_______________________________________________ ____________________________________________ UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MATO GROSSO DO SUL UNIDADE DE ENSINO DE DOURADOS CURSO DE LICENCIATURA EM QUMICA

CHIRLEY VANESSA BOONE DAIANE CRISTINA MARIANO ALEGRE NAI FERNANDA SANCHES DE OLIVEIRA RAQUEL DE OLIVEIRA SILVA

TESTE DE CARACTERIZAO E IDENTIFICAO DE CARBOIDRATOS

Dourados - MS Maio - 2011 1

________________________________________________ ____________________________________________ UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MATO GROSSO DO SUL UNIDADE DE ENSINO DE DOURADOS CURSO DE LICENCIATURA EM QUMICA

CHIRLEY VANESSA BOONE DAIANE CRISTINA MARIANO ALEGRE NAI FERNANDA SANCHES DE OLIVEIRA RAQUEL DE OLIVEIRA SILVA

TESTE DE CARACTERIZAO E IDENTIFICAO DE CARBOIDRATOS

Relatrio

apresentado

como

exigncia parcial da disciplina de Bioqumica do 4 ano do Curso de Licenciatura pela em Qumica, professora ministrada Lucinete.

Dourados - MS Maio - 2011 2

SUMRIO

1. INTRODUO

Os carboidratos perfazem a mais abundante classe de biomolculas da face da Terra. Sua oxidao o principal meio de abastecimento energtico da maioria das clulas no fotos- sintticas. Alm do suprimento energtico, os carboidratos atuam como elementos estruturais da parede celular e como sinalizadores no organismo. (FRANCISCO JUNIOR, 2008) Os carboidratos so acetais ou cetais poliidroxlicos com a frmula emprica (CH2)n'. Os carboidratos simples, ou acares, mais abundantes so as pentoses (C5H10O5) e as hexoses (C6H12O6). Os acares possuem um ou mais tomos assimtricos de carbono e, portanto, podem existir na forma de estereoismeras; a maioria dos acares de ocorrncia natural, como, por exemplo, a ribose, a glucose, a frutose e a manose pertencem s sries D. Acares com cinco ou mais tomos de carbono podem ocorrer em duas formas anomricas, que so hemiacetais cclicos, estereoisomricos, formados entre um grupo hidroxlico do acar e o grupo carbonlico. Os anis com cinco e seis elementos, assim formados, so denominados

furanoses e piranoses, respectivamente. As piranoses podem ocorrer nas conformaes em "barco" (ou canoa) e em "cadeira" (LEHNINGER, 1976). Os glicosdeos anomricos resultam a partir da reao dos pentoses e hexoses com lcoois. Os grupos hidroxlicos livres dos acares podem ser completamente acetilados ou metilados; seus anis tambm podem ser clivados pelo cido peridico. Os acares podem ser reduzidos a acares-lcoois; eles podem ser oxidados, no carbono aldedico, a cidos aldnicos, no grupo hidroxlico primrio, a cidos urnicos e, em ambos os tomos de carbono terminais, a cidos aldricos (LEHNINGER, 1976). Os dissacardeos consistem em dois monossacardeos unidos em ligao glicosdica. A maltose contm dois resduos de glucose em ligao (1 4), a celobiose contm dois resduos de glucose, a lactose contm galactose e glucose, e a sacarose contm glucose e frutose. Na sacarose, os tomos anomricos de carbono de ambos os monossacardeos esto ligados entre si e no podem sofrer oxidao (LEHNINGER, 1976). Os polissacardeos (glicanos) so classificados, quimicamente, como homopolissacardeos, os quais contm uma nica unidade monossacardica repetitiva (como, por exemplo, o glicognio, que um polmero da glucose), e como heteropolissacardeos, os quais contm duas ou mais unidades monossacardicas repetitivas (como, por exemplo, o cido hialurnico, o qual um polmero de cido Dglucurnico e N-acetil-D-glucosamina, alternados). Eles tambm so classificados funcionalmente como polissacardeos de reserva ou polissacardeos estruturais. Os polissacardeos de reserva mais importantes so o amido e o glicognio, que so polmeros ramificados de glucose, com ligaes (1 4) nas cadeias, e ligaes (1

