Suplementação com

Imunoestimulante (Defensyn®)
na melhora clínica de cães com
Leishmaniose Visceral
Luana Dias de Moura (coordenadora da pesquisa)
MV, MSc, Doutoranda em diagnóstico
e terapêutica na Medicina Veterinária

König do Brasil Ltda

Estrada Municipal, 889
Rod. Castelo Branco Km 68,5
Bairro Dona Catarina – 18120-000
Mairinque, SP
Tel / Fax 55 (11) 4708-1867
Autores
Luana Dias de Moura, Médica Veterinária, Mestra, UFPI;
Naílson de Jesus Melo; Graduando em Medicina Veterinária, UFPI;
Leopoldo Fabrício Marçal do Nascimento; Doutor em Ciência Animal;
Maria do Socorro Pires e Cruz, Médica Veterinária, Doutora em Doenças Tropicais, UFPI;
Mariana Kiyomi Maruno, Zootecnista, Doutora, Departamento Técnico, König do Brasil;
André de Almeida Prazeres Gonçalves, Médico Veterinário, Gerente Nacional, König Brasil.

Departamento Técnico de Nutrição

nutricao@konigbrasil.com.br
Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral
1. INTRODUÇÃO
A nutrição de cães e gatos tem se comportado de
forma semelhante à nutrição humana, observada através
da crescente incorporação de ingredientes funcionais nos
alimentos. O manejo nutricional tem sido uma importante
ferramenta no auxílio do tratamento de diversas patologias,
por meio da inclusão de alimentos nutracêutico na dieta dos
animais (BORGES, 2013).
A imunomodulação através da dieta ocorre de
duas formas. A primeira, busca componentes da dieta que
atuem diretamente nos patógenos ou na microbiota do trato
gastrointestinal e a segunda, exerce efeitos indiretos sobre
os patógenos da microbiota por terem como alvo as células
intestinais e/ou células imunes dos hospedeiros (ZAINE, 2014).
Dentre as patologias que podem ser auxiliadas pelos
alimentos nutracêuticos, encontra-se a leishmaniose visceral
canina (LVC), conhecida também calazar ou kalazar uma
antropozoonose causada por protozoários intracelulares
do gênero Leishmania e que acometem canídeos silvestres e
domésticos (SCHIMMING et al., 2012). Doença considerada
imunomediada, visto que o parasita influencia a resposta
imune do hospedeiro.
Alimentos nutracêuticos com ꞵ-glucanos e
α-mananos podem auxiliar no tratamento da LVC por
modular o sistema imune do hospedeiro através de suas
interações específicas com várias células imunocompetentes,
indutoras na imunidade humoral e mediada por células
(MEDZHITOV & JANEWAY JUNIOR, 2000).
1.1 LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
A leishmaniose é uma doença endêmica com
maior incidência em países, localizados em regiões
tropicais e subtropicais. No Brasil, as principais áreas
endêmicas da Leishmaniose Visceral (LV) possui registro
de casos em 21 estados da Federação, sendo as principais
áreas endêmicas localizadas na região nordeste (PORTAL
DA SAÚDE, MS, 2015).
A LV é causada por um protozoário do gênero
Leishmania pertencente à família Trypanosomatidae e à or-
dem Kinetoplastida. Estes protozoários apresentam uma
única mitocôndria rica em material genético (kDNA), deno-
minado quinetoplasto (GRIMALDI JÚNIOR &TESH,
1993). O agente etiológico em nosso país é a Leishmania in-
fantum chagassi (GONTIJO & MELO, 2004).
A transmissão ao hospedeiro ocorre durante a pi-
cada de fêmeas hematófagas, as quais pertencem à ordem
díptera, família Psychodidade, subfamília Phlebotominae,
espécie Lutzomya longipalpis e L. cruzi, conhecidos po-
pularmente como mosquito-palha e birigui (GONTIJO
& MELO, 2004).
As fêmeas flebotomíneas infectadas contaminam o
hospedeiro vertebrado ao realizarem seu repasto sanguíneo,
liberando as formas promastigotas (infectante) do parasita
juntamente com a saliva. Na epiderme do hospedeiro,
estas formas são fagocitadas por células do sistema
mononuclear fagocitário. No interior dos macrófagos, as
formas promastigotas perdem o flagelo, diferenciando-
se em amastigotas que se multiplicam intensamente até
o rompimento dos mesmos, ocorrendo a liberação destas
formas que serão fagocitadas por novos macrófagos
num processo contínuo, ocorrendo a disseminação
hematogênica para outros tecidos (figura 1) ricos em células
do sistema nuclear fagocitário, como linfonodos, fígado,
baço e medula óssea (COUTO et al., 1998).
A infecção do vetor ocorre quando as fêmeas, ao se
alimentarem do sangue de mamíferos infectados, ingerem
macrófagos parasitados na forma amastigota da Leishma-
nia. No trato digestivo ocorre o rompimento dos macrófa-
gos liberando essas formas. Ocorre, então, a reprodução por
divisão binária e sua rápida diferenciação em formas flage-
ladas denominadas promastigotas (formas infectantes). O
ciclo do parasita no inseto se completa em torno de 72 ho-
ras (SANTA-ROSA & OLIVEIRA, 1997). Existem indí-
cios que o período de maior transmissão da leishmaniose
ocorra durante ou logo após a estação chuvosa, quando há
um aumento da densidade populacional dos insetos, sendo
a maioria de hábito noturno (ALMEIDA et al., 2010).
Os hospedeiros vertebrados da LV são animais sel-
vagens como roedores, tatus, raposas e preguiças e, no am-
biente doméstico, os cães, gatos e o próprio homem. Neste
ambiente, o cão (Canis familiaris) é considerado principal
reservatório do parasita, tendo assim, papel fundamental
no ciclo hospedeiro / reservatório / vetor (DANTAS-TOR-
RES, 2009). Por essa razão, é considerado um importante
elo na transmissão da leishmaniose humana (SILVA et al.,
2007; VERÇOSA et al., 2008).
Os animais, uma vez infectados, podem permanecer
em um quadro infeccioso assintomático ou podem apresen-
tar uma doença progressiva com sinais clínicos variados. Os
sinais clínicos mais frequentes em cães com LV são linfade-
nopatia, lesões do focinho ou orelha (úlceras), apatia, ano-
rexia, perda de peso, mucosas pálidas, onicogrifose, lesões
cutâneas, hemorragia, despigmentação do focinho ou lábio,
alopecia, blefarite e ceratoconjuntivite (REIS et al., 2006, SIL-
VA et al., 2017). Em cães, a pele é o órgão que mais comu-
mente apresenta sinais de LV, e a presença do parasita na pele
deste reforça o importante papel na transmissão e no ciclo do
parasita. (QUEIROZ et al., 2010).
Considerando que a LVC é uma doença imuno-
mediada, onde o parasita influencia a resposta imune do
hospedeiro, observa-se que as lesões sistêmicas estão di-
retamente relacionadas com a resposta imune do hospe-
deiro e a evolução da doença (BARBIERI, 2006).
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Amastigotas intracelulares

Fagolisossoma
Proliferação

Absorção

Lise

Macrófago
Re-invasão

Adesão

Refeição sanguínea Refeição sanguínea

(flebótomo) (flebótomo)

Amastigotas
Promastigotas
metacíclicas

Figura 01. Ciclo biológico da leishmaniose

visceral canina (Adaptado de Sykes et al., Promastigotas
procíclicas
2013).

