CURSO DE ENFERMAGEM

LABORATÓRIO DE QUÍMICA/BIOQUÍMICA

Procedimento Operacional Padrão - 03 DATA:25/04/2023

TÍTULO:
IDENTIFICAÇÃO DE CARBOIDRATOS

DISCIPLINA:BIOQUÍMICA
TURMA:2° período TURNO: noite

1. OBJETIVOS

 Executar testes qualitativos para reconhecimento de glicídios;

 O significado dos seguintes testes: iodo, Benedict, Seliwanoff, Molish;
 Aplicar os testes acima para identificar três glicídios desconhecidos.
2. PROCEDIMENTO

Para esta aula prática o estudante deverá preparar antes de começar a mesma o quadro geral de
reações de glicídio que consta no Relatório. Quando houver dúvida num resultado de reação, deve-
se realizar o mesmo teste empregando a solução do glicídio padrão suposto. Não há necessidade de
se medir com pipetas os reagentes fornecidos. Usar gotas, considerando que 1 mL = 20 gotas. Para as
Soluções de glicídio desconhecidas, tomar volumes aproximados.
I - TESTE DE IODO
01. Colocar em tubo de ensaio + 1 ml da solução de glicídio a ser identificado;
02. Adicionar 1 gota da solução lugol. O aparecimento de coloração azul, indica reação positiva;
03. Ler a interpretação.
II - TESTE DE BENEDICT
01. Colocar em tubo de ensaio + 1 ml da solução do glicídio a ser identificado;
02. Adicionar 1 ml do reagente de Benedict e misturar;
03. Aquecer, com agitação e diretamente, na chama. Deixar em ebulição por + 1 minuto;
04. Observar a solução. A mudança de coloração (azul para verde até vermelho tijolo) e/ou formação
de precipitado (cor de tijolo) indica reação positiva;
05. Ler a interpretação.
III - TESTE DE SELIWANOFF
01. Colocar em um tubo de ensaio + 1 ml da solução do glicídio a ser identificado;
02. Colocar em um tubo + 0,5 ml da solução de frutose (C = controle);
03. Acrescentar a cada um dos tubos 1 ml de reagente de Seliwanoff e misturar;
04. Colocar os tubos num banho de água em ebulição;
05. Observar periodicamente. No momento em que a coloração do tubo C ficar vermelha, retira-se os
tubos do banho;
06. Comparar o tubo D com o controle. O aparecimento da cor vermelha indica reação positiva;
07. Ler a interpretação.
IV - TESTE DE MOLISH
01. Colocar em um tubo de ensaio seco + 1 ml da solução do glicídio a ser identificado;
02. Acrescente 3 gotas da solução alcoólica de alfa-naftol e misturar;
03. Gotejar + 2 ml de H2SO4 concentrado pela parede do tubo inclinado, de modo que os dois líquidos
não se misturem. Voltar, cuidadosamente, o tubo à posição vertical;
04. Deixar em repouso. O aparecimento de estrias ou de anel roxo na superfície da separação dos
dois líquidos indica reação positiva;
05. Ler a interpretação.
RELATÓRIO Preencher a tabela abaixo, marcando os testes positivos com (+) e os negativos com (-)

3. MATERIAL UTILIZADO
tubos de ensaio e suporte;
1 bico de bunsen;
1 tripé;
1 tela;
1 copo de béquer;
1 pinça para tubo de ensaio;
1 bastão de vidro fino;
lâmina e microscópio.
Soluções padrões de glicídios (ver relatório);
Soluções de 3 glicídios desconhecidos;
Solução de lugol: 0,5 g iodo metálico, 1,0 g iodeto potássio, dissolvidos em 100,0 mL de água;
Regente de Benedict: 17,3 g sulfato de cobre, 173,0 g citrato de sódio e 100,0 g carbonato de sódio
anidro dissolvidos em 1.000,0 mL de água;
Reagente de Seliwanoff: 0,05 g ressorcinol dissolvidos em 100,0 mL HCl + 6 N;
Solução alcoólica de alfa-naftol a 1%;
H2SO4 concentrado.
4. DEFINIÇÕES
Este experimento pode servir de modelo para caracterizá-1o dos constituintes de material biológico
por meio de um conjunto de reações qualitativas. Pelo sistema de identificação e eliminação
progressiva pode-se dizer, ao final do trabalho prático, quais foram os glicídios fornecidos dentre os
seguintes: glicerose, glicose, frutose, lactose, manose, sacarose e amido, por exemplo.
01. O teste de iodo serve para diferenciar homopolissacarídeos dos outros glicídios. Os
homopolissacarídeos, do tipo amido, formam com o iodo um complexo (produto de adsorção)
colorido. Pela coloração resultante pode-se identificar, por exemplo: azul-amido; avermelhado-
glicogênio; roxo avermelhado-dextrinas, incolor-inulina.;
02. O teste de Benedict serve para diferenciar glicídios redutores de não redutores. Glicídios que
tenham 1 carbono anomérico livre dão reações positivas, pois podem sofrer oxidação. A solução de
Benedict contém um complexo de citrato e cobre. Em presença de açúcar redutor o Cu +2 (azul) é
reduzido a Cu+, que é menos solúvel em solução alcalina, e precipita sob a forma de Cu 2O (amarelo
ou vermelho). O açúcar, por sua vez, é oxidado, quebrado e polimerizado na solução.
03. O teste de Seliwanoff serve para diferenciar cetoses (por exemplo: frutose, sacarose) de aldoses
(glicose, lactose). Cetoses, quando em solução ácida e aquecimento, formam composto 4-
Hidroximetil furfural que reage com o resorcinol (reagente de Seliwanoff) dando um produto de cor
vermelha, cuja estrutura não é bem conhecida.
04. O teste de Molish serve para diferenciar açúcares de 5 ou mais átomos de carbono dos de menor
número de átomos de carbono. Os de maior número de carbono (5 ou mais), sob a ação desidratante
ao H2SO4, transformam-se em furfural ou Hidroximetil furfural. Estes reagem com os fenóis (no caso,
o -naftol) dando origem a um composto marron-avermelhado. Para o bom êxito desta reação é
necessário que o tubo de ensaio esteja bem seco e que haja a menor agitação possível.

5. BIBLIOGRAFIA

COMPRI-NARDY, Mariane B., STELLA, Mércia Breda, OLIVEIRA, Carolina de. Práticas de Laboratório
de Bioquímica e Biofísica. Guanabara Koogan.
ROSA, Gilber, GAUTO, Marcelo, GONÇALVES, Fábio. Química Analítica: Práticas de Laboratório – Série
Tekne. Bookman, 2013.
DIAS, Silvio Pereira, VAGHETTI, Júlio Pacheco, LIMA, Éder Cláudio, BRASIL, Jorge Lima. Química
Analítica: Teoria e Prática Essenciais. Bookman, 2016.
XAVIER, Ricardo M., DORA, José Miguel, BARROS, Elvino. Laboratório na Prática Clínica, 3ª edição.
ArtMed, 2016.