ESCOLA ESTADUAL TÉCNICA PROF.

ARMANDO JOSÉ FARINAZZO

CENTRO PAULA SOUZA

Leonardo Bombonato Tonioli

Luis Henrique Morais Telles
Maria Vitória Moy Paulique
Rita de Cássia Lopes da Rocha

RELATÓRIO DE MICROBIOLOGIA

Fernandópolis
2019
 Leonardo Bombonato Tonioli
Luis Henrique Morais Telles
Maria Vitória Moy Paulique
Rita de Cássia Lopes da Rocha

RELATÓRIO DE MICROBIOLOGIA

Relatório referente à aula prática,

apresentado ao componente curricular
de Microbiologia ministrado pela
professora Estela Zanon, como critério
de avaliação e atribuição de menções.

Fernandópolis
2019
1. TEMA

Análise quantitativa das colônias microbianas presentes no leite integral, leite

fermentado e grau de diluição.

2. OBJETIVOS

Observar o desenvolvimento de microrganismos presentes no leite

fermentado e leite integral, realizar a contagem de colônias formadas nos meios de
cultivo de acordo com a diluição e quantificar os seres vivos presentes.

3. INTRODUÇÃO TEÓRICA
3.1. LEITE - INTEGRAL E FERMENTADO.

O leite é uma das melhores fontes de cálcio disponível. Por isso, este
alimento é essencial para a saúde dos ossos e dentes e seu consumo irá prevenir a
osteoporose. Além disso, a bebida pode contribuir para a perda de peso,
proporcionar bem-estar e ainda prevenir o diabetes tipo 2. O alimento é um aliado de
quem pratica exercícios e é especialmente necessário na infância e adolescência,
mas importante até a terceira idade.

No leite integral não há processo químico para retirar a gordura natural da

bebida. Ele é o tipo mais recomendado para as crianças, pois sua gordura é
importante para a formação do sistema nervoso da criança e para o crescimento.
Este leite tem mais vitaminas A, B e K.

Existem alguns alimentos que são saborosos e ainda ajudam no controle da

flora, como os iogurtes e o leite fermentado. Este último é considerado um alimento
probiótico, rico em lactobacilos, que chegam vivos ao intestino, atravessando sem
problemas o estômago, ambiente ácido onde a maioria dos micro-organismos não
sobrevive.
 O leite fermentado é um alimento obtido através da fermentação do leite
pasteurizado ou esterilizado, por fermentos próprios, onde o produto final deve ter a
ocorrência de microrganismos viáveis, ativos e abundantes.Na sua produção, ocorre
uma diminuição do pH do leite envolvido e também sua coagulação.É considerado
um alimento funcional, pois contém probiótico.

3.2. DILUIÇÃO SERIADA

Uma diluição seriada é uma técnica na qual se realizam várias diluições

progressivas. Inicia com a solução mais concentrada chegando a soluções menos
concentradas, amplificando o fator de diluição rapidamente.

A fonte do material de diluição (soluto) para cada etapa é proveniente do

material diluído da etapa anterior. Em uma diluição em série, o fator de diluição total
é o produto dos fatores de diluição em cada etapa. Assim, se você tiver uma diluição
1/2, seu fator de diluição é 2, todas as diluições seguintes serão multiplicadas por 2.
Para ter 1 mL de solução, como no exemplo abaixo, você terá a adição de 0,1 ml do
concentrado mais 0,9 mL do diluente.

Diluições em série são usadas para criar com precisão soluções

extremamente diluídas, bem como soluções para experimentos que exigem uma
curva de concentração com uma escala exponencial ou logarítmica.

A técnica é útil quando há escassez do volume do concentrado ou do

diluente, havendo necessidade de minimizar seu uso, ou quando há necessidade de
diversas diluições, por exemplo, na determinação de um título ou na contagem de
microrganismos.

3.3. AGAR LACTOBACILLI MRS – MEIO DE CULTIVO

O agar lactobacilli MRS é utilizado para o cultivo de lactobacilos em ambiente

de laboratório. O agar lactobacilli MRS não se destina ao uso no diagnóstico de
doenças ou outras condições em seres humanos.
 O agar lactobacilli MRS baseia-se nas formulações de deMan, Rogosa e
Sharpe (MRS). Este meio suporta o crescimento exuberante de lactobacilos de
matéria fecal, lácteos e outras fontes.

O Caldo MRS Lactobacillus é baseado nas formulações de deMan, Rogosa e

Sharpe (MRS).1 Este meio sustenta o crescimento exuberante de lactobacilos
provenientes de fontes orais, fecais, lácteas e outras.