A resistência à infecção em animais assintomá-
ticos dependerá da resposta celular Th1 a qual está asso-
ciada à produção de citocinas pró-inflamatórias IFN-γ,
TNF-α, IL-2 além de linfócitos T CD4+ e CD8+ (figura 2).
Nos cães sintomáticos observa-se proliferação
do parasita nos macrófagos, devido a uma redução no
número de linfócitos T CD4+, o que sugere a ausência
de resposta efetiva no sentido de eliminar o parasita
(CORRÊA, 2007). Em cães assintomáticos predomina a
resposta imune celular para Th1 mediado por IFN-γ e
TNF-α, proporcionando resistência à LVC.

IFN-γ Ativação de Eliminação

TNF-α Macrófagos do Parasita
IL-2
Th1
IL-12
IL-18 Inibição
IL-27 IL-10 Síntese Nitrocoxide
de Óxido
Nítrico Radicais
Th0 livres de
Oxigênio
Figura 02. Perfil de linfócitos
Inib
içã

IL-4 na resposta imune a

o

leishmaniose visceral canina

Th2 B P (Adaptado de BANETH et al.
2008).
Treg
IL-4
IL-10
Disseminação do Parasita
TGF-ꞵ

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1.2. DIAGNÓSTICO, CONTROLE E TRATAMENTO
A suspeita da LVC é baseada em dados
epidemiológicos e nos achados clínicos, entretanto
ainda é considerado um diagnóstico complexo, visto que
algumas doenças compartilham sintomatologia similar.
O período de incubação nos cães é bastante variável. Este
período possui média de três meses a sete anos. A LVC é
uma doença de evolução lenta: no momento inicial, os
parasitas são encontrados no local da picada infectada,
depois distribuem-se através da derme, para depois,
por fim ocorrer a infecção das vísceras. Além disso,
cerca de cinquenta por cento dos cães soropositivos são
assintomáticos e possivelmente não demonstrarão sinais
da LVC (REIS et al., 2000).
A fase inicial da doença é caracterizada por
lesões cutâneas como: alopecia, despigmentação dos
pelos, descamação e eczema em particular no espelho
nasal e orelha, pequenas úlceras rasas localizadas mais
frequentemente ao nível das orelhas, focinho, cauda
e articulações. Em fases mais adiantadas, observam-
se onicogrifose, esplenomegalia, linfoadenopatia,
alopecia, dermatite, úlceras de pele, distúrbios oculares
(conjuntivites, ceratoconjuntivite, blefarite e/ou uveítes),
coriza, apatia, diarreia, hemorragia intestinal, edema de
patas, vômito e hiperqueratose. Já na fase de infecção,
ocorrem em geral a paresia das patas posteriores,
caquexia, inanição e morte. Já as lesões renais são
consideradas como a principal causa de óbito por LVC
(ARRUDA 2009).
Diferentes técnicas podem ser utilizadas para
confirmar o diagnóstico como: teste sorológico, pesquisa
do parasita por exames parasitológicos e/ou ensaios
moleculares (MARZOCHI et al., 1985; MINISTÉRIO
DA SAÚDE, 2014). O diagnóstico parasitológico pode
ser realizado por exame direto (figura 3) baseado na
detecção da forma amastigota da Leishmania sp.. Para
tal, são utilizadas lâminas contendo amostras de medula
óssea, linfonodo ou pele; ou cultura do material obtido
por punção de medula óssea e linfonodos em meio
específico para identificação de formas promastigotas do
parasita (CUNNINGHAM et al.,2012; MINISTÉRIO DA
SAÚDE, 2006; SCHIMMING & PINTO E SILVA, 2012).
O diagnóstico sorológico se baseia na detecção de
anticorpos anti-Leishmania circulantes, tendo em vista que
os animais doentes desenvolvem resposta imune humoral
e produzem altos títulos de IgG anti-Leishmania (FERRER,
1999). No Brasil, o Ministério da Saúde recomenda como
protocolo de diagnóstico e método de triagem o teste
imunocromatográfico TR DPP® (Dual-Path Platform)
e, o teste de ELISA (Enzime Linked ImmunonoSorbent
Assay) utilizando-se antígeno solúvel total como teste
confirmatório (NOTA TÉCNICA Nº 01/2011-CGDT/
CGLAB / DEVIT / SVS / MINISTÉRIO DA SAÚDE, 2011).
Figura 03. Exame parasitológico direto com presença de
forma amastigota de Leishmania sp. em aspirado de linfonodo
(MOURA, 2018).
A reação em cadeia de polimerase (PCR) é a técnica
de diagnóstico molecular que torna possível identificar a
ampliar o DNA do parasita (IKEDA-GARCIA E FEITOSA,
2006). Porém esta técnica é mais usada em pesquisa do
que em rotina clínica laboratorial. A utilização da PCR é
uma técnica que torna possível identificar e ampliar o DNA
do parasita em amostras de sangue total, medula óssea,
linfonodos e fragmentos de pele. Apresenta sensibilidade
e especificidade próxima de 100% (IKEDA GARCIA &
FEITOSA, 2006; MANNA et al., 2009). A técnica PCR em
tempo real foi introduzida recentemente para detectar
quantitativamente leishmanias no organismo, entretanto
essa técnica ainda é onerosa, não faz parte da rotina de
muitos laboratórios e também não está padronizada pelo
Ministério da Saúde (QUEIROZ et al., 2010).
As medidas de controle estão centradas no
diagnóstico e tratamento precoce dos casos humanos,
redução da população de flebotomíneos, eliminação dos
reservatórios domésticos e atividades de educação em
saúde. Recomenda-se controle único vetorial e a utilização
de inseticidas de ação residual Em cães, as medidas de
controle estão ligadas ao uso se repelentes, tais como
coleiras, bisnagas ou sprays com inseticidas capazes de
inibir o contato de flebotomíneo no animal, além do uso
de vacina como profilaxia e a higienização do ambiente e
do animal (MINISTÉRIO DA SAÚDE, 2014).
De acordo com a portaria interministerial
nº1426 de 11 de julho de 2008, tornou proibido o
tratamento da LVC com produtos de uso humano ou
não registrado no Ministério da Agricultura, Pecuária
e Abastecimento (MAPA). A terapêutica em cães se dá
com a associação de drogas: combina-se medicamentos
com efeito leishmanicida, com efeito leishmaniostático,
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juntamente com o uso de imunomoduladores (FRASER
et al., 2008). O paciente deve ter acompanhamento
clínico e laboratorial constante, idealmente em
intervalos de 6 meses, na busca de se manter um bom
prognóstico.
O primeiro medicamento oral destinado ex-
clusivamente aos cães acometidos com a LVC foi a
miltefosina (hexadexilfofocolina, HepC), que promo-
veu importante avanço terapêutico no tratamento da
enfermidade (SUNDAR & OLLIARO, 2007). O modo
de ação da miltefosina, que é uma droga leishmanicida
(CROFT et al., 1987), está associado a alterações no me-
tabolismo lipídico, mais precisamente, na biossíntese
dos fosfolipídios promovendo assim, ação leishmani-
cida (LUX et al., 2000). Por meio de nota técnica con-
junta nº001/2016 MAPA / MS, foi autorizado o registro
do produto Milteforan® (Virbac Saúde Animal) para o
tratamento da LVC no Brasil, uma vez que a miltefosina
não é uma droga utilizada no tratamento da doença em
humanos (MAPA / MS, 2016).
O alopurinol (4-hidroxipirazolo – [3,4-d] pri-
rimida) tem atividade leishmaniostática, ele interfere
no crescimento da Leishmania, atuando na inibição da
síntese de pirimidinas, o que leva à inibição das sínte-
ses de proteínas do parasita (PFALLER et al., 1974). Este
medicamento de uso oral é uma droga de baixo custo
