FIXAO A base para uma boa preparao histolgica a fixao completa e adequada do tecido a estudar, para tanto devemos

s obedecer a alguns requisitos. Intervalo mnimo entre coleta e a fixao Volume do fixador dever ser no mnimo 10vezes maior que o volume da pea. Evitar que pequenas peas ( principalmente as de punes por agulha) fiquem coladas no recipiente. Fixadores so substncias qumicas que mantm a integridade dos tecidos aps a morte, sem qualquer alterao da estrutura celular por isso a sua funo . -Inibir ou parar a autlise; -Impedir a atividade e proliferao bacteriana; -Coagular e tornar difusveis as substncias insolveis. -Preservar e endurecer os tecidos a fim de que resistam as etapas seguintes da tcnica histolgica; - Para melhorar a diferenciao tica dos tecidos; - Facilitar a subsequente colorao. A fixao deve comear sempre que possvel na sala de cirurgia, ou na sala de autpsia, ou onde quer que seja colhido o material, e obedece a marcha progressiva da periferia para o centro, isto as regies superficiais so fixadas mais cedo do que as mais profundas. O tempo de fixao vai depender do fixador que estiver sendo utilizado podendo variar de 4 a 72 horas. Este material deve ser imediatamente mergulhado no liquido fixador adequado . A escolha desse fixador de suma importncia pois dele vai depender os estudos que se quer fazer como tambm das tcnicas a serem aplicadas. Os tecidos podem ser de: Cirurgias, Bipsias, Necropsias, Camundongo, Coelho, Gato, Cachorro, Vaca,etc. A escolha do fixador se leva em conta: - Velocidade de penetrao nos tecidos; - Finalidade do exame a ser realizado; - Vantagem econmica; - Sem prejuzo a sade. Devemos salientar tambm que na fixao alguns fa tores interferem para uma maior

rapidez do nosso fixador. Exemplo. Quando se deseja uma fixao rpida para casos de cortes imediatos de congelao, emprega-se a formalina aquecida a 50 durante uma hora. Este mesmo fixador a temperatura ambiente requer pelo menos 12 horas para exercer sua atividade. A temperatura aumenta a velocidade de fixao, aumenta a penetrao do fixador atravs do tecido, quanto mais elevada ela for, mais rpida ser a penetrao. Algumas preparaes requerem no entanto, penetrao lenta para melhor preservao estrutural. Nestes casos, recomenda-se o resfriamento entre 0 e 60. Os fixadores mais utilizados em histologia so: formol 10% , formalina tamponada, Bouin, Zenker, Alfac, Helly, Formol sublimado, Glutaraldedo, etc. Vantagens e Desvantagens de Alguns Fixadores: os fixadores aditivados fixam em tempos reduzidos que variam de 1 5 horas devido a mistura de agentes qumicos. O formol um fixador lento, seu tempo de fixao varia de 1 a 24 horas, seu custo considerado baixo e muito utilizado em patologia cir rgica. A ao dos fixadores ocorre da periferia para o centro , portanto no devemoscolocar muitos fragmentos no vidro, pois eles aderem-se uns aos outros, dificultando a difuso do fixador. De acordo com sua propriedade de agir sobre as protenas, os diferentes fixadores so classificados em: Coagulantes ou Sem Coagulao (Precipitantes.)

Agente Fixador

Poder de Penetrao

Com Coagulao:

lcool

Moderado

Cloreto de Mercrio

Moderado

cido Pcrico

Moderado

Sem Coagulao

Formol Tetrxido de smio

Moderado Lento

cido Actico

Rpido

importante observar o PH nos fixadores, pois estes podem ocasionar uma retrao maior no tecido, como tambm alteraes na colorao. O valor timo do PH nos fixadores de 6,8 a 7,0. Freqentemente os fixadores so constitudos de um principal, associado eventualmente a outros. Quase todos os bons fixadores so ,entretanto constitudos de duas ou mais substncias fixadoras, corrigindo uma , os defeitos da outra. No entanto , de modo geral , por melhor que seja o fixador sempre ocorre contrao e diminuio de volume ( entre 20 a 40% ) dependendo do fixador empregado. Principais fixadores o Acetona:

Usada para fixao citolgica, desidrata muito o tecido e o tempo normal de fixao de 10 a 30 minutos. cido Actico: um dos mais usados, entretanto, sempre em combinao com outras substncias fixadoras. O cido actico tem propriedade de corrigir a ao hidratante de outros fixadores, evitando- se desse modo artefatos de fixao . Ele no fixa a protena citoplasmtica mas , coagula o ncleo da protena, tendo pouco efeito fixador; no causa endurecimento, penetra bem e dstri o condrioma. Geralmente empregado em solu aquosa de 0,3 a 5 %.Tempo de fixao; curto, de 10 a 15 minutos. cido Pcrico: Este fixador empregado, associado ao formol ou ao cido actico. Tem ao fixadora rpida, porm de pequena pene trao, possuindo leve descalsificante e provocando antes da desidratao pelos lcoois , at que todo fixador seja removido. Para o preparo da soluo aquosa saturada, a que se usa geralmente, coloca-se de 1 a 1,5g em 100ml de gua destilada em temperatura ambiente, deixando- se durante 12 a 24 horas ou , se prepara a soluo alcolica com lcool a 80%. Este fixador fixa as proteinas formando picratos de protena e a mesma combinao observada com alguns carbodratos. Tem

pequena penetrao e causa endurecimento, mas no provoca retrao ou distoro do tecido. lcool Etilico : usado para a fixao de pequenos fragmentos de tecido, entretanto, atualmente est sendo pouco empregado devido a numerosas contra indicaes do seu uso. A fixao rpida( 1 hora) desde que os fragmentos de tecidos tenham a espessura ,mxima de fixao , pois, ocorrer contrao do tecido e seu endurecimento ser muito intenso. O tecido depois de fixado dever passar do lcool absoluto para 95% e depois a 80%. As alteraes celulares observadas com a fixao pelo lcool so: Agregados de clulas tendem a se contrair, levando formao de grupos celulares. O citoplasma se contrai fortemente. Os ncleos so distorcidos morfologicamente. O citoplasma se retrai e se acumula na membrana do lado oposto ao qual o fixador penetrou na clula. lcool Etilico Absoluto. Ele no bom fixador , pois ao mesmo tempo que fixa desidrata o tecido tornando o muito duro. Alm disso, tem capacidade de penetrao muito pequena, de modo que os fragmentos do tecido a serem fixados devem ser pequenos. Em geral usa-se lcool 95% durante 30minutos. Carnnoy: lcool Absoluto.........................60,0ml Clorofrmio................................30,0ml cido Actico Glacial................10,0ml um dos fixadores mais rpidos e penetrantes. O tempo de fixao de em mdia 3 horas, e usado geralmente para diagnsticos urgentes. Tem sido muito empregado em citologia nos esfregaos hemorrgicos para a retirada de sangue ,pois destri as hemceas. No necessrio lavagem em gua aps a fixao.

Fixadores do ReproUnB Paraformaldedo:

PREPARO: SOLUO ESTOQUE PARAFORMALDEDO A SOLUO ESTOQUE FEITA A 8% 8GR DE PARAFORMALDEIDO EM 92ML DE GUA AGITAR E AQUECER A 56-60C COLOCAR 2 GOTAS DE NAOH 0,1M- AT FICAR TRANSLCIDO ESFRIAR, FILTRAR E AJUSTAR O PH (FRIO) PARA 7,2-7,4 COLOCAR A SOUO ESTOQUE NO CONGELADOR.

SOLUO DE USO PARAFORMALDEDO SOLUO USO: 1:1 EM TAMPO FOSFATO CONCENTRADO FIXAO: COLOCAR O MATERIAL E DEIXAR 1H TEMPERATURA AMBIENTE E NA GELADEIRA OVERNIGHT (SOLUO USO A 4%) A QUANTIDADE DEVE SER ~10 VEZES MAIOR QUE O TAMANHO DO MATERIAL LEMBRAR QUE O TAMANHO DO MATERIAL IMPORTANTE PARA O TEMPO!