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Espermograma
Cinthia Manzzi Feij
Deborah Montagnini Spaine
Danielle S. Tibaldi
Sandro C. Esteves
Introduo
O espermograma o foco central da avaliao laborato-
rial para o homem com queixa de infertilidade. Embora
no seja um teste de funo espermtica, esse exame for-
nece informaes sobre a atividade germinativa, a ativi-
dade dos epiddimos e a atividade das glndulas sexuais
acessrias
1
.
Os resultados do espermograma so frequentemente
utilizados como marcadores da fecundidade masculina e
das chances de se estabelecer uma gravidez. de funda-
mental importncia, portanto, que o exame seja executa-
do por profssionais bem treinados e realizado num labo-
ratrio de andrologia com rigoroso controle de qualidade
(Figura 1). A acurcia e a reprodutibilidade dos resulta-
dos fornecidos pelo laboratrio facilitam ao clnico esta-
belecer a melhor linha diagnstica e teraputica
2
. Apesar
disso, o valor prognstico das variveis seminais, como
concentrao, motilidade e morfologia espermtica,
como marcadores de fecundidade limitado. O potencial
frtil do homem infuenciado pela atividade sexual, pelo
estado das glndulas sexuais acessrias e por fatores def-
nidos, como estado de sade geral, uso de medicamentos,
drogas ilcitas, tabagismo e lcool, alm de outros desco-
nhecidos.
Figura 1. Viso geral do laboratrio de andrologia. O laboratrio
deve possuir equipamentos e instrumentos especfcos e em quan-
tidade necessria ao atendimento de sua demanda, manter manu-
ais tcnico-operacionais referentes aos equipamentos e procedi-
mentos realizados facilmente acessveis aos funcionrios do setor,
implementar e manter um programa de manuteno preventiva e
corretiva, alm de manter os equipamentos calibrados.
Os valores de referncia para as variveis rotineiramente
analisadas no smen foram recentemente atualizados pela
Organizao Mundial da Sade (OMS)
3
. Na Tabela 1, en-
contram-se os valores de referncia publicados em edies
anteriores consecutivas dos manuais da OMS
3-6
. Embora
esses valores sejam largamente utilizados para diferenciar
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homens frteis e subfrteis, existe ampla variao de ferti-
lidade mesmo nos homens com parmetros anormais. Os
valores de referncia utilizados pelo manual da OMS pu-
blicado em 2010 foram estabelecidos com base em resulta-
dos de anlises seminais de um grupo de aproximadamen-
te dois mil homens de oito pases, que foram capazes de
engravidar suas parceiras por via natural at um ano aps
o trmino da contracepo
7
. Os valores dos parmetros
espermticos desses homens foram distribudos em uma
curva, gerando valores mdios e intervalos de confana
para diversos percentis. Estabeleceram-se como valores
de referncia aqueles obtidos no percentil 5, ou seja, 95%
dos indivduos considerados frteis possuam anlises
seminais cujos parmetros espermticos eram maiores ou
iguais aos observados nesse percentil (Tabela 1)
3,7
.
Os valores de referncia indicados no novo manual da
OMS no devem, portanto, ser utilizados para uma distin-
o rgida entre homens frteis e infrteis, embora sirvam
como um guia padronizado para auxiliar na avaliao das
chances de concepo
8
. Valores abaixo dos limites estabe-
lecidos podem sugerir a necessidade de tratamento, embo-
ra no tenham poder discriminatrio para determinar a
natureza desse tratamento. Entre os parmetros esperm-
ticos, nenhum deles foi capaz de, isoladamente, distinguir
entre os grupos de homens que obtiveram gravidez daque-
les que no o fzeram, embora a morfologia espermtica
tenha sido o parmetro mais representativo. Os resultados
da anlise seminal de um paciente devem ser interpretados
em conjunto com as informaes clnicas
2,8
.
