Curso: Biologia

Disciplina: Bioquímica

PL29 Ano letivo: 2020/2021

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Diálise

Resumo:

Esta experiência foi realizada com o objetivo de aplicar uma técnica de separação de moléculas
(diálise), através de uma membrana semipermeável, de modo a separá-las. Para tal, utiliza-se
uma manga de diálise (membrana semipermeável) e dentro desta, foi colocada uma solução
com moléculas de diferentes tamanhos. Finalmente, para comprovar a saída das moléculas de
menor dimensão através da manga por difusão, segundo o gradiente de concentração, são
aplicados três testes às amostras, utilizando biureto, ninidrina e nitrato de prata para verificar a
existência de albumina, glicina e iões cloreto, respetivamente. Deste modo, conclui-se que a
membrana é semipermeável para as moléculas pequenas e impermeável para as grandes.

Materiais e reagentes:

• Manga de diálise (previamente fervida numa solução aquosa de EDTA);

• Solução de NaCl 5M;

• Solução de uma proteína (caseína ou albumina) a 1%;

• Solução de um aminoácido (por exemplo, glicina) a 1%;

• Solução de nitrato de prata 0.5M;

• Solução de ninidrina;

• Reagente do biureto;

• Balança;

• Gobelé;

• Pipeta com pompete;

• Fio.
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Métodos:

Para esta experiência, escolheram-se três reagentes diferentes: biureto, ninidrina e nitrato de
prata para a identificação nas soluções de albumina (proteína), glicina (aminoácido) e cloreto de
sódio, respetivamente. Preparámos duas membranas, uma com solução A, que continha
albumina e cloreto de sódio, e uma outra com a solução B, que continha glicina e albumina. Para
tal, começa-se por torcer uma das pontas do saco de diálise, dando um nó com um fio. De
seguida, colocamos a solução dentro do saco e voltamos a torcer e a dar um nó na outra ponta
do saco. Ambas, foram colocadas em gobelets individuais com água destilada. Após quinze
minutos, retirámos amostras da solução exterior do saco de diálise de A e de B. Passados
novamente mais 15 minutos (trinta minutos no total) repetimos o processo. Por fim, retirámos
uma amostra do interior de cada um dos sacos de diálise. Seguidamente, efetuámos diferentes
testes, de modo a averiguar a presença das diferentes moléculas nas soluções. Isto foi-nos
possível porque: o teste do biureto quando está na presença de uma proteína, origina um
complexo violeta; o teste da ninidrina na presença do aminoácido origina um complexo púrpura;
e finalmente, o teste do nitrato de prata que na presença de iões cloreto forma um precipitado
branco de cloreto de prata.

Apresentação dos resultados:

O tubo 1,2 e 3 são o controlo negativo (sem reação)

e os restantes positivos (com reação).

Tabela 1- Resultados das reações de controlo.

Tabelas 2 e 3 - Resultados obtidos na determinação da proteína,

aminoácido e cloreto de sódio ao longo do tempo
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Discussão de resultados:

Após analisar os resultados obtidos das experiências realizadas, podemos concluir que estes
foram expectáveis em todos os tubos.

Nos tubos de ensaio números 7,9,13 e 15 (que contêm o reagente biureto), não foram detetadas
proteínas no meio exterior à membrana de diálise, porque a solução não alterou a sua cor.
Concluímos assim, que não ocorreu reação de biureto (devido à inexistência da proteína).

Esta situação sugere que as proteínas por se tratarem de macromoléculas, ou seja, moléculas
de grandes dimensões ficaram retidas dentro do saco de diálise.

Esta hipótese é confirmada nos tubos de ensaio 11 e 17 (onde a proteína se encontra no interior
da manga de diálise), pois o teste foi positivo, o que demonstra que a proteína reagiu com o
biureto, porque a solução mudou a sua coloração azul turquesa para violeta.

Já nos testes para detetar a presença de iões cloreto e aminoácidos (glicina), os resultados foram
sempre positivos, porque ocorreu reação, devido ao nitrato de prata ter reagido com os iões
cloreto, e por sua vez a ninidrina reagir com os aminoácidos.

Isto foi possível, tanto no interior como no exterior da manga de diálise porque os iões cloreto
e os aminoácidos conseguem atravessar os poros da membrana de diálise por serem partículas
mais pequenas comparativamente a estes.

Notou-se uma intensificação dos resultados, ou seja, um aumento da concentração dos

compostos testados ao longo do tempo.

