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TESTES GENÉTICOS E BIOMARCADORES MOLECULARES ARTIGO ORIGINAL

Volume 22, Número 5, 2018
ªMary Ann Liebert, Inc.
1–7
DOI: 10.1089/gtmb.2017.0250

Associação Específica de Idade deCCL5Polimorfismo Genético

com Tuberculose Pulmonar: Um Estudo Caso-Controle

Alexandre Varzari,1,2Elena Tudor,1Nina Bodrug,1Andrei Corloteanu,1

Ecaterina Axentii,1e Igor V. Deyneko3

Objetivos.As quimiocinas desempenham um papel fundamental na regulação e resposta imunológica e têm sido
implicadas na patogênese da tuberculose (TB). Neste estudo, investigamos se polimorfismos funcionais das
quimiocinasCCL5, CCL2,eCXCL8estão associados à TB pulmonar numa população da Moldávia. Materiais e métodos:
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.

Um total de 250 pacientes com TB e 184 controles saudáveis foram examinados paraCCL5
- 403G/A (rs2107538),CCL5Em1.1T/C (rs2280789),CCL2 -2518A/G (rs1024611) eCXCL8 -Polimorfismos 251A/T
(rs4073) usando técnicas padrão de reação em cadeia da polimerase.
Resultados:Nenhuma das variantes analisadas apresentou associação significativa com a suscetibilidade geral à TB
pulmonar. No entanto, oCCL5O polimorfismo In1.1T/C foi significativamente associado à TB de início precoce em pacientes
com menos de 30 anos (modelo dominante, razão de chances [OR] = 3,01,p =0,0046) ou menos de 40 anos (modelo
dominante, OR = 2,17,p =0,0099), e a análise realizada apenas de caso demonstrou queCCL5Os portadores do alelo C
In1.1T/C exibiram um início de TB mais precoce do que os homozigotos TT (36,14 anos vs. 40,13 anos,p =0,0065). Além
disso, foi observada significância nominal para uma associação entre a incidência de TB e ambos os oito genótipos
pareados na coorte geral de pacientes (0,017 <p <0,05) e oCCL2 -Polimorfismo 2518A/G entre homens (modelo dominante,
OR = 0,55,p =0,041; modelo log-aditivo, OR = 0,57,p =0,018). Conclusão:OCCL5O polimorfismo In1.1T/C pode modular o
risco de TB pulmonar de início precoce.

Palavras-chave:tuberculose, suscetibilidade, genética do hospedeiro, quimiocinas, polimorfismo, estudo de associação

Introdução juntamente com fatores bacterianos e ambientais, a genética do

hospedeiro influencia a suscetibilidade e resistência à TB (Lawn e Zumla,

A tuberculose ativa (TB)é uma doença infecciosa grave causada por

Mycobacterium tuberculose (Mtb) que atinge principalmente o
sistema respiratório, mas também pode se espalhar para outros órgãos.
Aproximadamente 9 milhões de novos casos de TB e 1,5 milhões de
mortes associadas à TB são notificados todos os anos; assim, a TB
representa atualmente um dos mais sérios desafios para a saúde global
(Organização Mundial da Saúde [OMS], 2016). A sua incidência está
distribuída de forma desigual em todo o mundo, de tal forma que *90%
de todos os casos de TB ocorrem em países em desenvolvimento e em
partes da Europa Oriental (Lawn e Zumla, 2011; OMS, 2016). Dos países
afetados da Europa Oriental, foi relatado que a Moldávia apresenta a
maior incidência de TB (152 casos/100.000/ano) e a terceira maior
(depois da Ucrânia e da Rússia) taxa de mortalidade induzida por TB (7,7
casos/100.000/ano) ( OMS, 2016).
Estudos que investigaram os efeitos da TB em gémeos e em familiares de
primeiro grau de pacientes com TB demonstraram que, juntamente com
2011; Naranbhai, 2016). Até o momento, muitos genes candidatos
associados à TB foram investigados, incluindo aqueles que codificam
quimiocinas que medeiam criticamente a resposta inflamatória do
hospedeiro durante a infecção por TB (Algoode outros,2003; Ligeiro e
Khader, 2013; Naranbhai, 2016). As quimiocinas constituem uma grande
superfamília de pequenas citocinas estruturalmente relacionadas que
atraem leucócitos para o local da infecção e medeiam a ativação de
leucócitos (Slight e Khader, 2013). Na TB pulmonar, os leucócitos
infiltrantes organizam-se então numa estrutura chamada granuloma,
que controla e contém a infecção bacteriana (Algoode outros,2003;
Ligeiro e Khader, 2013).
Duas subfamílias principais de quimiocinas, CXC e CC, são
distinguidas por um padrão conservado de resíduos de cisteína
localizados perto do terminal N (Slight e Khader, 2013; Qidwai e
Khan, 2016). O membro prototípico da família CXC é o
homodímero Interleucina 8 (IL-8 ou CXCL8), que também é

1Laboratório de Genética Humana, Instituto Chiril Draganiuc de Tisiopneumologia, Kishinev, República da Moldávia.
2Biobanco Unificado de Hannover, Hannover Medical School, Hannover, Alemanha.
3Instituto de Microbiologia e Centro Integrado de Biologia de Sistemas de Braunschweig (BRICS), Technische Universität Braunschweig,
Braunschweig, Alemanha.