e facilmente disponível para tratamento (GINEL et al.,
1998). No entanto, embora o alopurinol seja capaz de
amenizar os sinais clínicos, o mesmo não é eficiente
para estimular uma resposta imunoespecífica e assim
eliminar o agente infeccioso.
A Domperidona possui ação ação imunomodu-
ladora, estimulando a produção de linfócitos Th1 e de
IL-2, IL-12, IFN-g e TNF-a levando à ativação dos ma-
crófagos, seguida da diminuição da população de Th2,
entretanto tem uso restrito (droga humana), podendo
apresentar efeitos colaterais (GOMEZ-OCHOA et al.,
2009).
1.3. ALIMENTOS NUTRACÊUTICOS.
Sabe-se que a quimioterapia da LVC ainda é um
desafio, devido a inexistência de tratamento efetivo que
elimine o parasita. Dessa forma, a suplementação dos
cães com alimentos nutracêuticos pode ser um potente
adjuvante para boa resposta imune ao tratamento de LV
em cães.
Os alimentos nutracêuticos são suplementos
alimentares que contém forma concentrada de
composto bioativo, o qual se apresenta separado da
matriz alimentar e é utilizado com finalidade melhorar
a saúde e em doses que excedem aquelas contidas na
dieta convencional (ZEISEL, 1999). Outra definição
de composto nutracêutico, seria a substância não
fármaco, produzida de forma purificada ou sob forma
de extrato e administrada de forma oral para fornecer
ao organismo os agentes necessários para a estrutura e
função normal, visando melhorar a saúde e o bem-estar
dos animais (BOOTHE, 1997).
As substâncias nutracêuticas são as vitaminas
antioxidantes (A, C e E), flavonoides, vitamina D, ácidos
graxos poli-insaturados, L-carnitina, glucosamina,
condroitina, prebióticos, probióticos, minerais e fibras
dietéticas (DAVÍ et al., 2010).
Na alimentação dos cães e gatos, os suplementos
nutracêuticos são recomendados com objetivo de
favorecer a saúde do trato digestório, da resposta
imune, das condições de pele e pelagem, da composição
corporal e da prevenção de danos decorrentes do
envelhecimento, além de auxiliar nas funções orgânicas
dos animais doentes.
1.4. PREBIÓTICOS
Os prebióticos são definidos como ingredientes
alimentares não digeríveis que atuam de forma beneficia
na saúde do hospedeiro (GIBSON & ROBERFROID, 1995).
A alteração da microbiota intestinal em decorrência do
consumo de prebióticos ocorre pelo fornecimento de
nutrientes para as bactérias desejáveis, promovendo
assim, a exclusão competitiva das indesejáveis. Além
do mais, o trato gastrointestinal é o principal local de
interação entre o sistema imune e microrganismos
(ZAINE, 2014).
O sistema imune da mucosa do TGI de cães
e gatos consiste em estruturas linfoides organizadas,
incluído Placas de Peyer, linfonodos mesentéricos e
lâmina própria intestinal (STROKES; WALLY, 2006).
Nesta mucosa são encontrados tipos celulares específicos,
como linfócitos T e B, macrófago, mastócito, células
dendríticas, neutrófilos e eosinófilos (GERMAN, HALL,
DAY 1999.)
Sabe-se que as bactérias que residem no trato
gastrointestinal influenciam o desenvolvimento
do Tecido Linfoide Associado ao Intestino (GALT),
modulando assim a imunidade do animal. O GALT é
considerado maior órgão imunológico do organismo,
onde são localizadas, aproximadamente 80% das células
de defesa e 50% das células imunes efetoras, realizando
as seguintes atividades: captura, processamento e
apresentação de antígenos ingeridos; produção de
anticorpos locais, em especial IgA; ativação de respostas
imunes citomediadas, particularmente as mediadas por
linfócitos T CD8+ e macrófagos (SANTOS, 2017).
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1.4.1. BETA-GLUCANOS
Os ꞵ-glucanos são são polissacarídeos com
ação prebiótica originados da parece celular da
Saccharomyces cerevisiae. A S. cerevisiae é uma levedura,
cuja parede celular é composta por glucanos (55%),
mananoproteínas (22%) e quitina (1,5%) (Figura 04). A
composição destes componentes está distribuída em
duas camadas principais, sendo a externa composta por
mananoproteínas e a interna por glucanos e quitina,
em estrutura interconectada por ligações covalentes
(MAGNANI & CASTRO-GOMES, 2008).
Figura 04. Estrutura da parede
celular da Saccharomyces
cerevisiae (Fesel & Zuccaro,
2016).
Quitina sintetase
UDP-GlcNAc
Os glucanos são polímeros de glicose com
ligações ꞵ(1-3) e ꞵ(1-6), já quitina é composta por ꞵ(1-4)-
N-acetilglucosamina e uma pequena porção de lipídeos
(MAGNANI & CASTRO-GOMES, 2008).
Os ꞵ-glucanos obtidos microrganismos pertencem
a uma classe de substâncias conhecidas como modificadores
de resposta biológica (MRB), pois alteram a resposta no
hospedeiro. Esses polímeros ativam a resposta imune via
sistema complemento diretamente, ou com auxílio de
anticorpos que produzem fatores quimioterápicos que
induzem a migração de leucócitos para o sítio de infecção
(MAGNANI & CASTRO-GOMES, 2008).
1.4.2. AÇÃO DO ꞵ-GLUCANO NO SISTEMA IMUNE
Os ꞵ-glucanos possuem várias propriedades
imunomoduladoras. Eles agem por estimulação do
sistema imune, principalmente em macrófagos, exercendo
efeito benéfico contra uma grande variedade de bactérias,
fungos, vírus e parasitas (MANTOVANI et al., 2008).
O efeito imunoestimulante está relacionado com
a sua interação com receptores específicos presentes nas
células do sistema imune, como os receptores toll-like, de
manose, complemento-CR3, dectina-1 e, que reconhecem
células específicas presentes nos patógenos (Padrão
Molecular Associado aos Patógenos - PAMPs) (Figura 05).
Dessa forma, permite o reconhecimento pelo sistema imune
do que próprio ou não próprio (BROWN; GORDON, 2001)
A ligação do PAMP a um receptor de célula
imune (Receptores de Reconhecimento Padrão – PRRs)
induz uma sinalização que desencadeia uma cadeia de
Mananoproteínas
ꞵ-1,6-glucano
ꞵ-1,3-glucano
Quitina
Bi-camanda
fosfolipídica da
membrana celular
ꞵ-1,3-glucano sintetase
UDP-Glc
sinais intracelulares, com consequente produção de
componentes da resposta imune inata (como citocinas,
IFNs, moléculas do complexo de histocompatibilidade,
entre outros), que atuam contra os microrganismos.
(MEDZHITOV et al., 1997). Estes receptores estão
presentes principalmente nos macrófagos, neutrófilos,
células dendríticas (CDs) (ABBAS et al.,2003).
A estrutura que permite o reconhecimento do
ꞵ-glucano pelo sistema imune, está associada a padrões
moleculares (PAMP’s). O ꞵ-glucano desencadeia respostas
cuja função é proteger o hospedeiro de invasões de patógenos,
caracterizando como parte da imunidade inata de organismos
superiores (MAGNANI & CASTRO-GOMES, 2008).
Os receptores relacionados ao reconhecimento
do ꞵ-glucano em vertebrados incluem a dectina-1, o re-
ceptor do sistema complemento 3 (CR3) e a lactosilcerami-
da. O mecanismo de resposta é mediado pela combinação
desses receptores, porém o mecanismo mais esclarecido é
o da dectina-1 (MAGNANI & CASTRO-GOMES, 2008).
7
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Recrutamento de leucócitos: Inflamação

