Atividades do Sistema

Complemento

IMUNOHEMÓLISE -
Experiência de Erlich Morgenroth Modificada

Prof. Helio José Montassier

 Características Gerais do Sistema
Complemento

Definição:- é um conjunto formado na sua maior parte por

cerca de 30 proteínas plasmáticas ou séricas, sintetizadas por
hepatócitos e por macrófagos que podem ser ativadas através
de 3 diferentes vias, com reações sequenciais ou em cascata,
i.e., cada componente ativado é capaz de ativar um outro
componente do sistema complemento.
O Sistema Complemento é composto por proteinas plasmáticas / séricas
pertencentes às frações gama, beta e alfa globulinas por causa do seu
comportamento de migração na eletroforese de proteínas do soro.

Eletroforese: processo de migração de proteínas em um campo elétrico

IMUNOHEMÓLISE - Experiência de Erlich Morgenroth Modificada

I. OBJETIVOS:-
Demonstrar os elementos que participam da reação de imunohemólise
de hemácias de carneiro: (figura 01)
(Ag) Antígeno - Hemácias de carneiro (E)
(Ac) Anticorpos - Hemolisina de coelho anti-E
(C) Complemento - Soro normal de cobaia

II. MATERIAL
l) Estante para tubo de hemólise (l2x75mm)
2) 3 tubos de ensaio l2x75mm
3) 4 pipetas de lml com graduação centesimal
4) Suspensão de hemácias de carneiro a 5%
5) Hemolisina (já diluída)
6) Complemento (soro normal de cobaio) já titulado
7) Solução fisiológica
III. TÉCNICA
l) Numerar os tubos l, 2 e 3
2) Pipetar 0,lml de suspensões de hemácias nos 3 tubos
3) Pipetar 0,lml de hemolisina nos tubos l e 2
4) Pipetar 0,5ml de complemento nos tubos l e 3
5) Pipetar solução fisiológica: (figura 02)
- 0,8ml no tubo l
- l,3ml no tubo 2
- 0,9ml no tubo 3Solução Tampão
6) Incubar a 1ª etapa da reação em B.M. a 37ºC por 30 minutos.
7) Centrifugar os tubos e fazer a leitura dos resultados

Complemento
Como entender o fenômeno da IMUNOHEMÓLISE

Hemácias de Carneiro + Acs Específicos (Hemolisina) + Complemento

Incubação a 37ºC (Banho Maria)

por 15 a 30 min.

HEMÓLISE (Lise das Hemácias de Carneiro)

 VIA CLÁSSICA

• É ativada por uma interação (Ag-Ac).

• A ligação Ag-Ac provoca uma mudança
conformacional no Ac, que abre um sítio
de ligação para C1.
• C1: 6 moléculas C1q, 2 C1s, 2 C1r
• C1qr2s2 liga-se a 1 IgM ou 2 IgG
• IgM>IgG3>IgG1>IgG2
Fig. A via clássica de ativação do S. complemento é iniciada pela ligação do C1q
aos Acs (IgM ou IgG) ligados a Antígenos na superfície bacteriana
 C2b

C4b2a3b

C4b2a C4b2a

Fig. A via clássica de ativação do S. complemento gera a enzima C3-convertase

que cliva C3 e deposita um grande número de moléculas de C3b na superfície dos
patógenos.

Múltiplos sítios de [(C4bC2a)+C3b] constituem a enzima C5-convertase que cliva

o componente C5 em C5a e C5b e isso dá início à Via Lítica.
 Via Lítica do S. Complemento

Geração de C5 convertase leva ao

início da
Via Lítica
Fig. 8.49. The membrane-attack complex assembles to generate a
pore in the lipid bilayer membrane.
IV - RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO

Uma vez realizada a leitura da experiência procedente, prosseguir do

seguinte modo: (figura 03)
7) Centrifugar os tubos 2 e 3
8) Abandonar o sobrenadante do tubo 2
9) Decantar o sobrenadante do tubo 3 sobre as hemácias do tubo 2 e
agitar este tubo para ressuspender as hemácias
10) Sobre o sedimento do tubo 3, colocar hemolisina (0,lml) e solução
salina (l,3ml). Agitar para ressuspender as hemácias
11) Incubar uma 2ª etapa da reação os tubos 2 e 3 em B.M. a 37ºC por
30 minutos (figura 04)
12) Centrifugar os tubos e fazer a leitura dos resultados
 Resultados ao Final da 1ª Etapa de Incubação

Ausência de
Hemólise Hemólise

Ausência de
Hemólise

- Ags na Membrana das Hemácias de Carneiro

- Acs de Coelho Anti-Hemácias de Carneiro

- Sistema Complemento (Soro Normal de Cobaia)

Hemólise Ausência de
Hemólise