Coleta do smen
O local de coleta tem efeito direto sobre os parmetros se-
minais, especialmente sobre o volume ejaculado. Preferen-
cialmente, a amostra seminal deve ser colhida em uma sala
silenciosa, isolada, limpa, com banheiro anexo e prxima
ao laboratrio onde ser realizada a anlise (Figura 2). A
coleta domiciliar pode ser autorizada em casos especiais,
desde que o material chegue ao laboratrio em no mxi-
mo uma hora e que cuidados sejam tomados durante seu
transporte at o laboratrio
9
. Os parmetros seminais so
infuenciados por temperaturas abaixo de 25 C ou acima
de 37 C. Quando isso ocorrer, os resultados obtidos po-
dem no ser confveis.
O modo preferencial de coleta a masturbao. A cole-
ta por coito interrompido no indicada, pois pode haver
perda da primeira frao do ejaculado ou contaminao
da fora vaginal. Em casos selecionados, pode-se autori-
zar a coleta pelo ato sexual utilizando preservativo atxico
(ex.: Male-Factor Pak). Nos portadores de leso medular,
a coleta pode ser realizada por vibroestimulao ou por
eletroejaculao. Nos casos de ejaculao retrgrada, o pa-
ciente deve ser orientado quanto alcalinizao prvia da
urina obtida pela ingesto oral de bicarbonato de sdio.
O smen deve ser colhido utilizando-se um frasco es-
tril, descartvel, composto de polipropileno, de boca larga
(cerca de sete centmetros de dimetro) e com tampa de
rosca. O laboratrio sempre deve fornecer o frasco cole-
tor, cujo lote previamente testado quanto toxicidade do
plstico sobre a motilidade espermtica (Figura 3).
Tabela 1. Valores de referncia para os parmetros seminais publicados nos consecutivos manuais da Organizao Mundial da Sade
(OMS)
Parmetros seminais Edio (Ano de publicao)
1 (1980) 2 (1987) 3 (1992) 4 (1999) 5 (2010)
1
Volume (mL) -- 2,0 2,0 2,0 1,5
Concentrao (x10
6
por mL) 20-200 20 20 20 15
Concentrao total (x10
6
) -- 40 40 40 39
Motilidade total (%) 60 50 50 50 40
Motilidade progressiva
2
2
3
25% 25% (grau a) 25% (grau a) 32% (a+b)
Vitalidade (% vivos) -- 50 75 75 58
Morfologia (% normais) 80,5 50 30
4
14
5
4
6
Leuccitos (x10
6
por mL) < 4,7 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0
1
Valores de referncia correspondentes ao percentil 5, obtidos pela distribuio dos dados dos espermogramas de homens que engravidaram suas
esposas num intervalo 12 meses;
2
grau a = motilidade progressiva rpida (> 25 m por s); grau b = motilidade progressiva lenta (5 a 25 m por s);
3
progresso para frente (escala 0 a 3);
4
valor arbitrrio;
5
valor no defnido, porm sugerido levando-se em considerao o critrio estrito;
6
critrio
estrito de Tygerberg. (Adaptado de Esteves SC et al. Critical Appraisal of World Health Organizations New Reference Values for Human Semen
Characteristics and Efect on Diagnosis and Treatment of Subfertile Men. Urology. 2012;79(1):16-22.)
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Figura 2. Viso geral da sala utilizada para coleta de smen. De
acordo com a Resoluo da Diretoria Colegiada n 23 da Anvisa, a
sala de coleta de smen deve garantir o conforto e a privacidade
do paciente e possuir um sanitrio com acesso exclusivo.
Figura 3. Frasco coletor comumente utilizado para a coleta de s-
men. O frasco deve ser estril, de boca larga e testado quanto
toxicidade do plstico para a motilidade espermtica.
Os parmetros espermticos avaliados rotineiramente
so infuenciados pelo tempo de abstinncia ejaculatria
antes da coleta, pelo mtodo de coleta, pela temperatura e
pelo tempo entre a ejaculao e o incio da anlise. Em ra-
zo da variabilidade biolgica entre espermogramas de um
mesmo paciente, pelo menos dois exames devem ser reali-
zados antes de se estabelecer alguma concluso diagnsti-
ca
2
. O intervalo recomendado entre os exames arbitrrio,
e geralmente se situa entre 7 e 15 dias. O tempo de abstinn-
cia ejaculatria antes da coleta deve ser de dois a sete dias
3
.