Citocinas (pró-inflamatórias)

Fagocitose

Sinalização
intracelular Burst respiratório: espécies reativas
de oxigênio e óxido nítrico

Apresentação de antígeno (via complexo

principal de histocompatibilidade)

• Ligantes endógenos - (Glico/lipo) proteínas alteradas/modificadas, opsoninas (ex. fragmentos da fração C3 do

sistema complemento e fibronectinas, células tumorais e citocinas)
• Microorganismos e produtos microbianos (ex. Lipopolissacarídeos)

TLR4- Receptor Toll-like 4 MR-Receptor de manose

CD14- molécula de diferenciação tipo CD14 Dectina-1

TLR2- Receptor Toll-like 2 SR-Receptor scavenger

CR3- Receptor para complemento do tipo 3

Figura 05. Modulação da atividade de macrófago por PRRs (Adaptado de Lenung et al., 2006).

O imunoreceptor dectina-1 é uma

glicoproteína transmembrana tipo II, presente de
Macrófago
forma heterogênea nos tecidos, cuja principal função
é a vigilância contra patógenos. A sua expressão está
diretamente relacionada com monócitos, macrófagos,
neutrófilos e células dendríticas. Dessa forma, seus
sinais contribuem para a resposta destas células,
incluindo fagocitose, burst oxidativo, degranulação
de neutrófilos, produção de mediadores lipídicos da
inflamação, citocinas e quimiocitocinas, que recrutam
e coordenam a ativação de outras células imunes
(Figura 06) (GOODRIDGE; WOLF; UNDERHILL,
2009).
Dectina-1 • TNF/Mediadores inflamatórios
• Funções microbicidas efetoras
Este imunoreceptor ao ser estimulado pelo
ꞵ-glucano sofre fosforilação e, ao que tudo indica,
está envolvida na produção de superóxido pelos
macrófagos como resposta de defesa (MAGNANI &
CASTRO-GOMES, 2008).

O dectina-1 presente na membrana dos

macrófagos é o principal receptor de reconhecimento
de ꞵ-glucanas e, através desta especificidade há a ꞵ-glucano
sua ativação com consequente reconhecimento de
patógenos, promovendo a indução de uma série
de respostas celulares protetoras inclusive com a
diferenciação da resposta imunológica (Th1 ou Th2).
Sugere-se que esta especificidade induza a produção
de interleucinas IL-12, IL-18 e IL-27 que estão Figura 06. Interação do ꞵ-glucano com o receptor dectina-1
associados a resposta celular Th1 (SANTOS, 2017). em macrófago (Adaptado de Hohl & Palmer, 2006).