6) nos pontos de ramificao. O polissacardeo estrutural mais importante a

celulose, com unidades D-glucose em ligao (1 4) (LEHNINGER, 1976). As paredes das clulas bacterianas contm peptidoglicanos (murenas) que so heteropolissacardeos de cido N-acetlmurmico e N-acetilglucosamina, com peptdeos curtos entrecruzados contendo D-aminocidos. As paredes celulares dos vegetais superiores contm celulose, outros polissacardeos, e protenas. As clulas animais possuem envoltrios celulares flexveis (glicoclix) contendo mucopolissacardeos cidos acoplados a protenas. Existem trs classes de glicoprotenas distintas pelos resduos de aminocidos, nos quais esto ligadas as cadeias oligossacardicas laterais. (LEHNINGER, 1976). 4

2. OBJETIVO
Caracterizar a presena de carboidratos em material biolgico.

3. MATERIAIS E REAGENTES
3.1 Materiais 17 tubos de ensaio; Pipeta volumtrica de 1ml; Pipeta volumtrica de 2 ml; 1 bquer; Banho- Maria; Grade. 3.2 Reagentes Frutose 1%; Trealose 1%; Glicose 1%; Amido 1%; Sacarose 1%; Reagente de Molisch alfa-naftol a 5% em lcool etlico 95%; Reagente de Seliwanoff resorcinol a 0,03% em cido clordrico a 3 mol/L; Reagente de Benedict; Soluo de lugol iodo a 5% em iodeto de potssio a 10%; cido sulfrico; Hidrxido de sdio 2,5 mol/L (10%); Etanol.

4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
4.1 Teste de Molisch Tubo 1 pipetou-se 2 ml da soluo de glicose; Tubo 2 pipetou-se 2 ml da soluo de sacarose; Tubo 3 pipetou-se 2 ml da soluo de amido; Tubo 4 pipetou-se 2 ml de gua. Em cada tubo adicionou-se 2 gotas do reativo de Molisch e misturou-se. Em seguida, adicionou-se 1 ml de cido sulfrico, lentamente pela parede do tubo. A reao positiva quando forma-se uma regio de cor violeta na interfase. 4.2 Teste de Seliwanoff Tubo 1 pipetou-se 0,5 ml da soluo de glicose; Tubo 2 pipetou-se 0,5 ml da soluo de frutose; Tubo 3 pipetou-se 0,5 ml da soluo de sacarose; Tubo 4 pipetou-se 0,5 ml de gua. Em cada tubo adicionou-se 2 ml do reativo de Seliwanoff. Aqueceu-se em banho-maria fervente por um minuto e observou-se o resultado. Em seguida, aqueceu-se por quatro minutos e observou-se o resultado. 4.3 Teste de Benedict Tubo 1 pipetou-se 1 ml da soluo de glicose; Tubo 2 pipetou-se 1 ml da soluo de amido; Tubo 3 pipetou-se 1 ml da soluo de sacarose; Tubo 4 pipetou-se 1 ml da soluo de trealose. Em cada tubo adicionou-se 1,5 ml do reagente de Benedict. Aqueceu-se em banhomaria fervente por cinco minutos e observou-se o resultado. A reao positiva indicada pela formao de precipitado vermelho-tijolo.

4.4 Teste de iodo para amido A) Tubo 1 pipetou-se 1 ml da soluo de glicose; Tubo 2 pipetou-se 1 ml da soluo de amido; Tubo 3 pipetou-se 1 ml de gua. Adicionou-se em cada tubo uma gota de lugol e anotou-se o resultado. B) Efeito da temperatura Aqueceu-se o tubo 2 (do teste anterior) sem ferver e observou-se o resultado. Em seguida, resfriou-se o tubo e observou-se o resultado. C) Efeito do meio alcolico Em um tubo de ensaio pipetou-se 1 ml da soluo de amido e adicionou-se 1 ml de etanol e uma gota de lugol. Observou-se o resultado. D) Efeito do meio alcalino Em um tubo de ensaio pipetou-se 1 ml da soluo de amido e adicionou-se 1 ml de hidrxido de sdio 2,5 mol/L (10%) e uma gota de lugol. Observou-se o resultado.

