Diagnose de fitobacterioses

CONTEÚDO
1. Diagnose - definição
2. Sintomas e sinais
– Tipos de mancha
• Angular
• Zonada
• Aureolada
• Cuneiforme ou forma de “V”
– Clorose
– Crestamento
– Encharcamento ou anasarca
– Escaldadura
– Estria
– Fasciação
– Galha, hipertrofia ou tumor
– Podridão mole ou maceração
– Talo oco e canela preta
– Sarna
– Cancro
– Morte ou seca das pontas, seca dos ponteiros ou “die back”
– Murcha
3. Diagnose em plantas ou partes infectadas
– Exame macroscópico dos sintomas e sinais
– Exame microscópico da exsudação bacteriana
– Isolamento da bactéria
– Teste de Gram
– Reação de hipersensibilidade – HR
– Teste de patogenicidade
– Identificação do isolado através testes
• Bioquímicos
• Sorológicos
– Técnicas moleculares
• Diagnose – processo de se conhecer uma
doença,

• Fitobactérias podem induzir diferentes sintomas

nas plantas infectadas e em alguns casos
produzir sinais,

• Sintomas e sinais – importantes para

identificação e diagnose
– Cautela
• R. solanacearum, Verticilium e Fusarium – murcha em
solanáceas
• Sintomas • Sinais
– Alterações visíveis no – Evidências de estruturas
do patógeno em órgão da
aspecto da planta planta
doente – ou presença de cheiro
característico

Pus
E. amylovora
X. vesicatoria
Exsudação em gota

Teste do copo
E. amylovora Exsudação bacteriana
R. solanacearum
 Diferentes tipos de sintomas
Causado pela mesma bactéria

Queima dos
bordos foliares

Descoloração
vascular
Cancro no caule
Clavibacter michiganensis subsp.
Lesões nos frutos
michiganensis
 Diferentes tipos de sintomas
Causado pela mesma bactéria

Canela
preta

Podridão mole

Pectobacterium carotovorum
Talo oco
 Típico de bacteriose em plantas

Anasarca Exudação Pus

Congestionamento de água Nuvem de células bacterianas
 Mancha
Sintomas

Murcha Cancro Pinta Clorose Des. Vasc.

Crestamento Sarna Ench., Anasarca Podr. mole

 Diagnose no campo
• Observação dos sintomas

• Conhecimentos e experiência sobre a cultura

• Quais doenças incidem sobre aquela cultura

• Condições climáticas favoráveis

 Tipos de manchas

P.s.tabaci

Angular – limitada pela nervura, necrose Zonada – círculos concêntricas

aspecto polígono irregular

P.s.garcea
Café

Aureolada áreas necróticas

circundadas halo clorótico Cuneiforme ou forma de “V”
Mancha Angular
Pseudomonas sryngae pv. lacrymans –
pepino
Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum
- algodão
Paredes celulares espessas
– Folhas – xilema e as fibras esclerenquimáticas, ricas
em lignina
– Pode restringir a colonização do patógeno
• Interrompe o avanço de bactérias nos tecidos
• Sintomas de manchas angulares
• Patógeno coloniza somente as áreas entre as nervuras
– Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum
Estruturas de defesa histológica
– Camadas de cortiça
• Originam de células formadas a partir do felogênio (tecido
meristemático),
• Impedindo a invasão do patógeno para os tecidos sadios,
• Interrompendo o fluxo de água e nutrientes em direção ao
patógeno e substâncias tóxicas ao hospedeiro
– Tecidos mortos permanecem na planta – lesões necróticas

P. syringae pv. tabaci - fumo

 Mancha aureolada
• Áreas necróticas circundadas
por halo clorótico
– Produção de toxinas - bactéria
– Ativação de clorofilases,
– Destruição de clorofila
– Danos aos cloroplastos
– Inibição de fotossíntese,

Pseudomonas syringae pv. garcae – mancha

aureolada do cafeeiro
 Mancha e Pinta

Xanthomonas Pseudomonas
vesicatoria syringae pv. tomato
Penetração - estômatos Multiplicação - espaços intercelulares Enzimas-toxinas lesões
 Clorose

• Amarelecimento dos órgãos

clorofilados - folhas
– Pseudomonas corrugada –
tomate
• Necrose da medula
 Crestamento
• Morte do tecido vegetal dando aparência de
queima

Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli Pseudomonas syringae pv. pisi

Crestamento bacteriano comum do feijoeiro Crestamento bacteriano em ervilha
 Encharcamento ou anasarca
• Tecido translúcido devido à expulsão de água
das células da planta infectada p/ espaços
intercelulares

Pseudomonas syringae pv. pisi

Crestamento bacteriano em ervilha Xanthomonas fragariae -
morango
 Escaldadura
• Descoramento da epiderme e de tecidos adjacentes
em órgãos aéreos. Seu aspecto visual lembra o órgão
escaldado por água quente

Escaldadura em folhas de cana-de-açúcar infectadas por Xanthomonas

albilineans.
 Estria
• Também conhecida como listra, é uma lesão
alongada, estreita, paralela à nervura das
folhas de gramíneas

Estria vermelha em folha de cana-de-açúcar decorrente de infecção

por Acidovorax avenae subsp. avenae
 Fasciação
Crescimento anormal de raízes no colo da planta,
- desequilíbrio nos níveis normais de citocininas da planta

Rhodococcus fasciens
Rhizobium rhizogenes
(Agrobacterium rhizogenes) Induz fasciação em gerânio
 Galha (Hipertrofia, Tumores)
• Hiperplasia de células de planta em torno de
uma lesão
• Tumores no colo da
planta
Danos ao hospedeiro
• Deficiência mineral,
• Amarelecimento
• Nanismo
Rhizobium vitis Rhizobium
• Desequilíbrio hormonal (Agrobacterium radiobacter (A.
vitis) tumefaciens)
Bactéria de solo, penetração ferimentos
 Tumor inducing

Conjugação

aa

A. vitians

Processo de formação de galhas induzidas por Rhizobium radiobacter,

sob a ação dos hormônios auxinas e citocininas
Podridão mole ou maceração
Órgão de reserva
• Frutos
• Bulbos
• Tubérculos
• Rizomas

Pectobacterium

Apodrecimento + odor
Maceração Pectobacterium pectolíticas
Pseudomonas fluorescente
 • Pectinases degradam as substâncias pécticas,
α-1,4

Metilpoligalacturonase

Pectina

Trans-eliminase ac.
poligalacturônico

Ac. poligalacturônico

metanol Metilesterase da pectina

Mecanismo de ação de algumas enzimas pectolíticas

 Podridão mole ou maceração

Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum - alface e cebola

 Podridão mole ou maceração

Odor desagradável, invasão do tecido

por saprófitas

Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum – cenoura e batata

 Talo Oco e Canela Preta
Atividade pectolítica – região Colonização da casca – acúmulo de
central, não lenhosa melanina e outros pigmentos escuros

Pectobacterium ssp.
Elevada umidade

Batata

Pectobacteroim atroseptica,
Tomate Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum,
Dickeya chrysanthemi
 Sarna
• Áreas rugosas, corticosas e
escuras, tamanho variável,
proliferação anormal das
células da periderme

– Streptomyces spp. – sarna

comum
 Cancro

• Lesões alongadas no caule,

profundas – rachaduras
• Bactéria invade a planta e
multiplica nos feixes vasculares
• Colonização estende p/ o
tecido parenquimatoso
• Alterações histológicas,
rachando o caule expondo o
cancro
Cancro da haste tomateiro
Clavibacter michiganensis subsp.
michiganensis
 Cancro

Cancro cítrico - Xanthomonas

axonopodis pv.citri Lesões salientes nas duas faces da folha
 Morte ou seca das pontas, seca dos
ponteiros ou ‘die back’

Erwinia amylovora
macieira

Galhos sofrem murcha, necrose e morte

Pode ocorrer progressão no sentido descendente – morte da planta
Morte ou seca das pontas, seca dos
ponteiros ou ‘die back’

Xanthomonas axonopodis pv. manihotis - mandioca

Morte ou seca das pontas, seca dos ponteiros
ou ‘die back’

Erwinia psidii - goiabeira

 Murcha
• Bloqueio dos vasos do xilema, impedindo
o transporte de água e sais minerais