1
 2 VARZARI ET AL.
conhecido como fator quimiotático de neutrófilos. As
quimiocinas reguladas na ativação, células T normais expressas
e secretadas (RANTES ou CCL5) e proteína quimiotática de
macrófagos-1 (MCP-1 ou CCL2) são membros da família CC que
geralmente são quimiotáticas para monócitos e linfócitos.
Notavelmente, níveis aumentados de CCL5, CCL2 e CXCL8 foram
observados no lavado broncoalveolar e nos fluidos pleurais, e
no soro isolado de pacientes com TB ativa em comparação com
controles saudáveis (Kurashimae outros,1997; Flores-
Villanuevae outros,2005).
Variações genéticas emCCL5, CCL2,eCXCL8demonstraram
modular a atividade transcricional dos genes e, portanto, os
níveis das proteínas correspondentes (Deynekoe outros,2006).
Por exemplo, polimorfismos funcionais, incluindo -403G/A,
-2518A/G e -251A/T, foram previamente identificados nas
regiões promotoras deCCL5, CCL2, eCXCL8,respectivamente
(cascoe outros,2000; Hizawae outros, 2002; Flores-Villanuevae
outros,2005), e da mesma forma, In1.1T/C foi previamente
identificado no íntron 1 deCCL5 (Ume outros, 2002). Sugere-se
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.
que tais variantes provavelmente contribuam para a
suscetibilidade/resistência do hospedeiro a várias doenças
inflamatórias e infecciosas (Qidwai e Khan, 2016; Qidwai, 2016).
Assim, foram realizadas extensas pesquisas para avaliar se a
suscetibilidade à TB está associada aCCL5 (Chue outros, 2007; Ben-
Selmae outros,2011a; de Wite outros,2011; Selvaraj e outros,2011;
Mishrae outros,2012; Mhmoude outros,2013),CCL2 (Flores-
Villanuevae outros,2005; Chue outros,2007; Möllere outros, 2009;
Teue outros,2009; Arjie outros,2012; Vélez Edwardse outros, 2012;
Singhe outros,2014; Chene outros,2015) eCXCL8 (Mãe e outros,
2003, 2016; Cookee outros,2004) polimorfismos; no entanto, a
maioria dos estudos até à data foram realizados em populações
africanas, asiáticas e latino-americanas com uma elevada incidência
de TB e produziram resultados inconsistentes. Até onde sabemos,
não existem estudos abrangentes que investiguem o efeito doCCL5
eCXCL8polimorfismos na suscetibilidade à TB já foram conduzidos
em uma população do Leste Europeu. Assim, o presente estudo
caso-controle foi desenhado para determinar seCCL5, CCL2,e/ou
CXCL8polimorfismos contribuem para a incidência de TB pulmonar
na Moldávia.
Materiais e métodos
Amostras
Este estudo de caso-controle envolveu 250 pacientes não
aparentados (109 mulheres e 141 homens; idade média no
recrutamento, 40,4 – 12,5 anos; idade média no diagnóstico, 38,9 –
12,1 anos) com TB pulmonar infiltrativa da Clínica de
Tisiopneumologia, do Instituto de Fisiopneumologia. , República da
Moldávia. O diagnóstico de TB foi baseado em sintomas clínicos e
achados radiográficos de tórax, e confirmado por avaliação
bacteriológica. Pacientes sabidamente imunodeficientes (por
exemplo, devido a infecção por HIV, diabetes, câncer ou terapia
imunossupressora administrada) foram excluídos do estudo. Todos
os pacientes eram caucasianos, de ascendência europeia e
(predominantemente) etnicamente moldavos (91,5%).
A coorte de controle consistia em 184 indivíduos saudáveis, não
aparentados e etnicamente pareados (Moldávios, 87%) (111
mulheres e 73 homens; idade média no recrutamento, 47,2 – 14,8
anos), que viviam em comunidades afetadas pela TB (de tal forma
que se presumia que eram foram expostos à bactéria). Os
indivíduos controle foram excluídos se tivessem histórico de terapia
anti-TB anterior, sinais ou sintomas sugestivos de TB ativa,
e/ou infiltrados na radiografia de tórax. Todos os participantes do
estudo forneceram consentimento informado por escrito para a sua
participação no estudo, que foi aprovado pelo Comitê de Ética do
Instituto de Tisiopneumologia (República da Moldávia) e que aderiu
aos princípios da Declaração de Helsinque.
Amostras de sangue venoso anticoagulado com EDTA foram
coletadas de todos os participantes do estudo, e o DNA genômico
foi extraído de leucócitos do sangue periférico usando um método
padrão de salting out (Millere outros,1988).
Genotipagem
Quatro polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) emCCL5
(-403G/A ou rs2107538),CCL5 (In1.1T/C ou rs2280789), CCL2 (-2518A/
G ou rs1024611) eCXCL8 (-251A/T, ou rs4073) foram selecionados
para genotipagem com base na frequência alélica (frequência
alélica menor [MAF] em populações europeias, MAF‡0,1) e efeitos
funcionais relatados anteriormente. O significado funcional relatado
de cada SNP foi primeiro reavaliado usando o algoritmo
SNP_TATA_Comparator (Ponomarenkoe outros,2015). A seguir, o
CCL5 -403G/A, CCL5Em1.1T/C, eCCL2 -Os SNPs 2518A/G foram
genotipados usando um método de polimorfismo de comprimento
de fragmento de restrição de reação em cadeia da polimerase
(PCR), como descrito anteriormente (Ane outros,2002; Ben-Selmae
outros,2011a; Singhe outros,2014), enquanto oCXCL8 -O SNP 251A/T
foi genotipado usando um método de PCR específico para alelo,
como descrito anteriormente (van de Sandee outros,2007).
Sequências de primers utilizadas, condições de PCR e enzimas de
restrição, bem como as análises de gel conduzidas são
apresentadas nos Dados Suplementares (Dados Suplementares
estão disponíveis online em www.liebertpub.com/gtmb). Para
controle de qualidade, *10% das amostras escolhidas
aleatoriamente foram regenotipadas para cada SNP, confirmando
totalmente os resultados iniciais da genotipagem.
Análise estatística
Estudantet-testar ec2O teste foi usado para comparar as
distribuições de idade e sexo entre pacientes e controles. O
desvio do equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) foi avaliado pelo
teste exato de Fisher. O desequilíbrio de ligação (LD) entre os
doisCCL5polimorfismos genéticos foram examinados usando D
¢eR2coeficientes. Utilizamos o tamanho da amostra, as
frequências alélicas na população controle e a prevalência de
TB relatada de 0,0025 (OMS, 2016) para encontrar o menor
tamanho do efeito com um nível de significância de 5% e um
poder de 80% usando um modelo de herança multiplicativa.
As frequências genotípicas nos grupos caso e controle foram
comparadas por meio de análise de regressão logística ajustada para
idade e sexo. Foram testados modelos genéticos dominante, recessivo,
codominante, log-aditivo e sobredominante. As correlações entre a idade
de início da doença e os SNPs individuais foram avaliadas por meio de
uma regressão linear com a idade de início como variável contínua
dependente. Razões de chances (OR) e seus correspondentes intervalos
de confiança de 95% (IC) ep-os valores foram calculados como medidas
de associações.p-Valores <0,05 foram considerados significativos para
todos os testes. A correção de Bonferroni para múltiplos testes foi
aplicada quando apropriado, dividindo 0,05 pelo número de
comparações independentes.
Os efeitos combinados dos pares de SNP na prevalência da doença foram
analisados usando uma regressão logística para todas as combinações
possíveis de SNP usando modelos genéticos dominantes, recessivos e
sobredominantes, como descrito anteriormente (Varzarie outros,
 POLIMORFISMOS GENÉTICOS DE QUIMOCINA E TB 3