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A resposta celular Th1 promove a formação das
citocinas INF-γ, TNF-α e IL-2, responsáveis pela ativação
de macrófagos, realizando assim o burst respiratório, com
a produção de óxido nítrico e a eliminação do parasita
(Figura 07) (SANTOS, 2017).
Beta-glucano
Receptor
(Ativar)
Ativação de Macrófagos
IFN-γ
TNF-α
IL-2
Th1
Figura 07. Ativação de macrófago por ꞵ-glucano. Adaptado de Peluso (2020) e Baneth (2008).
O imunorreceptor CR3 funciona como uma
molécula de adesão celular, que possui um sítio de
ligação para carboidrato, local onde o ꞵ-glucano se
adere. E o receptor lactosilceramida é um esfingolipídio
presente na membrana plasmática celular e, juntamente
como ꞵ-glucano realça o burst oxidativo e as funções
antimicrobianas (MAGNANI & CASTRO-GOMES, 2008)
1.5. DEFENSYN® COMO IMUNOESTIMULANTE
NA LVC
Muitos alimentos comerciais para cães e gatos
produzidos no Brasil contêm derivados da levedura
Sacharomyces cerevisae, cuja inclusão beneficia o
sistema imune e a microbiota do trato gastrointestinal
(ZAINE et al., 2014). A parede celular é constituída
principalmente por mananoproteínas, ꞵ-glucanos e
quitina (LIPKE & OVALLE, 1998).
Os mananoligossacarídeos presentes na parede
celular tem ação prebiótica, observada pelo estímulo
do crescimento das bactérias que agem auxiliando o
trato digestório. Consequentemente há o aumento da
microbiota benéfica, com consequente diminuição da
patogênica, caracterizada pela aglutinação de patógenos
(CARCIOFI & GOMES, 2010).
Os ꞵ-glucanos são polissacarídeos, que se
diferenciam pelo tipo de ligação entre as unidades de
glicose presentes na cadeia principal e pelas ramificações
conectadas a essa cadeia. O ꞵ-glucano mais abundante
é a 1,3 ꞵ-glucano que apresenta habilidade para
estimular o sistema imunológico, através da ativação
de macrófagos, células endoteliais dendríticas, células
T e B, linfócitos polimorfonucleares, com a indução da
Patógeno Interleucina
Imunoglobulina
Citocinas
Eliminação do Parasita
Síntese de Óxido
Nítrico Nitrocoxide
Radicais livres de Oxigênio
expressão de diversas citocinas (KUBALA et a., 2003).
Devido a função biológica desse polipeptídio, verifica-
se efeito benéfico a uma série de doenças que incluem
as infecções virais, parasitárias, bacterianas e fúngica,
combate a tumores, efeito anti-inflamatório, anti
hipocolesterolêmico, hipoglicêmico, mutagênico, e em
situações supressão imune divido ao estresse (FREITAS
JUNIOR et al., 2012).
O Defensyn® (König, Saúde Animal) é um
suplemento alimentar imunomodulador. Possui em
sua composição nutrientes altamente concentrados
e direcionados às exigências nutricionais de animais
que se encontram em estado de convalescência,
ou seja, se recuperando de alguma enfermidade,
de doenças crônicas, imunossupressoras, que não
possuem cura e até mesmo em situações oportunistas.
Possui alta concentração de ꞵ-glucano, e também
grandes quantidades de mananoligossacarídeos e
frutoligossacarídeos. Também é composto por outros
nutracêuticos de grande importância, como as vitaminas
A, C, E, B1, B2, B6, B12, inositol, ácido pantotênico,
ácido fólico, zinco e selênio quelato, glutamina, sulfato
de Glucosamina, ácido linoleico, Lactocilus acidiphilus e
plasma sanguíneo.
2. JUSTIFICATIVA E OBJETIVO
O uso de nutracêuticos na veterinária pode, po-
tencialmente, resultar em benefícios aos pacientes. Ainda
9
Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral
existe escassez de informações científicas sobre sua reco-
mendação, dosagem adequada e eficácia (ZAINE et al.,
2014), mas, conforme apresentado anteriormente, existem
evidências que as substâncias imunomoduladoras sejam al-
tamente benéficas para animais em estado convalescente.
Como a ocorrência de lesões sistêmicas da LVC
está diretamente relacionada com a resposta imune do
hospedeiro e a evolução da doença (BARBIERI, 2006), e
o Defensyn® possui alta concentração de ingredientes
imunomoduladores em sua composição, o presente
estudo se justifica como forma de avaliar a efetividade
da suplementação com este imunoestimulante na
melhora clínica de cães com LVC, quando submetidos ao
tratamento com Alopurinol na dosagem recomendada
de 10 a 20 mg/kg/BID.
Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a
suplementação alimentar com o imunoestimulante
Defensyn® na melhora clínica de cães com LVC em conjunto
com tratamento alopático convencional com o Alopurinol.
3. METODOLOGIA
3.1. ASPECTOS ÉTICOS E LOCAL DE TRABALHO
O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em
Experimentação Animal (CEEA) da Universidade Fede-
ral do Piauí. Para a realização deste estudo foi solici-
tado consentimento dos tutores, permitindo as coletas
amostrais e acompanhamento clínico. O presente tra-
balho foi realizado sob a supervisão da M.V. Luana Dias
de Moura (CRMV PI-01311) na cidade de Teresina, Piauí,
com colaboração de clínicas veterinárias.
3.2. DELINEAMENTO EXPERIMENTAL
Neste estudo foram utilizados 25 cães com
diagnóstico positivo para a LVC. Inicialmente, realizou-
se uma triagem onde diversos cães foram submetidos
a avaliação clínica e parasitológica, metodologia
considerada padrão ouro no diagnóstico da LVC, e apenas
os que tiveram avaliação positiva foram distribuídos nos
tratamentos experimentais. Os cães foram distribuídos de
forma casualizada em três tratamentos experimentais, os
quais consistiam em:
Grupo 1: Alopurinol (15mg/kg/sid) + Defensyn®
(3g/5kg/sid); com 09 cães;
Grupo 2: Alopurinol (15mg/kg/sid), com 09 cães;
Grupo 3: Controle; sem o consumo do alopurinol e/ou
Defensyn®, com 07 cães.
O período experimental adotado, foi de 60 dias
após a positividade do exame parasitológico. Os animais
receberam tratamento por 60 dias após a positividade
no exame parasitológico. O Defensyn® é um produto
em pó, e sua forma de administração é oral, onde pode
ser misturado a água ou polvilhado sobre o alimento
a ser consumido. Recomenda-se o consumo imediato
da água ou alimento, após a adição do produto. Já o
alopurinol é um medicamento de uso oral, em forma
de comprimidos e, normalmente comercializados
nas versões de 100 ou 300mg. Durante o período
experimental, recomendou-se que o tutor mantivesse a
alimentação do animal em sua normalidade, fornecendo
a mesma dieta consumida previamente ao ensaio.
Após o diagnóstico positivo para LVC dos cães,
recomendou-se medidas preventivas para evitar picadas
de flebotomíneos. As medidas preventivas foram o
uso de coleira impregnada com deltametrina ou o uso
de spray repelente a base de permetrina. Posterior
ao término do ensaio experimental, os animais
foram encaminhados novamente aos clínicos que os
acompanham para continuar o tratamento contra LVC.
No início do experimento (D0) e ao final (D60) todos
animais foram submetidos ao diagnóstico sorológico,
parasitológico, a avaliação clínica e de parâmetros
bioquímicos e hematológicos.
3.3.1. DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO
Os animais utilizados na pesquisa foram subme-
tidos ao diagnóstico parasitológico, método considera-
do padrão ouro. Para realização deste exame foi feito
contenção adequada de cada animal, e posteriormente
coletado as amostras, por punção de medula óssea, lin-
fonodos e/ou citologia de pele quando presente lesões.
O material coletado foi fixado, corado pelo método do
panótico rápido, e enviado para analise com pesquisa
direta do parasita, em laboratório particular de Teresi-
na. Essa metodologia possibilitou o diagnóstico preciso
dos animais com positividade para LVC.
3.3.2. AVALIAÇÃO CLÍNICA
O perfil clínico dos animais utilizados no estudo,
foi avaliado de acordo com a metodologia adaptada
proposta por Silva et al. (2017). Esta metodologia consiste
em avaliar e pontuar através de uma ficha, a sintomatologia
da doença, onde considera-se: o grau de atividade do
animal, presença de ectoparasitas, estado nutricional,
estado de pele e pelos, presença de secreções e tamanho
de linfonodos. A escala utilizada na pontuação varia de 0
(zero) a 2 (dois), quando apresentadas condições normais
recebiam pontuação 0 (zero) e conforme o aumento da
severidade das lesões há o consequente aumento desta
pontuação. Ao final do preenchimento desta ficha soma-
se toda a pontuação recebida nos diferentes itens avaliados
e o seu valor total é considerado como o escore do animal,
atingindo-se escore máximo de 25 pontos. Dessa forma,
quanto maior o valor do escore apresentado, maior as
evidências dos sinais clínicos decorrentes da LVC.
10
Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral

3.3.3. DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO E Quando avaliado os sinais clínicos de cada grupo no

AVALIAÇÃO DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS E
HEMATOLÓGICOS.
Para as análises sorológicas, bioquímicas e
hematológicas coletou-se 04 ml de sangue através da
venopunção jugular em tubos tipo Vacuntainer®. Para o
ensaio bioquímico e sorológico foram utilizados tubos
contendo ativador de coagulação, obtendo-se assim o
soro. E para o ensaio hematológico utilizou-se tubos
contendo anticoagulante (EDTA-K2).
O diagnóstico da LVC foi realizado no
Hospital Veterinário da Universidade Federal do Piauí
(UFPI), utilizando-se metodologia recomendada pelo
Ministério da Saúde (MINISTÉRIO DA SAÚDE, NOTA
TÉCNICA, 2011). Esta metodologia consiste em teste
rápido de triagem com TR DPP®, seguido de ensaio
ELISA.
D0, não se observou diferença significativa nos valores de
escore entre eles (Figura 08). Porém quando analisado ao fim
do período experimental, D60, foi constatado a redução dos
sinais clínicos para os animais tratados com G1 (Alopurinol
+ Defensyn®) e G2 (Alopurinol), diferentemente do grupo
G3 (Controle) que apresentaram sinais clínicos de escore
elevado (Figura 09). Porém, houve diferença significativa
(p<0,05), apenas entre os cães dos tratamentos G1 e G3.
A redução do escore relacionado aos sinais clíni-
cos dos cães do G1, tratados com Alopurinol juntamente
com o consumo do suplemento alimentar Defensyn®, de-
monstra a influência da suplementação sobre a resposta
imune dos animais contra o parasita causador da LVC.

Os exames hematológicos e bioquímicos foram

realizados em laboratório particular de Teresina. Para os
ensaios bioquímicos avaliou-se proteínas totais (PT), globu-
linas, albumina (ALB), alanina aminotransferase (TGP), fos-
fatase alcalina (FA), creatinina e ureia. Para o ensaio hema-
tológico, verificou-se os valores da série vermelha e branca,
além do número de plaquetas. Para diagnóstico diferencial
e de exclusão de coinfecção, realizou-se o teste 4DXPlus®
(IDEXX), verificando-se a presença de hemoparasitose dos
animais introduzidos na pesquisa.

3.4. ANÁLISE ESTATÍSTICA Figura 8. Escore clínico dos animais no início do período
experimental (D0). Colunas seguidas de letras diferentes
Foi adotado delineamento casualizado. Para diferem estatisticamente (5%). G1: Alopurinol (15mg/kg/sid)
análise estatística, utilizou-se o software GrafPad Prism + Defensyn® (3g/5kg/sid); G2: Alopurinol (15mg/kg/sid);
5.0 (GraphPad Pris Inc., San Diego, Estados Unidos). Os G3: Controle; sem o consumo do alopurinol e/ou Defensyn®.
dados foram analisados utilizando-se teste de variância
e, quando significativo foram analisados através dos
testes de Kruskal Wallis e Dunn’s com a adoção de 5%
de significância.

4. RESULTADOS

Todas as avaliações e análises propostas foram

realizadas sem nenhuma intercorrência, porém algumas
avaliações foram realizadas somente nos grupos G1 e G2.

4.1. AVALIAÇÃO CLÍNICA

Os principais sinais clínicos observados nos

animais no início do tratamento, no D0, incluía respec-
tivamente, linfonodos aumentados, lesão de orelha / fo-
cinho, onicogrifose, mucosas pálidas, despigmentação
do focinho, lesão de pele (presença de úlceras e derma-
tite), emagrecimento, alopecia, secreção ocular serosa
- mucosa, conjuntivite, opacidade córnea, blefarite e
sangramento.
Figura 9. Escore clínico dos animais ao final do período
experimental (D60). Colunas seguidas de letras diferentes
diferem estatisticamente (5%). G1: Alopurinol (15mg/kg/sid)
+ Defensyn® (3g/5kg/sid); G2: Alopurinol (15mg/kg/sid);
G3: Controle; sem o consumo do alopurinol e/ou Defensyn®.

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Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral

IMAGENS DA AVALIAÇÃO CLÍNICA DOS ANIMAIS DO GRUPO 01

A

Figura 10. Avaliação clínica de um cão do G1 (Alopurinol (15mg/kg/sid) + Defensyn® (3g/5kg/sid)). Imagem A:antes do
período experimental (D0). – onicogrifose, úlcera nasal, hiperqueratose de focinho, despigmentação de lábio e focinho, úlceras
e ponta de orelha e dermatite esfoliativa. Imagem B: Ao final do período experimental (D60) – onicogrifose.

Figura 11. Avaliação clínica de um cão do G1 (Alopurinol (15mg/kg/sid) + Defensyn® (3g/5kg/sid)). Imagem A: antes do
período experimental (D0). – úlcera nasal, hiperqueratose de focinho, despigmentação de lábio e focinho, dermatite esfoliativa,
alopecia generalizada. Imagem B: Ao final do período experimental (D60) – despigmentação de focinho e lábio, secreção ocular.

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Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral

IMAGENS DA AVALIAÇÃO CLÍNICA DOS ANIMAIS DO GRUPO 2

Figura 12. Avaliação clínica do cão do G2 (Alopurinol (15mg/kg/sid)). Imagem A:antes do período experimental (D0) –
Pelagem ruim, alopecia generalizada e periocular, onicogrifose, mucosas hipocoradas, despigmentação de lábios e focinho,
úlceras em ponta de orelha, dermatite esfoliativa, secreção ocular, blefarite / uveíte. Imagem B: Ao final do período experimental
(D60) – pelagem ruim, onicogrifose, dermatite esfoliativa, secreção ocular, blefarite e uveíte

Figura 13. Avaliação clínica do cão do G2 (Alopurinol (15mg/kg/sid)). Imagem A: antes do período experimental (D0) –
onicogrifose, despigmentação de lábio e focinho, despigmentação de lábios e focinho, úlceras em lábio e ponta de orelha, dermatite
esfoliativa, áreas de alopecia. Imagem B: Ao final do período experimental (D60) – onicogrifose.

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Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral

IMAGENS DA AVALIAÇÃO CLÍNICA DOS ANIMAIS DO GRUPO 3

Figura 14. Avaliação clínica do cão do G3

(Controle). Imagem A: antes do período
experimental (D0) – Onicogrifose, lesão
de ponta de orelha, opacidade de córnea.
B Imagem B: Ao final do período experimental
(D60) – onicogrifose, despigmentação de
focinho e lábio, secreção ocular, opacidade
e ulcera de córnea, secreção ocular.

4.2. DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO E onde é possível detectar a forma amastigota do parasita.

AVALIAÇÃO DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS E Após o período experimental de 60 dias, verificou-se
HEMATOLÓGICOS. que todos os animais do G1 não apresentaram formas
amastigotas, diferentemente dos animais do G2, os quais
Tanto as análises hematológicas quanto bioquí- dois cães apresentaram formas amastigotas e do G3,
micas foram realizadas apenas nos grupos G1 e G2 (Ta- onde todos os indivíduos apresentaram estas formas do
bela 01). Os exames hematológicos são importantes por protozoário (Figura 15).
avaliarem o estado clínico dos animais (REIS et al., 2006).
Neste estudo foram encontrados achados variados, inde-
pendente do tratamento administrado e tempo de coleta.
Dentre os resultados, os cães apresentaram anemia normo-
cítica, normocrômica, trombocitopenia, leucocitose e eo-
sinopenia, porém não se encontrou diferença significativa
entre as variáveis analisadas (p>0,05).

