam por equilbrio qumico a partir de uma espcie inicial:
24
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III.4.4. Desvios lei de Lambert-Beer A linearidade da lei de Lambert-Beer limitada por factores qumicos e instrumentais. As principais causas de desvio linearidade so: variaes do coeficiente de absortividade para concentraes elevadas (>0.01M) devido a interaces electrostticas entre molculas vizinhas; disperso da radiao devido a partculas em suspenso na amostra (soluo); fluorescncia ou fosforescncia da amostra; alteraes no ndice de refraco para concentraes elevadas de analito; desvios no equilbrio qumico dependentes da concentrao do analito; radiao no monocromtica, este desvio pode ser minimizado se a anlise for efectuada na zona plana do espectro que corresponde ao mximo de absoro do analito; radiao dispersa. III.4.4.1 Lei limite A lei de Lambert-Beer s se aplica a solues diludas, concentraes inferiores a 10-2-10-3 M, tendo sido esta foi a hiptese base de Beer. Em solues com concentraes mais elevadas existe uma maior interaco entre as molculas, o que provoca uma alterao do seu coeficiente de absortividade. Por outro lado, os electres da camada externa das molculas (ou tomos), se a soluo for muito concentrada interactuam electrostaticamente de modo repulsivo interferindo com a radiao. Esta interaco provoca, em geral, uma diminuio da intensidade emergente, que deixa de ser proporcional concentrao. O ndice de refraco (n) da soluo, que se altera com a concentrao, tem um relao directa com o ngulo da radiao emergente ( ). A sua variao, muito significativa para concentraes elevadas, provoca uma diminuio da intensidade da radiao que chega ao detector (fixo, com uma determinada geometria em relao ao percurso da luz incidente). III.4.4.2 Desvios qumicos Quando h possibilidade de estabelecimento de equilbrios a lei de Lambert-Beer pode no ser aparentemente verificada. Contudo, em condies experimentais bem definidas, estes desvios podem ser eliminados permitindo efectuar as anlises. III.4.4.2.1 Equilbrio cido-base: cido fraco em soluo HX X- + H+, sendo A relao entre a absorvncia e as espcies em soluo dada pela equao seguinte:
eq. 35
considerando que o H+ no tem espectro de absoro (A=0, a todos os ). No ponto isosbstico, caso exista, permite calcular a concentrao total do cido (CT) que existe nas suas duas formas (protonada, HX, e no protonada, X ). Neste ponto , logo , resultando numa relao directa entre a absorvncia e a concentrao.
25
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A outros comprimentos de onda e em meio tamponizado, ou seja, a pH constante, possvel tambm fazer o mesmo tipo de anlise. Considerando que, funo da concentrao total ( , se , ento ): . A equao 32 pode ser expressa em
ento,
, resultando a equao:
eq. 36
Em meio tamponizado, a recta de calibrao, para um cido fraco em soluo, portanto dada pela seguinte equao:
eq. 37
em que o declive da recta
, com
III.4.4.2.2 Formao de dmeros 2X X2, sendo e
A lei de Lambert-Beer desenvolvida para as duas espcies em soluo tem a seguinte equao:
eq. 38
pelo que s existe uma relao linear entre a absorvncia total e a concentrao quando .
III.4.4.2.3 Formao de complexos A formao de um complexo entre um metal e um ligando, pode ser descrito pelo seguinte equilbrio qumico: M + L ML + L ML2 + L ... MLn Sendo a concentrao total de metal dada por: Logo, dos complexos metlicos,
26
. , ou utilizando as constantes de formao
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, ou seja
eq. 39
o que mostra que a razo entre a absorvncia e a concentrao totais independente da concentrao de metal mas dependente da de ligando. Assim, as condies experimentais que tornam constante, e portanto nas quais a lei de Lambert-Beer aplicvel, so: Fora inica e temperatura constantes, de modo a garantir que no h variao de n. Efectuar as medidas ao mximo de absoro (garantir que i constante). Utilizar uma concentrao de ligando muito superior de metal de modo que com a variao de concentrao de metal esta se mantenha praticamente constante.
III.4.4.3 Desvios Instrumentais A principal causa para este tipo de desvios lei de Lambert-Beer devida ao facto nos espectrofotmetros ser muito difcil obter radiao monocromtica, assim a radiao incidente pode ter vrios comprimentos de onda (energias): A consequncia imediata ser um encurvamento, com desvio negativo lei, mais ou menos significativo dependendo dos valores dos coeficientes de absortividade aos diferentes .
Figura 31 Representao grfica de absorvncia em funo da concentrao, desvios linearidade.
Sendo fi a fraco de radiao incidente com o comprimento de onda i. A lei de Lambert-Beer, no entanto, pode ser desenvolvida de modo a considerar a interaco do analito com a radiao heterocromtica, como se apresenta de seguida.
eq. 40
eq. 41
I0 pode ser posto em evidncia e desaparece, ou seja,

eq. 42
se os coeficientes de absortividade forem iguais:
, a equao anterior fica:

eq. 43
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Como
, a equao anterior reduz-se a
, donde se deduz que quando os
coeficientes de absortividade so iguais a Lei de Lambert-Beer vlida mesmo quando a radiao no completamente monocromtica. As condies, ou gama de comprimentos de onda, em que constante est directamente relacionada com o espectro de absoro.
Figura 32 Espectros de absorvncia e a sua transformao em coeficiente de absortividade
O coeficiente de absortividade ser constante significa que, para um dado intervalo de energias () uma dada molcula (ou tomo), no tem variao de absorvncia. Num espectro esta condio verificada ao mximo de absoro, tal como se pode observar na figura anterior. III.4.4.4 Condies experimentais mais adequadas Em resumo, para evitar alguns dos desvios e garantir que nas condies experimentais so as adequadas para que, em princpio, a lei de Lambert-Beer seja utilizada na anlise, importante: Trabalhar com solues pouco concentradas (Lei limite) Trabalhar em condies tais que a possibilidade de estabelecimento de equilbrios qumicos seja minimizada, ou caso exista essa possibilidade, garantir que mesmo assim a lei de Lambert-Beer vlida, como por exemplo, mantendo o meio tamponizado e/ou a fora inica constante (evitar os possveis desvios qumicos). Utilizar para a anlise, sempre que possvel, o(s) mximo(s) de absoro de cada espcie, deste modo praticamente constante, mesmo quando a radiao no monocromtica (minimizar os desvios instrumentais).
Um aspecto tambm importante, e que refora a necessidade de se utilizar para a anlise medidas efectuadas ao mximo de absoro, o facto de se pretender obter um mtodo de anlise com uma sensibilidade elevada. Um mtodo em que a sensibilidade elevada possibilita a distino entre concentraes muito prximas. A sensibilidade do mtodo, quando se utilizam rectas de calibrao, est directamente relacionado com o declive, e com o erro que se obtm quando h pequenas variaes nas medidas efectuadas, . A figura seguinte mostra que quanto maior for o declive da recta (ou seja, quanto maior for a sensibilidade) menor ser a incerteza na concentrao quando as medidas tm uma variao A.
Figura 33 Rectas de calibrao para uma anlise a dois comprimentos de onda diferentes
Tendo em conta que o declive da recta, sendo vlida a lei de Lambert-Beer, corresponde ao valor
.b, ento o comprimento de onda onde a sensibilidade mxima, corresponde aquele onde o
coeficiente de absortividade (e a absorvncia) mais elevado. Assim, claro que a gama espectral (ou comprimento de onda) mais adequado o mximo de absoro da espcie em estudo.
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III.5.
Escolha de um mtodo de anlise
Na escolha de um mtodo de anlise o primeiro passo ser a definio do problema analtico, para isso necessrio e importante conhecer: Propriedades fsicas e qumicas da matriz da amostra, e qual a quantidade de amostra disponvel. Componentes da amostra (em especial os que existem em maiores quantidades), e de entre eles os que podem causar interferncias. Que preciso necessria (ensaio qualitativo ou quantitativo)? A quantidade de amostras que necessrio analisar
Critrios para avaliao de um mtodo analtico: Preciso: pouca variao em medidas repetidas de uma mesma amostra Exactido: proximidade do valor real Sensibilidade: declive da curva de calibrao Limite de deteco: quantidade mnima detectvel Gama de concentraes: Limite mnimo e mximo de concentraes que podem ser analisadas Selectividade: razo de sensibilidade para a espcie a analisar em relao a outras espcies presentes e ainda, rapidez de anlise; facilidade e convenincia; prtica requerida ao operador; custo e disponibilidade do equipamento; custo do ensaio por amostra.
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IV. Espectroscopia de Absoro Molecular UV/vis

A introduo da mtodos espectroscpicos UV/vis de anlise da dcada de 30 do sculo XX, foi um passo importante em qumica analtica, tendo como vantagem o facto de se tratarem de mtodos no destrutivos. Estas anlises, em geral, no necessitam de grandes quantidades de amostra nem muito tempo para serem efectuadas. A espectroscopia de absoro UV/vis, forma corrente de designar a espectroscopia electnica, actualmente uma tcnica de rotina na maioria dos laboratrios de anlise.
IV.1. Bases tericas

Absoro de radiao electomagntica na regio espectral do ultravioleta e visvel transfere a quantidade de energia necessria para que ocorram transies nos nveis de energia electrnicos de valncia da molcula. Esta absoro resulta em excitao de electres do estado fundamental (em geral do nvel ocupado de mais baixa energia) para um outro nvel de energia que se denomina estado excitado (usualmente o nvel de energia no ocupado de menor energia). Na figura seguinte apresenta-se um diagrama de algumas das transies electrnicas que podem ocorrer numa molcula considerando as diferenas de energia entre esses nveis.
Figura 34 Transies possveis por absoro de um foto com energia igual diferena entre dois nveis de energia na molcula.
Estas transies s so possveis quando a energia do foto coincide com a diferena de energia entre o nvel fundamental e um possvel nvel excitado. Na Figura 34 claro que so necessrias energias mais elevadas, radiao com comprimento de onda menores, para promover transies da orbital (e para orbitais anti-ligantes) do que das orbitais (e para orbitais anti-ligantes), isto porque a diferena de energia entre nveis e os restantes mais elevada. Em espectroscopia usual designar por cromforo a parte da molcula (grupo ou grupos de tomos) responsvel pela absoro de radiao UV/vis. A transio electrnica envolve principalmente interaco entre a molcula e a componente elctrica da radiao electromagntica, pelo que as regras de seleco so de natureza dipolar. Sendo que a intensidade da transio electrnica proporcional ao quadrado do momento de transio, , e o momento de transio, Re, dado por:
eq. 44
Para uma transio seja permitida condio:
, e os requisitos de simetria so os que satisfazem a
eq. 45
em que A a representao totalmente simtrica do grupo pontual de simetria a que pertence. Segundo o princpio de Franck-Condon durante uma transio electrnica os tomos no alteram a sua posio, mas os electres pode estar sujeitos a reorganizao. Este princpio resulta numa transio vertical, entre dois nveis de energia electrnica, tal como representado na figura.
Figura 35 Transio vertical numa transio electrnica

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A espectroscopia UV/vis fornece duas informaes importantes:

A posio do mximo de absoro (max) - que corresponde energia (E) da excitao
electrnica, e como resultado de algumas correlaes empricas, informao sobre o cromforo responsvel pela absoro.
O coeficiente de absortividade molar ou coeficiente de extino () - este parmetro, como
j foi referido, especfico cada molcula e dependente do comprimento de onda. De um modo geral est associado com a maior ou menor probabilidade uma transio ocorrer. Quando o coeficiente de extino tem um valor muito baixo, a probabilidade dessa transio ocorrer pequena. Se o valor for zero, ou prximo de zero, estas transies designam-se por transies proibidas, embora mais correctamente devam ser associadas a transies estas sejam as fortemente desfavorecidas, ou seja, com pouca probabilidade de ocorrer. Na tabela seguinte so apresentados os mximos de absoro e os respectivos coeficientes de absortividade molar de alguns grupos funcionais.
Tabela 1 - Mximos de absoro caractersticos de grupos funcionais isolados
Grupo funcional C=C CC
Transio * *
max (tpico) (nm) 170 178 185 205 172 178 185 195 223 200 210 250 265 180 185 190 200 170 175 180 185 210 215 235 240 250 150 160 180 195 270 295 195 210
(tpico) -1 -1 (L mol cm ) 10000 20000 100 12000 8000 10000 2 100 150 2000 8000 150 250 500 1500 300 3000 1200 100 400
_____
R-OH R-SH R 2O R 2S RSSR
n * n * n * n * n * n * * n * n *
1000 10000 15 20 100
Os solventes nos quais o analito (ou espcie absorvente) se encontra dissolvido pode ter um efeito importante no espectro de absoro do analito, dependendo da polaridade de ambos. O efeito pode ser um alargamento da banda de absoro, ou uma perda de resoluo estrutural (por exemplo diminuio da resoluo vibracional), ou ainda diminuio do coeficiente de absortividade. Outro efeito importante a alterao da posio do mximo de absoro. Bandas resultantes de uma transio n* desviam-se para menores comprimentos de onda (desvio para o azul) com o aumento da polaridade do solvente. Este desvio devido ao aumento da solvatao do par isolado, o qual provoca uma diminuio da energia da orbital n. Outro efeito, embora nem sempre observado, o desvio para maiores comprimentos de onda (desvio para o vermelho) da transio *. Neste caso existe uma fora atractiva de polarizao que baixa a energia dos nveis excitado e no excitado, sendo a diminuio da energia maior para o estado excitado a diferena de energia entre os dois nveis diminui. Esta diminuio de energia tambm afecta a transio n*, contudo o efeito da solvatao mais importante sobrepondo-se ao segundo. No caso de solventes apolares e molculas apolares o efeito de solvente pouco significativo nos espectros de absoro UV/vis.
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Muitas molculas inorgnicas apresentam absoro por transferncia de carga, sendo denominados complexos de transferncia de carga. Para que um complexo apresente este comportamento, um dos componentes deve apresentar propriedades de doao e outro deve ser capaz de aceitar electres. A absoro de radiao, nestes casos, envolve a passagem de um electro do doador para uma orbital associada com o aceitante. Os coeficientes de absortividade molar para absoro associados com transferncia de carga so muito elevados, em geral maiores que 1x104 M-1.cm-1. O comprimento de onda mximo de absoro de cada substncia est directamente relacionado com a sua cor. De facto, existe uma relao directa entre a cor da substncia e a sua estrutura electrnica, tal como exemplificado na tabela seguinte.
Tabela 2 Relao entre a cor observada e a radiao absorvida
Cor absorvida Violeta Azul Azul esverdeado Verde azulado Verde Verde amarelado Amarelo Laranja Vermelho
Cor observada Amarelo esverdeado Amarelo Laranja Vermelho Prpura Violeta Azul Azul esverdeado Verde azulado
Radiao absorvida (nm) 400 435 435 480 480 490 490 500 500 560 560 580 580 595 595 605 605 750
IV.2. Instrumentao
Existem vrias combinaes de componentes que podem ser reunidos de forma a constiturem um espectrofotmetro integrado, com vrios graus de preciso e adequado para aplicaes particulares. Os espectrofotmetros tipicamente contm cinco componentes base: (i) fonte estvel de energia radiante, (ii) um contentor transparente radiao para colocar a amostra (porta-amostras), (iii) dispositivo que isola a regio do espectro electromagntico para efectuar as medidas, (iv) detector de radiao, que converte a energia radiante num sinal adequado, e (v) processador de sinal. O arranjo espacial de todos os componentes de um espectrofotmetro varivel, por exemplo o selector de comprimentos de onda pode estar antes ou depois da amostra, sem que hajam vantagens significativas de uma ou outra configurao instrumental. IV.2.1. Tipos de Espectrofotmetros Os espectrofotmetros podem ser classificados pelo percurso da radiao, e os principais tipos so: feixe simples, com apenas um percurso e feixe duplo, em que a radiao pode seguir dois percursos distintos, e espectrofotmetros de multi-canais. Feixe simples Utiliza apenas um percurso para a radiao, pelo que necessrio ter em conta variaes na resposta do detector e na fonte de radiao a cada , pois no h compensao para qualquer alterao em qualquer dos componentes dos espectrofotmetros. Um modo de diminuir este efeito acertar em cada medida os limites da transmisso: 100 % (branco) e o zero (qualquer superfcie que impea completamente a radiao de chegar ao detector). As vantagens principais dos espectrofotmetros de feixe simples o seu baixo custo e facilidade de utilizao. Este tipo de espectrofotmetro e til para mtodos de anlises, a apenas um comprimento de onda, de sistemas com apenas um composto a analisar. Na Figura 36 apresentada o esquema de um espectrofotmetro de feixe simples.
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Figura 36 Representao esquemtica de um espectrofotmetro de feixe simples identificando os principais componentes.
Feixe duplo Nos espectrofotmetros de feixe duplo a radiao pode seguir dois percursos distintos, um passando pela amostra e outro em que a radiao passa pela clula que contem a referencia (branco). A principal vantagem a rapidez, pois no tem necessidade de acertar o zero e o 100 %. Os espectrofotmetros podem ser de feixe duplo em espao ou feixe duplo em tempo, tal como esquematizado nas figuras seguintes.
Figura 37 Representao esquemtica de um espectrofotmetro de feixe duplo em tempo identificando os principais componentes.
Nos espectrofotmetros de feixe duplo em tempo a radiao segue para os dois percursos sendo dividida por um disco em intervalos de tempo regulares. O disco que separa a radiao um espelho com parte transparente radiao, sendo que quando esta zona se encontra no percurso da radiao esta segue directamente para a amostra. Por outro lado, se no percurso da radiao se encontra a zona espelhada a radiao reflectida e segue para a referncia. Assim, a radiao passa atravs da amostra e atravs da referncia alternadamente. De notar que a distncia percorrida pela radiao at ao detector semelhante quer seja devida amostra, quer seja proveniente da referncia. A razo da radiao amostra/referncia a medida da absorvncia.
Figura 38 Representao esquemtica de um espectrofotmetro de feixe duplo em espao identificando os principais componentes.
Nos espectrofotmetros de feixe duplo em espao a radiao dividida dois percursos iguais, num divisor de feixe e ~50% da radiao segue para a amostra enquanto os restantes 50 % so
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dirigidos para a referncia (em geral o branco). Neste caso podem ser observados dois processos independentes, pois em todo o tempo de anlise a radiao atravessa sempre a amostra e a referncia. So utilizados dois detectores, estes encontram-se em posies equivalentes de modo a tornar o percurso da radiao idntico para a amostra e a referncia. O espectrmetro de feixe duplo em espao tem maior rudo que o de feixe duplo em tempo, contudo permite efectuar estudos cinticos relativamente rpidos, enquanto que com um espectrofotmetro de feixe duplo em tempo no possvel ser observada nenhuma alterao mais rpida que a alternncia da radiao. As desvantagens dos espectrofotmetros de feixe duplo esto relacionadas com um rudo espectral mais elevado. Este aumento de rudo pode ser associado com a necessidade de maior amplificao do sinal, uma vez que podem existir perdas de radiao significativas nas lentes, espelhos e clula adicionais. Multi-canais com matriz de fotodiodos Estes espectrofotmetros tm um sistema de deteco que permite medidas a vrios ao mesmo tempo, pelo que podem ser obtidos espectros completos num perodo de tempo curto. A matriz de fotododos, integrada num espectrofotmetro tal como esquematizado na Figura 39, uma ferramenta poderosa para estudar intermedirios transientes de reaces moderadamente rpidas, em estudos cinticos. No entanto a sua utilizao est mais associada a tcnicas cromatogrficas, como sistema de deteco, em anlise qualitativa e quantitativa
Figura 39 Esquema de um espectrofotmetro de multi-canais baseado em rede de difraco e em matriz de fotodiodo.
As principais desvantagens deste tipo de equipamento so o preo relativamente elevado e a resoluo espectral limitada e nem sempre a mais conveniente (de 1 a 2 nm). De notar que neste tipo de espectrofotmetros o elemento dispersivo da radiao (rede de difraco) se encontra depois da amostra e antes do detector (matriz de fotododos). IV.2.2. Fontes de Radiao Para uma utilizao mais geral de um espectrofotmetro importante que a fonte de radiao tenha como principais caractersticas: permita obter uma gama vasta de comprimentos de onda, e que a radiao tenha intensidade razovel e uniforme, em toda essa gama Fontes mais utilizadas podem ser divididas em dois grupos, as fontes contnuas (policromticas) de que so exemplo as lmpadas de tungstnio, de deutrio; e as fontes de riscas (monocromticas) lmpadas de ctodo oco e de descarga, e lasers Fontes de radiao continuas Uma lmpada de tungstnio consiste num filamento de tungstnio (enrolado) e montado num envelope de vidro (ou quartzo) de alta preciso. O interior da lmpada pode ser vcuo, ou o mais vulgar, a lmpada pode estar cheia de um gs inerte, como o rgon ou crpton. Estes gases tm como funo impedir a oxidao do filamento. Os parmetros de funcionamento da lmpada variam entre 2,5 a 12 V e 0,02 a 1 A. O tempo mdio de utilizao de cerca de 30000 horas, e a sua temperatura varia entre 2200 a 3000 K. Estas lmpadas podem ser utilizadas na gama de comprimentos de onda de 350 a 2200 nm (regio do visvel e do infravermelho prximo).
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Figura 40 Esquema de uma lmpada de tungstnio
Todas as lmpadas incandescentes funcionam de acordo um princpio bsico simples: uma corrente elctrica forada a passar num filamento metlico que resiste ao fluxo de electricidade. Ao forar a passagem de corrente a resistncia produz um aumento de temperatura, e quando o filamento atinge uma temperatura elevada, brilha com radiao de um corpo negro e torna-se incandescente.
Um corpo negro uma superfcie que absorve a mesma quantidade de energia que a que emite, sendo a quantidade de radiao emitida, a um determinado comprimento de onda, determinada pela temperatura. Todos os objectos podem emitir luz, visvel ou no, quando recebem energia suficiente em forma de calor. A emisso desta luz, ou radiao electromagntica, uma das formas que os objectos tm para perder energia para o espao que os rodeia e que se encontra a temperaturas mais baixas. Como se pode ver na Figura 41, tanto a forma como o mximo de emisso dependem da temperatura:
Figura 41 Diagrama de emisso de um corpo negro, representao da intensidade relativa da radiao emitida em funo do comprimento de onda.
Figura 42 Fotografia de uma lmpada de filamento de tungstnio, construda por Mazda, selada no topo. Foi uma das primeiras a ser construdas. O bolbo da lmpada tem 15 mm de dimetro, o filamento est enrolado e preso a 13 suportes.
A radiao emitida como um espectro contnuo, mas a distribuio de energia emitida depende da temperatura a que o objecto radiante. Um aumento da temperatura do corpo provoca um desvio da distribuio da emisso e a radiao torna-se mais energtica (menores comprimentos de onda). Uma fonte de radiao ideal, ou seja um corpo negro ideal, emitiria um contnuo de radiao a todos os comprimentos de onda. Numa lmpada de deutrio, que consiste um recipiente fechado contendo deutrio com presso de gs de ~1 atm, o efeito de uma descarga elctrica pode provocar a seguinte reaco: D2 + Ee D2* D + D + h O mecanismo pelo qual se pode obter um contnuo de energia, envolve a formao inicial de uma espcie molecular excitada (D2*), por aco da energia elctrica (Ee), a espcie excitada dissocia-se dando origem a dois tomos excitados e um foto. Neste processo a energia resulta do seguinte balano:
Figura 43 Esquema e fotografia de uma lmpada de deutrio
Sendo que
resulta da espcie D2* e portanto quantificada, enquanto que
so as
energias cinticas dos dois tomos de deutrio. Assim, ao quebrar a ligao, a energia em excesso transforma-se em energia cintica (translacional), no quantificada, e, pode ser obtido um contnuo de energia pois a soma dos dois pode variar desde zero at . De notar que a energia do foto tambm pode variar, ou seja, quando a energia cintica dos tomos aumenta a energia do foto diminui de modo a compensar e respeitar o balano de energia. O resultado que a gama de comprimentos de onda destas lmpadas na regio espectral do ultravioleta: 160-380 nm. Nesta regio, para que seja possvel utilizar estas lmpadas como fonte de radiao, necessrio que o exterior seja num material transparente como o quartzo.
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Figura 44 Comparao entre a emisso de uma lmpada de deutrio e de tungstnio
Fontes de radiao monocromticas (de linhas) Lmpadas de ctodo oco, emitem radiao monocromtica, e o comprimento de onda especfico depende do elemento que constitui o ctodo. Estas so mais utilizadas em espectrofotometria de absoro atmica, sendo constitudas por um nodo de tungstnio e um ctodo cilndrico selado num tubo que se encontra sob vcuo, com um gs inerte (non ou rgon) a uma presso de 1 a 5 torr. O ctodo construdo (ou apenas revestido) no metal do qual se pretende o espectro. Na Figura 45 est esquematizada uma lmpada de ctodo oco. Ao aplicar um potencial de 300 V atravs dos elctrodos, ocorre ionizao do gs inerte e gerada uma corrente de 5 a 15 mA, quando os ies e os electres migram para os elctrodos. Se o potencial aplicado for suficiente para que os caties formados, aps a ionizao, tenham uma energia cintica elevada ento, ao embaterem no ctodo, podem libertar tomos do metal. A nuvem atmica produzida contm tomos no estado excitado que, ao voltarem para o estado fundamental, vo emitir radiao especfica do elemento que constitui o ctodo.
Figura 45 Lmpada de ctodo oco
A difuso dos tomos pode ocorrer no sentido de uma reposio no ctodo, regenerando parte dos tomos metlicos que foram ejectados. A configurao cilndrica do ctodo concentra a radiao numa regio do tubo, assim como aumenta a probabilidade da deposio dos tomos metlicos ocorrer no ctodo. A eficincia destas lmpadas depende da geometria de construo e do potencial a que vo operar. Nas lmpadas de descarga, tal como a lmpada de deutrio, h uma passagem de corrente elctrica atravs do gs produzindo luz (radiao). Lmpadas de baixa presso de gs apresentam linhas estreitas de emisso, caractersticas dos tomos. Lmpadas de descarga tm um funcionamento semelhante s lmpadas de ctodo oco. Contudo no possuem elctrodos, e a radiao produzida por excitao de um sal dos metais. A ionizao do gs inerte ocorre por radiao com campo elevado na gama das rdio frequncias ou das microondas. As vantagens so a de ser possvel obter uma intensidade da radiao com 10 a 100 vezes superior, e a de possibilitar a anlise para materiais mais volteis e no condutores. Na figura seguinte apresentado um esquema de uma lmpada de descarga.
Figura 46 Esquema de uma lmpada de descarga sem elctrodos
Os Lasers, so utilizados quando necessria radiao monocromtica muito intensa. So fontes importantes para: ultravioleta, visvel, infravermelho e mtodos baseados em Transformada de Fourier. LASER um acrnimo de light amplification by stimulated emission of radiation, sistema que produz um feixe de luz monocromtico no qual todas as ondas se encontram em fase ou so coerentes. Os Lasers contm quatro componentes primrios:
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Meio activo pode ser um cristal slido como o rubi ou Nd:YAG, corantes lquidos, gases como o CO2 ou hlio/neon, ou semicondutores como o GaAs. O meio activo contm tomos cujos electres podem ser excitados a um estado de energia metaestvel por uma fonte de energia exterior. Mecanismo de excitao bombeia a energia para o meio activo por um, ou mais, dos trs mtodos bsicos: ptico, elctrico ou qumico. Espelho com reflectncia elevada superfcie que reflecte 100 % da luz do laser. Espelho com transmitncia parcial superfcie que reflecte menos de 100 % da luz do laser e transmite (deixa passar) a restante.
A luz de um laser produzida quando ao meio activo aplicada energia que eleva os seus electres para um nvel de energia instvel (ver Figura 47). Estes electres decaem para um estado metastvel de energia mais baixa e com um tempo de vida relativamente longo (microsegundos a milissegundos), os quais no retornam espontaneamente para o estado fundamental. Deste modo, possvel criar uma inverso de populao na qual a maioria dos tomos se encontram no estado metaestvel, se for aplicado ao material a quantidade de energia necessria. Quando a inverso de populao atingida, a aco laser iniciada se um electro retorna espontaneamente ao Figura 47 Estados de energia do meio activo de estado fundamental com libertao de um foto.
um laser
Se o foto emitido exactamente do comprimento de onda certo, este vai estimular um tomo no estado metaestvel a emitir um foto com as mesmas caractersticas, ou seja, o mesmo comprimento de onda, que se desloca em fase e com a mesma direco do foto incidente. Este processo designa-se por emisso estimulada. Esta emisso, coerente, que se desloca ao longo do eixo da cavidade ptica, amplificada devido aos espelhos que impedem a perda completa de radiao aps ser emitida pelos tomos, e que a reflectem dentro da cavidade ptica estimulando a emisso por outros tomos. Bombeando continuamente a energia para o meio activo, pode ser atingido um equilbrio entre o nmero de tomos que esto no estado metaestvel e o nmero de fotes emitidos, resultando num emisso de radiao contnua. IV.2.3. Selectores de comprimento de onda No possvel obter radiao com apenas um comprimento de onda, seja qual for a fonte, mesmo nas mais especificas h alargamento de linha por efeito de Doppler. As fendas permitem que uma gama varivel de comprimentos de onda passe atravs. Os selectores tm como funo para aumentar a especificidade da radiao
Figura 48 Efeito da largura de banda
Nos espectrofotmetros de varrimento, ou dispersivos, os selectores permitem que da radiao incidente apenas um comprimento de onda especfico chegue ao detector (ou incida sobre a amostra). De facto, em cada instante apenas se pretende analisar um comprimento de onda e o varrimento feito em sequncia para uma determinada gama espectral. Os mais utilizados so os filtros e monocromadores. O tipo de selector pode servir para caracterizar o equipamento de medida, pois usualmente designa-se por espectrofotmetro equipamento com prismas ou redes de difraco (monocromadores); e por fotmetros aqueles possuem filtros para seleccionar a gama espectral de anlise (que pode ser apenas um comprimento de onda).
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Filtros Os filtros so os tipos de selector mais simples, e tm como efeito sobre a radiao diminurem a gama de que os atravessam. Quando se pretende fazer anlise a vrios comprimentos de onda muitas vezes necessrio mais do que um filtro (quando existem!!!). Contudo, apesar da sua simplicidade de utilizao, no tm grande versatilidade pois no possvel fazer varrimento de uma gama vasta do espectro electromagntico. Filtros de absoro Estes filtros so vidros de diferentes cores podem ser utilizados para absorver os comprimentos de onda da radiao que no tm interesse, deixando passar a restante gama espectral. Como se pode ver na Figura 49 a zona espectral que atravessa um espectro, depende do material de que so construdos, corresponde menor absorvncia (~zero), pelo que combinando dois materiais diferentes pode ser ainda mais limitada a radiao que atravessa os filtros.
Figura 49 Espectros de absoro de dois filtros de diferentes materiais e a radiao transmitida por combinao desses filtros.
Filtros de interferncia Nos filtros de interferncia a radiao passa atravs da superfcie, que constituda por uma camada fina de um fluoreto de metais alcalino-terrosos. Ao atravessar esta superfcie a radiao reflectida, no interior, sendo esta reflexo funo da espessura do filtro (Figura 50). Ao ser reflectida sucessivamente no interior do filtro vo ocorrer interferncias construtivas e destrutivas dos diferentes componentes da radiao (ou seja, de ). Deste modo, apenas um comprimento de onda especfico atravessa o filtro, i.e. aquele que tiver apenas interferncias construtivas emerge do filtro. Monocromador: prismas e redes de difraco A funo chave de um monocromador transmitir radiao de um comprimento de onda seleccionado, os quais podem ser alterados manualmente ou de modo automtico. A fonte de radiao pode ser contnua (luz branca), ou uma mistura de comprimentos de onda monocromticos (fonte de linhas). Os elementos base dos monocromadores so:

Figura 50 Representao esquemtica de um filtro de interferncia
abertura (ou fenda) de entrada possibilita radiao de dimenses bem definidas, em geral de forma rectangular com largura w e altura h, colimador espelho que converte o feixe de radiao num feixe paralelo, selector de comprimento de onda prisma ou rede de difraco, separa os diferentes comprimentos de onda da radiao pelos diferentes ngulos de difraco, definidos pela disperso angular, focante espelho que se destina a focar a radiao na abertura de sada, converte o feixe paralelo em convergente, abertura (ou fenda) de sada isola uma gama restrita de comprimentos de onda do feixe inicial, encontra-se situada no plano focal do ltimo espelho
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Prisma Os diferentes comprimentos de onda so refractados a diferentes ngulos, sendo que azuis tm maior n logo so desviados para a base do prisma. A largura de banda funo da largura da abertura de sada da radiao, alterando a posio do prisma vai mudar o comprimento de onda que atravessa a fenda de sada da radiao.
Figura 51 Decomposio da radiao por um prisma
Os prismas so pouco utilizados no espectrofotmetros modernos, contudo, apresentam algumas vantagens, tais como serem relativamente baratos e permitirem uma seleco eficiente numa gama razovel de comprimentos de onda. As suas principais desvantagens so: a sua pequena disperso a comprimentos de onda elevados, e a absoro da radiao inerente ao material de que so fabricados, o que limita a gama espectral em que podem ser utilizados ( qual a radiao no absorvida). Redes de difraco De utilizao mais comum nos monocromadores dos instrumentos dispersivos, uma superfcie polida com uma srie de sulcos (linhas) paralelos. A gama do espectro electromagntico da sua utilizao determinada pelo nmero de linhas (sulcos) por mm. UV/vis 300-2000 linhas/mm IV 10-200 linhas/mm Sulcos mais prximos do uma melhor disperso e resulta na possibilidade de um aumento de resoluo. Uma rede de difraco de reflexo, a mais utilizada, consiste em espelhos paralelos muito finos sobre uma superfcies plana.
Figura 52 Representao esquemtica de uma rede de difraco
Figura 53 Reflexo da radiao numa rede de difraco de reflexo
O ngulo com que cada comprimento de onda difractado, numa rede de difraco de reflexo, dado pela equao seguinte:
eq. 46
em que n a ordem de reflexo, o comprimento de onda, d a distncia entre sulcos (linhas), e os ngulos de incidncia i e de reflexo r do feixe de radiao. As reflexes de primeira ordem so as que do origem aos comprimentos de onda mais levados. Quando se pretende remover os feixes resultantes de reflexes de ordem superior podem ser adicionados nos monocromadores filtros de corte de radiao na abertura de sada. O princpio de funcionamento do monocromador CzernyTurner est esquematizado na Figura 54. No monocromador a radiao de uma fonte externa focada na abertura de entrada, transformada em feixe paralelo no colimador (primeiro espelho cncavo) e direccionada para a rede de difraco. Neste componente a radiao de diferentes comprimentos de onda difractada com diferentes ngulos. O feixe difractado, paralelo, focado numa srie de imagens (cada uma com um comprimento de onda especfico), no plano focal. A abertura de sada Figura 54 Esquema de um monocromador apenas permite que uma gama estreita de comprimentos Czerney-Turner, com rede de difraco tipo de onda atravesse o monocromador. echellette
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O varrimento de toda a gama espectral disponvel pode ser obtido por alterao da posio da rede de difraco, a qual pode mover a posio das imagens, ao longo do plano focal, relativamente abertura (fenda) de sada. O desempenho dos monocromadores importante pois ir condicionar o desempenho global de qualquer espectrofotmetro. Os parmetros que podem ser indicativos do desempenho de um monocromador so: largura de banda refere a gama de comprimentos de onda que passa atravs da abertura de sada, resoluo relativo capacidade do monocromador para distinguir entre dois comprimentos de onda sucessivos e pouco espaados, perda de intensidade razo entre a intensidade da radiao entrada e sada do monocromador (semelhante transmitncia), comprimento focal comprimentos de focagem tanto do colimador como do focante, estes so determinantes para o tamanho do monocromador, deve ser tido em conta que em geral a perda de intensidade inversamente proporcional (tal como definida), radiao perdida radiao com comprimentos de onda indesejveis (ou seja, comprimentos de onda fora da largura de banda) que passam atravs da abertura de sada, disperso angular referente diferena nos ngulos de comprimentos de onda prximos que so difractados, disperso linear relacionado com o modo como os feixes de radiao aos diferentes comprimentos de onda se espalham ao longo do plano focal.
IV.2.4. Clulas (porta-amostra) As clulas (porta-amostra ou cuvettes) que se utilizam podem ser de vrios tipos, dependendo da anlise, da amostra e da gama espectral. O material das clulas deve ser escolhido de modo a que estas sejam transparentes radiao na gama espectral de trabalho. Assim, podem ser utilizadas clulas de vidro no visvel, mas quando se pretende efectuar a anlise tambm no ultravioleta, ento as clulas devem ser de quartzo, pois o vidro absorve a < 320 nm.
Figura 55 Clulas para lquidos utilizadas em espectroscopia ultravioleta e visvel.
A forma ou geometria das clulas pode ser plano ou cilndrico (tal como esquematizado na Figura 56), no entanto a mais favorvel aquela na qual incidncia da radiao perpendicular s paredes. Em clulas cilndricas a radiao pode ser reflectida e/ou refractada, e como consequncia pode haver perda de resoluo e/ou sinal. O percurso ptico (b) pode ser muito varivel e pode ir desde 0,5 a 10 cm. Contudo, as clulas mais utilizadas possuem um percurso ptico de 1 cm.
Figura 56 Geometrias das clulas para lquidos utilizadas em espectroscopia ultravioleta e visvel.
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IV.2.5. Detectores Os detectores so componentes dos espectrofotmetros utilizados para detectar e quantificar a radiao que atravessou o sistema em estudo e converter a resposta do sistema num sinal que seja possvel medir, de um modo geral, transformam a energia radiante em energia elctrica.
Tabela 3 Alguns tipos de detectores e a sua utilizao
Tipo de detector fototubo fotomultiplicador estado slido
Gama de (nm) 150 1000 150 1000 350 3000
Propriedade medida corrente corrente vrias
Utilizao tipica ultravioleta ultravioleta/visvel vrias
A sua configurao e estrutura variam de acordo com o tipo de radiao usada, mas os detectores mais utilizados so: Clulas fotoelctricas Fototubo Fotomultiplicador
Clulas fotoelctricas Acessrio, componente do espectrofotmetro, que regula ou produz corrente ou voltagem em resposta a certos tipos de radiao, utilizado em particular para radiao visvel. Tem geralmente como base um semicondutor, tais como selnio, germnio ou silcio, preparados ou modificados de modo conveniente. Numa clula fotoemissiva, um ctodo fotossensvel emite electres quando irradiado. Estes electres transformam-se em corrente quando migram para o plo positivo (nodo da clula). A corrente elctrica gerada (i) proporcional intensidade da radiao incidente (I):
i=kI
Apesar das clulas fotoelctricas serem pouco dispendiosas, este tipo de detector apenas utilizado na gama espectral do visvel, e como a intensidade de corrente decresce com o tempo, mais eficiente para tempos de anlise baixos (i.e. ensaios curtos).
Figura 57 Esquema do funcionamento de uma clula fotoelctrica do tipo fotoemissivo.
O funcionamento de uma clula fotovoltica diferente, neste tipo de detector, a radiao induz alterao de comportamento de uma juno p-n. Esta juno condutora criada entre camadas de semicondutores diferentes, sendo obtida uma diferena de potencial por efeito fotovoltico. Os fotodiodos, ou detectores de estado slido, so um exemplo deste tipo de detectores. Os fotododos so cristais de Si dopados, que por aplicao de uma diferena de potencial apresentam duas regies distintas: regio n rica em electres (-) e regio p rica em lacunas (+). Depois de estabelecidas estas duas regies no h passagem de corrente. Por aco da radiao ocorre uma perturbao que possibilita a passagem de corrente, sendo esta proporcional intensidade da radiao que incide sobre o fotodiodo. Na figura seguinte est esquematizado o funcionamento de um fotododo.
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Os fotodiodos so mais sensveis que os fototubos e mais baratos que os fotomultiplicadores, sendo a sua principal vantagem o facto de poderem ser utilizados em srie: Matriz de fotodiodos.
Figura 58 Esquema do funcionamento de um fotododo
Figura 59 Esquema de uma matriz de fotododos
A matriz de fotodiodos um conjunto de fotodiodos, sobre o suporte adequado, e com espaamento uniforme. Este tipo de detector permite medidas simultneas de vrios comprimentos de onda. Deste modo, podem ser obtidos espectros completos num perodo de tempo curto, que podem ter elevada resoluo espectral (~1 nm).
Outros tipos de clulas fotoelctricas so as fotocondutivas, em que a resistncia de uma substncia se altera como resultado da fotocondutividade, estas podem ser usadas como sistemas simples de medio da luminosidade, como por exemplo na fotografia, ou detectores de luz. Fototubo O funcionamento destes detectores de radiao tem por base o efeito fotoelctrico. O efeito fotoelctrico um processo de interaco entre um foto com energia E=h, com um tomo, da qual resulta a ejeco de um electro. O foto quando absorvido pelo tomo perde toda a sua energia no processo de ionizao. A energia cintica do electro libertado (Ec do fotoelectro) dada pela diferena entre a energia do foto e a energia de ligao (EL):
Ec=h- EL
eq. 47
Esta relao mostra que a energia dos electres libertados por efeito fotoelctrico no aumenta com o aumento da intensidade da luz incidente, mas funo da frequncia (energia) da radiao que incide sobre o metal. Por outro lado, quando h EL no h efeito fotoelctrico. O nmero de electres libertados vai ser proporcional intensidade da radiao que incide sobre o ctodo. O fototubo constitudo por um ctodo, um nodo e uma fonte externa de corrente, contidos num tubo transparente radiao e no interior do qual a presso deve ser baixa, ou seja, deve estar sob vcuo. Na figura seguinte apresentada uma fotografia e um esquema de um fototubo.
Figura 60 Esquema de um fototubo
O funcionamento de um fototubo pode ser descrito de uma forma simplificada do seguinte modo: a radiao ao incidir sobre o ctodo (placa revestida por uma substncia, em geral um metal, com as caractersticas adequadas) promove a libertao de electres; a passagem destes electres para o nodo devida descarga elctrica provocada pela fonte externa. A corrente proporcional intensidade dos fotes que chegam ao fototubo. O material que constitui as paredes exteriores do fototubo pode ser de quartzo (se forem utilizados tambm no ultravioleta) ou de vidro (quando so utilizados apenas na gama espectral do visvel). Este detector mais dispendioso que as clulas fotoelctricas
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Fotomultiplicador Um fototubo de vcuo com amplificao adicional por multiplicao de electres denominado fotomultiplicador. Este constitudo por um fotoctodo, um conjunto de dnodos denominado por cadeia de dnodos, nos quais um processo de multiplicao de electres secundrios ocorre, e um nodo. Diferentes tipos de estruturas de dnodos foram desenvolvidas de acordo com os tempos de resposta, de passagem, ou de anlise pretendidos, ou ainda a corrente de fundo baixa. Entre as mais comuns estruturas, podem ser referidas as estruturas confinadas circulares, focadas lineares, ecr, caixa, ou ainda em rede. Algumas estruturas especiais dos dnodos permitem a combinao com campos elctricos e magnticos adicionais.
Figura 61 Tubos fotomultiplicadores
O fotoctodo de um fotomultiplicador em canal consiste num sistema multiplicador de electres em canal para os fotoelectres, e um nodo para recolher a corrente final de electres. O componente base deste sistema um tubo com a superfcie interior recoberta por um material semicondutor, sendo em geral curvo de modo a inibir a acelerao dos ies positivos para o fotoctodo. Este tipo de estrutura pode ser organizado numa srio de canais, designados por microcanais, constituindo uma matriz cuja aplicao mais importante em espectroscopias com imagem.
Figura 62 Esquema do funcionamento de um fotomultiplicador, amplificao do sinal.
O funcionamento de um fotomultiplicador, representado na Figura 62, semelhante ao do fototubo mas, produzindo uma corrente maior porque a radiao ao incidir no ctodo (dnodo de converso) provoca libertao de electres. Os electres ao colidirem com os dnodos (~90 V mais positivos) so acelerados, estas colises promovem tambm o aumento do nmero de electres, no final possvel ocorrer uma amplificao de 106-107 electres. As principais vantagens do fotomultiplicador a sua maior sensibilidade e um limite de deteco mais baixo, contudo no pode ser exposto a radiao muito intensa (luz da sala) pois, devido elevada amplificao do sinal recebido, pode ser danificado.
IV.3. Titulaes espectrofotomtricas

Uma aplicao dos mtodos espectrofotomtricos em titulaes, estas permitem quantificar uma substncia com espectro de absoro pouco intenso. As principais caractersticas das titulaes espectrofotomtricas so: (i) minimizao da interferncia de outras substncias absorventes (desde que no participem na reaco); (ii) mtodo mais correcto para determinaes que exigem um erro pequeno (0.5 a 1 %), se o erro pode ser mais elevado (at 5 %) utiliza-se a espectrofotometria directa. Para a definio do ponto de equivalncia com menor erro devem ser utilizar reaces com elevada estabilidade (curva fica mais prxima das rectas de ajuste). Uma curva de titulao espectrofotomtrica uma representao grfica da absorvncia, corrigida para as alteraes de volume, em funo do volume de titulante. O comprimento de onda de trabalho
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deve ser escolhido de modo a obter uma grande variao no ponto de equivalncia. Quando as condies experimentais escolhidas so as apropriadas, a curva consistir em duas regies lineares com diferentes declives, uma referente ao incio da titulao e outra ao final desta depois do ponto de equivalncia. Durante uma titulao a absorvncia de uma soluo pode ser medida de dois modos: (1) Utilizando uma montagem (como se exemplifica na figura ao lado) que permita soluo manter-se homognea e circular para a clula de medida (2) Retirar pequenas pores de soluo para uma clula de medida em intervalos regular e medir a absorvncia. A forma das curvas de titulao depende da reaco envolvida, ou seja, do comportamento dos reagentes (titulante e titulado) e do produto de reaco ao comprimento de onda a que efectuada a anlise. Nas figuras seguintes so apresentados alguns exemplos de curvas de titulao.
Figura 63 O titulado e o produto da reaco no absorvem, ao comprimento de onda de medida, mas absorve o titulante
Figura 64 O titulado absorve, ao comprimento de onda de medida, mas no absorve o titulante nem o produto de reaco
Figura 65 O titulado e o titulante no absorvem, ao comprimento de onda de medida, mas absorve o produto de reaco
Figura 66 O titulado e o titulante absorvem, ao comprimento de onda de medida, mas no absorve o produto de reaco
Figura 67 O titulado no absorve ao comprimento de onda de medida mas absorvem o titulante e o produto de reaco
Determinao do ponto de equivalncia