Mesa1.Distribuição genotípica e frequência alélica dos polimorfismos estudados

em pacientes com tuberculose e controles saudáveis

Análises de associação
Genótipo/ Casos, Controles HWE, HWE
Polimorfismo alelo n (%) (p) n (%) (P) Modelo genético OU (IC 95%)a pa
CCL2 -2518A/G AA 144 (57,8) 1 90 (49,2) 0,86 Codominante AG x AA 0,72 (0,47–1,10) 0,16
(rs1024611) AG 91 (36,5) 78 (42,6) GG x AA 0,54 (0,24–1,23)
GG 14 (5,6) 15 (8,2) Dominante AG+GG vs. 0,69 (0,46–1,03) 0,072
A 379 (76,1) 258 (70,5) Recessivo AA+AG x GG 0,62 (0,28–1,39) 0,25
G 119 (23,9) 108 (29,5) Sobredominante AA+GG x AG 0,77 (0,51–1,16) 0,21
Aditivo de log - 0,73 (0,53–1,01) 0,056
CXCL8 -251A/T AA 51 (20,5) 0,8 36 (19,6) 0,38 Codominante AT x TT 0,81 (0,50–1,30) 0,68
(rs4073) NO 126 (50,6) 98 (53,3) AA x TT 0,87 (0,48–1,58)
TT 72 (28,9) 50 (27,2) Dominante AA+AT x TT 0,83 (0,53–1,30) 0,41
A 228 (45,8) 170 (46,2) Recessivo AT+TT x AA 1,00 (0,60–1,66) 1
T 270 (54,2) 198 (53,8) Sobredominante AA+TT x AT 0,86 (0,57–1,29) 0,46
Aditivo de log - 0,92 (0,69–1,24) 0,59
CCL5 -403G/A GG 144 (57,8) 0,29 113 (61,4) 0,83 Codominante GA x GG 1,26 (0,82–1,94) 0,51
(rs2107538) GA 95 (38,1) 62 (33,7) AA x GG 0,88 (0,33–2,34)
AA 10 (4) 9 (4,9) Dominante AA+GA x GG 1,21 (0,80–1,83) 0,36
G 383 (76,9) 288 (78,3) Recessivo GG+GA x AA 0,81 (0,31–2,12) 0,66
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.

A 115 (23,1) 80 (21,7) Sobredominante GG+AA x GA 1,27 (0,84–1,94) 0,26

Aditivo de log - 1,12 (0,79–1,58) 0,54
CCL5In1.1T/C TT 173 (69,2) 1 136 (73,9) 0,55 Codominante TC x TT 1,27 (0,80–2,03) 0,6
(rs2280789) TC 70 (28) 43 (23,4) CC x TT 1,05 (0,31–3,53)
CC 7 (2,8) 5 (2,7) Dominante TC+CC x TT 1,25 (0,80–1,95) 0,33
T 416 (83,2) 315 (85,6) Recessivo TT+TC x CC 0,99 (0,29–3,30) 0,98
C 84 (16,8) 53 (14,4) Sobredominante TT+CC x TC 1,27 (0,80–2,02) 0,31
Aditivo de log - 1,18 (0,80–1,74) 0,41
aAjustado por sexo e idade na investigação.
IC, intervalo de confiança; HWE, equilíbrio de Hardy-Weinberg; OU, razão de chances.

2014, 2015). Todos os dados foram avaliados utilizando os softwares
SNPStats e E-Views (IHS Global, Inc.).
Resultados
Os pacientes nos grupos caso e controle exibiram
distribuições de idade e sexo significativamente diferentes (p =
0,003 e p =3,0·10-6, respectivamente). As frequências doCCL5
-403G/A,CCL5Em1.1T/C,CCL2 -2518A/G, eCXCL8
- Os polimorfismos 251A/T nesta coorte foram considerados
consistentes com aqueles previamente observados em outras
populações caucasianas-europeias. Além disso, as distribuições
alélicas dos SNPs investigados mostraram-se de acordo com o
HWE em ambos os grupos (Tabela 1).
Este estudo teve poder suficiente (80%) para detectar OR
mínimos de 1,45, 1,50, 1,54 e 1,64 para oCCL2 -2518A/G,
CXCL8 -251A/T,CCL5 -403G/A, eCCL5Polimorfismos In1.1T/C,
respectivamente. Não foi observada diferença significativa
entre as frequências deCCL5 -403G/A,CCL5 Em1.1T/C, e
CXCL8 -Genótipos e alelos 251A/T nos grupos caso e
controle de TB (Tabela 1). Da mesma forma, oCCL2
- O polimorfismo 2518A/G demonstrou estar apenas marginalmente
associado à incidência de TB usando um dominante (OR = 0,69, IC
95% = 0,46–1,03,p =0,072) ou log-aditivo (OR = 0,57, IC 95% = 0,53–
1,01,p =0,073) modelo genético.
LD forte (D em pares¢ =0,96,R2= 0,593) foi observado
entre os doisCCL5loci nas posições de nucleotídeos -403G/A
e In1.1T/C. Análises adicionais de haplótipos não revelaram