O acompanhamento dos parâmetros bioquímicos

é fundamental para avaliar a atividade das funções renais
e hepáticas (Tabela 02), considerando que a insuficiência
renal crônica é considerada uma das principais causas
de morte em cães com leishmaniose. Independe do
tratamento empregado e do tempo experimental
utilizado, não se constatou diferenças significativas em
nenhuma variável avaliada (p>0,05).
A avalição sorológica com TR-DPP e teste ELISA
também não demonstrou diferença significativa quando
avaliado os diferentes tratamentos e os períodos de
amostragem (p>0,05).
Realizou-se exame parasitológico em amostras de
medula, linfonodo e pele, através da confecção de lâminas
Figura 15. Resultado da avaliação parasitológica dos animais no
início do período experimental (D0). Colunas seguidas de letras
diferentes diferem estatisticamente (5%). G1: Alopurinol (15mg/
kg/sid) + Defensyn® (3g/5kg/sid); G2: Alopurinol (15mg/kg/
sid); G3: Controle; sem o consumo do alopurinol e/ou Defensyn®.
Numeração 01: foram observadas formas amastigotas de
Leishmania em exame direto de medula, linfonodo e /ou pele.
Numeração 0 (zero): não foram observadas formas amastigotas
de Leishmania em exame direto de medula, linfonodo e /ou pele.

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Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral

Tabela 01. Parâmetros hematológicos e seus respectivos desvios padrões dos animais do G1 (Alopurinol + Defensyn®) e G2
(Alopurinol) no início (D0) e no final do período experimental (D60).

G1* G2*
Valores de
Hemograma
Referência5
D0 D60 D0 D60

Hemácias
4,7 ± 1,3 5,6 ± 0,7 4,7 ± 1,4 5,4 ± 1,1 5,5-8,5
(milhões/mm³)
Hemoglobina
11,3 ± 2,2 12,4 ± 1,8 12,6 ± 6,0 12,1 ± 2,7 12-18
(g/ld)

Hematócrito (%) 33,8 ± 7,5 38,8 ± 4,6 37,5 ± 13,5 34,7 ± 11,4 37-55

VGM (fl)1 69,5 ± 6,5 69,0 ± 3,4 72,2 ± 7,4 71,1 ± 3,1 60-77

CHGM (%)2 31,8 ± 2,0 31,9 ± 3,4 32,3 ± 2,6 31,3 ±1,2 32-36

RDW (%)3 18,4 ± 5,5 19,3 ± 5,9 15,7 ± 1,2 16,1 ± 0,8 14-17

Plaquetas
241 ± 133 209 ± 122 270 ± 120 234 ± 111 200-500
(x10³/mm³)
PPT (g/dl)4 7,7 ± 1,2 7,7 ± 1,3 9,5 ± 3,9 8,7 ± 1,1 6-8

Leucócito (x10³μl) 10900 ± 2500 8900 ± 3800 12800 ± 5000 11400 ± 2700 6000-17000

*Tratamento experimental G1 com Alopurinol (15mg/kg/sid) e Defensyn® (3g/5kg/sid) e G2:Alopurinol (15mg/kg/sid); 1Volume
globular médio; 2Concentração de hemoglobina globular médio; 3Amplitude de distribuição eritrocitária; 4Proteína plasmática total;
5
Meyers DJ, Cole EH, Rich LJ. Medicina de laboratório veterinária: interpretação e diagnóstico. São Paulo: Editora Roca, 1995.

Tabela 02. Parâmetros bioquímicos e seus respectivos desvios padrões dos animais do G1 (Alopurinol + Defensyn®) e G2 (Alopurinol)
no início (D0) e no final do período experimental (D60).

G1* G2*
Valores de
Bioquímica sérica
Referência5
D0 D60 D0 D60

Ureia (mg/dl) 38 ± 15 32 ± 17 29 ± 1,4 23 ± 0,6 10-60

Creatinina (mg/dl) 0,8 ± 0,2 0,8 ± 0,2 0,8 ± 0,3 1,0 ± 0,4 0,5-1,6

FA (UI/l)1 121 ± 42 134 ± 62 270 ± 158 104 ± 35 10-96

TGP (UI/l)2 27 ± 16 42 ± 39 41 ± 52 27 ± 16 7,0-92

PT (g/dl)3 9,1 ± 2,0 7,3 ± 1,8 7,6 ± 2,6 7,0 ± 2,4 6,0-8,0

ALB (g/dl)4 2,6 ± 1,0 2,5 ± 0,7 2,4 ± 0,9 2,5 ± 0,5 2,3-3,8

Globulina (g/dl) 6,5 ± 2,7 4,7 ± 2,2 5,2 ± 2,9 4,6 ± 2,8 2,4-5,2

*Tratamento experimental G1 com Alopurinol (15mg/kg/sid) e Defensyn® (3g/5kg/sid) e G2:Alopurinol (15mg/kg/sid); 1Fosfatase
alcalina; 2Transiminase glutâmico-pirúvica; 3Proteínas totais; 4Albumina; 5Meyers DJ, Cole EH, Rich LJ. Medicina de laboratório
veterinária: interpretação e diagnóstico. São Paulo: Editora Roca, 1995.

