Noções básicas de cultura de células

Dinâmica Intracelular
2007/2008
 Culturas celulares

• Culturas celulares: em que consistem?

• Vantagens e limitações do uso de culturas celulares

• Tipos de culturas celulares

• Requisitos necessários para manutenção de células em cultura

• Considerações experimentais
 Culturas celulares: em que consistem?

Um tipo de cultura de tecidos que envolvem um conjunto

de técnicas que permitem cultivar e/ou manter células
isoladas fora do organismo de origem

Desagregação do tecido original por forma a obter as células isoladas,

podendo estas ser cultivadas em monocamada aderente ou em suspensão
Vantagens e limitações do uso de culturas celulares

Vantagens
- Controlo das condições ambientais
- Análise independente de parâmetros
- Elevado número de testes num pequeno intervalo tempo
- Redução dos ensaios com animais
- Menos dispendiosas que a experimentação animal

Desvantagens
- Perda de características fenotípicas
- Sistema biológico fora do ambiente natural
- Ausência de sinais importantes
 Tipos de culturas celulares

Culturas primárias Linhas celulares

- Obtidas directamente dos tecidos - Obtidas de culturas primárias

- Culturas heterogéneas - Células imortalizadas (alteração genética)
- Mantêm-se pouco tempo em cultura - Crescimento rápido e contínuo
- Propicias ao desenvolvimento de - Proliferação ilimitada ou limitada a um
contaminações elevado número de passagens

COS-7 HeLa

HSB-2
Células ciliadas do Linfócitos humanos
epitélio nasal
Células do Células epiteliais
epitélio renal de de carcinoma
símios cervical humano
Neurónios de rato transformadas
(hipocampo) pelo vírus SV-40
Leucemia linfoblástica
aguda T
 Requisitos necessários para manutenção de
células em cultura

Instalações, equipamento e material

- Zona de recepção de material

Instalações - Zona de trabalho (Sala de cultura)

- Zona de lavagens e tratamento de
material

- Câmaras de fluxo laminar

Equipamento - Incubadoras
(Sala de cultura)
- Centrífugas, microscópio
 Requisitos necessários para manutenção de
células em cultura

Condições de cultura (meios de cultura e parâmetros ambientais)

- Sais Inorgânicos
- Temperatura
- Hidratos de Carbono
Parâmetros - Humidade
- Aminoácidos
ambientais
- Vitaminas (Incubadora) - Níveis de CO2
Meios de - Proteínas e peptídeos - pH
Cultura - Lípidos e ácidos gordos

- Soro
- Tampões
- Antibióticos
- Indicador de pH
 Considerações experimentais

Preparação de meios de cultura e soluções estéreis

Criopreservação e descongelamento
- Fase exponencial de crescimento
- Elevada viabilidade celular
- Maior concentração de soro
Congelamento - Crioprotector
- Lento
- Armazenamento a baixas temperaturas

- Rápido
Descongelamento - Meio de cultura
- Incubadora com parâmetros adequados
 Considerações experimentais

Subcultura (células em suspensão vs células aderentes)

- Meio de cultura
Subcultura - Meio de dissociação ou tripsina
(Células aderentes)
- Meio de cultura

Determinação da densidade celular (azul tripano)

Hemocitómetro

Número de Células/ml = n x d x 104