Mesa2.Revelados efeitos da interação genótipo-genótipo em pares no risco de tuberculose

por regressão logística sob modelos genéticos dominantes, recessivos e sobredominantes

Primeiro locus Genótipo Segundo locus Genótipo Casos,n (%) Controles,n (%) OU (IC 95%)a pa
CCL2-2518A/G AA CCL5 -403G/A GG+GA 139 (55,6) 84 (45,7) 1,49 (1,02–2,19) 0,0405
CCL2-2518A/G GG CCL5 -403G/A GG 7 (2,8) 13 (7,1) 0,38 (0,15–0,97) 0,0362
CCL2-2518A/G AG+GG CCL5 -403G/A GG 61 (24,4) 63 (34,2) 0,62 (0,41–0,94) 0,0249
CCL2-2518A/G AG+GG CCL5 -403G/A GG+AA 66 (26,4) 66 (35,9) 0,64 (0,42–0,97) 0,0341
CCL2-2518A/G AG+GG CCL5 In1.1T/C TT 71 (28,4) 72 (39,1) 0,62 (0,41–0,92) 0,0188
CCL2-2518A/G AG+GG CCL5 In1.1T/C TT+CC 74 (29,6) 74 (40,2) 0,63 (0,42–0,93) 0,021
CXCL8 -251A/T AA+TT CCL5 -403G/A AG 46 (18,4) 19 (10,3) 1,96 (1,10–3,47) 0,0198
CXCL8 -251A/T AA CCL5 In1.1T/C TC 12 (4,8) 2 (1.1) 4,59 (1,01–20,56) 0,0305

Apenas associações com um valor nominalp-valor <0,05 são mostrados.

aAjustado por sexo e idade na investigação.
 4 VARZARI ET AL.

Mesa3.Análise da Associação deCCL5Em1.1T/CPolimorfismo em grupos de início precoce

(<40e <30Anos)
18–39 anos 18–29 anos
Genótipo/ Controles,
Modelo alelo n (%) Casos,n (%) OU (IC 95%)a pa Casos,n (%) OU (IC 95%)a pa
Codominante TT 136 (73,9) 85 (62) 1 (Referência) 0,029 44 (57,9%) 1 (Referência) 0,018
TC 43 (23,4) 47 (34,3) 2h30 (1h23–4h30) 28 (36,8%) 3,10 (1,36–7,06)
CC 5 (2,7) 5 (3,6) 1,37 (0,31–5,98) 4 (5,3%) 2,53 (0,43–14,96)
Dominante TT 136 (73,9) 85 (62) 1 (Referência) 0,0099b 44 (57,9%) 1 (Referência) 0,0046b
TC+CC 48 (26,1) 52 (38) 2,17 (1,19–3,93) 32 (42,1%) 3,01 (1,38–6,59)
Recessivo TT+TC 179 (97,3) 132 (96,3) 1 (Referência) 0,92 72 (94,7%) 1 (Referência) 0,5
CC 5 (2,7) 5 (3,6) 1,08 (0,25–4,64) 4 (5,3%) 1,83 (0,32–10,44)
Sobredominante TT+CC 141 (76,6) 90 (65,7) 1 (Referência) 0,0085b 48 (63,2%) 1 (Referência) 0,008b
TC 43 (23,4) 47 (34,3) 2,27 (1,22–4,21) 28 (36,8%) 2,93 (1,30–6,61)
Aditivo de log - - - 1,77 (1,06–2,95) 0,026 - 2,30 (1,21–4,37) 0,0095b

aAjustado por sexo e idade na investigação.

bO resultado permaneceu significativo após controlar o erro tipo I usando a correção de Bonferroni (uma =0,05/4).
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.

diferenças significativas nas frequências de haplótipos dos dois
SNPs entre os pacientes e indivíduos saudáveis (p >0,05).
Em seguida, foram avaliados os efeitos de todas as combinações
possíveis de pares de SNP no risco de TB. Os resultados desta análise
identificaram oito combinações de SNP que inicialmente pareciam estar
potencialmente associadas à TB; no entanto, nenhuma dessas
associações potenciais permaneceu significativa após a correção de
Bonferroni para testes múltiplos (p >0,0056, Tabela 2).
Para analisar a associação entre o genótipo do paciente e a idade de
início da doença, os pacientes com TB analisados foram divididos em
dois grupos, compreendendo aqueles com idade <40 anos (grupo de
início precoce,n =137) e‡40 anos (grupo de início tardio,n =113). Cada um
desses grupos foi então comparado com um grupo de indivíduos
saudáveis utilizando uma análise de regressão multivariada. A idade
limite de 40 anos foi selecionada porque a prevalência da TB específica
por idade na República da Moldávia é unimodal e centrada nesta idade
(OMS, 2016). Notavelmente, a idade média no diagnóstico da doença de
38,9 anos observada por este estudo é consistente com a relatada pela
OMS (2016).
OCCL5Descobriu-se que o SNP In1.1T/C está associado à
incidência de TB no grupo de início precoce usando codominante (p
=0,029), dominante (p =0,0099), sobredominante (p = 0,0085) e log-
aditivo (p =0,026) modelos genéticos (Tabela 3); no entanto, apenas
op-os valores gerados usando os modelos dominante e
sobredominante permaneceram significativos após serem feitas as
correções de Bonferroni para comparações múltiplas (p <0,0125).
Notavelmente, o efeito doCCL5O SNP In1.1T/C sobre o risco de TB foi
ainda mais pronunciado quando os pacientes foram divididos em três
subgrupos, compreendendo aqueles com idade <30, 30-44 e> 44 anos
(Tabela 3). Nenhuma outra associação significativa foi observada em
grupos de início precoce ou tardio.
Uma análise subsequente de regressão linear apenas de caso
confirmou uma relação entre oCCL5Polimorfismo In1.1T/C e idade
de início da TB (Tabela 4). Os pacientes homozigotos para o alelo T
comum exibiram uma idade de início maior do que aqueles
portadores do alelo C (40,13 anos vs. 36,14 anos,p =0,0065).
Por fim, foi realizada uma análise estratificada por gênero para
avaliar separadamente o efeito dos polimorfismos analisados na
incidência de TB pulmonar em homens e mulheres. Os resultados
desta análise revelaram associações significativas entre oCCL2 -SNP
2518A/G e risco de TB em pacientes do sexo masculino, conforme
determinado usando dominante (p =0,041) e log-aditivo (p =0,018)
modelos genéticos (Tabela 5); no entanto, isso não foi mantido após
a correção de Bonferroni (p >0,0125). Nenhuma outra associação
significativa entre os polimorfismos estudados e a incidência de TB
foi observada em homens ou mulheres.
Discussão
Foi demonstrado anteriormente que variações de sequência nas
regiões reguladoras e codificadoras de proteínas de quimiocinas estão
associadas a uma série de doenças infecciosas e inflamatórias