15
Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral
Figura 16. Resultado da avaliação parasitológica dos animais
no início do período experimental (D0). Colunas seguidas de
letras diferentes diferem estatisticamente (5%). G1: Alopurinol
(15mg/kg/sid) + Defensyn® (3g/5kg/sid); G2: Alopurinol
(15mg/kg/sid); G3: Controle; sem o consumo do alopurinol
e/ou Defensyn®. Numeração 01: foram observadas formas
amastigotas de Leishmania em exame direto de medula,
linfonodo e /ou pele. Numeração 0 (zero): não foram
observadas formas amastigotas de Leishmania em exame
direto de medula, linfonodo e /ou pele
5. DISCUSSÃO
Dada a inexistência até o momento de uma droga
que seja capaz de estimular uma resposta imunoespecífica,
e assim eliminar o parasita, muitos estudos tem buscado
a melhora da condição de vida dos animais acometidos
pela LVC. A busca é por tratamentos que auxiliem na
melhora dos sinais clínicos, promovam a atenuação
dos efeitos colaterais, e confiram longevidade e bem-
estar ao paciente. Mas a terapêutica da LVC continua
a ser um desafio (PHAM et al., 2013), tendo em vista
a grande dificuldade dos médicos veterinários no
controle da doença e estabilidade do paciente. O uso de
suplementos nutracêuticos compostos por prebióticos e
imunoestimulantes tem sido uma escolha promissora,
e com excelente custo-benefício, para atuar como
adjuvante no tratamento desses cães.
O consumo de Defensyn® demonstrou
melhorar significativamente os sinais clínicos dos cães
tratados simultaneamente com o Alopurinol. Sabe-
se que a ocorrência de lesões sistêmicas da LVC está
diretamente relacionada com a resposta imune do
hospedeiro, dessa forma, o consumo do suplemento
contendo alta concentração de ꞵ-glucanos, ingrediente
imunoestimulante, auxilia na melhora clínica do paciente
(SANTOS, 2017).
A melhora clínica observada nos cães suplemen-
tados com Defensyn® pode ser em decorrência da res-
posta imunológica celular Th1. Os macrófagos possuem
receptores com alta especificidade para ꞵ-glucanos, que
quando ativados desencadeiam a resposta celular Th1
a partir da liberação de interleucinas específicas (IIL-2,
IL-18 e IL-27), promovendo a ativação dos macrófagos
através da ativação das citocinas INF-γ, TNF-α e IL-2,
e a realização do burst respiratório, com consequente
eliminação do parasita devido a presença do óxido ní-
trico. Este mecanismo pode explicar a melhora clínica
dos cães, porém não é capaz de explicar a eliminação
das amastigotas da Leishmania (SANTOS, 2017).
Cook et al. (1982) verificaram que a administração de
glucanos via intravenosa antes e após infecção de hamsters
por Leishmania dovani, promovia a redução de parasitas
no fígado e no baço. Também observaram a atividade
de macrófagos peritoneais in vitro ao serem ativados por
glucanos, constatando a redução significativa do parasita
intracelular, fornecendo assim, evidências para o aumento
da resistência inespecífica de hamsters proporcionada pelos
glucanos em resposta a leishmaniose visceral.
Em estudo conduzido por Zaine (2010) observou-
se que a inclusão de ꞵ-glucanos em alimentos extrusados
para cães proporcionou aumento nas subpopulações
linfocitárias de células T totais (CD5+), T helper (CD5+ e
CD4+), T citotóxico (CD5+ e CD8+), e linfócitos B (CD45+
e CD21+), além do aumento da citocina TNF-α.
Brener et al (2005) ao avaliar a atividade in vitro
do 1,3 ꞵ-glucano sobre a secreção de citocinas pró-infla-
matórias em macrófagos peritoneais em camundongos,
observaram boa capacidade de secretar citocinas da ativi-
dade celular Th1. Dessa forma, observa-se em cães assin-
tomáticos para LVC acentuada redução de parasitas nos
macrófagos, devido ao aumento no número de linfócitos
T CD+4 (perfil Th1).
Em relação as análises hematológicas, indepen-
dente do grupo e do tempo analisado, observou-se resul-
tados esperados para cães acometidos com LVC, como
anemia normocítica e normocrômica, trombocitope-
nia, leucocitose e eosinopenia (SILVA et al., 2011; CIA-
RAMELLA et al., 1997; FREITAS et al, 2012). Não houve
modificações dos resultados hematológicos com os trata-
mentos empregados.
O acompanhamento dos parâmetros bioquímicos
é fundamental para avaliar os distúrbios na função renal e
hepática (MONTEIRO, 2010). Os parâmetros relacionados
a ureia e creatinina identificam o comportamento da
função renal, pois uma das características marcantes da
LVC é a insuficiência renal crônica, sendo em muitas vezes
a principal causa da morte em cães com leishmaniose. A
função renal é comprometida pelo desenvolvimento lento
e progressivo de lesões renais irreversíveis, ocasionando a
perda de suas funções, como consequência da deposição
glomerular de complexos imunocirculantes (FREITAS et
16
Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral

al., 2012) .Neste estudo, foi constatado que os resultados 6. CONCLUSÃO

de creatinina e ureia permaneceram dentro dos valores
considerados de referência, este resultado foi possível
devido ao baixo uso de posologia do medicamento
terapêutico.
Já as lesões hepáticas são analisadas consideradas
as seguintes variáveis: proteínas totais, aminotransferase,
fosfatase alcalina, albumina e glubulina. Apesar da baixa
incidência, cerca de 5% dos cães com leishmanioses
apresentam problemas hepáticos, recomenda-se a
realização deste tipo de controle. Estas lesões são causadas
pela multiplicação do protozoário nos macrófagos
hepáticos, originando a hepatite crônica (FREITAS et al.,
2012). Não foram constatadas alterações em nenhum dos
parâmetros hepáticos avaliados, independente do grupo e
período experimental. A função hepática se manteve em
funcionamento normal, sem ocasionar prejuízo da saúde
do animal.
Ao analisarmos a utilização do suplemento
alimentar imunoestimulante Defensyn® em conjunto
com o Alopurinol, medicação comumente usada no
tratamento de cães com Leishmaniose visceral, em dose
inferior ao indicado, verificou-se melhora significativa
no exame clínico e parasitológico e com a manutenção
da atividade renal dentro da normalidade.
Portanto o Defensyn® representa uma alternativa
bastante promissora para ser utilizado associado a qualquer
tratamento terapêutico, uma vez que não se refere a uma
droga e sim um suplemento nutricional capaz de estimular
a resposta imune contra a leishmaniose visceral canina.

Avaliando os exames parasitológicos, no início do

período experimental observou-se a presença de formas
amastigotas em todos animais analisados e nos três
tecidos de interesse. Após 60 de experimentação, apenas
no grupo G1 apresentou redução total de amastigotas nas
amostras examinadas, sendo observadas a sua presença
no grupo G2 e G3. Este resultado reitera a afirmação de
que o Defensyn® auxilia na redução da multiplicação da
LVC.

O Alopurinol, leishmaniostático, utilizado neste

estudo na posologia de 15mg/kg/vo/sid, dosagem 15mg/
kg/vo/sid, dosagem abaixo da recomendação presente na
literatura (10-20mg/kg/vo/bid), mas se mostrou, apesar
disso, efetiva, dado o resultado satisfatório apresentado,
principalmente quando utilizado em conjunto com o
suplemento alimentar imunomodulador Defensyn®.

Utilizando uma dosagem menor é possível evitar

as possíveis alterações renais ocasionadas pelo consumo
prolongado do alopurinol, o que é especialmente impor-
tante tendo em vista que se trata de um medicamento de
uso contínuo no tratamento da Leishmaniose. O uso de
qualquer droga para o tratamento da LVC associado com
imunomodulador Defensyn® pode estimular o sistema
imune dos animais, favorecendo o perfil Th-1, melhoran-
do a qualidade de vida dos animais, uma vez que ainda
não há cura parasitológica.

17
Suplementação com Imunoestimulante (Defensyn®) na melhora clínica de cães com Leishmaniose Visceral
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ABBAS, A. K.; LICHTMAN, A. H. Cellular and Molecular
Immunology. 6th ed. Saunders 2003.
ALMEIDA, P.S.; MINZÃO, E.R.; MINZÃO, L.D.; SILVA, S.R.;
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