TÉCNICA HISTOLÓGICA

Disciplina: Histologia
Prof. Me. José de Jesus R. Marques
e-mail: jjrmarques@hotmail.com
TÉCNICA HISTOLÓGICA - ETAPAS

 COLETA
 FIXAÇÃO
 DESIDRATAÇÃO
 CLAREAMENTO
 IMPREGNAÇÃO
 INCLUSÃO
 MICROTOMIA
 COLORAÇÃO
 MONTAGEM DE LÂMINAS
 OBSERVAÇÃO AO MICROSCÓPIO
 COLETA

 É a retirada de parte do órgão a ser analisada

(preparar uma lâmina histológica) podendo
ser:
▪ de biópsia cirúrgica, endoscópica, cirurgias
radicais e necrópsia.
▪ de animais de laboratório.

OBS: em qualquer caso, a peça deve logo ser

fixada.
 FIXAÇÃO

 O material coletado é imerso em fixadores

 Evita a destruição das células por suas
próprias enzimas (autólise) ou por
bactérias.
 Preserva a morfologia e a composição dos
tecidos.
 Insolubiliza as proteínas dos tecidos
 Oferece ao material uma resistência às
fases seguintes (endurece a peça).
 FIXAÇÃO

 PRINCIPAIS FIXADORES
▪ Formol (aldeído fórmico) a 10%
▪ Glutaraldeído a 4%
▪ líquido de “ Bouin” : formol, ácido acético
e solução aquosa de ácido pícrico).

Duração: cerca e 12 a 24 horas,

dependendo do fixador e do tamanho da
peça.
 FIXAÇÃO

Material cortado e colocado no cassete para o processamento.

 FIXAÇÃO

Material em cassetes
plásticos e mergulhados
no frasco contendo formol
a 10%.
 DESIDRATAÇÃO

 Remover a água dos tecidos

 Utiliza-se álcool etílico de concentrações
crescentes( 70%, 80%, 90% e álcool
absoluto).
 Duração: 6 a 24 horas, dependendo do
tamanho da peça.
DESIDRATAÇÃO

Bateria de
álcool para
desidratação.
O frasco 1
corresponde a
maior
proporção
água/álcool e o
frasco 5 e
menor
proporção
(absoluto).
 CLAREAMENTO OU
DIAFANIZAÇÃO
 Embeber a peça em substância miscível
com a parafina.
 Remover o álcool dos tecidos, permitindo a
entrada da parafina.
 Os tecidos tornam-se translúcidos
 Duração: 1 a 6 horas, dependendo do
tamanho da peça.
 Ex: xilol, benzol
CLAREAMENTO OU
DIAFANIZAÇÃO

Bateria de
frascos
com xilol.
 IMPREGNAÇÃO

 Parafina fundida a 60ºC.

 Parafina penetra nos vasos,nos espaços
intercelulares, no interior das células,
impregnando o tecido e tornando mais fácil
a obtenção dos cortes no micrótomo.
 Duração: 30 minutos a 6 horas,
dependendo do tamanho da peça.
 IMPREGNAÇÃO

Peças dentro de fracos de vidro

contendo parafina no interior da
estufa a 60ºC dentro.
 INCLUSÃO

 A peça é colocada num molde retangular

contendo parafina fundida.
 Finalidade: Obtenção do bloco de parafina
para ser cortado no micrótomo
INCLUSÃO

Material já
incluído na
parafina.
 MICROTOMIA

 Reduzir os tecidos
a cortes finos (4 a 6
µm), que após a
sua coloração, são
visualizados ao
microscópio
 Equipamento:
micrótomo
MICROTOMIA

Corte do bloco
em tiras de 4 a
6 micrômetros
de espessura.
MICROTOMIA

Cortes do
material
pronto
para
serem
distendid
os em
água
aquecida.
MICROTOMIA

Cortes sobre a
água aquecida
em "Banho
Maria".
MICROTOMIA

Corte sendo
pescado
sobre a lâmina
de vidro.
MICROTOMIA

Lâminas de vidro com os

cortes já distendidos
sobre a platina
aquecedora.
MICROTOMIA
 COLORAÇÃO

 Para se proceder à coloração torna-se

necessário remover a parafina e hidratar os
cortes.
 São usados corantes, os quais se
comportam como ácidos ou bases.
 Corante Básico ou Catiônico: possui carga
elétrica positiva. Ex: HEMATOXILINA
 Corante Ácido ou Aniônico: possui carga
elétrica negativa. Ex: EOSINA
 COLORAÇÃO

 COLORAÇÃO: Processa-se através dos seguintes

passos:

– Desparafinar em xilol durante 10 min.

– Imersão em álcool absoluto.(3x)
– Lavar a lâmina em água corrente durante 3 min.
– Corar pela hematoxilina (corante básico) durante
5 min.
– Lavar a lâmina em água corrente durante 5 min.
– Corar, pela eosina (corante ácido) durante 30
segundos.
COLORAÇÃO

Frascos de
vidro com os
principais
corantes
utilizados na
confecção de
lâminas
histológicas.
 COLORAÇÃO

– Desidratar o corte em álcool

– Imersão em álcool absoluto

– Diafanização ou clareamento
– Imersão em xilol
 MONTAGEM

 Coloca-se uma gota de resina sintética

(Entelan®) sobre o corte ou sobre uma
lamínula. Esta é então, colocada e
comprimida sobre o corte, de modo a
espalhar-se a resina em fina camada entre
a lâmina e lamínula.
 MONTAGEM

Lâmina e lamínula ( menor)

limpas.
 MONTAGEM

Demonstração da adição da
resina sintética sobre a lâmina
para a montagem.
MICROSCÓPIO
MICROSCÓPIO

1 = ocular
2 = objetivas e revólver
3 = platina
4 = charriot
5 = macrométrico
6 = micrométrico
7 = diafragma no condensador
8 = condensador
9 = botão do condensador
10 = dois parafusos
centralizadores do condensador
11 = fonte de luz
12 = controle de iluminação
13 = diafragma de campo
(alavanca no lado esquerdo do
microscópio)
14 = dois parafusos de ajuste da
lâmpada (esquerdo e direito)
15 = focalizadora da lâmpada
(alavanca no lado direito do
microscópio - não visível no
fotografia)
MICROSCÓPIO
“O SENHOR É O MEU PASTOR
E NADA ME FALTARÁ”

Salmo 23