Mesa4.Efeito deCCL5Em1.1T/CPolimorfismo na Idade de Início, Analisado por Regressão Linear

Modelo Genótipo/alelo n Média de idade de início (SE) Coeficiente LR (IC 95%)a pa
Codominante TT 173 40,13 (0,92) 0,00 0,021
TC 70 36,51 (1,42) - 4,07 (-7,27 a 0,87)
CC 7 32,43 (4,24) - 6,87 (-15,58 a 1,84)
Dominante TT 173 40,13 (0,92) 0,00 0,0065b
TC+CC 77 36,14 (1,34) - 4,33 (-7,42 a 1,23)
Recessivo TT+TC 243 39,09 (0,78) 0,00 0,2
CC 7 32,43 (4,24) - 5,73 (-14,48 a 3,03)
Sobredominante TT+CC 180 39,83 (0,9) 0,00 0,02
TC 70 36,51 (1,42) - 3,81 (-7,00 a 0,61)
aAjustado para sexo.
bO resultado permaneceu significativo após controlar o erro tipo I usando a correção de Bonferroni (uma =0,05/4). LR,
regressão logística.
 POLIMORFISMOS GENÉTICOS DE QUIMOCINA E TB
Mesa5.Análise da Associação deCCL2 -2518A/GPolimorfismo em Homens
Modelo Genótipo/alelo Casos,n (%)
Codominante AA 85 (60,7)
AG 49 (35)
GG 6 (4,3)
Dominante AA 85 (60,7)
AG+GG 55 (39,3)
Recessivo AA+AG 134 (95,7)
GG 6 (4,3)
Sobredominante AA+GG 91 (65)
AG 49 (35)
Aditivo de log - -
aAjustado pela idade na investigação.
(Qidwai e Khan, 2016; Qidwai, 2016); assim, este
estudo investigou seCCL5, CCL2,eCXCL8
polimorfismos conferiram suscetibilidade à TB
pulmonar na população moldava analisada.
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.
O SNP -2518 A/G noCCL2descobriu-se que a região
promotora afeta a atividade transcricional do gene, de modo
que o alelo G foi associado a maiorCCL2níveis de expressão
(Flores-Villanuevae outros,2005). Notavelmente, no entanto,
estudos anteriores que examinaram a associação entre o CCL2 -
O SNP 2518A/G e a TB pulmonar em várias outras populações
relataram resultados inconsistentes. Por exemplo, descobriu-se
que o risco aumentado de TB estava associado ao alelo -2518G
no norte da China (Shie outros,2015), coreano, mexicano,
peruano (Flores-Villanuevae outros,2005; Ganachari e outros,
2010), Zâmbia (Buijtelse outros,2008) e Tunisino (Ben-Selmae
outros,2011b) populações. Por outro lado, descobriu-se que o
mesmo alelo estava significativamente associado à resistência à
TB em Gana (Thyee outros,2009) e marroquino (Arji e outros,
2012) e não ter efeito sobre a suscetibilidade à TB na população
russa (Thyee outros,2009), Chinês de Hong Kong (Chue outros,
2007), Sahariya Indiano (Mishrae outros, 2012), sul-africano de
cor (Möllere outros,2009), Guiné Bissau, Gâmbia, Afro-
Americana, Branca Americana e Argentina (Velez Edwardse
outros,2012) populações. Da mesma forma, o presente estudo
não foi capaz de demonstrar associação significativa entre o
CCL2 -SNP 2518A/G e risco de TB na coorte moldava analisada
(embora tenha sido observada uma frequência não
significativamente reduzida do alelo G entre pacientes com TB).
Esta inconsistência entre os estudos é provavelmente devida,
pelo menos em parte, ao pequeno tamanho das amostras e às
diferenças intrínsecas nas origens genéticas das populações
estudadas.
Vários autores postularam que as diferenças baseadas no sexo
provavelmente têm impacto na susceptibilidade à TB e, de facto, a TB ocorre
duas vezes mais frequentemente nos homens do que nas mulheres (OMS,
2016). Curiosamente, a análise específica de género conduzida por este estudo
mostrou que oCCL2 -O SNP 2518A/G modulou o risco de TB em homens, mas
não em mulheres. Embora estes resultados tenham sido apenas
nominalmente significativos, são apoiados por aqueles relatados
anteriormente para uma população do sul da Índia, que também mostraram a
frequência doCCL2 -O genótipo 2518A/G GG está diminuído entre pacientes do
sexo masculino com TB em comparação com homens saudáveis (Singh e
outros,2014). Estes resultados enfatizam a importância de estratificar os
pacientes com TB por sexo para identificar e compreender com precisão
possíveis associações entre polimorfismos e resistência/suscetibilidade do
hospedeiro à TB ativa.
5
Controles,n (%) OU (IC 95%)a pa
34 (46,6) 1 (referência) 0,055
32 (43,8) 0,61 (0,33–1,12)
7 (9,6) 0,28 (0,09–0,92)
34 (46,6) 1 (referência) 0,041
39 (53,4) 0,55 (0,30–0,98)
66 (90,4) 1 (referência) 0,071
7 (9,6) 0,34 (0,11–1,09)
41 (56,2) 1 (referência) 0,24
32 (43,8) 0,70 (0,39–1,26)
- 0,57 (0,35–0,91) 0,018
Foi demonstrado anteriormente que os SNPs -403G/A e In1.1T/C
aumentam (Hizawae outros,2002) e diminuição (Um e outros,2002)
CCL5atividade transcricional e expressão, respectivamente. Além
disso, estudos anteriores relataram uma associação significativa
entre oCCL5 -Polimorfismo 403G/A e risco de TB pulmonar
(Sánchez-Castañóne outros,2009; Ben-Selmae outros,2011a; Mishra
e outros,2012; Kouhpayehe outros, 2016), embora isso não tenha
sido confirmado por vários outros estudos (Chue outros,2007; de
Wite outros,2011; Selvaraje outros,2011; Mhmoude outros,2013).
Nenhuma associação significativa entre o CCL5O polimorfismo
In1.1T/C e o risco de TB ainda foram identificados (Chue outros,