5. RESULTADOS E DISCUSSO
5.1. Reao de Molish: Quando um monossacardeo tratado com cido concentrado, ele se desidrata. Os oligossacardeos ou polissacardeos so primeiro hidrolisados em seus monossacardeos constituintes, que so ento desidratados. As pentoses do como produto final o furfural, e as hexoses o hidroximetilfurfural, que na presena de cido, reage com alfanaftol (composto fenlico) formando produto de cor violeta. Essa reao considerada geral para os carboidratos. A tabela 1 mostra o resultado obtido do teste realizado.

Tabela 1: resultados do teste de molisch. Tubo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Amostra Glicose Sacarose Amido gua Cor inicial Incolor Incolor Incolor Incolor Cor final Azul/cinza Marrom Roxo Amarelo

Os monossacardeos mais importantes so os formados por cinco ou seis tomos de carbono (pentoses e hexoses, respectivamente). Por serem molculas muito ricas em grupamentos hidroxila (-OH), os monossacardeos podem ser facilmente desidratados por ao de cidos fortes concentrados, como o cido sulfrico (H2SO4). O cido rompe facilmente as ligaes glicosdicas presentes em molculas de polissacardeos, quebrando-os e fornecendo seus monossacardeos. Esses, por sua vez, so desidratados e podemos ter como produto: o furfural, quando o monossacardeo desidratado for uma pentose, e o hidroximetilfurfural (HMF), quando for uma hexose. Tanto o furfural quanto o HMF so substncias incolores, impedindo que a reao seja visualizada. Para resolver esse problema, adiciona-se um composto fenlico ao meio (alfa-naftol, conhecido como reativo de Molisch). O fenol reage como os produtos incolores, e provoca o aparecimento de um anel de colorao lils. (EXPERIMENTOS DE BIOQUMICA - www.fcfar.unesp.br) No experimento realizado no observou a formao do anel lils, pois ao adicionar o reativo de Molisch agitou-se o tubo, que mascarou a reao, o teste negativo para gua, pois este no um carboidrato.

5.2. Reao de Seliwanoff: Distingue cetohexoses de aldohexoses. Nas condies do teste, as cetohexoses transformam-se nos derivados do furfural mais rapidamente que as aldohexoses. Em conseqncia, nas referidas condies e sendo curto o tempo de incubao, o resorcinol forma um produto colorido (vermelho) apenas com as cetohexoses. No entanto, prolongando-se o tempo de incubao, as aldoses reagem de maneira semelhante. tabela 1 mostra o resultado obtido do teste realizado. Tabela 2: resultados do teste de Seliwanoff Tubo Tubo 1 Tubo 2 Amostra Glicose Frutose Aps 1 minuto Incolor Incolor Aps 4 minutos Incolor Rosa 8 A

Tubo 3 Tubo 4

Sacarose gua

Incolor Incolor

Rosa claro Incolor

Esse teste permite diferenciar aldoses de cetoses que, sob ao do HCl, so transformadas em derivados de furfural que se condensam com o resorcinol, formando um produto vermelho de composio incerta. A reao com cetose rpida e mais intensa pela maior facilidade de formao do derivado furfural. Logo, a frutose reage positivamente. Caso a sacarose sofra hidrlise prvia, ela tambm reagir positivamente devido liberao da frutose (FRANCISCO JUNIOR, 2008). O teste acontece mais rapidamente para cetoses que para aldoses, por esse motivo que a colorao do tubo 2 foi mais intensa, pois a frutose uma cetose, j na sacarose a cor se apresentou menos intensa, pois a sacarose constituda por uma molcula de glicose e outra de frutose, sendo uma cetose e uma aldose. 5.3. Reao de Benedict: Identifica acares redutores. Os carboidratos redutores possuem grupos aldedos ou cetonas livres ou potencialmente livres, sofrendo oxidao em soluo alcalina de ons metlicos como o cobre. Os ons cpricos so reduzidos pela carbonila dos carboidratos a ons cuprosos, formando o xido cuproso que tem cor vermelho tijolo. A tabela 3 mostra os resultados do teste. Tabela 3: resultados do teste de Benedict. Tubo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Amostra Glicose Amido Sacarose Trealose Colorao final Vermelho-tijolo Azul lmpido Azul lmpido Azul lmpido

