PRÁTICA 1 (ANÁLISE DOS DADOS)

ESPECTROFOTOMETRIA – CONCEITOS E APLICAÇÕES

Giovana Torres do Amaral RA:11202231693

Ingrid de Freitas Rosa RA: 11202231638
Jéssica Amanda Gonçalves RA: 11202132033
João Victor Menezes Soares RA: 11202020847
Matheus Curcio Pereira RA: 11202130782

1. Seguem os plots assim como o solicitado:

Para fazer o cálculo da absortividade definimos a linha de tendência que das amostras
recolhidas no lab, e com isso podemos definir o coeficiente angular dessa reta que é
numericamente igual à multiplicação da absortividade com o caminho óptico (que no
experimento tinha 1 cm). Portanto, em cada um dos gráficos acima, o coeficiente angular da
reta é igual a absortividade de cada uma das substâncias.

2. Para o cálculo das amostras desconhecidas, utilizamos a absortividade que foi

descoberta no item anterior e a Lei de Lambert-Beer desenvolvida desse modo:

𝐴
𝐴 = ε. 𝐶. 𝑙 ➞ 𝐶 = 𝑙.ε

Sendo absorbância (𝐴), absortividade (ε), concentração (𝐶), caminho óptico (𝑙).

3. O método de Biureto é uma técnica clássica utilizada para a dosagem de proteínas em

solução. Ele se baseia na formação de um complexo azul-violeta entre íons de cobre (II) e o
grupo peptídico presente nas proteínas. O princípio básico do método de Biureto pode ser
descrito em algumas etapas:

Na presença de íons de cobre (II) em solução alcalina (geralmente NaOH), as ligações

peptídicas das proteínas sofrem uma reação de complexação. Essa complexação resulta na
formação de um complexo de cor azul-violeta entre os íons de cobre e o grupo peptídico.
A intensidade da cor gerada é diretamente proporcional à concentração de proteínas
presentes na solução. A absorbância da solução é medida em um espectrofotômetro a um
comprimento de onda específico para determinar a concentração de proteínas.

Vantagens do método de Biureto:

● Sensibilidade: O método de Biureto é capaz de detectar concentrações
relativamente baixas de proteínas, sendo mais sensível que alguns métodos de
colorimetria mais antigos.
● Ampla faixa de linearidade: Este método é eficaz em uma ampla faixa de
concentrações de proteínas, o que o torna útil para amostras com diferentes níveis
de concentração proteica.
● Relativamente simples: Comparado a alguns métodos mais complexos, o método de
Biureto é relativamente simples e requer um equipamento básico de laboratório,
como um espectrofotômetro.

Desvantagens do método de Biureto:

● Sensibilidade a interferentes: Alguns compostos presentes na amostra podem
interferir na formação do complexo azul-violeta, levando a resultados imprecisos.
● Toxicidade: O cobre utilizado no método de Biureto pode ser tóxico em altas
concentrações, exigindo precauções no manuseio e descarte adequado de resíduos.
Portanto, embora o método de Biureto possa não ser o mais sensível disponível, sua
rapidez, custo-benefício e consistência na determinação da concentração de proteínas em
uma variedade de meios o tornam uma escolha valiosa em muitos cenários, como na
análise de amostras de leite.

REFERÊNCIAS:
- Apostila de aulas práticas (2024.1) de Bioquímica: estrutura, propriedade e funções de
biomoléculas
- COMPARAÇÃO DE DIFERENTES METODOLOGIAS PARA DETERMINAÇÃO DE
PROTEÍNAS EM LEITE CRU DO MUNICÍPIO DE DOM PEDRITO, Rio Grande do Sul, 2014