Anlise seminal
O espermograma de rotina deve abranger: (a) caractersti-
cas fsicas do smen, que incluem coagulao, liquefao,
viscosidade, aspecto, cor e pH; (b) volume da amostra;
(c) avaliao microscpica, que inclui a concentrao de
espermatozoides, motilidade espermtica total e progres-
siva, vitalidade espermtica, morfologia espermtica e
quantifcao do nmero de leuccitos.
Avaliao macroscpica das
caractersticas fsicas do smen
Imediatamente aps a ejaculao, o smen normal forma
um cogulo semelhante a um gel, em razo da presena de
protenas secretadas pelas vesculas seminais (semenogeli-
na, fbronectina e lactoferrina). A ausncia de coagulao
indica a inexistncia ou a defcincia das protenas que for-
mam o cogulo e pode ocorrer nos casos de obstruo dos
dutos ejaculatrios, ausncia congnita ou disfuno das
vesculas seminais.
A liquefao do cogulo seminal um processo enzi-
mtico e a principal enzima envolvida o antgeno pros-
ttico especfco (PSA). Depois da observao da presena
ou no do cogulo, o frasco com a amostra seminal pode
ser colocado em uma estufa, temperatura de 37 C, ou
permanecer temperatura ambiente, para que ocorra a li-
quefao. O tempo mdio para a liquefao completa de
15 a 30 minutos. Caso ela no ocorra em at 60 minutos,
classifca-se a liquefao como incompleta, podendo ter
ocorrido alteraes prostticas. Amostras normalmente
liquefeitas podem conter corpsculos gelatinosos que no
se dissolvem; estes no apresentam nenhum signifcado
clnico.
A viscosidade do smen deve ser avaliada aps a li-
quefao, com o auxlio de uma pipeta sorolgica de 5 ml.
A viscosidade considerada normal quando a amostra,
ao sair da pipeta por ao somente da fora da gravida-
de, goteja ou forma um flamento com extenso inferior a
2 cm. Quando o flamento formado for superior a 2 cm, a
viscosidade descrita como aumentada.
O aspecto do smen modifcado medida que os
processos de coagulao e liquefao acontecem. Imedia-
tamente aps a coleta, a amostra seminal tem aspecto he-
terogneo, espesso e gelatinoso, tornando-se opalescente,
homogneo e mais fudo aps a liquefao.
As coloraes branca ou acinzentada so consideradas
normais. Alterao na cor pode indicar doenas locais ou
sistmicas (infeco, hepatite) ou ainda uso de medica-
mentos (antibipticos, antisspticos urinrios ou vitami-
nas). A colorao avermelhada, em razo da presena de
hemcias, conhecida por hematospermia e pode resul-
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tar de um processo infamatrio, obstruo ou cistos nos
dutos ejaculatrios, neoplasias, anormalidades vasculares,
entre outros
9
.
O pH seminal resultado da mistura das secrees das
vesculas seminais (pH alcalino) e da prstata (pH cido).
O valor normal do pH seminal 7,2. Aps a colheita, o
frasco com a amostra seminal deve permanecer bem fe-
chado para evitar evaporao do CO
2
da amostra e altera-
o do sistema tampo. A determinao do pH rotinei-
ramente realizada utilizando-se papel de indicador de pH.
Volume
O volume seminal depende primariamente das glndulas
sexuais acessrias, sendo aproximadamente 60% prove-
niente das vesculas seminais, 30% da prstata, 5% de se-
crees do epiddimo, glndulas de Cowper e de Littr, e
5% de elementos fgurados (espermatozoides, clulas ger-
minativas, leuccitos etc.).
De acordo com a mais recente verso do manual da
OMS
3
, o volume seminal deve ser avaliado pela sua den-
sidade. Assim, o frasco coletor pesado antes e depois da
coleta. Sabendo-se que a densidade do smen de 1 g por
ml, calcula-se o volume pela diferena entre as pesagens.
