1º - Passo: Coleta do Material / Preparar a Lâmina.
2º - Passo: Adicionar Primeiro Corante / Cristal Violeta /60 segundo 3º- Passo: Lavar a Lâmina com Água e Secar. 4º- Passo: Adicionar o Lugol / Mordente/ Fixador/ 60 Segundo. 5º- Passo: Lavar a Lâmina e Secar. 6 º- Passo: Aplicar Álcool / Solução Descorante/ 30 Segundo 7º- Passo: Adicionar o Corante / Fuccina /Descorante/ 30 Segundo. 8º- Passo: Analisar o Conteúdo da Lâmina no Microscópio Gram. Positiva e Gram. Negativa.
Nesse Procedimento, as bactérias são submetidas primeiras à ação de um
corante violeta, seguida de fixação com iodo de depois um agente de descoloração, como o metanol. Seguidamente, São novamente coradas com safranina. A bactéria Gram-positiva fixa o primeiro corante, devido a maior espessura da parede celular, e ficam coradas de azul ou violeta, enquanto a que as bactérias Gram-negativas, após a descoloração pelo metanol, são coradas pela Safranina e ficam vermelhas. As Bactérias que retém a coloração violeta são designadas por Gram-positiva. As Bactérias que perdem a coloração violeta depois de descoloradas, mas que adquirem um corante de contraste ficando com um tom cor de rosa é Gram- Negativa. Logo a pós todo Procedimento guardar os produtos tudo em seu devido lugar, fazer a limpeza da lâmina e também da bancada com Álcool e joga o Material Descartável no lixo.