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O ponto de equivalncia de uma titulao espectrofotomtrica determinado pelo ajuste de duas rectas a cada um dos lados da curva. Os pontos utilizados devem ser aqueles que melhor definem essa recta, mas no aqueles que se encontram perto do ponto de equivalncia, por serem os que apresentam mais erros na sua determinao. Para que seja possvel obter um ponto final da titulao satisfatrio, os sistemas (ou sistema) absorventes devem obedecer lei de Lambert-Beer, pois de outro modo a curva de titulao no ter regies com linearidade que por extrapolao permitem obter o ponto de equivalncia. A absorvncia deve ser corrigida para o volume de titulante adicionado, assim para a obteno da verdadeira curva de titulao, a absorvncia medida deve ser multiplicada por: (V+v)/V, em que V o volume inicial da soluo e v o volume de titulante adicionado. Esta correco no introduz erros significativos ao assumir que os volumes da soluo inicial e do titulante adicionado so aditivos. Na figura seguinte est exemplificado o modo como, a partir de uma curva de titulao, possvel obter o ponto de equivalncia.
No se obtm uma recta no ponto de equivalncia mas uma curvatura. O efeito devido ao restabelecimento do equilbrio, pois Figura 68 Aplicao do mtodo de ajuste linear para a este, antes do ponto de equivalncia, est determinao do ponto de equivalncia. deslocado no sentido inverso e depois do ponto de equivalncia no sentido directo.
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V. Espectroscopia de Emisso Molecular