Murcha em planta de batata e bananeira - Ralstonia solanacearum

(tomate)
 Murcha

Pus bacteriano exsudando

de vasos de tubérculos
Ralstonia solanacearum

Xilema infectado, invasão do tecido parenquimatoso que

circula os vasos, resultando em necrose vascular, levando
a murcha.
 Murcha

Descoloração pardo-avermelhada
Descoloração vascular na parte do pseudocaule
interna do pseudocaule

Mal do panamá
Ralstonia solanacearum, moko da bananeira Fusarium oxysporium f.sp. cubense
 Murcha

Xanthomonas axonopodis pv.manihotis - mandioca

Xylella fastidiosa
Candidatus liberobacter - huanglongbing
Greening

Diaphorina citri
 Leifsonia xyli subsp. xyli (raquitismo da
soqueira)

- subdesenvolvimento da planta, que se agrava a cada ciclo -para as

socas subseqüentes.
Diagnose
 Diagnose em plantas ou partes de planta
infectada
1. Exame macroscópico dos sintomas e sinais
2. Exame microscópico da exsudação bacteriana
3. Isolamento da bactéria
4. Teste de gram
5. Reação de hipersensibilidade - HR
6. Teste de patogenicidade
7. Identificação do isolado através testes
– Bioquímicos
– Sorológicos
8. Técnicas moleculares
1.Exame macroscópico dos sintomas e
sinais

Pus
Odor
 2.Exame microscópico da exsudação bacteriana
Detecção de bactérias em caules

Teste do copo, pode ser

feito no campo
• Ralstonia solanacerum –
murcha bacteriana
• Corte do ramo - na
extremidade do tecido sadio
• Exsudação do pus bacteriano
 2.Exame microscópico da exsudação bacteriana
Detecção de bactérias em folhas

Teste de exsudação em
gota
• corte margem da lesão –
fragmento retangular 0,4x0,5 cm
• Coloque 1 gota d´água – lâmina de
microscópio
• cubra lamínula
• visualize ao microscópio de menor
aumento
• Células bacterianas exsudam do
interior do tecido p/ o meio
 2.Exame microscópico da exsudação bacteriana
Detecção de bactérias em folhas

• teste de exsudação em gota

• método rápido
• sensível
• Seguro
– Cuidados
• Exsudação de gomas e látex
 3.Métodos de isolamento
Absoluta assepsia

Esquema para isolamento de fitobactérias a partir de órgãos vegetais infectados

 Semeadura da suspensão de células em meio de cultura
sólido
Semeadura pelo método
de estrias ou riscas
• Alça de repicagem – gota
suspensão

Estrias compostas

Estrias simples
 Semeadura da suspensão de células em meio de cultura
sólido

Semeadura pelo método de estrias ou riscas

• Após 24 a 48h
• Colônias individualizadas
• Repicar p/ tubos de
cultura com meio
inclinado
4. Teste de Gram
• Cristal violeta
• Lugol
• Álcool
• Safranina

+ permeável, lipídios dissolvidos

Hans Christian Joachin Gram

1853-1938, médico dinamarquês
 5. Reação de hipersensibilidade - HR

Esquema da utilidade do teste de HR para detecção de

colônias fitopatogências em placas de isolamento
 5. Reação de hipersensibilidade - HR
Reação rápida – 24h
Localizada
Perda da turgidez
Necrose
6. Teste de patogenicidade
Métodos de inoculação
Atomização
Penetração por estômatos
Métodos de inoculação
Tesouras
• Ferimento
 Bibliografia
• Doenças bacterianas das hortaliças – Diagnose e Controle
– Carlos A. Lopes, Alice M. Quezado-Soares
– EMBRPA, Brasília –DF, 1997
• Bactérias fitopatogênicas
– Reginaldo S. Romeiro
– Viçosa, 1995
• Manual de Fitopatologia – Princípios e conceitos – Vol.1
– Bergamin Filho, A. , Kimati, H., Amorim, L.
– São Paulo, 1995
• Manejo de doenças bacterianas
– Ricardo Magela de Souza,
– Textos acadêmicos – UFLA/FAEPE, 1999
– Curso de Pós-Graduação “Lato Sensu” a distância: Manejo de doenças de plantas
• Introdução ao uso de marcadores moleculares em análise genética
– Marcio Elias Ferreira, Dario Grattapaglia
– Embrapa, 1998