4. MATERIAIS E REAGENTES

4.1. MATERIAIS

 Alça de Driglaski;
 Béquer;
 Bico de bussen;
 Bonequinha;
 Pipeta automática;
 Pipeta Volumétrica;
 Placa de petri;
 Suporte para tubo de ensaio;
 Tubo de ensaio.

4.2. REAGENTES

 Ágar;
 Leite Fermentado;
 Leite Integral;
 Solução salina.

5. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
 Fez-se, inicialmente, a identificação de todos os materiais que seriam
utilizados na aula prática, tais como tubo de ensaio e placas de Petri. Após, pegou-
se diversas alíquotas de uma solução salina já preparada e adicionou-as em tubos
de ensaio distintos.

Pipetou-se, com o auxílio de uma pipeta automática, 1 mililitro de leite integral

e inseriu-se no tubo de ensaio “1” que continha 9 mililitros de solução. Em seguida,
pegou-se 1 mililitro do tubo “1”, e adicionou-se no tubo “2”. Realizou-se esse
processo até que colocar-se 1 mililitro no tubo “4”, do qual foi retirado 1 mililitro que
estava em excesso, já que deve-se conter 9 mililitros em todos.

Realizou-se o mesmo procedimento com o leite fermentado e, posteriormente,

utilizando pipetas graduadas, adicionou-se alíquotas dos leites diluídos, de todos os
tubos, em placas de Petri distintas que já continham o Ágar (ao todo foram 8
placas). Para espalhar-se cada alíquota em determinado placa, necessitou-se
colocar a alça de Drigalsky no bico de Bunsen até atingir o rubro, com o intuito de
esterilizar a mesma, para espalhar-se a solução diluída.

Por fim, inseriu-se todas as placas de Petri em uma estufa com uma
temperatura em torno de 36 a 40 C para promover a proliferação dos
microrganismos e esperou-se 24 horas. Analisou-se, finalmente, os resultados uma
semana depois.

6. RESULTADOS OBTIDOS E DISCUSSÃO

Durante a realização do procedimento, pôde-se observar os seguintes

resultados:

Diluição Seriada
Leite Fermentado Leite Integral
Grau de Diluição Número de Grau de Diluição Número de
Colônias Colônias
 10-1 Incontável 10-1 Nulo
10-2 37 10-2 Nulo
10-3 14 10-3 Nulo
10-4 03 10-4 Nulo

É válido ressaltar que não houve proliferação de microrganismos com uso de

leite fermentado em todas as concentrações. Tal fator é explicado pela alta
temperatura que esse produto é acondicionado em sua produção, assim, torna-se
um meio livre de organismos vivos.

Por outro lado, como mostrado na tabela acima, houve proliferação em todas
as placas com uso de leite fermentado. Além disso, observou-se que quanto mais a
amostra foi diluída, menor foi a concentração de colônias. Outrossim, utilizou-se a
amostra de diluição 10-2 para realizar o cálculo de Unidade Formadora de Colônia,
pois resultou em 37 (unidade entre 25-300 colônias, quantidade estabelecida como
ideal para realização dos cálculos). Veja:

UFC = número de colônias x 10 (fator de correção) x diluição

UFC = 37 x 10 x 102

UFC = 3,7.104 Unidade Formadora de Colônia / Mililitro

7. CONCLUSÃO

Após a realização do experimento, pode-se concluir que a contagem das

colônias foi realizada com sucesso, uma vez que, utilizando o leite fermentado,
pôde-se contá-las.

8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Informe Publicitário. Leite fermentado: você conhece os benefícios dos

lactobacilos?. Disponível em:
<https://www.google.com.br/amp/s/www.minhavida.com.br/amp/alimentacao/
materias/33207-leite-fermentado-voce-conhece-os-beneficios-dos-lactobacilos>.
Acesso em: set. 2019.

KASVI. Preparo de soluções em laboratório: concentração, fator de diluição e

diluição seriada. Disponível em: <https://kasvi.com.br/preparo-de-solucoes-
laboratorio-concentracao-fator-diluicao-seriada/>. Acesso em: set. 2019.

NEOGEN. Agar Lactobacilli MRS. Disponível em:

<https://foodsafety.neogen.com/pt/lactobacilli-mrs-agar>. Acesso em: set. 2019.

STUPPIELLO, B. Leite: benefícios, nutrientes e importância de consumir.

Disponível em:
<https://www.google.com.br/amp/s/www.minhavida.com.br/amp/alimentacao/tudo-
sobre/18018-leite>. Acesso em: set. 2019.