Todos os compostos absorvem energia a qual causa excitao dos electres ligantes da molcula, como j foi referido para a espectroscopia de absoro electrnica, implicando aumento da energia vibracional, ou em condies apropriadas, transies entre estados electrnicos discretos. Os mtodos designados de luminescncia molecular mais correntes em anlise qumica so: a fluorescncia, a fosforescncia e a quimiluminescncia. Em cada um destes mtodos as molculas do analito so excitados produzindo espcies cujo espectro de emisso pode ser utilizado em anlise quantitativa e qualitativa. Os vrios tipos de luminescncia molecular podem ser agrupadas, ou classificadas, de dois modos: (a) pelo modo de excitao para o estado excitado com capacidade de emisso, e (b) tipo de estado excitado molecular. Na tabela seguinte encontra-se um resumo desta classificao:
Tabela 4 Classificao dos tipos de luminescncia
Modo de excitao Absoro (UV/vis) de radiao
Tipo de luminescncia Fotoluminescncia Quimiluminescncia, bioluminescncia Termoluminescncia Electroluminsncia Radioluminescncia Triboluminescncia Luminescncia acstica
Estado excitado
Tipo de luminescncia Fluorescncia, fluorescncia com atraso Fosforescncia
Primeiro estado excitado singleto Primeiro estado tripleto
Reaco qumica Recombinao de ies termoactivados Injeco de carga Partculas ou radiao de energia muito elevada Frico Ondas sonoras
* Assumindo o estado fundamental como sendo um estado singleto.
A fluorescncia, fluorescncia com atraso e fosforescncia resultam do mesmo processo, no qual as molculas so excitadas por absoro de um foto, sendo referidos estes fenmenos, de um modo geral, como fotoluminescncia. A diferena resulta da fluorescncia ser um processo radiativo permitido por spin, enquanto que a fosforescncia o resultado de uma transio radiativa proibida por spin. No caso da quimiluminescncia o espectro de emisso resulta de uma espcie excitada formada devido a uma reaco qumica. Um dos factores mais atractivos para a utilizao das tcnicas de fluorescncia e fosforescncia est relacionado com a sensibilidade inerente a estes mtodos de anlise, com limites de deteco de uma a trs ordens de grandeza inferiores aos obtidos por espectroscopia de absoro. Por outro lado, os mtodos fotoluminescntes podem ter gamas dinmicas, ou seja, gama de concentraes onde se observa linearidade, significativamente superiores aos das tcnicas de absoro molecular. Estas tcnicas de anlise implicam medidas da radiao emitida em espectrofotmetros designados por fluormetros ou fosformetros. A fluorescncia com atraso, por outro lado, tem poucas aplicaes analticas.
V.1.
Teoria da Fotoluminescncia
A fluorescncia ocorre quando a molcula absorve um foto de radiao ultravioleta/visvel, este processo de excitao seguido de uma emisso rpida de um foto, na mesma gama espectral, retornando a molcula ao estado fundamental. A fluorescncia pode ser observada, em sistemas qumicos simples e complexos, no estado gasoso, lquido ou slido. O tipo mais simples observado em sistemas atmicos gasosos diludos. Nos sistemas atmicos a emisso pode ocorrer com energia igual da radiao absorvida, ou seja a emisso e absoro ocorrem ao mesmo comprimento de onda. Este tipo de fluorescncia, na qual a radiao absorvida reemitida sem alterao da frequncia, designada por radiao ressonate ou fluorescncia de ressonncia.
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Algumas espcies moleculares tambm exibem fluorescncia de ressonncia. Contudo, a grande maioria, apresenta bandas de fluorescncia (ou fosforescncia) centradas a comprimentos de onda mais elevados que os da linha de ressonncia. Este desvio para comprimentos de onda mais elevados, ou energias mais baixas, denominado por desvio de Stokes (anti-stokes quando o desvio para comprimentos de onda menores). Este desvio resulta, segundo o princpio de Frank-Condon, da transio ocorrer na vertical, ou seja o tempo da transio inferior ao movimento relativo dos tomos. Assim, ao transitar para o estado electrnico excitado a molcula pode transitar tambm para nveis vibracionais excitados, decaindo rapidamente para o nvel vibracional de menor energia. A emisso ocorrer deste nvel vibracional, pelo que a energia deste processo inferior energia do foto absorvido. Na figura ao lado est representado o diagrama de energia potencial de dois estados de energia electrnicos e as transies entre esses nveis (absoro e emisso) de acordo com o princpio de Frank-Condon.
Figura 69 Transio entre dois estados electrnicos: processo de absoro (ou excitao), decaimento radiativo (fluorescncia), e decaimento no radiativo (a verde) de relaxao vibracional.
Estados excitados nos processos de fotoluminescncia O diagrama parcial de energia (diagrama de Jablonski), figura seguinte, mostra os processos de excitao (absoro de radiao) e alguns processos de desexcitao (perda de energia aps a absoro). Na Figura 70 esto representados os estados electrnicos (linhas horizontais mais grossas), em que S0 o estado fundamental, S1 e S2 os estados electrnicos excitados singleto e T1 o primeiro estado electrnico tripleto. Em geral, tal como representado, o primeiro estado tripleto excitado tem uma energia inferior do estado singleto correspondente. A cada nvel electrnico, existem vrios nveis vibracionais associados (linhas horizontais mais finas). O primeiro passo de uma transio electrnica o processo de absoro singleto-singleto do qual resulta a transio entre o estado fundamental singleto da molcula para um estado singleto excitado (S0Sn), que conduz ao espectro de absoro UV/vis. No exemplo apresentado, existem duas Figura 70 Diagrama de Jablonski: representao bandas de absoro da molcula, uma centrada a dos mecanismos de relaxao dos estados excitados 1(S0S1) e outra a 2(S0S2). das molculas. De um modo anlogo, a absoro tripleto-tripleto, no representada no diagrama parcial de energia da Figura 70, ocorre entre o estado tripleto de menor energia da molcula para um estado tripleto de maior energia (TTn), assim conduzindo para um espectro de absoro tripleto. De notar que a transio (S0T1), no se encontra indicado, este processo no ocorre com extenso significativa por se tratar de um processo que envolve dois nveis com diferente multiplicidade de spin, e portanto, com probabilidade muito pequena de ocorrer ( proibido por spin). O conhecimento do espectro de absoro ultravioleta/visvel dos compostos a analisar de crucial importncia quando a anlise efectuada por luminescncia. As velocidades dos processos de absoro e de emisso so bem distintos, pelo que o tempo que cada um dos processos necessita para ocorrer tambm muito diferente. Na absoro 10-15 a 10-14
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s, enquanto para a fluorescncia de molculas com coeficientes de absortividade elevados (10 5 a 103 M-1.cm-1) este tempo de 10-9 a 10-7 s, aumentando, em molcula com coeficientes de absortividade menores, para 10-5 a 10-6 s. No caso da emisso por fosforescncia o processo de emisso pode decorrer em gamas de tempo de 10-4 a 10 s, ou mais. A perda de energia de uma molcula excitada pode ser de dois tipos: processo radiativo, ou processo no radiativo. Um processo de desexcitao radiativo envolve sempre emisso de um quanta de luz, enquanto que um processo no radiativo o resultado da transformao da energia electrnica em energia vibracional ou rotacional. Em ambos os processos de perda de energia seguem o princpio (ou regra) de conservao de spin, ou seja, transies entre termos de igual multiplicidade so permitidos por spin, enquanto que termos de diferentes multiplicidade so proibidos por spin. Geralmente, a probabilidade de transies no radiativas so elevadas, e tanto mais elevadas quanto menor a diferena de energia entre os estados fundamentais vibracionais dos estados electrnicos que esto envolvidos na transio. Processos de desexcitao no radiativos Os processos de perda de energia no radiativos podem ser considerados intracromticos ou intercromticos, dependendo se a transio ocorre respectivamente no mesmo sistema da molcula ou em dois sistemas da molcula que no esto conjugados. Existem tambm os processos intermoleculares, neste caso a transio ocorre por interaco entre duas molculas da mesma espcie ou de espcies diferentes. Transies intercromticas ou intermoleculares so sempre processos de transferncia de energia electrnica. Estas transferncias podem ser permitidos por spin (entre estados de igual multiplicidade) ou proibidos por spin (quando a interaco ocorre entre estados de diferentes multiplicidades de spin). Transies no radiativas intracromticas entre estados de igual multiplicidade de spin so designadas por converso interna (IC), e podem ser: (SnS), (SS0), (TnT). Estas transies tambm podem ocorrer entre estados com diferentes multiplicidade de spin, so os cruzamentos intersistemas (ISC): (STn), (TS0) ou (TS). A propriedade mais importante das transies no radiativas, em determinaes analticas, a probabilidade destas transies ocorrem, pois esta determina o rendimento de fluorescncia (e dos restantes processos de desactivao radiativa), como descrito de seguida. Processos de desexcitao radiativos Os processos de desactivao (perda de energia) pelos quais a molcula retorna ao estado fundamental, podem ser uma combinao de vrios mecanismos. A Figura 71 mostra em detalhe trs dos possiveis mecanismos que podem ocorrer com emisso de um foto, dois dos quais se encontram tambm na Figura 70. Os passos do mecanismo de desactivao, com emisso, esto limitados a um nmero reduzido de sistemas moleculares.
Figura 71 Mecanismos de desexcitao radiativa.
Fluorescncia ocorre sempre do primeiro estado excitado singleto (ou seja, do estado excitado de menor energia), independentemente do estado excitado que foi produzido por absoro. O processo de desactivao do estado electrnico excitado pode ter como um dos passos do mecanismo a emisso a partir do estado tripleto, emisso por fosforecncia. Depois cruzamento intersistemas para o estado tripleto, a desactivao subsequente pode ser por converso interna, converso externa ou por fosforescncia. Uma transio (TS) muito menos provvel que uma transio (SS), assim o tempo de vida do estado excitado tripleto, como j foi referido, muito superior ao da transio inicial (absoro) ou de qualquer outro tipo de processo de desactivao
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(com excepo da fluorescncia com atraso). Assim, quando a emisso se deve a fosforescncia, o processo deve persistir mesmo depois de terminar a irradiao. Os processos no radiativos so muito mais eficientes para a desexcitao do que a fosforescncia, e este tipo de emisso em geral apenas observada a baixas temperaturas, solues com viscosidade elevada, ou em analitos adsorvidos em slidos. A perda de energia por fluorescncia com atraso, tal como j foi referido, tem pouco interesse analtico no entanto pode ser um importante mecanismo de perda de energia sempre que ocorre passagem de electro do estado singleto excitado para o estado tripleto. Existem vrios tipos de fluorescncia com atraso, mas os mais importantes so: Fluorescncia com atraso tipo E o primeiro estado excitado singleto fica ocupado por uma transio no radiativa termoactivada do estado tripleto excitado. Como a populao dos estados excitados singleto e tripleto esto em equilbrio trmico, o tempo de vida da fluorescncia com atraso igual ao tempo de vida da fosforescncia concomitante. Fluorescncia com atraso tipo P o primeiro estado excitado singleto fica ocupado por interaco de duas molculas no estado tripleto (aniquilao tripleto-tripleto), que do origem a uma molcula no estado excitado singleto. Este um processo bifotnico em que o tempo de vida da fluorescncia com atraso metade do tempo de vida da fosforescncia concomitante. Fluorescncia por recombinao o primeiro estado excitado singleto fica ocupado por recombinao de um radical inico com electres ou por recombinao de radicais inicos de sinal oposto. V.1.1. Variveis que afectam a fluorescncia Os parmetros que caracterizam uma transio radiativa luminescente so: o espectro, o rendimento quntico e o tempo de vida. A fluormetria (e a fosformetria) estuda a relao entre a intensidade dos fotes absorvidos e emitidos a um comprimento de onda especfico. Esta uma tcnica analtica quantitativa muito precisa, no muito dispendiosa e fcil de utilizar. A intensidade da radiao emitida (If) decresce exponencialmente com o tempo (t), de acordo com a seguinte lei de velocidade:
eq. 48
em que I0 a intensidade da radiao incidente e kf a constante de velocidade do processo de fluorescncia (ou fosforescncia). importante ter em conta que os processos de fluorescncia tm um decrscimo de intensidade muito mais rpido que a fosforescncia, uma vez que a constante de velocidade tem uma relao inversa com o tempo de vida do estado excitado (0).
eq. 49
sendo que 0 (fosforescncia) > 0 (fluorescncia). O rendimento quntico de fluorescncia (f) ou fosforescncia (p) uma medida quantidade de radiao que emitida em relao ao nmero de fotes que so absorvidos, ou seja, a fraco de tomos excitados que perdem o excesso de energia por fluorescncia ou fosforescncia,
eq. 50
ou
eq. 51
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Podendo ser determinado pelas constantes de velocidade dos processos pelos quais o estado excitado de mais baixa energia na molcula desactivado,
eq. 52
O rendimento quntico pode variar entre 0,0 e 1,0, contudo, o nmero de molculas com f ou p unitrio muito reduzido. Tipos de transies em fluorescncia A absoro de radiao a comprimentos de onda inferiores a 200 nm e a emisso correspondente, que seria devida a transies *, tem energia suficiente para provocar desactivao dos estado excitado por pr-dissociao ou dissociao. Muitas molculas orgnicas possuem ligaes que poderiam ser quebradas com energias de 140 kcal/mol (correspondente a uma radiao de 200 nm), pelo que a fluorescncia devida a transies * raramente observada. Assim, a emisso restrita a processos menos energticos, por exemplo * ou *n. De um modo emprico, observado que a fluorescncia mais comum em compostos cujos estados energticos mais baixos permitem uma transio *, do que em compostos em que a transio electrnica de energia mais baixa *n. A concluso a tirar a de que a eficincia quntica maior em transies *. Esta maior eficincia pode ser racionalizada de dois modos: O coeficiente de absortividade molar de uma transio *, , em geral, cem a mil vezes superior ao da transio n*. Considerando que este coeficiente uma medida da probabilidade destes processos ocorrerem em ambas as direces (excitao, desexcitao), e o tempo de vida associado a uma transio * mais pequeno. A termodinmica destes processos sugere que a constante de velocidade para o cruzamento intersistemas menor para os estados excitados derivados de uma transio *, da qual resulta maior diferena entre as energias dos estados singleto e tripleto. Como consequncia, da necessidade de maior energia para desemparelhar os electres do estado excitado *, a sobreposio dos estados vibracionais dos dois estados menor e portanto a probabilidade de ocorrer cruzamento intersistemas tambm menor. Destes dois efeitos resulta que a fluorescncia com maior frequncia associada a transies *, pois estas transies tm um tempo de vida mdio mais curtos (kf maior) e tambm porque o processo de desactivao que compete com a fluorescncia tem menor probabilidade de ocorrer. Efeito de estrutura molecular A fluorescncia mais intensa observada em molculas contendo grupos funcionais aromticos com o nveis de transio * com energia mais baixa. Muitos compostos aromticos no substitudos fluorescem em soluo, contudo a eficincia quntica aumenta com o nmero de aneis e o grau de condensao. A substituio no anel benznico pode provocar desvios no mximo de absoro e por consequncia no mximo de emisso, a alterao pode tambm provocar variaes na intensidade de fluorescncia. A influncia da substituio por halogenetos resulta numa diminuio de fluorescncia com o aumento do nmero atmico do substituinte, este efeito pode ser explicado por um aumento da probabilidade de ocorrer cruzamento intersistemas. No caso do iodobenzeno possvel que haja tambm efeito de pr-dissociao. A substituio por grupos carbonlo ou carboxlo num anel aromtico em geral provoca uma inibio de fluorescncia, pois esta transio (n*) , em geral, menos eficiente (como j foi referido). Na tabela seguinte so apresentados alguns exemplos deste efeito.
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Tabela 5 Efeito dos substituintes na fluorescncia do benzeno
Composto Benzeno (C6H6) Fluorbenzeno (C6H5F) Clorobenzeno (C6H5Cl) Bromobenzeno (C6H5Br) Iodobenzeno (C6H5I) Fenol (C6H5OH) cido benzoco (C6H5COOH) Anisol (C6H5OCH3)
em (nm) 270 310 270 320 275 345 290 380 ------280 365 310 390 285 345
If (relativa)
10 10 7 5 0 18 3 20
Os heterociclicos simples, como a pridina ou o furano, no apresentam fluorescncia, mas quando estas estruturas se encontram fundidas de um modo geral esta emisso detectada. Isto acontece porque a transio electrnica de energia mais baixa a n*, conduzindo a um estado que se pode converter rapidamente para o estado tripleto e, portanto, inibir a fluorescncia. A rigidez estrutural da molcula pode tambm influenciar a emisso por fluorescncia. Este processo favorecido em molculas que possuem estruturas rgidas. A explicao pode ser a de que em molculas menos rgidas os processos de converso interna podem ter uma constante de velocidade mais elevada (kci) e consequentemente um aumento dos processos de desactivao no radiativos. Na molcula menos rgida (ou em parte dela) podem ser induzidas vibraes de baixas frequncias e este movimento conduzir para alguma perda de excesso de energia da molcula excitada electronicamente. Efeito de temperatura, solvente e oxignio dissolvido Estes dois efeitos tm como explicao o mesmo tipo de influncia a nvel da coliso entre as molculas, cujo aumento vai provocar a probabilidade de desactivao por converso externa. Assim, um aumento de temperatura ou uma diminuio da viscosidade da soluo tem como efeito uma diminuio da intensidade de fluorescncia. A fluorescncia do analito tambm diminui quando o solvente tem tomos pesados ou a existem em soluo outras molculas com estes tomos na sua estrutura. a interaco spin-orbital que resulta num aumento do cruzamento intersistemas, ou seja, num aumento da constante de velocidade de formao do estado tripleto, com a correspondente diminuio de fluorescncia. Em alguns casos, a incorporao destes tomos pesados nos sistemas pode ser utilizada para aumentar a fosforescncia, quando esse processo utilizado na anlise. A presena de oxignio dissolvido em geral conduz a uma diminuio da intensidade de fluorescncia no analito em soluo. Este efeito pode resultar de dois efeitos, oxidao fotoqumica da espcie fluorescente, ou inibio por aumento do processo de cruzamento intersistemas devido s propriedades paramagnticas do oxignio. Outras molculas paramagnticas podem ter o mesmo efeito sobre as molculas fluorescentes. Efeito de pH A intensidade de fluorescncia dependente do pH sempre que na molcula existem substituintes com caractersticas acidicas ou bsicas. Os comprimentos de onda de absoro e de emisso das duas formas do analto, ionizada e no ionizada, so em geral diferentes. Sendo que os compostos fluorescntes so em geral aromticos com um sistema ressonate mais ou menos extenso, alteraes na emisso destes analitos pode advir da diferena no nmero de espcies ressonates nas suas formas cida e bsica.
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V.2.
Espectros de emisso e de excitao
Em estudos fluorimtricos possvel efectuar dois tipos de espectros, espectros de emisso e espectros de excitao. Os espectros de emisso correspondem a um varrimento dos comprimentos de onda de emisso (em) mantendo fixo a comprimento de onda de excitao (ex), ou seja para um comprimento de onda de excitao determinada a distribuio espectral da radiao emitida. Estes espectros devem ser efectuados para uma energia da radiao ao qual mxima a absoro, garantindo uma intensidade mxima tambm do espectro de emisso. O traado dos espectros de excitao feito mantendo o comprimento de onda de emisso fixo e variando o de excitao. A intensidade mxima obtida quando o comprimento de onda de emisso, a que se faz a anlise, aquele que corresponde intensidade mais elevada no espectro de emisso. Tendo em conta que o analito s pode emitir aps absorver radiao, estes espectros identificam os comprimentos de ondas aos quais ocorre absoro por parte do analito. Os espectros de excitao, so pois, o correspondente a um espectro de absoro, mas no qual se mede quantidade de radiao emitida e no a de radiao transmitida aps atravessar a amostra.
Figura 72 Espectros de emisso e de excitao
Figura 73 Espectro total de emisso e de excitao
Quando existe possibilidade de efectuar um varrimento simultneo do comprimento de onda de excitao e de emisso, podem ser efectuadas anlise de varrimento sincronizado. Este tipo de anlise, em que exc e exc diferem de alguns nm e esta diferena mantida constante ao longo de todo o espectro, particularmente importante no estudo de misturas. V.2.1. Bandas de difuso de Rayleigh e de Raman As bandas de difuso de Rayleigh e de Raman, so fceis de identificar e so devidas presena do solvente, em quantidade muito superior de soluto. Estas bandas adicionais num espectro de emisso so importantes quando a excitao e emisso ocorrem a comprimentos de onda muito prximos, ou seja, quando h uma sobreposio elevada entre os espectros de emisso e de excitao. Difuso de Rayleigh A radiao difundida (ou dispersa) pelo processo Rayleigh, resulta de uma re-emisso por molculas do solvente de uma fraco da radiao de excitao. Esta emisso aparece ao mesmo comprimento de onda que a radiao de excitao e a sua intensidade independente do ngulo a que se efectuam as medidas. A intensidade desta banda est relacionada com a polarizabilidade das molculas de solvente.
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Difuso de Raman O processo de difuso (ou disperso) Raman provocado pela transferncia de parte da energia da radiao para as molculas de solvente, sob a forma de energia vibracional. Resulta de uma coliso inelstica (ou seja, com variao de momento) entre o foto e a molcula. Havendo variao de momento significa que o foto difundido (disperso) tem uma frequncia (energia, logo, comprimento de onda) diferente da do foto incidente. Esta perda de momento, ou energia, uma consequncia directa da dualidade onda-corpsculo da radiao. Identificao das bandas no espectro As bandas de difuso Raman e Rayleigh so de identificao fcil num espectro de emisso. A banda de Rayleigh aparece centrada no comprimento de onda de excitao. A menores comprimentos de onda pode ser detectada a banda de Raman, esta tem uma intensidade de cerca de 100 a 1000 vezes menor que a banda de Rayleigh.
Figura 74 Espectro de emisso com as bandas de difuso de Raman e Rayleigh.
A diferena de energia entre o foto absorvido e difundido (emitido) constante para cada solvente. Assim, uma alterao no comprimento de onda de excitao provoca uma alterao da posio da banda de difuso Raman em relao de Rayleigh. Para os diferentes solventes a posio relativa das bandas no se altera, ou seja, constante e caracterstico. Na tabela seguinte apresentada a posio relativa das bandas de difuso Raman e Rayleigh.
Tabela 6 Posies das bandas de Rayleigh e Raman, para uma excitao com lmpada de mercrio
ex (nm) gua Etanol Ciclo-hexano Clorofrmio
254 278 274 274 275
365 416 405 408 410
436 511 500 499 502
Banda de Rayleigh Banda de Raman (nm)
V.2.2. Concentrao e intensidade de fluorescncia A intensidade de fluorescncia (If) pode ser relacionada com a radiao absorvida atravs da seguinte equao:
eq. 53
Em que k a constante de proporcionalidade, I0-I o nmero de fotes absorvidos (por unidade de tempo e por unidade de rea). A constante de proporcionalidade o rendimento quntico de fluorescncia, o qual pode ser expresso por:
eq. 54
A relao entre a intensidade de fluorescncia e a concentrao pode ser obtida atravs da lei de Lambert-Beer: do seguinte modo:
eq. 55
, ou seja
. Substituindo I na equao 54, esta pode ser escrita
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A exponencial pode ser desenvolvida em srie de Maclaurin:
Tendo em conta a srie anterior, claro que quando se verifica a condio: , os termos superiores ao de primeira ordem no so significativos. Pelo que se pode obter a intensidade de fluorescncia por uma das equaes seguintes:
ou eq. 56
Ficando o limite superior do erro: A representao grfica da intensidade de fluorescncia (y) em funo da concentrao (x), tem uma forma linear para concentraes que verificam a condio , enquanto para concentraes mais elevadas a curva tende para o valor mximo de , ou seja, quando (c ) ento (If kI0), tal como se pode observar na Figura 75.
Figura 75 Representao grfica da intensidade de fluorescncia em funo da concentrao do analto.
A curvatura negativa que apresenta a representao da intensidade de fluorescncia com a concentrao, que em alguns casos pode dar origem no a um patamar mas a um mximo, pode ser devida a: Auto-extino de fluorescncia, como resultado da coliso entre molculas que promove transferncia de energia, um processo no radiativo, cuja probabilidade de ocorrer aumenta com o aumento da concentrao. Auto-absoro, um efeito importante quando existe sobreposio dos espectros de absoro e emisso, a intensidade de fluorescncia diminui porque ao atravessar a soluo absorvida por outras molculas. Um aumento de concentrao vai aumentar a possibilidade de absoro da radiao emitida por outras molculas no estado fundamental. Os mtodos fluorimtricos tm uma sensibilidade maior, e os limites de deteco so cerca de 1000 vezes inferiores aos correspondentes mtodos de absoro (nota: a sensibilidade de um mtodo pode ser avaliado pelo declive da recta de calibrao, sendo os limites de deteco e de quantificao inversamente proporcionais ao declive).
V.3.
Quimiluminescncia
A quimiluminescncia por definio a emisso de radiao electromagntica sob a forma de luz, gerada por libertao de energia numa reaco qumica. Uma reaco quimiluninescente pode ser descrita de uma forma geral pelas seguintes equaes qumicas: A + B C* + D C* C + h (radiao) As duas espcies (molculas ou tomos) ao reagirem do origem a uma terceira espcie (molcula) no estado excitado (C*), podendo ainda resultar outras molculas (ou tomos) no estado fundamental. O excesso de energia que resulta da reaco , na sua maior parte, perdido de dois modos: sob a forma de calor (processo minoritrio), ou ainda por colises e por emisso de fotes (processos mais significativos). Sendo estes dois ltimos processos de dissipao da energia em
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excesso competitivos entre si, de um modo geral verifica-se que a quimiluninescncia, pode ser mais significativa quanto menor for o nmero de partculas do sistema, uma vez que a probabilidade de colises diminui. Em fase gasosa a quantidade de energia libertada nestas reaces, por emisso de fotes, aumenta quando se diminui a presso, pois, a desactivao por colises diminui. As reaces com emisso de luz podem se agrupadas em trs tipos, tendo em conta o tipo de molcula ou o modo como esta induzida: Reaces qumicas utilizando compostos sintticos e utilizando, em geral, espcies muito oxidantes, como sejam perxidos, so usualmente designadas por reaces quimiluminescentes; Reaces com emisso de radiao envolvendo organismos vivos, tal como acontece com os pirilampos e alforrecas, so conhecidas por reaces bioluminescentes; Quando a reaco com emisso de radiao ocorre por efeito de um estmulo elctrico (ou seja induzidas por passagem de corrente elctrica), designam-se reaces electroquimiluminescentes.
Reaces quimiluminescentes e bioluminescentes envolvem em geral a quebra ou fragmentao de ligaes O-O e molculas de perxidos orgnicos. Os perxidos, em especial os cclicos, so os mais relevantes nas reaces com emisso de radiao, uma vez que a ligao perxido relativamente fraca e por isso fcil de quebrar. Por outro lado, os produtos finais resultam de uma reorganizao molecular que liberta uma quantidade muito elevada de energia. A maior sensibilidade obtida quando uma reaco com emisso de radiao eficiente, dando origem ao maior nmero de fotes possvel. Um composto ou grupo quimiluminescente apenas d origem, no mximo, a um foto de radiao. A reaco mais eficiente ser aquela para a qual o rendimento quntico (CL) unitrio, ou seja, quando existe uma relao de um entre o nmero de fotes emitidos e o nmero de molculas que reagiram, de acordo com a equao:
eq. 57
onde CE a probabilidade de com a reaco obter um estado electrnico excitado, com um valor compreendido entre 0 e 1, a que a 0 corresponde a uma reaco escura (sem possibilidade de emisso), e 1 a uma reaco na qual todos os molculas resultantes (produtos) se encontram no estado excitado. As reaces quimiluminescentes mais importantes tm valores de CE superiores ou iguais a 10-3. O parmetro F (rendimento quntico de fluorescncia) a probabilidade do estado excitado perder o seu excesso de energia por um processo de fluorescncia, podendo tambm variar entre 0 e 1, e na maioria dos casos tem um valor de 0.1. O rendimento quntico de reaco (R) a fraco de molculas iniciais de reagente que seguem a reaco luminescente em relao quelas que seguem reaces paralelas, sendo o seu valor em geral 1. Um sinal tipico, derivado de uma reaco fotoluminescente, apresentado na Figura 76. Aps a adio dos reagentes o mximo da intensidade de emisso atingido rapidamente, ao que se segue uma diminuio mais ou menos exponencial (dependendo da reaco) do sinal. Na anlise quantitativa, o sinal obtido integrado por um determinado perodo de tempo e depois comparado com padres tratados do mesmo modo. Ou pode ser utilizada a altura do pico na intensidade mxima de emisso. A repreentao grfica da rea do pico (ou da altura) em funo da concentrao de um dos reagentes resulta numa relao linear numa determinada gama de concentraes.
Figura 76 Intensidade de emisso por quimiluminescencia em funa do tempo aps a mistura dos reagentes
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V.3.1. Produtos quimiluminescentes Uma reaco importante envolve o monxido de azoto (NO) e o ozono (O3), que em qumica da atmosfera pode servir para determinar, tanto a quantidade de ozono (utilizando um excesso de NO) como a quantidade de NO (utilizando, neste caso, um excesso de O3). As equaes qumicas so as seguintes: NO + O3 NO2* +O2 NO2* NO2 + h (radiao) Outro exemplo : CH3-S-CH3 + F2 produtos + h (radiao) Na maioria das reaces quimiluminescentes os seus produtos esto bem caracterizados, no entanto nesta ltima a natureza e complexidade da reaco, dificulta a determinao do tipo de produtos formados. Assim, apenas o HF electrnica e vibracionalmente excitado foi claramente identificado como um produto da reaco, no entanto outros compostos (no identificados) contribuem tambm para a radiao total emitida pelo sistema. Os produtos quimiluminescentes, podem emitir radiao em qualquer gama espectral (desde o ultravioleta at ao infravermelho), no entanto os mais comuns apresenta-se o seu mximo de emisso na regio do visvel ou prximo. Na tabela seguinte so apresentados alguns exemplos de compostos quimiluminescentes.
Tabela 7 Emissores quimilumiescentes mais utilizados em anlises qumicas
Composto quimiluminescente 3-Aminophthalate (de luminol) CH3Se CN HCF HCHO HF HSO IF N-methylacridone (de lucigene) Na NO2 OH Oxyluciferin (de luciferin) Ru(bpy)3 S2 SF2 SO2
max emisso 425 nm 750-825 nm 383-388 nm 475-750 nm 350-500 nm 670-700 nm 360-380 nm 450-800 nm 420-500 nm 589 nm 1200 nm 306 nm 562 nm 600 nm 275-425 nm 550-875 nm 260-480 nm
Referncia
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V.4.
Instrumentao
Os componentes dos fluormetros e espectrofluormetros ou fosformetros e espectrofosformetros, utilizados para efectuar as medidas de emisso por luminescncia, so idnticos aos dos espectrofotmetros de absoro UV/vis. Contudo devido a algumas especificidades existem componentes mais adequados e a geometria (disposio relativa dos componentes) tambm diferente. Os espectrmetros utilizados so na sua grande maioria de feixe simples, e na sua constituio so usados dois monocromadores. Devido semelhana com os espectrofotmetros de absoro UV/vis alguns dos componentes j foram descritos anteriormente, pelo que, de seguida apenas vo ser descritas as caractersticas que so especficas destes equipamentos.
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V.4.1. Fluormetros e fosformetros A emisso por fluorescncia (e fosforescncia) um processo que, de um modo geral, se observa com igual intensidade em todas as direces, pelo que as medidas so usualmente efectuadas a 90 em relao fonte de radiao para minimizar os efeitos da radiao no absorvida (directa). Todos os instrumentos de medidas de fluorescncia e fosforescncia tm trs elementos bsicos: fonte de radiao, porta-amostras e detector. Para que estes equipamentos tenham utilidade analtica tambm necessrio que o sistema esteja equipado com monocromadores ajustveis que possam seleccionar com preciso os comprimentos de onda de excitao e de emisso. Os fluormetros e fosformetros devem permitir medidas da intensidade da radiao emitida pelas amostras quer na forma de um varrimento contnuo da emisso, numa gama de comprimentos de onda seleccionada e para um comprimento de onda de excitao fixo, quer por anlise a pares de comprimentos de onda fixos de emisso e excitao. Fluormetros Na Figura 77 apresentado um esquema de um fluormetro, com algumas das caractersticas mais importantes inerentes a este equipamento. Notar o ngulo de 90 entre a fonte de radiao e a radiao que chega ao detector. De um modo geral, em espectroscopia de luminescncia, so necessrias fontes de radiao com fluxo elevado, pois como j foi referido a intensidade de fluorescncia depende directamente da intensidade da radiao incidente (I0). Estas fontes, utilizadas como base de excitao do analito, so lmpadas de descarga (tambm designadas por lmpadas de arco), as mais utilizadas so as de vapor de mercrio de baixa presso, e as de xenon. As lmpadas de mercrio, com janelas de slica fundida, produzem linhas de intensidade elevada a 254, 302, 313, 546, 578, 691 e 773 nm. Nos espectrofotmetros em que necessrio uma fonte de radiao contnua as lmpadas de Xe so a mais utilizadas. O espectro destas lmpadas um contnuo de 300 a 1300 nm.
Figura 77 Representao esquemtica dos principais componentes de um fluormetro.
A seleco de comprimentos de onda, tanto para a excitao como para a emisso, pode ser efectuado por filtros, quando a fonte no continua as linhas individuais podem ser isoladas com os filtros de absoro ou de interferncia adequados. No entanto, a maioria dos espectrofluormetros vm equipados com monocromadores com rede de difraco. O sinal tipo de fotoluminescncia tem uma baixa intensidade, pelo que para detectar o sinal gerado necessrio utilizar detectores muito sensveis, e amplificadores de sinal adequados. Os detectores so, em geral, tubos fotomultiplicadores. Outros tipos de detector, como os contadores qunticos que produzem um sinal elctrico proporcional ao fluxo de fotes absorvidos por uma soluo fluorescente, ou actinmetros qumicos, detectores nos quais a quantidade de um produto qumico formado proporcional ao nmero de fotes absorvidos. Matrizes de fotododos e detectores de transferncia de carga tambm podem ser utilizados em alguns tipos de espectrofluormetros. Os porta-amostras, ou clulas de fluorescncia, podem ser cilndricos ou rectangulares, em vidro ou quartzo, podem ser utilizados nas medidas de fluorescncia. Cuidados especiais devem ser tidos na construo das clulas, e no porta-amostras do equipamento, pois a luz difusa que chega ao detector deve ser reduzida ao mnimo. Devido dependncia da fluorescncia com a temperatura, os porta-amostras do equipamento vm com um sistema de termoestatizao, de modo a garantir que no existe variao da temperatura da amostra durante a anlise.
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Fosformetros Os componentes dos fosformetros so os mesmos dos fluormetros, com iguais caractersticas e geometria, pois tambm neste caso a medida da radiao emitida deve ser efectuada a ~90 relativamente radiao incidente na amostra. O componente essencial, que distingue o fosformetro do fluormetro, um sistema que permita alternadamente, irradiar e obscurecer a amostra. Este sistema pode ser apenas um disco, com zona transparente e zona no transparente radiao, cuja rotao seja promovida por um sistema mecnico que garanta a sua alternncia em perodos de tempo bem definidos. A intensidade da radiao emitida ser medida enquanto a amostra no est a ser irradiada, tal como esquematizado na Figura 78. Este desfasamento entre o tempo de irradiao e de medida apenas necessrio quando se pretende distinguir a fosforescncia da fluorescncia. Muitos fluormetros comerciais j tm este acessrio para medidas de fosforescncia.
Figura 78 Esquema de uma anlise por fosformetria
A fosforescncia, em geral, um processo que pode produzir maior intensidade de radiao a baixa temperatura, assim, medidas efectuadas temperatura do azoto lquido podem evitar a desactivao por outros processos porque o processo de desexcitao por colises entre as molculas inibido. Um reservatrio com janelas de quartzo (Dewar) onde se pode colocar uma clula porta-amostras, pode ser utilizado para medidas de fosforescncia e pode ser um dos Figura 79 Esquema do sistema de discos de um acessrios fundamentais dos fosformetros. fosformetro. V.4.2. Luminmetros A quimiluminescncia utiliza as medidas de quantidade de radiao emitida pelas espcies excitadas, sendo estas espcies em geral molculas, para determinar concentraes do analito. Esta tcnica analtica tem uma utilizao ainda reduzida e bastante recente. Os espectros resultantes da emisso molecular so em geral bandas largas, podendo ser bastante complexas (compostas) dependendo da espcie que se analisa. As medidas podem ser efectuadas tanto em sistemas no estado gasoso como a solues. Tal como a espectroscopia de fotoluminescncia, as medidas de quimiluninescncia, resultam da deteco de radiao electromagntica produzida num sistema que deve ter um rudo de fundo reduzido. Uma vez que a energia necessria para excitar o analito para estados electrnico, vibracionais ou rotacionais de energia mais elevada (e a partir dos quais podem decair radiativamente), no uma fonte de radiao externa, no existem problemas de disperso (ou difuso) da radiao emitida pela fonte. A maior limitao a deteco, pois so necessrios detectores com limites de deteco extremamente baixos de modo a ser possvel detectar as em geral baixas emisses de radiao do analito. O maior atractivo da quimiluminescncia como ferramenta analtica a simplicidade da deteco. Esta devido ao facto de que o processo em si , por definio, a sua nica fonte de radiao pelo que os mtodos e os instrumentos apenas necessitam de ter um modo de detectar a luz e de registar os resultados. Os equipamentos utilizados para esta tcnica analtica so muito simples e os seus componentes base so: reactor e um tubo fotomultiplicador. Em geral, no necessrio utilizar qualquer selector de comprimento de onda porque no h necessidade de uma fonte de radiao externa.
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V.5.
Mtodos de derivatizao
60
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VI. Espectroscopia de Infravermelho