O teste de Benedict baseado na reduo do Cu2+ a Cu+ devido ao poder redutor das carbonilas em soluo alcalina. O on cuproso (Cu+) produz o Cu2O, composto de cor vermelha. Todos os monossacardeos reagem positivamente, logo, a glicose. Os dissacardeos dependem da presena de uma extremidade redutora, fato que no ocorre no caso da sacarose. Todavia, a sacarose tambm pode levar a resultados positivos caso sofra hidrlise prvia (FRANCISCO JUNIOR, 2008).

5.4. Teste de iodo para amido O amido formado por dois polissacardeos, amilose e amilopectina. A amilose interage com o iodo, dando uma colorao azul intensa. A amilopectina interage como o iodo dando colorao avermelhada.

Tubo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Amostra Glicose Amido gua

Colorao final Amarelo Azul-violeta Amarelo

Os dois fatores que determinam o desenvolvimento de colorao quando o iodo interage com os polissacardeos so o comprimento e a ramificao da cadeia sacardea. A colorao desenvolvida devido ao aprisionamento do iodo no interior da cadeia de amilose. Na presena do amido e de ons iodeto (I-), as molculas de iodo formam cadeias de I6 que se alocam no centro da hlice formada pela amilose contida no amido (Harris, 2001). A formao desse complexo amilose-I6 responsvel pela cor azul intensa, engendrada, por sua vez, a partir da absoro de luz na regio do visvel das cadeias de I6 presentes dentro da hlice da amilose. Quanto maior a ramificao da cadeia, menos intensa ser a colorao desenvolvida, visto que a interao entre o iodo e a cadeia ser menor (FRANCISCO JUNIOR, 2008). Os testes foram negativos para glicose e gua, pois no so polissacardeos. Efeito da temperatura: Ao aquecer o tubo 2 (amido) do teste de iodo, que apresentava colorao azulvioleta, continuou com a mesma colorao, ao momento que resfriou a soluo permaneceu com a colorao inicial.

Efeito do meio alcolico Observou um turvamento da soluo ao adicionar etanol. Com a adio de lugol verificou-se mudana de colorao, a soluo passou a ser precipitado marrom.

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Efeito do meio alcalino O teste feito em meio alcalino nenhuma alterao visvel foi observada, a soluo permaneceu incolor.

6. CONCLUSO
Aps a realizao da prtica, podemos concluir que os testes realizados so especficos para o que se quer identificar. Carboidratos (Molisch), diferenciao de pentoses e hexoses (Seliwanoff), identificao de accares redutores (Benedict) e a reao para identificao de amido (Lugol).

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7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
LEHNINGER, A. L. Bioqumica: traduo da 2 edio americana, superviso: Jos Reinaldo Magalhes. Volume 1. So Paulo: Edgard Blcher, 1976. HARRIS, D.C. Anlise qumica quantitativa. Trad. C.A.S Riehl e A.W.S Guarino. 5 ed. Rio de Janeiro: LTC, 2001. FRANCISCO JUNIOR, W. E. Carboidratos: Estrutura, Propriedades e Funes. Qumica Nova na Escola. n. 29, p. 8-13, 2008. EXPERIMENTOS DE BIOQUMICA, disponvel em:

http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/introducao_carboidratos/introd ucao_ch.htm, acessado em 15/05/2011.

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