Para simplifcar, o volume seminal pode ser medido com
auxlio de uma pipeta sorolgica graduada de 5 ml, com
intervalo de 0,1 ml, aspirando-se toda amostra colhida
aps a liquefao.
A diminuio do volume seminal (hipospermia) pode
estar relacionada obstruo dos dutos ejaculatrios ou
ausncia congnita das vesculas seminais, obstruo das
vesculas seminais, ejaculao retrgrada, disfuno
das glndulas sexuais acessrias e ao hipogonadismo
1,2
.
Outros fatores, tais como perda de parte da amostra du-
rante a coleta, ejaculao parcial em razo de orgasmo in-
completo, perodo de abstinncia inadequado e estresse,
tambm podem diminuir o volume do ejaculado colhido.
Avaliao microscpica das
caractersticas do smen
Agregao e aglutinao
Aps a anlise macroscpica, realiza-se a avaliao mi-
croscpica inicial quanto presena de agregao e de
aglutinao. Para isso, 20 L do smen liquefeito so colo-
cados sobre uma lmina de microscopia e recobertos com
lamnula. Avalia-se a alquota sob microscopia ptica com
contraste de fase utilizando magnifcao de quatrocentas
vezes. Existem dois tipos de aglutinao: (i) inespecfca
(tambm conhecida como agregao, em que se observam
espermatozoides imveis aderidos a clulas ou debris ce-
lulares); (ii) especfca (espermatozoides aderidos uns aos
outros). Esta ltima sugestiva da presena de anticorpos
antiespermatozoides
10
.
Motilidade espermtica
A motilidade defnida como o movimento espontneo dos
espermatozoides. A determinao do percentual de esper-
matozoides mveis e sua progresso realizada manualmen-
te ou por meio da utilizao de sistemas computadorizados.
Na avaliao manual, uma alquota do smen liquefeito
avaliada sob microscopia ptica, com contraste de fase, utili-
zando-se aumento de duzentas ou quatrocentas vezes, e, pre-
ferencialmente, sob condies controladas de temperatura, a
37 C (placa aquecedora acoplada ao microscpio).
Os espermatozoides podem ser classifcados de acordo
com trs padres de motilidade (OMS, 2010), a saber:
motilidade progressiva;
motilidade no progressiva;
imveis.
Idealmente, a avaliao da motilidade espermtica
deve ser realizada com a utilizao de cmaras apropria-
das, que possuem profundidade conhecida (ex.: Makler

,
Horwell

, Microcell

) e permitem a livre movimentao

dos espermatozoides (Figura 4). Pelo menos duzentas c-
lulas so avaliadas, e o clculo fnal expresso em termos
percentuais. De maneira alternativa, pode-se avaliar a mo-
tilidade com o uso de lmina e lamnula. Para tanto, depo-
sita-se cerca de 10 L de smen liquefeito sobre lmina de
microscopia, aquecida a 37 C, e cobre-se com lamnula.
Inicialmente, contam-se os espermatozoides que exibem
motilidade progressiva em um campo aleatrio. A seguir,
contam-se os que exibem motilidade no progressiva, bem
como os imveis, no mesmo campo visual. O processo
realizado em duplicata e, ao fnal, a mdia utilizada para
estabelecer o percentual de espermatozoides mveis (mo-
tilidade total) e daqueles com motilidade progressiva.
Concentrao espermtica
A concentrao espermtica defnida como o nmero de
espermatozoides em milhes por mililitro de smen (x10
6

por ml), devendo ser determinada pela diluio volumtrica
associada hematocitometria. A contagem dos espermato-
zoides deve ser realizada por meio de uma cmara de Neu-
bauer modifcada, que apresenta, na verdade, duas cmaras,
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Figura 4. Cmaras de contagem utilizadas para anlise da motilidade espermtica: (a) cmara de Makler; (b) Microcell; (c) Horwell.