2007; Selvaraje outros,2011; Mhmoud e outros,2013); No entanto, o
CCL5Foi demonstrado que o SNP In1.1T/C está associado a várias
outras doenças infecciosas (Hattorie outros,2011; Zhaoe outros,
2016).
Este estudo não encontrou associação entre TB pulmonar e
-403G/A ou In1.1T/CCCL5SNPs na coorte geral de pacientes.
Curiosamente, no entanto, os resultados da análise estratificada por
idade dos SNPs analisados sugerem que as diferenças
relacionadas com a idade na resistência/suscetibilidade à TB podem
ter mascarado uma associação entre a CCL5In1.1T/C e incidência de
TB. Na verdade, oCCL5O genótipo In1.1 TC+CC, que confere uma
capacidade reduzida para a produção de CCL5, demonstrou ocorrer
com uma frequência significativamente maior entre pacientes com
TB de início precoce do que entre indivíduos saudáveis (Ume
outros,2002). Por outro lado, a frequência do genótipo TT, que
confere uma capacidade relativamente elevada de produção de
CCL5, foi significativamente maior entre indivíduos saudáveis. Esses
resultados são consistentes com um estudo recente, que sugeriu
que oCCL5O genótipo In1.1T/C TT pode regular positivamente a
expressão de CCL5 nas células T de pacientes com TB, de modo a
recrutar células mononucleares adicionais para o local da infecção e
aumentar a imunidade Th1, protegendo assim o hospedeiro contra
a doença (Singhe outros,2017).
Até onde sabemos, este estudo é o primeiro a relatar uma
relação específica por idade entre umCCL5No polimorfismo 1.1T/C e
na TB pulmonar, embora notavelmente, associações de TB
dependentes da idade com outras origens genéticas tenham sido
publicadas anteriormente (Mahasirimongkole outros, 2012;
Concedere outros,2013; Tahirie outros,2016). Juntos, estes
resultados sugerem que o impacto do contexto genético pode ser
maior nos casos de TB de início precoce, em vez de de início tardio.
Isto é consistente com uma teoria genética publicada
anteriormente para doenças infecciosas (Casanova e Abel, 2013).
O polimorfismo -251A/T noCXCL8foi demonstrado
anteriormente que o promotor modulaCXCL8expressão, tal
 6 VARZARI ET AL.
descobriu-se que o aumento da produção de IL-8 está
associado à presença do alelo A (Hulle outros,2000). Além disso,
uma associação estatisticamente significativa foi previamente
identificada entre oCXCL8 -SNP 251A/T e incidência de TB em
brancos e afro-americanos (Mae outros, 2003), bem como em
uma população nativa paraguaia (Lindenaue outros,2014). Em
contraste, dois outros estudos genéticos que investigaram
coortes de pacientes da Gâmbia (Cookee outros, 2004) e China
(Mae outros,2016) não conseguiu confirmar uma associação
entre este SNP e a incidência de TB. Da mesma forma, este
estudo não mostrou associação entre oCXCL8 -Genótipo 251A/T
e/ou frequências alélicas e incidência de TB na coorte moldava
analisada. É possível que estes resultados contraditórios
possam ter sido causados pelos efeitos das diferenças étnicas
na LD, pela heterogeneidade dos subtipos da doença e/ou pelo
pequeno tamanho das amostras (Cookee outros,2004).
A TB é uma doença complexa e, como tal, a sua patogénese
provavelmente envolve interações entre múltiplos fatores genéticos
(de Wite outros,2011); assim, este estudo analisou o impacto dos
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.
genótipos combinados no risco de TB. Os resultados desta análise
identificaram oito combinações de genótipos (diplótipos) que foram
significativamente associadas à TB na população moldava
analisada. Embora apenas nominalmente significativas, estas
associações sugerem um papel potencial para estes genótipos
combinados na conferição do risco de TB; no entanto, isto requer
confirmação através de estudos futuros com coortes maiores. Uma
análise combinada anterior deCCL5 -Os polimorfismos 403G/A e
In1.1T/C em uma população chinesa mostraram que os diplótipos
GA/TT e GG/TC estão fortemente associados à TB (p <0,001 ep <
0,0001, respectivamente) (Chue outros,2007), mas essas associações
não foram identificadas neste estudo.
No geral, este estudo fornece evidências de uma associação
dependente da idade entre oCCL5Polimorfismo In1.1T/C e TB
pulmonar de início precoce na população moldava analisada.
Além disso, foi demonstrado que um fraco efeito específico do
género é exercido pelaCCL2 -Polimorfismo 2518A/G no risco de
TB experimentado por homens nesta coorte. A análise caso-
controle conduzida da coorte geral não mostrou que nenhum
dos polimorfismos individuais estivesse associado à incidência
de TB, mas identificou várias associações nominais entre várias
combinações de genótipos e o risco da doença. Este estudo foi
limitado principalmente pelo tamanho relativamente pequeno
da amostra, que não foi suficiente para detectar efeitos
menores das variantes genéticas, para realizar uma análise
extensa da correlação genótipo-fenótipo ou para explorar
