MATRIZES COMPLEXAS - Espectrofotometria na região do visível e do

ultravioleta
Matriz - Espectrofotometria na região do infra-vermelho (IR)
- Ressonância magnética nuclear
- Meio no qual os analitos se encontram
ESPECTROSCOPIA DE ABSORÇÃO
RESOLUÇÃO - RDC Nº 27, DE 17 DE MAIO DE
2012 ATÔMICA
- Dispõe sobre os requisitos mínimos para a validação de - Espectroscopia de absorção atômica
métodos bioanalíticos empregados em estudos com fins - Espectroscopia de plasma
de registro e pós-registro de medicamentos. - Análise qualitativa ou quantitativa de metais

● Analito: composto químico específico a ser ESPECTROSCOPIA DE ABSORÇÃO

mensurado em uma matriz ATÔMICA
● Matriz: meio no qual os analitos em estudo serão
quantificados; - Espectroscopia de absorção atômica
● Matriz biológica: meio de origem biológica no qual - Espectroscopia de plasma
os analitos em estudo serão quantificados - Análise qualitativa ou quantitativa de metais

METODOS ANALITICOS ESPECTROMETRIA DE MASSAS

Triagem: - Identificação inequívoca
● Métodos gerais que se destinam a verificar a ausência - Fragmentação da amostra
ou presença de um composto ou um grupo de - Em geral acoplada à cromatografia
compostos.
● Precisam apresentar sensibilidade e presteza.

Confirmação:
●Destinam-se a confirmar os resultados obtidos da etapa
de triagem analítica.

ETAPAS ANALÍTICAS
Etapa 1 .
● Isolamento e concentração do analito
● Preparação da amostra: hidrólise, digestão, remoção
de interferentes (extração líquido-líquido ou extração em
fase sólida), entre outros

Etapa 2 .
● Diferenciação /detecção
● Técnicas empregadas: imunoensaios, cromatografia,
espectrofotometria de absorção atômica, entre outras.

Etapa 3 .
● Identificação / quantificação

TÉCNICAS ANALÍTICAS
-Clássicas
- Instrumentais

- Depende da adequação do método ao problema e da PREPARO DE AMOSTRAS

disponibilidade dos recursos necessários
- Pode ser considerada como uma série de operações
ESPECTROSCOPIA unitárias necessárias para que determinada(s)
substância(s) (analito) possa(m) ser analisada(s) pela
técnica analítica de escolha.
- Pode ser uma simples diluição, como a diluição de uma - Extração por head space (HS)
matéria-prima para análise por titulação. - Extração líquido-líquido (LLE)
- Extração em fase sólida (SPE)
ETAPAS
PROCESSOS DE EXTRAÇÃO
Liberação dos analitos da amostra (matriz)
- Remoção de interferentes - Processos físico-químicos: partição, adsorção e
- Técnicas de extração volatilização.
- Volatilização: os analitos são extraídos da matriz por
MINERALIZAÇÃO volatilização, passando da fase aquosa para a fase gasosa
(headspace ou espaço confinante) e são introduzidos
- Mineralização ou digestão ou desagregação de matéria diretamente no CG. Os constituintes não voláteis
orgânica. permanecem na amostra.
- Preparação da amostra para análise de metais.
- Transforma todos os compostos orgânicos, por um EXTRAÇÃO LIQUIDO-LIQUIDO
processo de oxidação, em substâncias inorgânicas que
poderão estar solubilizadas no meio e em compostos (ELL)
orgânicos que se volatilizarão. - Baseia-se na extração direta do material biológico com
- Via úmida: utilização de ácidos fortes como agentes um solvente imiscível com o meio da matriz,
oxidantes (ácido clorídrico, ácido perclórico) ou outras possibilitando o isolamento da substância de interesse
substâncias como o permanganato de potássio. Pode-se pela partição entre as fases. Depende:
utilizar forno de micro-ondas.
● Solvente extrator
- Via seca: altas temperaturas e oxigênio (agente
● pH
oxidante). Não deve ser utilizado para amostras com
● Proporção do volume das fases
mercúrio (volátil). Equipamentos: mufla, autoclave,
● Salting out: adição de agentes químicos (NaCL,
forno de micro-ondas
Na2SO4 ) que aumentam a força iônica e a polaridade da
REMOÇÃO DOS INTERFERENTES fase aquosa.

- Uma matriz pode ter muitos componentes como as EXTRAÇÃO EM FASE SOLIDA
matrizes biológica (proteínas, lipídios, carboidratos) que (SPE)
podem interferir na análise.
- Remoção de proteínas: precipitação, ultrafiltração e - Mesmos princípios da cromatografia em coluna.
diálise. - Permite a realização simultânea dos processos de
- Precipitação de proteínas: Desnaturação ou purificação (clean-up) e pré-concentração (ou
precipitação é muitas vezes necessária principalmente enriquecimento) do analito: possibilita uso de grande
em amostras como sangue total ou plasma. volume de amostra, menor volume de solventes, não
forma emulsões, automatizações
Métodos de precipitação:
Etapas:
a) com ácidos (p.ex. ácido tricloroacético e ácido - Condicionamento ou ativação da fase extratora
perclórico): formam sais insolúveis com a forma - Aplicação da amostra
catiônica das proteínas em meio ácido. - Lavagem da coluna: remoção de interferentes
b) com solventes orgânicos: solventes que são - Eluição e coleta dos analitos
miscíveis em água como acetona, metanol, etanol e
acetonitrila podem abaixar a solubilidade de proteínas.
c) com sais metálicos: proteínas também podem ser
removidas da amostra com o uso de sais de zinco ou
cobre em condições alcalinas.
d) sulfato de amônio: O sulfato de amônio é um
precipitante relativamente ineficiente: < 75% das
proteínas são removidas com a adição de 1,5 mL de sol.
saturada em 0,2 ml de plasma.

TECNICAS DE EXTRAÇÃO
- Ultrassonicação com solventes orgânicos
- Volatilização