Figura 5. Cmara de Neubauer modifcada ( esquerda). No centro, ilustrao representando seu retculo central, que contm 25 quadra-
dos subdivididos em 16 quadrados menores. direita, fotomicrografa mostrando um dos 25 quadrados do retculo central da cmara,
delimitado por linhas triplas e contendo 16 quadrados menores, nos quais se observam os espermatozoides.
uma superior e outra inferior. Cada uma possui 0,100 mm de
profundidade e um retculo central contendo 25 quadrados
grandes, cada um com 16 quadrados menores (Figura 5).
Para se determinar a concentrao espermtica,
conta-se o nmero de espermatozoides presentes nos 25
quadrados grandes (cinco fleiras) de ambas as cmaras,
obtendo-se a mdia entre as duas contagens. Utiliza-se
microscopia ptica comum com magnifcao de duzentas
vezes para a observao dos espermatozoides. Para que os
resultados sejam validados, a diferena entre as contagens
das duas cmaras no deve exceder 1/20 da sua soma. Caso
isso ocorra, necessrio homogeneizar novamente a dilui-
o e repetir o procedimento.
A concentrao de espermatozoides em milhes por
mililitro resultante da mdia daqueles contados pelo fa-
tor de diluio da cmara (Tabela 2).
A contagem total (do ejaculado) obtida multiplican-
do-se o valor da concentrao de espermatozoides pelo
volume da amostra seminal, e o resultado expresso em
milhes de espermatozoides por ejaculado.
Morfologia espermtica
A morfologia defnida pela forma e pelo aspecto dos es-
permatozoides. Entre os vrios sistemas de classifcao
morfolgica, o recomendado pelo manual da OMS
3
o
critrio estrito de Tygerberg, descrito em 1986 por Kruger
et al., que emprega a anlise morfomtrica para a determi-
nao do padro de normalidade: segmento ceflico com
forma oval e lisa (possuindo de 5 m a 6 m de compri-
mento e de 2,5 m a 3,5 m de largura, quando corados
pela colorao do Dif-Quick

ou panptico), com acros-
somo compreendendo de 40% a 70% do segmento cefli-
co. A pea intermediria deve ser delgada, com menos de
1 m de largura, comprimento aproximado de 1,5 vez o
tamanho do segmento ceflico e no apresentar nenhum
defeito. A cauda deve ser uniforme, levemente mais fna
que a pea intermediria, com comprimento aproximado
de 45 m, sem defeito, como cauda enrolada, quebrada ou
curta. Pelo critrio de Kruger, as formas limtrofes so con-
sideradas anormais (Figura 6).
Tabela 2. Diluies e fatores de correo para determinao da concentrao de espermatozoides, utilizando hematocitometria (adapta-
do do manual da Organizao Mundial da Sade para o exame e processamento de smen humano, 5. Ed., 2010 p. 39)
Nmero de
espermatozoides por
campo inteiro (exame a
fresco; 200x)
Diluio Volume smen (l) Volume fxador
(diluente) (l)
Fator de diluio
> 400 1:20 (1+19) 50 950 5
61 a 400 1:5 (1+4) 50 200 20
1 a 60 1:2 (1+1) 50 50 50
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A anlise da morfologia realizada preparando-se um
esfregao com 5 l de smen liquefeito. A lmina de mi-
croscopia utilizada para a confeco do esfregao deve ser
previamente limpa com lcool 70%, e, aps a fxao e co-
lorao (Figura 7), no mnimo duzentos espermatozoides
so contados e classifcados como normais e anormais.
Para a anlise morfomtrica, avaliam-se as dimenses
e o aspecto dos espermatozoides sob magnifcao de mil
vezes (imerso), com o auxlio de um micrmetro acopla-
do ocular do microscpio ptico. O resultado expresso
em porcentagem de formas ovais normais (Figura 8).
Em relao s formas anormais, recomenda-se calcu-
lar o percentual de espermatozoides exibindo defeitos no
segmento ceflico, na pea intermediria e na cauda, bem
como aqueles com excesso de citoplasma residual (Figuras
9, 10 e 11)
3
.
Vitalidade espermtica
O teste rotineiramente empregado para a avaliao da vi-
talidade espermtica utiliza o corante supravital eosina.