interações entre fatores genéticos e ambientais. O estudo
também é limitado por uma série de SNPs analisados. Assim,
estudos adicionais com coortes maiores e múltiplos marcadores
genéticos são necessários para confirmar e ampliar as
observações apresentadas.
Agradecimentos
Os autores agradecem a Elisabeth Weiss e Thomas Illig pela
assistência com este artigo. Agradecemos também aos sujeitos
do estudo pela disponibilidade em participar deste estudo. O
estudo foi apoiado pela Academia de Ciências da Moldávia
(bolsa nº 13.817.09.01A) e pelo Hannover Unified Biobank. AV
foi patrocinado pela Fundação Alexander von Humboldt.
Declaração de divulgação do autor
Não existem interesses financeiros concorrentes.
Referências
Algood HM, Chan J, Flynn JL (2003) Quimiocinas e tubérculos
culose. Fator de crescimento de citocinas Rev 14:467–477.
Um P, Nelson GW, Wang L,e outros. (2002) Influência moduladora
no VIH/SIDA através da interacção de variantes do gene RANTES.
Proc Natl Acad Sci EUA 99:10002–10007.
Arji N, Busson M, Iraquiano G,e outros. (2012) O MCP-1 (CCL2)
- O genótipo 2518 GG está associado à proteção contra a
tuberculose pulmonar em pacientes marroquinos. J Infect
Dev Ctries 6:73–78.
Ben-Selma W, Harizi H, Bougmiza I,e outros. (2011a) Poli-
morfismos no gene RANTES aumentam a suscetibilidade à
tuberculose ativa na Tunísia. DNA Cell Biol 30:789–800. Ben-
Selma W, Harizi H, Boukadida J (2011b) MCP-1 -2518 A/G
o polimorfismo funcional está associado ao aumento da
suscetibilidade à tuberculose pulmonar ativa em pacientes
tunisinos. Mol Biol Rep 38:5413–5419.
Buijtels PC, van de Sande WW, Parkinson S,e outros. (2008)
Polimorfismo no ligante 2 da quimiocina CC associado à
tuberculose na Zâmbia. Int J Tuberc Lung Dis 12:1485–1488.
Casanova JL, Abel L (2013) A teoria genética de doenças infecciosas
doenças: um breve histórico e ilustrações selecionadas. Annu Rev
Genomics Hum Genet 14:215–243.
Chen LM, Tong X, Li XB,e outros. (2015) A associação começa
entre o polimorfismo -2518A/G no gene MCP-1 e o risco
de tuberculose pulmonar na população chinesa de
Sichuan. Eur Rev Med Pharmacol Sci 19:563–566.
Chu SF, Tam CM, Wong HS,e outros. (2007) Associação entre
Polimorfismos funcionais da RANTES e tuberculose em
chineses de Hong Kong. Genes Imune 8:475–479.
Cooke GS, Campbell SJ, Fielding K,e outros. (2004) Interleucina-8
o polimorfismo não está associado à tuberculose pulmonar
na Gâmbia. J Infect Dis 189:1545–1546.
de Wit E, van der Merwe L, van Helden PD,e outros. (2011) Gene-
interação genética entre genes candidatos à tuberculose em uma
população sul-africana. Genoma Mamm 22:100–110. Deyneko IV,
Bredohl B, Wesely D,e outros. (2006) FeatureScan:
revelando similaridade dependente de propriedade de sequências de
nucleotídeos. Nucleic Acids Res 34 (problema do servidor Web):W591–
W595.
Flores-Villanueva PO, Ruiz-Morales JA, Song CH,e outros. (2005)
Um polimorfismo do promotor funcional na proteína
quimioatraente de monócitos-1 está associado ao aumento da
suscetibilidade à tuberculose pulmonar. J Exp Med 202:1649–
1658. Ganachari M, Ruiz-Morales JA, Gomez de la Torre Pretell JC,
e outros. (2010) O efeito conjunto do genótipo GG da MCP-1 e do
genótipo 2G/2G da MMP-1 aumenta a probabilidade de
desenvolvimento de tuberculose pulmonar em indivíduos vacinados
com BCG. PLoS Um 5:e8881.
Grant AV, El Baghdadi J, Sabri A,e outros. (2013) Dependente da idade
associação entre tuberculose pulmonar e variantes
comuns de TOX na região de ligação 8q12–13. Am J Hum
Genet 92:407–414.
Hattori S, Shimojo N, Mashimo T,e outros. (2011) Relacionamento
entre polimorfismos de RANTES e bronquiolite por vírus sincicial
respiratório em uma população infantil japonesa. Jpn J Infect Dis
64:242–245.
Hizawa N, Yamaguchi E, Konno S,e outros. (2002) Um funcional
o polimorfismo no promotor do gene RANTES está associado ao
desenvolvimento de asma de início tardio. Am J Respir Crit Care
Med 166:686–690.
Hull J, Thomson A, Kwiatkowski D (2000) Associação de re-
bronquiolite por vírus sincicial respiratório com a região do gene da
interleucina 8 em famílias do Reino Unido. Tórax 55:1023–1027.
 POLIMORFISMOS GENÉTICOS DE QUIMOCINA E TB
Kouhpayeh HR, Taheri M, Baziboroon M,e outros. (2016) CCL5
O polimorfismo rs2107538 aumentou o risco de tuberculose em
uma amostra da população iraniana. Praga Med Rep 117:90–97.
Kurashima K, Mukaida N, Fujimura M,e outros. (1997) Elevado
Níveis de quimiocinas no lavado broncoalveolar de pacientes com
tuberculose. Am J Respir Crit Care Med 155:1474–1477. Gramado
SD, Zumla AI (2011) Tuberculose. Lanceta 378:57–72. Lindenau JD,
Guimarães LS, Friedrich DC,e outros. (2014) Cy-
polimorfismos do gene tocina estão associados à suscetibilidade
à tuberculose em uma população ameríndia. Int J Tuberc Lung Dis
18:952–957.
Ma X, Reich RA, Wright JA,e outros. (2003) Associação entre
