2ª teste diferencial: fungos

Fungos são seres eucariontes, na sua maioria multicelulares, são completamente

heterotróficos/quimiorganotróficos podendo obter energia a partir da decomposição de
matéria orgânica do ambiente em organismos vivos ou em decomposição. Alguns
fungos são biotróficos,isto é, secretam substancias químicas que alteram a
permeabilidade da membrana celular do seu hospedeiro tornando-a mais permeável para
hidratos de carbono e assim absorvem estes açúcares para obtenção de
energia.(MADIGAN et al 2015)

1ª etapa: inoculação dos fungos no meio de cultura sólido por esgotamento.

Meio de cultura (ágar sangue)

Amostra com microrganismos
Lamparina
Alça
fósforo

Procedimentos.

Primeiro devemos tratar da desinfeção do local de trabalho e organização do

mesmo local, só assim é que procedemos com a inoculação.

1º . È de extrema importância que a inoculação seja feita ao redor da lamparina acesa.

O primeiro passo consiste em flambar a alça na chama azul segurando-a na

posição obliqua
Em seguida esfriamos a alça ao redor da chama
Pegamos a amostra e extraímos o material biológico e cuidadosamente abrimos
a placa ao redor da chama e em zig-zag inoculamos a nossa amostra.
 Depois de inoculada a amostra fechar a placa e flambar a alça.
Levamos o meio de cultura para o forno com a temperatura ideal de 37º

Criadas as condições para o desenvolvimento dos fungos, observamos o seu

desenvolvimento em um período de três dias até a etapa seguinte.

2ª Etapa: coloração diferencial.

Para coloração diferencial usamos os seguintes matérias:

 Alça
 Lamparina
 Meio de cultura
 Lamina
 Fósforo
 Álcool

Reagentes

 Azul de metileno
 Safranina
 Óleo de imersão

Procedimentos

1º passo: esfregaço

 Ao redor da lamparina acesa removemos uma amostra do material biológico e

esfregamos cuidadosa e meticulosamente na lamina

2º passo: Fixação

 Levamos a lamina até a parte superior da chama da lamparina e fixamos a

amostra a ser observada.

3º passo: coloração

 Colocamos duas gotas do azul de metileno na lamina de deixamos por 5

minutos
 Em seguida lavamos a lamina com álcool e adicionamos a Safranina e
deixamos por 3 minutos.
 Em seguida lavamos com água destilada e deixamos a lamina secar por 10
minutos.
4º passo: Observação Microscópica

 Depois da lamina secar adicionamos duas gotas de óleo de imersão e levamos ao

microscópio optico e usamos a objectiva de maior ampliação.

Resultados: Os componentes da parede celular dos fungos reagiram negativamente a

coloração do azul de metileno, apresentando o a cor vermelha da safranina .
References

 MADIGAN M. Et al; Brock Biology of microorganisms;14th ed;person

education; San Francisco, 2015.