Espermatozoides vivos apresentam membrana plasmtica
ntegra e no permitem a passagem da eosina para o inte-
rior da clula (espermatozoide no corado). O mesmo no
ocorre com espermatozoides mortos, cujas membranas
no esto intactas (espermatozoide corado de rosa). Pelo
menos duzentos espermatozoides so avaliados utilizan-
do-se microscopia ptica com objetiva de imerso (mag-
nifcao de mil vezes) (Figura 12).
De acordo com o manual da OMS
3
, a determinao
da vitalidade espermtica deve ser realizada apenas quan-
Figura 6. Desenho esquemtico do espermatozoide humano visto microscopia ptica, com as medidas utilizadas na avaliao mor-
fomtrica, segundo o critrio estrito de Tygerberg (quadro esquerda). No centro e direita, ilustraes representando os defeitos
morfolgicos mais comuns.
do a porcentagem de espermatozoides imveis for supe-
rior a 60%.
Concentrao de clulas redondas e
leuccitos
Normalmente, a amostra seminal possui outros elementos
celulares alm dos espermatozoides, como clulas epite-
liais do trato geniturinrio, clulas prostticas superfciais
ou colunares, clulas germinativas imaturas como esper-
matcitos e espermtides , alm de leuccitos. A deter-
minao da concentrao desse grupo de clulas referidas
como redondas realizada empregando-se a mesma me-
todologia descrita para a determinao da concentrao
de espermatozoides.
Do ponto de vista clnico, entretanto, o mais impor-
tante diferenciar os leuccitos das outras clulas redon-
das, pois a ocorrncia de um nmero elevado de leuc-
citos no smen pode indicar infeco genital clnica ou
subclnica, nveis elevados de radicais livres de oxignio,
ttulos elevados de anticorpos antiespermatozoides, fun-
o espermtica defciente e, consequentemente, diminuir
a fertilidade
2,9
. Entre as diversas tcnicas existentes para a
identifcao dos leuccitos no smen, a mais simples o
teste de Endtz, ou teste da peroxidase. Esse teste permi-
te identifcar os neutrflos polimorfonucleares, que so
os de maior importncia clnica e geralmente provm do
epiddimo. Os neutrflos tambm so chamados de gra-
nulcitos, pois possuem grnulos contendo uma enzima
chamada peroxidase.
Espermatozoide normal
com medidas
Cabea 2,5 a 3,5 mm
Cabea 5,0 a 6,0 mm
Pea intermediria
1,5 vez a cabea
Cauda
45 mm
Defeitos de cabea
Defeitos de pea intermediria Defeitos de cauda
1. Fusiforme
1. Pea
dobrada
1. Cauda
curta
2. Cauda
dobrada
3. Cauda
enrolada
2. Insero
anmala
3. Pea
grossa
4. Pea
fna
5. Excesso de
citoplasma residual
Globozoospermia
Acromossomo
pequeno
2. Piriforme 3. Cabea redonda 4. Cabea amorfa 5. Vacuolado 6. Macroceflico 7. Microceflico
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Figura 7. Colorao pelo mtodo pantico da morfologia espermtica. Inicialmente, mergulha-se a lmina de microscopia com o esfrega-
o de smen (seco) na soluo fxadora. O processo repetido cinco vezes, mantendo-se o esfregao por um segundo dentro da soluo,
com intervalo de um segundo entre os mergulhos. necessrio deixar a lmina secar completamente antes de prosseguir para o prximo
passo (aproximadamente 15 minutos). Depois, mergulha-se a lmina seca na soluo I do kit pantico, seguindo-se o mesmo mtodo
descrito para a etapa anterior. Deve-se permitir que o excesso do corante escorra, mas a lmina no deve secar completamente. A ltima
etapa consiste em mergulhar a lmina na soluo II do kit pantico, processo que deve ser repetido duas vezes, seguindo-se a mesma
sistemtica j descrita. O excesso do corante removido enxaguando-se a lmina gentilmente em gua destilada, e fnalmente se deixa a
lmina secar por completo temperatura ambiente antes de realizar a leitura.