Alelos do gene da interleucina-8 e suscetibilidade humana à
doença tuberculosa. J Infect Dis 188:349–355.
Ma Y, Liu YH, Zhang ZG,e outros. (2016) Gene da interleucina 8
os polimorfismos não estão associados à suscetibilidade à
tuberculose na população chinesa. Biomed Environ Sci 29:
158–161.
Mahasirimongkol S, Yanai H, Mushiroda T,e outros. (2012)
Estudos de associação de todo o genoma da tuberculose em asiáticos
Baixado pela Biblioteca da Universidade de Gotemburgo em www.liebertpub.com em 07/04/18. Apenas para uso pessoal.
identificam locus de risco distintos para tuberculose jovem. J Hum
Genet 57:363–367.
Mhmoud N, Fahal A, Wendy van de Sande WJ (2013) Associados
associação de polimorfismos de nucleotídeo único de IL-10 e
CCL5 com tuberculose na população sudanesa. Trop Med Int
Saúde 18:1119–1127.
Miller SA, Dykes DD, Polesky HF (1988) Uma simples salga
procedimento para extrair DNA de células nucleadas humanas.
Ácidos Nucleicos Res 16:1215.
Mishra G, Poojary SS, Raj P,e outros. (2012) Polimorfismo genético
fismas dos genes CCL2, CCL5, CCR2 e CCR5 na tribo Sahariya
do centro-norte da Índia: um estudo de associação com
tuberculose pulmonar. Infectar Genet Evol 12:1120–1127.
Möller M, Nebel A, Valentonyte R,e outros. (2009) Investigação
de genes candidatos do cromossomo 17 na suscetibilidade à TB
em uma população sul-africana. Tuberculose (Edinb) 89:189–194.
Naranbhai V (2016) O papel da genética do hospedeiro (e genômica) em
tuberculose. Espectro de Microbiol 4:TBTB2-0011-2016.
Ponomarenko M, Rasskazov D, Arkova O,e outros. (2015) Como
use SNP_TATA_Comparator para encontrar uma mudança significativa
na expressão genética causada pelo SNP regulador do promotor deste
gene através de uma mudança na afinidade da proteína de ligação a
TATA para este promotor. Biomed Res Int 2015:359835.
Qidwai T (2016) Polimorfismo genético de quimiocinas em humanos
saúde e doença. Immunol Lett 176:128–138.
Qidwai T, Khan MY (2016) Impacto das variações genéticas no CC
receptores e ligantes de quimiocinas em doenças infecciosas. Hum
Immunol 77:961–971.
Sánchez-Castañón M, Baquero IC, Sánchez-Velasco P,e outros.
(2009) Polimorfismos no promotor CCL5 estão associados à
tuberculose pulmonar no norte da Espanha. Int J Tuberc Lung Dis
13:480–485.
7
Selvaraj P, Alagarasu K, Singh B,e outros. (2011) CCL5
(RANTES) polimorfismos genéticos em pacientes com tuberculose
pulmonar do sul da Índia. Int J Immunogenet 38:397–402.
Shi GL, Yang L, Sol Y,e outros. (2015) Polimorfismo do gene MCP-1
fismas em pacientes do norte da China com tuberculose
pulmonar. Genet Mol Res 14:4035–4040.
Singh B, Anbalagan S, Selvaraj P (2017) Papel regulador de
Polimorfismos dos genes CCL5 (rs2280789) e CXCL10
(rs56061981) na expressão intracelular de CCL5 e CXCL10 na
tuberculose pulmonar. Hum Immunol 78:430–434.
Singh B, Chitra J, Selvaraj P (2014) CCL2, CCL3 e CCL4
polimorfismos genéticos em pacientes com tuberculose pulmonar no
sul da Índia. Int J Immunogenet 41:98–104.
Slight SR, Khader SA (2013) As quimiocinas moldam o sistema imunológico
respostas à tuberculose. Fator de crescimento de citocinas Rev 24:
105–113.
Tahiri K, Gharbaoui Y, Lazrak F,e outros. (2016) Um genoma em todo o genoma
estudo de associação de tuberculose pulmonar em Marrocos.
Hum Genet 135:299–307.
Thye T, Nejentsev S, Intemann CD,e outros. (2009) Promotor MCP-1
variante -362C associada à proteção contra tuberculose pulmonar
em Gana, África Ocidental. Hum Mol Genet 18:381–388. van de
Sande WW, Fahal A, Verbrugh H,e outros. (2007) Poli-
morfismos em genes envolvidos na imunidade inata predispõem
à suscetibilidade ao micetoma. J Immunol 179:3065–3074. Varzari
A, Bruch K, Deyneko IV,e outros. (2014) Análise de
polimorfismos em genes de receptores semelhantes a RIG-I em
pacientes alemães com esclerose múltipla. J Neuroimunol 277:140–
144. Varzari A, Deyneko IV, Tudor E,e outros. (2015) Polimorfismos
dos genes da glutationa S-transferase e da
metilenotetrahidrofolato redutase em pacientes moldavos com
colite ulcerosa: correlação genótipo-fenótipo. Meta Gene 7:76–82.
Velez Edwards DR, Tacconelli A, Wejse C,e outros. (2012) MCP1
SNPs e tuberculose pulmonar em coortes da África Ocidental,
EUA e Argentina: falta de associação ou epistasia com
polimorfismos de IL12B. PLoS Um 7:e32275.
Organização Mundial da Saúde (2016) Global Tuberculosis Con-
trol: Relatório da OMS 2016. Genebra, Suíça: OMS. Zhao J,
Ela S, Xie L,e outros. (2016) Os efeitos da RANTES
polimorfismos na suscetibilidade à infecção pelo HIV-1 e
progressão da doença: evidências de uma meta-análise
atualizada. AIDS Res Hum Retrovírus 32:517–528.
Endereço para correspondência:
Alexandre Varzari, PhD
Laboratório de Genética Humana
Instituto Chiril Draganiuc de Tisiopneumologia
Rua C. Varnav.
13Kishinev MD-2025
República da Moldávia
E-mail:alexander.varzari@mail.ru ;
varzari.alexander@mh-hannover.de