Disciplina: Imunologia clínica

Professor: Lucas
Aluna: Debora Lilian S. de Deus
Matrícula: 17027516 Turma: 7NNA

Técnica Imunoblotting
Conceito:
É um imunoensaio em suporte sólido que utiliza antígenos imobilizados para detectar
anticorpos contra proteínas específicas.
Os antígenos utilizados são altamente puros e geralmente isolados por afinidade
cromatográfica. As tiras de membrana não contêm proteínas desnecessárias que podem
causar resultados falsos positivos.
As faixas de antígenos são colocadas em posições muito bem definidas, o que significa
que a avaliação dos testes é muito mais simples do que por Westernblots.
As bandas resultantes são transferidas para uma membrana de nitrocelulose que é
cortada em tiras.

Princípio do Teste

 Membranas cobertas com finas tiras paralelas que contêm antígenos puros são
usadas como fase sólida. As membranas são fixadas sobre uma lâmina sintética.
 Se a amostra for positiva, anticorpos específicos diluídos na amostra de soro se
ligam aos antígenos da fase sólida.
 Em um segundo período de incubação, os anticorpos ligados reagem com
autoanticorpos marcados com fosfatase alcalina.
 Em uma terceira etapa, os anticorpos recebem coloração de uma solução de
cromogênio, que é capaz de promover uma reação de cor. Uma faixa bastante
escura na linha dos antígenos correspondentes aparece se a amostra de soro
contém anticorpos específicos. Dependendo do espectro de antígenos que foi
utilizado, é possível analisar diversos anticorpos próximos um do outro
simultaneamente, dentro das mesmas condições.

Vantagens

 Uma tira de membrana separada é incubada para cada amostra de soro.

 Tempo total de duração da análise é de aproximadamente 1 hora e 45 minutos.
 A incubação pode ser automatizada.
 Todos os processos de incubação acontecem em temperatura ambiente.
 A conclusão das etapas de incubação individual é indicada pelas marcações no
controle de faixas em cada tira de teste.
 Resultados positivos e negativos podem ser diferenciados uns dos outros de
forma rápida e confiável. A intensidade das faixas de antígenos está relacionada
à titulação do anticorpo.
 As tiras de teste incubadas podem ser armazenadas por longos períodos.
 Resultados podem ser documentados com facilidade.
 Primeiramente, as tiras de teste incubadas são escaneadas,o dispositivo
reconhece a posição das tiras mesmo que elas não tenham sido colocadas com
precisão; identifica as tiras e mede sua intensidade. Os estudos são gravados
juntos aos dados da imagem e o resultado individual pode ser produzido para
cada paciente.

Diagnóstico Autoimune, sorologia Infecciosas, diagnóstico de alergias.