Figura 8. Fotomicrografas de espermatozoides normais corados pelo mtodo pantico. Os espermatozoides foram avaliados pelo critrio
estrito de Tygerberg (Kruger). As setas indicam a viso geral de espermatozoides normais (esquerda). direita, detalhes da cabea e da
pea intermediria de espermatozoides normais.
Figura 9. Fotomicrografas de espermatozoides apresentando defeitos morfolgicos na cabea: (A) macroceflico; (B) microceflico; (C)
fusiforme; (D) piriforme; (E) redondo; (F) e (G) amorfo; (H) vacuolado (com mais de dois vacolos ou mais de 20% da rea da cabea ocu-
pada por vacolos). Os esfregaos foram corados pelo mtodo pantico, e os espermatozoides foram avaliados pelo critrio estrito de
Tygerberg (Kruger).
Espermatozoides
normais
5 mm
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Figura 10. Fotomicrografa de espermatozoides apresentando defeitos morfolgicos na pea intermediria: (A) insero anmala da
pea; (B) pea espessa; (C) pea fna; (D) pea dobrada; (E) com excesso de citoplasma residual (1/3 ou mais em relao ao tamanho da
cabea; esse defeito normalmente vem acompanhado de outros defeitos na pea intermediria. Gotas citoplasmticas so vesculas
pequenas aderidas pea intermediria e representam elementos normais de espermatozoides funcionais; normalmente, se perdem du-
rante o processo de colorao ou aparecem como distenses da pea intermediria com tamanho inferior a 1/3 da cabea). Os esfregaos
foram corados pelo mtodo pantico, e os espermatozoides foram avaliados pelo critrio estrito de Tygerberg (Kruger).
Figura 11. Fotomicrografa de espermatozoides apresentando defeitos na cauda: (A) cauda curta; (B) cauda enrolada; (C) cauda dobra-
da; (D) cauda dupla. Os esfregaos foram corados pelo mtodo pantico, e os espermatozoides foram avaliados pelo critrio estrito de
Tygerberg (Kruger).
Figura 12. Avaliao da vitalidade espermtica pelo mtodo da eosina. Espermatozoides com a cabea corada em rosa so considerados
mortos (membrana plasmtica no intacta, que permite a entrada do corante supravital), e os no corados (cabea branca) so conside-
rados vivos, pois possuem a membrana ntegra, que no permite a entrada do corante.
A
A
B
B
C
C
D
D
E
Nesse teste, uma alquota de smen liquefeito incuba-
da com um reagente contendo gua oxigenada, que reage
com a peroxidase presente nos grnulos dos neutrflos.
A peroxidase pertence ao grupo de enzimas com capaci-
dade de oxidar substratos orgnicos, usando o perxido
de hidrognio como aceptor de eltrons na reao. Como
resultado, obtm-se uma reao colorimtrica: os neutr-
flos coram-se de marrom e so facilmente identifcados
microscopia ptica, ao passo que as clulas peroxidase ne-
gativas no se coram (Figura 13). Estas ltimas podem re-
presentar clulas germinativas imaturas ou outros tipos de
leuccitos, como os moncitos, os linfcitos e os macr-
fagos. Depois do ensaio, pelo menos duzentas clulas so
analisadas, e o resultado expresso em porcentagem de
clulas peroxidase positivas. A concentrao de neutrf-
los calculada multiplicando-se a concentrao de clulas
redondas (x10
6
por ml) pela porcentagem de neutrflos
(clulas peroxidase positivas).
E
S
P
E
R
M
O
G
R
A
M
A
53
Figura 13. Diferenciao das clulas redondas presentes no smen, utilizando o teste de Endtz. esquerda: clula redonda peroxidase
negativa (seta larga) e granulcito peroxidase-positivo (P+). direita: viso geral de uma lmina contendo vrios granulcitos peroxidase-
-positivos.
Agradecimento
Os autores agradecem Fausto Barbieri e sua equipe pela
criao das ilustraes.
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