As aplicaes qualitativas da espectroscopia de infravermelho tm vindo a alargar o seu mbito desde a dcada de cinquenta, passando da simples identificao de molculas e/ou grupos caracterizao estrutural de filmes finos e molculas adsorvidas nos mais diversos substratos. As aplicaes quantitativas permitem actualmente distinguir equilbrios conformacionais e realizar estudos dinmicos em tempo real.
VI.1. Bases tericas

De acordo com a aproximao de Born-Oppenheimer, tal como referido para a espectroscopia electrnica, os ncleos dos tomos vibram to lentamente em comparao com os electres que a funo de onda total de um estado molecular pode ser factorizada nas suas componentes electrnica Da resoluo da equao de Schrdinger tendo em conta a equao, decorre que os valores prprios da energia total (E) so aditivos (E=Ee+En)*. Por estas razes, as transies vibracionais podem ser tratadas separadamente das electrnicas2,3. Como resultado, no caso de uma molcula diatmica, podem desenhar-se curvas de energia potencial em funo da distncia interatmica para determinado estado electrnico (ou superfcies de energia potencial no caso de uma molcula poliatmica). Se a frequncia (energia) da radiao coincide exactamente a frequncia natural de vibrao de uma molcula, ocorre transferncia de energia que resulta numa alterao da amplitude da vibrao molecular, ou seja, numa alterao dos comprimentos ou ngulos de ligao (ou ligaes). Uma aproximao, para o caso de uma molcula diatmica, considerar que a ligao entre os tomos se comporta como uma mola. VI.1.1. Molculas Diatmicas: modelo do oscilador harmnico Em primeira aproximao, as vibraes moleculares podem ser estudadas aplicando o modelo da mecnica clssica, uma vez que as dimenses dos tomos so muito superiores s dos electres. Uma molcula a vibrar pode ser considerada como um conjunto de osciladores que representam todos os graus de liberdade vibracional e que interactuam mutuamente 4. O modelo mais simples para descrever a vibrao de uma molcula diatmica (variao da distncia internuclear) o modelo do oscilador harmnico a uma dimenso, segundo o qual a curva de energia potencial da molcula, V(x), descrita por3,4:
eq. 58
em que k a constante de fora do oscilador e x=r-re, sendo r a distncia internuclear em deformao e re a distncia internuclear de equilbrio. Segundo este modelo, a frequncia de vibrao () pode ser calculada conhecendo a constante de fora do oscilador e a sua massa reduzida ()) pela relao:
eq. 59 Figura 80 Curva de potencial de uma molcula diatmica, pelo modelo do oscilador harmnico
sendo a massa reduzida dada pela expresso:
Da factorizao da funo de onda nuclear em v e r, resulta que En=Ev+Er.

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Segundo o modelo quntico do oscilador harmnico a uma dimenso, o operador hamiltoniano correspondente dado por:
eq. 60
pelo que a equao de Schrdinger resulta:

eq. 61
onde , sendo h a constante de Planck. A sua resoluo conduz aos seguintes valores prprios de energia vibracional (Ev):
eq. 62
em que v o nmero quntico vibracional (que pode ter valores inteiros 0, 1, 2, ...). VI.1.2. Molculas Diatmicas: modelo do oscilador anarmnico O modelo do oscilador harmnico , contudo, demasiado simplificado e no prev a dissociao da molcula, apenas coincidindo com o oscilador real para pequenas deformaes. Para uma descrio mais realista do movimento relativo dos tomos de uma molcula diatmica conveniente utilizar a funo de energia potencial do oscilador de Morse5:
eq. 63
onde
eq. 64
sendo De a energia de dissociao da molcula. Esta aproximao permite prever, para as energias dos nveis vibracionais, a expresso:
eq. 65
em que a constante de anarmonicidade. Na so comparadas as curvas de energia potencial previstas pelos dois modelos para uma molcula diatmica AB: modelo do oscilador harmnico a uma dimenso (linha a tracejado) e do oscilador anarmnico (linha a cheio)
Figura 81 Curvas de energia potencial de uma molcula _____ diatmica: modelo do oscilador harmnico, e modelo do oscilador anarmnico.
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VI.1.3. Molculas poliatmicas Uma molcula com N ncleos possui 3N graus de liberdade, que incluem translaes, rotaes e vibraes internas. Para um tratamento quntico das vibraes moleculares, considera-se um conjunto de coordenadas Qk (k=1, 2,...3N), designadas por coordenadas normais (coordenadas cartesianas pesadas). Existe uma destas coordenadas associada a cada modo normal de movimento e vice-versa6,7. Trs dos modos normais da molcula correspondem a translaes e trs (ou dois, se a molcula for linear) a rotaes da molcula como um todo. Assim, as vibraes genunas da molcula so 3N-6 (ou 3N-5 nas molculas lineares). Estas podem tambm ser descritas por um outro conjunto de 3N-6 (ou 3N-5) coordenadas relacionveis com a estrutura interna da molcula, nomeadamente ngulos e comprimentos das ligaes: so as coordenadas internas da molcula6,4. Na Figura 82 representam-se as coordenadas internas de uma molcula triatmica no linear8.
Figura 82 Coordenadas internas de uma molcula triatmica: r1, r2, .
Num modo normal de vibrao todos os ncleos realizam movimentos harmnicos com a mesma frequncia, em fase, mas geralmente com diferentes amplitudes, sendo a sua frequncia designada por normal ou fundamental3,6. Classicamente, a determinao dos modos e frequncias de vibrao de uma molcula poliatmica pode ser feita aplicando as equaes de Newton ao movimento dos tomos (uma por cada coordenada atmica):
eq. 66
em que T a energia cintica, V a energia potencial, qi uma coordenada de deslocamento dos ncleos e a sua derivada em ordem ao tempo. A resoluo deste sistema de equaes pode ser feita por um mtodo matricial (mtodo FG de Wilson)6, assim designado por envolver as matrizes [F] (que representa o campo de foras da molcula e constituda pelas constantes de fora dos osciladores e constantes das interaces) e [G] (relacionada com a geometria da molcula e as massas atmicas). conveniente, para diagonalizar as matrizes [F] e [G], escolher coordenadas apropriadas, que so as coordenadas normais de vibrao4,6. Utilizando este mtodo possvel obter as frequncias de vibrao e a composio de cada modo normal em termos das coordenadas internas da molcula. VI.1.4. Regras de seleco Para haver absoro induzida de um quantum de radiao de frequncia , necessrio que a diferena entre as energias dos estados inicial (Ei) e final (Ef) da molcula esteja relacionada com a frequncia da radiao incidente: E=Ef-Ei=h. Contudo, nem todas as transies energeticamente possveis so permitidas (observveis num espectro), sendo a probabilidade de uma transio determinada pelas regras de seleco. Se as transies ocorrem por interaco do sistema molecular com o vector campo elctrico da radiao (como o caso em espectroscopia de infravermelho), estas so regras de seleco de dipolo elctrico9,10. Os modos normais de vibrao observados so aqueles que provocam alterao do momento dipolar, da molcula, durante a vibrao. Esta a razo porque molculas diatmicas homonucleares no tm espectro de infravermelho. O momento dipolar de transio (Rv) para uma transio entre dois estados com as funes de onda i (inicial) e f (final) est relacionado com o operador momento dipolar 3,6,8:
eq. 67
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onde a conjugada da funo . Por outro lado, o momento dipolar pode ser expresso, para cada uma das coordenadas espaciais x, y e z, como uma expanso em srie de Taylor3,8: Para x tem-se: onde o ndice e se refere posio de
equilbrio. Substituindo na equao do momento dipolar de transio, tem-se:

eq. 68
Da ortagonalidade das funes de onda i e f decorre que, para if, equao 69 se pode escrever simplesmente:
, pelo que a
eq. 69
O primeiro termo desta srie diferente de zero para v=1 (em absoro, +1). Esta condio constitui a regra de seleco geral para as transies vibracionais. Tomando em conta a anarmonicidade elctrica (ou seja, considerando os termos de ordem superior no desenvolvimento em srie do momento dipolar), a condio de no anulamento do momento dipolar de transio e, portanto, a regra de seleco geral, vem modificada para v=1, 2, 3,...; so as transies harmnicas ou sobretons. Em absoro, temperatura ambiente, as transies fundamentais correspondem a (v=0 v=1) e as harmnicas a (v=0 v=n, sendo n=2, 3, 4...)4,8. Uma vez que a anarmonicidade elctrica pouco significativa, as intensidades das bandas harmnicas so geralmente pequenas.
Rv2, ou seja: Rv2=(Rv,x)2+(Rv,y)2+(Rv,z)2. Assim, para que uma transio seja permitida (tenha
probabilidade no nula), necessrio que pelo menos uma das componentes do momento de transio (Rv,x, Rv,y ou Rv,z) seja diferente de zero. Por outras palavras, um modo vibracional activo em infravermelho se originar um dipolo dinmico no nulo3,4,6. A determinao de quais os modos vibracionais que correspondem a esta condio implica o conhecimento da simetria da molcula. VI.1.5. A simetria molecular e o momento dipolar de transio
A probabilidade de uma transio definida como o quadrado do momento dipolar de transio,
Conforme os elementos de simetria que possui, uma molcula pode ser classificada num dos trinta e dois grupos pontuais de simetria11,*. A cada grupo pontual de simetria faz-se corresponder uma tabela de caracteres, de que se apresenta um exemplo, para o grupo pontual de simetria C2v. As molculas pertencentes a este grupo pontual possuem os seguintes elementos de simetria: identidade (E), eixo de rotao binrio (C2) e dois planos verticais contendo o eixo de rotao (v e v).
Tabela 8 Tabela de caracteres do grupo pontual de simetria C2v.
Um grupo pontual de simetria constitudo pelo conjunto de todas as operaes de simetria da molcula, todas elas admitindo um ponto comum, fixo. Teoricamente o nmero de grupos pontuais de simetria seria infinito, mas as molculas no possuem elementos de simetria de ordem muito elevada, pelo que usual classific-las em trinta e dois grupos.
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A tabela de caracteres contm a notao do grupo (1), as notaes das representaes irredutveis (2), as operaes de simetria separadas por classes (3) e, como o nome indica, os caracteres das representaes irredutveis (4). Ainda parte integrante das tabelas de caracteres so as indicaes dos vectores ou funes de base das representaes irredutveis: translaes segundo as trs direces ortogonais (ou componentes do momento dipolar), rotaes em torno de cada um dos eixos (5) e funes quadrticas, como o tensor polarizabilidade (6). Para que se verifique a condio de no anulamento de uma componente do momento dipolar de transio necessrio que a funo integranda seja totalmente simtrica, ou seja, que se verifique a condio: (i)()(f)=A, onde significa representao irredutvel, e A a representao irredutvel totalmente simtrica do grupo pontual de simetria da molcula. Como o momento dipolar vectorial, tem uma determinada direco, base da mesma espcie de simetria que uma translao da molcula na mesma direco. Por outro lado, a funo de onda do estado fundamental normalmente base da representao totalmente simtrica do grupo. Assim, ser necessrio que o produto directo das representaes irredutveis de f e pertena tambm representao totalmente simtrica, ou seja, que pertenam ambos mesma representao irredutvel. Portanto, (f)=(Tx) e/ou (f)=(Ty) e/ou (f)=(Tz)3. A utilizao das regras de seleco derivadas da discusso de simetria pode ser uma ferramenta importante na interpretao dos espectros de infravermelho, embora nem sempre sejam completamente observadas: algumas transies vibracionais proibidas por simetria so observadas e outras permitidas so demasiado fracas para serem detectadas experimentalmente. O aparecimento no espectro de infravermelho de bandas teoricamente no activas, ou o aumento de intensidade relativa de bandas, pode ser consequncia de acoplamentos entre dois modos por ressonncia de Fermi, se ambos possurem a mesma simetria e forem prximos em energia12. A ressonncia de Fermi muitas vezes devida a acoplamentos entre harmnicos de segunda ordem e bandas fundamentais8, existindo conservao da intensidade total dos dois modos (a banda mais intensa perde intensidade para a menos intensa). A mistura entre dois estados com funes de onda e pode ser esquematizada como na figura seguinte.
Figura 83 Mistura de estados e desdobramento de nveis em ressonncia de Fermi.
VI.2. Anlise Qualitativa

Em anlise qualitativa, um espectro de infravermelho, que corresponde impresso digital de cada molcula, pode ser utilizado de dois modos: (i) pode ser interpretado de modo a indicar pistas sobre a estrutura de um composto desconhecido, embora esta aproximao raramente seja conclusiva e necessita de ser complementada por outras tcnicas; (ii) por comparao com padres a identificao de um composto desconhecido pode efectuada, no entanto para uma correcta identificao, a forma do espectro (posio das bandas e intensidade relativa destas) padro e da amostra devem ser iguais. VI.2.1. Correlao entre os espectros de infravermelho e a estrutura molecular A atribuio das bandas de um espectro de infravermelho pode ser feita com base na simetria molecular e em clculos de frequncias dos modos normais de vibrao, dependendo das capacidades de clculo existentes. A primeira informao retirada de um espectro est pois relacionada com a estrutura da molcula, com a sua conformao e com a natureza das ligaes entre os seus tomos.
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Na maioria dos casos, esta atribuio complicada pelas dimenses das molculas e combinaes de movimentos dos tomos (acoplamento de modos vibraccionais). Nestes casos, recorre-se ao facto de alguns tipos de ligaes e grupos terem frequncias de vibrao muito caractersticas e quase independentes da molcula em que se encontram (frequncias de grupo): a energia potencial desse modo concentrada numa determinada ligao ou conjunto de tomos. Estas vibraes so usualmente denominadas como modos locais de vibrao6. Vibraes de esqueleto: deslocamentos semelhantes de todos (ou quase todos) os tomos da molcula. Vibraes caractersticas de grupo (mais intensas): vibraes de um pequeno nmero de tomos permanecendo o resto da molcula mais ou menos estacionria. Nas figuras seguintes esto esquematizados os movimentos relativos dos tomos, para algumas vibraes, do grupo de metileno. Elongaes
Movimentos dos tomos ao longos dos eixos das ligaes que correspondem a alterao dos comprimentos de ligao (sem alerao dos ngulos respectivos).
simtrica
anti-simtrica
Deformaes
Movimento relativo dos tomos que provocam alterao dos ngulos da ligao, ou movimento de um grupo de tomos relativamente ao resto da molcula.
no plano da molcula
fora do plano da molcula
angular
oscilao transversal
balano
toro
A existncia de modos locais pode ser relacionada com as constantes de fora dos diferentes osciladores. Se as constantes de fora de um determinado oscilador (vibrao de um conjunto de tomos) forem muito superiores s restantes, ento a vibrao pode ser independente. Este tipo de comportamento observado quando um dos tomos , por exemplo, o hidrognio (em ligaes C-H ou O-H), devido sua massa ser bastante pequena3. Na seguinte so indicados alguns exemplos de gamas de nmero de ondas de grupos funcionais mais comuns4,5,13,14.
Tabela 9 Gamas de frequncia tpicas de alguns grupos funcionais
Grupo -OH C-H =CH2 -CH3 -CH2 -CH3 -CH2 -CCC=C C-C C=O
Elongao -1 / cm 3330-3600 3300-3330 3020-3100 2960-3020 (as) 2910-2930 (as) 2880-2870 (s) 2850-2860 (s) 2230-2300 1640-1660 950-1150 1600-1800
Grupo
Deformao -1 / cm ~700 ~1100 1440-1470 (as) 1440-1470 1370-1390 (s) 1250-1330 1100-1300 1000-1030
C-H =CH2 -CH3 -CH2 -CH3 -CH -C-O CCH*
(as) modo anti-simtrico e (s) modo simtrico * de grupos em anis aromticos
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Para vibraes que envolvem tomos de hidrognio, carbono, azoto e oxignio, que so aquelas que quimicamente tm maior importncia, a maioria das excitaes vibracionais ocorre na regio do infravermelho mdio (200-4000 cm-1)9. Os principais factores que influenciam a frequncia de uma determinada vibrao so a constante de fora do oscilador e os efeitos isotpicos. O primeiro, relacionado com as caractersticas electrnicas do oscilador, pode ser uma medida da resistncia que este oferece s alteraes (de comprimento ou de ngulos das ligaes) provocadas pelo movimento dos tomos durante a vibrao. Diferentes tipos de ligaes tm diferentes graus de resistncia aos movimentos de elongao e deformao, sendo quase independentes da molcula na sua forma global. Um dos casos mais simples o aumento da frequncia do modo de elongao carbono-carbono ao passar de uma ligao simples ( 1000 cm-1, k=4,6-5,6 N.cm-1), para uma ligao dupla ( 1600 cm-1, k=9,5-10,8 N.cm-1) ou tripla ( 2200 cm-1, k=15,6-17,0 N.cm-1). Verifica-se assim, um aumento da frequncia deste modo de vibrao com o aumento da constante de fora mdia da ligao6,13.
O efeito de istopo provoca desvios nas frequncias de vibrao associadas com os grupos em que a substituio efectuada. Por exemplo, a substituio de hidrognio por deutrio, altera em cerca de 800 cm-1 (desvio para menor nmero de ondas) a frequncia do modo de elongao C-D, quando comparado com o correspondente C-H. Este efeito pode ser directamente relacionado com o aumento da massa reduzida do oscilador, no havendo modificao da distribuio da densidade electrnica na molcula. A extenso do desvio pode ser estimada qualitativamente pela raiz quadrada da razo de massa dos dois istopos5. Deste modo a substituio de hidrognio por deutrio corresponde a uma relao de , ou seja, .
VI.3. Anlise Quantitativa