Se esta experiência tivesse sido prolongada, iríamos observar um equilíbrio destes compostos,
dentro e fora da membrana, visto que estes são capazes de atravessar a mesma. Contudo, este
equilíbrio será atingido em períodos de tempo diferentes, e tal é observável também nos
resultados obtidos. Os aminoácidos apresentam maiores dimensões que os iões cloreto e por
isso, os iões cloreto iriam atingir a isotonia mais rapidamente do que os aminoácidos.

Deste modo, os testes de controlo negativo permitiram confirmar que não existiam as moléculas
que procurávamos identificar no meio em que se colocaram os sacos A e B, impedindo assim,
que os resultados finais das experiências ficassem comprometidos.

Ao contrário os grupos de controlo positive como esperado, verificaram a presença de albumina,

glicina e cloreto de sódio, pois reagiram positivamente aos testes de identificação qualitativa
das respetivas substâncias.

Estes grupos permitiram-nos através de comparação, verificar se realmente se deu a passagem

das substâncias em estudo para fora da membrana nos restantes tubos.
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Transporte ativo - transporte contra o gradiente de concentração, de uma zona menos

concentrada para a mais concentrada envolvendo gastos de energia. A membrana das células
tem a capacidade de fazer o transporte ativo para manter as diferenças de concentrações entre
meios, para permitir que a célula se mantenha viva.

Questões a desenvolver:

1. De que modo, se poderia confirmar experimentalmente que existe maior quantidade de glicina e/ou
albumina nos tubos positivos com a indicação (++) relativamente aos que apresentam (+)?

R: Poder-se-ia confirmar experimentalmente, através da espectroscopia de absorção. Este é um

método usado para inferir a concentração desconhecida de um dado composto. A energia da
radiação eletromagnética na gama do ultravioleta-visível (UV-Vis) é suficiente para promover a
excitação eletrónica das moléculas. A quantidade de radiação absorvida por uma dada
substância designa-se por absorvância. Sabendo a sua absorvância para um comprimento de
onda máximo, o comprimento da célula usada e o coeficiente de absorção podemos, através da
lei de Lambert-Beer, chegar à concentração do composto em questão.

A partir deste método é possível obter a concentração das soluções de glicina com uma
intensidade (++) e com intensidade (+). Uma intensidade (++) significa que a concentração é
maior do que numa solução com intensidade (+).

Uma vez obtidas estas concentrações, e tendo em conta que nos são facultados os valores dos
volumes, é possível calcular a quantidade de glicina em cada solução. Obtidas as quantidades é
fácil compará-las e verificar que a solução com intensidade (++) tem de facto mais quantidade
de glicina do que a solução com intensidade (+). Quanto à albumina, não é possível fazer uma
comparação de intensidade, porque esta só se encontra dentro da manga, não passando pela
membrana por se tratar de uma proteína.

2. Como poderia atuar experimentalmente, de modo a obter uma reação negativa para o teste do nitrato
de prata no interior da manga de diálise?

O teste do nitrato de prata é utilizado para detetar o cloreto de sódio. Sendo este, uma molécula
pequena é capaz de atravessar a membrana para o meio exterior. O cloreto de sódio muda do
meio hipertónico para o meio hipotónico até atingir a isotonia.

Para que o teste nitrato de prata seja negativo, é necessário que a concentração de cloreto de
sódio, dentro do saco de diálise, seja nula ou muito baixa, para que assim não haja reação. É
necessário para que isto aconteça que ocorram sucessivas mudanças de solvente, pois isso vai
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permitir a continua passagem do cloreto de sódio para o meio exterior e diminuir a concentração
dentro da manga. Estas mudanças de solvente servem para que o meio exterior da manga volte
a ficar hipotónico, de forma que continue a haver transporte simples.

3. Dê um exemplo da utilização deste procedimento no laboratório ou na área da saúde.

Um exemplo, deste procedimento na área da saúde é a diálise peritoneal. Esta diálise é utilizada
em doentes com insuficiência renal.

Bibliografia

• Simões, J.A.M. et al., “Guia do Laboratório de Química e Bioquímica”, Lidel, 2ª edição

revista, Lisboa, 2008.

• Brandler, B., Ingersoll, B., Lewandowski, J., “Writing biology laboratory reports”,
http://writing2.richmond.edu/training/project/biology/biology.html

• APA Style (6th Edition) retirado de http://writing2.richmond.edu/writing/wweb/apadocu.html

• Jeffrey H. Kahn, “Sample APA Paper for Students Interested in Learning APA Style”, retirado de
http://writing2.richmond.edu/writing/wweb/apadocu.html

• Atkins, P. W., & Jones, L. (n.d.). Chemical Principles: The Quest for Insight. Retrieved

Alunos:

José Abreu (56164)

Maria Loureiro (56157)

Mónica Monteiro (55281)

Pedro Roneberg (57094)

Data de entrega do relatório: 01/03/2021