A anlise por espectroscopia de infravermelho, geralmente aceite como sendo uma tcnica de anlise qualitativa ou semi-quantitativa para a maior parte das amostras, principalmente quando se utilizam espectrofotmetros dispersivos. Contudo, o desenvolvimento dos espectrofotmetros com transformada de Fourier (FTIR) e a evoluo em capacidade dos sistemas informticos conduziram a uma aumento das potencialidades de anlise quantitativa por esta tcnica de anlise. A base da anlise quantitativa, como referido na seco III.4 para qualquer outra tcnica de espectroscopia de absoro, a lei de Lambert-Beer, onde se expressa a relao directa entre a absorvncia (A) medida e a concentrao (c) do analito. Desvios lei de Lambert-Beer ocorrem com maior frequncia na espectroscopia de infravermelho do que na espectroscopia de absoro UV/Vis, sendo estes tanto de ndole qumica como instrumental. Os principais desvios instrumentais esto relacionados com uma resoluo insuficiente ou com radiao perdida. A resoluo est directamente relacionada com as larguras de fendas dos espectrofotmetros dispersivos, e com a diferena de percurso entre dois feixes de IV nos FTIR. No caso da radiao dispersa (perdida), nos FTIR quase desprezvel, tendo mais significado nos equipamentos dispersivos.
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Os desvios qumicos, incluem no s reaces qumicas que podem ocorrer entre o analito e outros componentes da amostra, assim como, interaces moleculares (intermoleculares, se ocorrerem entre molculas do analito) das quais so exemplo a ligaes por pontes de hidrognio. Resultando num desvio linearidade entre a absorvncia medida e a concentrao do analito. A linearidade da lei de Lambert-Beer observada para valores de absorvncia inferiores a 0,7 unidades, apesar de em casos excepcionais poder ser observada at 2 unidades de absorvncia. Os parmetros de quantificao mais utilizados so a rea ou a intensidade (altura) da banda de absoro. Na determinao das reas das bandas cuidados especiais devem ser tidos na definio dos limites de integrao.
VI.4. Instrumentao
A obteno de um bom espectro depende de muitos factores, entre os quais o espectrofotmetro, mas principalmente depende da amostra e do modo como a anlise efectuada. Para cada tipo de amostra (gasosas, lquidas ou slidas), foram desenvolvidos mtodos e acessrios especficos para efectuar a anlise por espectroscopia de infravermelho. Os dois tipos de espectrofotmetro que esto comercialmente disponveis so: dispersivos e os com transformada de Fourier. VI.4.1. Espectrofotmetros dispersivos Os espectrofotmetros dispersivos convencionais (ou de varrimento) so de feixe duplo, tendo como elemento dispersivo da radiao uma rede de difraco no monocromador. Na figura seguinte est um esquema de um espectrofotmetro de infravermelho dispersivo de feixe duplo. Neste tipo de espectrofotmetro existe a diviso da radiao em dois feixes equivalentes, um dos quais atravessa a amostra e o outro a referncia, que pode ser apenas ar. A radiao que contem toda a gama de frequncias emitidas pela fonte de radiao, aps atravessar a amostra (e a referncia) passa pelo monocromador e chega ao detector. A funo do monocromador ser a de seleccionar, em cada instante, uma frequncia nica que ser analisada pelo detector e o sinal correspondente processado.
Figura 84 Esquema de um espectrofotmetro de infravermelho dispersivo, de feixe duplo.
Variando a frequncia seleccionada pode ser traado o espectro. Sempre que uma frequncia particular absorvida pela amostra menor radiao transmitida, no detector comparada com a radiao transmitida pela referncia. A diferena (razo) entre a intensidade da radiao proveniente dos dois meios, vai conduzir obteno do espectro. Actualmente, de um modo geral, os espectrofotmetros de infravermelho dispersivos tm vindo a ser substitudos pelos equipamentos com transformada de Fourier. Contudo, a sua utilizao pode ser bastante vantajosa em anlises especficas, nas quais apenas necessrio monitorizar uma frequncia, tais como anlises cinticas de uma reaco rpida. VI.4.2. Espectrofotmetros com transformada de Fourier Os espectrofotmetros com transformada de Fourier (usualmente designados por FTIR) so semelhantes aos espectrofotmetros de infravermelho comuns. Contudo, os FTIR possuem uma caracterstica muito importante que os distingue dos espectrmetros dispersivos, os espectros no so obtidos directamente das medidas de intensidade da radiao transmitida em funo da energia da radiao incidente, mas as medidas resultam na obteno de um interferograma. Na figura seguinte apresentado um esquema simplificado de um FTIR.
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Figura 85 Esquema geral de um espectrmetro FTIR
O elemento essencial deste tipo de espectrmetros o interfermetro. Na figura anterior e na seguinte est representado um esquema do interfermetro de Michelson. Este constitudo por um divisor de feixe (Df) e dois espelhos, um fixo (E1) e outro mvel (E2). Em alguns espectrofotmetros estes espelhos so em forma de canto de cubo. O divisor de feixe consiste numa placa de material transparente radiao infravermelho, com um revestimento escolhido de modo a deixar passar apenas 50 % da radiao incidente, consoante a gama de frequncias pretendida (infravermelho prximo, mdio ou longnquo). No infravermelho mdio, em geral, o divisor de feixe de brometo de potssio, semi prateado. A radiao incidente dividida em dois feixes: um segue para o espelho fixo e outro para o espelho mvel, sendo recombinados no divisor de feixe. Como um dos espelhos altera a sua posio no tempo, o percurso dos dois feixes diferente, podendo ser definida a retardao () como a diferena entre os dois percursos pticos. Quando os dois feixes se recombinam, ocorrem interferncias construtivas e destrutivas.
Figura 86 Esquema do interfermetro de Michelson.
Uma interferncia completamente construtiva ocorre quando duas ondas electromagnticas tm a mesma frequncia e se encontram em fase.
Interferncias destrutivas (completas) ocorrem quando duas ondas electromagnticas tm a mesma frequncia, mas tm uma diferena de fase de metade do comprimento de onda.
Cada frequncia emitida pela fonte produz no detector um sinal sinusoidal de intensidade I(), descrito por15:
eq. 70
onde I() a intensidade da fonte frequncia . Esta funo, usualmente designada interferograma, integrada para todas as frequncias emitidas:
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Exemplo para trs ondas:
O interferograma complexo assim obtido tem o mximo de intensidade correspondente retardao nula, ou seja, para =0. O espectro em funo da frequncia (ou do nmero de ondas) da radiao, designado por espectro de feixe simples, resulta da aplicao ao interferograma de uma transformada de Fourier:
O mximo corresponde ao ponto de retardao nula (ZPD), ou seja para =0. Na Figura 87, apresentado o interferograma obtido num espectrmetro Mattson RS1, e o espectro de feixe simples recuperado por aplicao da transformada de Fourier a esse mesmo interferograma.
Figura 87 a) Interferograma obtido no espectrmetro Mattson RS1 com um detector MCT de banda larga; b) Espectro de feixe simples obtido por aplicao da transformada de Fourier ao interferograma (a), aps 1000 -1 acumulaes, com resoluo 4 cm .
A resoluo d (ou d , se for expressa em nmero de ondas) tanto mais elevada quanto maior for a poro de interferograma analisada, a qual determinada pelo percurso do espelho mvel. A calibrao deste percurso assim muito importante e feita por um laser, no caso de HeNe. Para limitar a gama de valores a ser utilizada, necessrio proceder apodisao do interferograma, o que significa truncar os seus limites laterais. Neste trabalho foi utilizada uma apodisao triangular, que consiste em multiplicar o interferograma (a sua expresso matemtica) pela funo de apodisao A():
A apodisao resulta numa perda de resoluo em relao a um espectro obtido sem apodisao. Contudo, permite a obteno de um maior nmero de pontos por cada percurso do espelho mvel, com melhoria significativa da razo sinal/rudo. O espectro de infravermelho (FTIR) resulta da diviso do espectro de feixe simples pelo correspondente branco:
Figura 88 Espectro de cido oleanlico obtido num espectrofotmetro Mattson RS1
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Vantagens do FTIR As principais vantagens que os espectrmetros com transformada de Fourier apresentam em relao aos antigos modelos dispersivos so18-17: Vantagem Fellgett ou multiplex relao sinal/rudo muito superior para espectros acumulados no mesmo intervalo de tempo, resultante de ser detectada uma maior gama de nmero de ondas durante todo o tempo de acumulao. Vantagem Connes maior exactido nas frequncias, pois mesmo que o espelho mvel tenha pequenas alteraes de velocidade, o seu percurso calibrado com grande preciso por um laser de HeNe. Vantagem Jacquinot maior intensidade de radiao para a mesma resoluo, pois, ao contrrio dos espectrmetros dispersivos, que necessitavam de fendas menores para uma maior resoluo, diminuindo deste modo o sinal, nos FTIR a resoluo apenas determinada pelo percurso do espelho mvel (vantagem ptica). Eliminao do problema da radiao perdida. VI.4.3. Fontes de radiao As fontes de radiao contnuas so constrituidas por slidos inertes que por aquecimento elctrico atingem temperaturas d 1500 e 2200 K. O mximo de intensidade ocorre na gama de frequncias entre 5000 e 5900 cm-1. Com um comportamento semelhante ao de um corpo negro, a sua intensidade decresce com o aumento da energia da radiao, por exemplo a 650 cm -1 a intensidade cerca de 1 % do mximo, embora a diminuio seja mais significativa para energias menores. As fontes mais utilizadas no infravermelho mdio so: Fontes incandescentes de mistura de xidos de terras raras (Lantandeos) As lmpadas de Nernst so cilindricas com o dimetro de 1 a 2 mm e um comprimento de 20 mm. No interior destes cilindros, selados, so formados xidos de terras raras, numa das extremidades esto ligados guias de platina para permitir a ligao a um elemento de aquecimento resistivo. Ao passar a corrente a lmpada pode atingir temperaturas entre 1200 e 2200 K. Um aumento de temperatura provoca uma diminuio da resitncia. Assim, o circuito electrico deve ser construido de modo a que a coorenre seja limitada, de modo a impedir o aumento excessivo da temperatura e a degradao rapida da fonte de radiao. Fontes de filamento incandescente de carboneto de silcio As fontes designadas por Globar, so constituidas por um filamento de carboneto de silcio, sendo as suas dimenses em geral de cerca de 50 mm (comprimento) x 5 mm (dimetro). tambm aquecida por electricamente e a sua temperatura de funcionamento varia enter 1300 e 1500 K, tendo um coeficiente positivo de resistncia (esta no diminui com o aumento de temperatura). VI.4.4. Detectores Os detectores para a espectroscopia de infravermelho podem ser agrupados em: (i) detectores sensveis ao efeito trmico da radiao; (ii) detectores piroelectricos; (iii) semicondutores, detectores de fotocondutividade. Os dois primeiros so utilizados em fotmetros ou espectrofotmetros dispersivos, enquanto que os detectores dependentes da fotocondutividade se encontram mais associados a espectrofotmetros com transformada de Fourier. Sensveis ao efeito trmico da radiao Estes detectores so constitudos por um sistema que a absorve toda a radiao (semelhante a um pequeno corpo negro) sendo medida a subida de temperatura resultante da absoro. Este corpo negro deve ser de um material que tenha capacidade calorfica pequena de modo a que a alterao de temperatura produzida seja possvel detectar, uma vez que as variaes so da
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ordem de grandeza de poucas centsimas de kelvin. O principal problema inerente a este tipo de detectores o rudo trmico produzido pelas variaes de temperatura ambiental. Termopares Os detectores com termopar so os detectores mais simples cuja resposta depende do efeito trmico da radiao. Os termopares so constituidos por dois metais diferentes, ligados entre si atravs de uma soldadura. Entre estes dois metais estabelecida uma diferena de potencial, Ecell, dependente da temperatura. Assim, as medidas de potencial vo estar directamente relacionadas com a temperatura da radiao incidente.
Figura 89 Esquema de um detector termopar
Clulas de Golay Este tipo de detector consiste num filme fino, de um material absorvente, colocado numa clula que se encontra pressurizada (como indicado no esquema na Figura 90). Ao incidir sobre o filme a radiao electromagntica ser absorvida, provocando aumento da temperatura do filme, que por sua vez promove um aquecimento do gs contido na cmara. Este ao expandir aumenta a presso exercida no espelho flexvel (que consiste numa membrana muito fina revestida a prata de um dos lados). A alterao na membrana vai ser detectada por radiao laser e medidas de deflexo. As vantagens mais importantes deste tipo de detector so: (i) qualquer tipo de radiao pode ser detectada desde que o filme absorvente seja sensvel, e a gama espectral pode ser limitada atravs da utilizao de uma janela de entrada de material apropriado; (ii) no necessita de ser arrefecido, funcionando temperatura ambiente, portanto de utilizao fcil. Contudo, tambm tem algumas desvantagens: (i) a membrana extremamente frgil, pelo que a clula deve ser manuseada como muito cuidado; (ii) tem uma resposta muito lenta, devido resposta trmica de aquecimento e arrefecimento do gs no interior da cmara, restringindo a velocidade mxima de operao a ~20 Hz.
Figura 90 Esquema e fotografia de uma clula de Golay
Bolmetros Os detectores que so termmetros de resistncia, so designados por bolometros, so construidos em materiais cuja resistncia se altera com a variao de temperatura. Estes materiais podem ser metais, tal como a platina, ou semi-condutores, entre os quais o germnio utilizado na regio do infravermelho longinquo.
Piroelctricos de sulfato de triglicina deuterado (DTGS)

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Semicondutores (dependentes da fotocondutividade) Telureto de mercrio e cdmio (MCT) e Antimoneto de ndio (InSb)
Foi utilizado um espectrmetro FTIR Mattson modelo RS1, com fonte de infravermelho constituda por um filamento incandescente de carboneto de silcio, arrefecida a gua, e um detector de telureto de mercrio e cdmio (MCT) de banda estreita (gama de trabalho: 4000 a 800 cm-1), da EG&G Judson. Estes detectores dependem da fotocondutividade dos semicondutores que os constituem, sendo arrefecidos com azoto lquido e, portanto, de baixo rudo18. Na Figura 85 apresenta-se um esquema muito simplificado de um espectrmetro FTIR. (Arrefecidos com azoto lquido, de baixo rudo) Germnio dopado com ouro ou cobre (Arrefecido com hlio lquido, muito sensveis)
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Figura 91 Resumo das principais caracteristicas de detectores que podem ser utilizados em espectroscopia de infravermelho.
VI.4.5. Sistema ptico Espelhos (superfcie recoberta por prata ou alumnio) Lentes (no podem ser de vidro) VI.4.6. Porta-amostras Com janelas e/ou em matrizes de : - NaCl ( - KBr ( > 625 cm-1) > 400 cm-1) > 454 cm-1)
- ZnSe (20000 < Solues aquosas - CaF2 ( - AgCl (
> 1111 cm-1) > 360 cm-1)
A sua forma e estrutura dependem do tipo de anlise e do estado fsico e de agregao da amostra porta-amostras especficos para os ensaios de: - gases - slidos - lquidos VI.4.7. Tipos de anlise por FTIR
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Modo de transmisso Mtodo mais comum: Clula de lquidos ou gases; Pastilhas de KBr
Modo de reflectncia difusa (DRIFT) Desenvolvido para obter espectros IV de amostras slidas, que dispersam a radiao incidente.
Esquema do porta-amostras: Modo de reflectncia total atenuada (ATR) Desenvolvido para obter espectros IV de: amostras lquidas (muito absorventes) filmes finos (maleveis ou hmidos) membranas geis pastas
No adaptveis a anlise em transmisso.
Modo de reflexo-absoro (RAIRS) Microscopia no IV Espectroscopia IV resolvida no tempo
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VII.
Anexo I
VII.1. Outro modo de deduzir a lei de Lambert-Beer:
Soluo contendo n partculas absorventes, contida numa clula de percurso ptico b. Seco recta com uma espessura infinitesimal dx e uma rea S. Radiao monocromtica (apenas um ). I<I0, existe absoro da radiao. Elemento de volume dV = SxdS, neste volume (elemento de volume) existem dn partculas absorventes. Do ponto de vista estatistico a probabilidade de captura do foto radiao absorvida: ; e a fraco de
, sendo dI a intensidade da radiao incidente subtrada da intensidade da
radiao emergente para o elemento de volume, e Is a intensidade da radiao incidente no mesmo elemento de volume A lei de Lambert-Beer:
Captura do foto pelas partculas: a rea de captura do foto, sendo a rea volta da partcula na qual se o foto incidir este capturado (absorvido). Esta rea de captura depende do tipo de partcula (do seu tamanho) e comprimento de onda da radiao Sendo dS = x dn, logo:
eq. 71
integrando para todas as partculas e para a intensidade total da radiao,

eq. 72
passando a logaritmos decimais:

eq. 73
Sabendo que
e a concentrao
, factores 1000 para
passar de mL a L e 6,023x1023 para passar de nmero de partculas a moles.

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Ento
, que substituindo na equao 21:
eq. 74
Sendo
, vem que A = b C, em que o coeficiente de
absortividade (ou absortividade molar). Como a absorvncia adimensional (no tem unidades) se: b (cm) e C (mol.L-1) as unidades de devem ser L.mol-1.cm-1.
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. Max Diem, Introduction to Modern Vibrational Spectroscopy, Ed. John Wiley & Sons, New York, 1993. . N. Sheppard, em Perspectives in Modern Chemical Spectroscopy, Ed. D. L. Andrews, SpringerVerlag, Berlim, 1990.
18 17
. L. M. Ilharco, Boletim da Soc. Portuguesa de Qumica, 69 (1998).34.
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Ana Rosa Garcia

Técnica de Análise Instrumenta L - Espetroscopia Molecular

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Mtodos Instrumentais

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Figura 1 Esquema geral de anlises espectroscpicas

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Figura 2 Representao da onda electromagntica segundo a teoria de Maxwell

No vcuo admite-se que esta velocidade corresponde velocidade da luz (c):

Figura 3 A onda electromagntica e os parmetros que a caracterizam.

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Figura 4 Decomposio da luz visvel por um prisma.

Figura 5 Montagem da experincia original de Herschel

Figura 7 Exemplo de espectros de absoro molecular

II.1. Tipos de estudos espectroscpicos

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Figura 11 Sinais detectados no laboratrio de uma Universidade

Maximizao da razo Sinal/Rudo

Figura 12 A relao sinal rudo num espectro de absoro na regio do infravermelho

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III. Espectroscopia de Absoro Molecular

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Figura 21 O espectro transformado para valores de absorvncia

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Figura 22 Espectro de ultra-violeta do isopreno

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a radiao transmitida dada pela forma integrada:

de notar que I/I0 a transmitncia (T).

Sendo log(I0/I) a absorvncia (A), a quantidade de luz absorvida dada por:

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Figura 26 Espectros bem resolvidos (espectros sem sobreposio espectral significativa).

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Figura 27 Espectros com sobreposio espectral.

Figura 28 Erro causado por sobreposio da absoro numa mistura binria

Figura 29 Espectros necessrios para a anlise de uma mistura binria

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As solues padro permitem calcular os coeficientes de absortividade para os componentes X e

Esta equao dividida pela absorvncia do padro X ao comprimento de onda ,

pode ser considerada como uma relao linear (y=mx+b) entre

Figura 30 Cruzamento de espectros, por variao da concentrao da amostra: ponto isosbstico

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em que o declive da recta

III.4.4.2.2 Formao de dmeros 2X X2, sendo e

. , ou utilizando as constantes de formao

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Figura 31 Representao grfica de absorvncia em funo da concentrao, desvios linearidade.

I0 pode ser posto em evidncia e desaparece, ou seja,

se os coeficientes de absortividade forem iguais:

, a equao anterior fica:

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, a equao anterior reduz-se a

, donde se deduz que quando os

Figura 32 Espectros de absorvncia e a sua transformao em coeficiente de absortividade

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Escolha de um mtodo de anlise

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IV. Espectroscopia de Absoro Molecular UV/vis

IV.1. Bases tericas