Química Analítica II

Prof. Renato Zanella

Suélen Willers

1. Usando uma figura, destacar os principais componentes do equipamento de

HPLC-UV-Vis com uma breve descrição destes.

Funcionamento do detector:

- Solvente: fase móvel, onde é armazenada o eluente para utilização na

análise;
- Bomba: bombeia a fase móvel para o injetor e a coluna de HPLC;
- Injetor: são realizadas pequenas inserções de amostra (5 a 20 microlitros);
- HPLC Coluna: contém duas fases, móvel e estacionária, que promove a
separação dos analitos através da afinidade. O analito com menor afinidade
com a fase estacionária é separado primeiro, seguindo até o com maior
afinidade, que é o último;
- Detector: possui um sistema em que uma lâmpada emite luz visível ou UV, a
qual é separada em diferentes comprimentos de onda e um apenas é
selecionado para passar na amostra; assim, a interação da luz com a
amostra é detectado por um dispositivo e documentada;
 - Descarte: a amostra é descartada.

2. Comente as duas misturas de fase móvel mais utilizadas com coluna C18 e como
podemos aumentar a força de eluição (capacidade de eluir os analitos) destas
misturas.
A coluna C18 é uma coluna de HPLC com uma alta eficiência quando se trata de
partículas de 3μm, 5μm e 10μm. As misturas de fases móveis mais utilizadas nesse
caso são:
a) água e metanol;
b) água e acetonitrila.
O motivo disso se da pela diferença de polaridade para a fase reversa desses
componentes (água 10,2; metanol 6,6; acetonitrila 6,2).
A força de eluição é importante na técnica de HPLC pois é ela que vai ditar a
separação dos componentes e quanto tempo isso levará. O ideal é que a força
permaneça entre média ou fraca, senão os componentes não serão separados
adequadamente, porém não tão fraca que demore muito. Portanto, precisa-se variar
a proporção de água e metanol/acetonitrila para adquirir a força de eluição ideal
para a fase estacionária que está sendo utilizada. Nesse caso, a lógica é de que
componentes com pouca retenção precisam de maior polaridade na fase móvel,
portanto uma maior proporção de água; componentes com menor polaridade
precisam de uma proporção maior de metanol/acetonitrila.

3. Explique em que se baseia a separação dos compostos por HPLC empregando

separação em fase reversa (RP). Cite um exemplo de fase estacionária e de fase
móvel comumente utilizadas em HPLC com RP.

Em uma cromatografia clássica, normalmente a fase estacionária constitui uma

polaridade alta enquanto a fase móvel tem baixa polaridade, fazendo com que os
componentes mais polares sejam atraídos para a fase estacionária e os menos
polares sejam eluídos com o solvente.
A cromatografia de fase reversa é diferente, pois a fase estacionária é apolar e a
fase móvel tem alta ou média polaridade, fazendo com que os compostos apolares
fiquem retidos da fase estacionária. Com isso, os compostos polares sairão primeiro
na coluna, enquanto os apolares são eluídos.
Um exemplo muito comum que pode ser citado é a separação do tolueno e fenol
com C18. Assim, a fase estacionária é o C18 e a fase móvel é fenol e tolueno com
tolueno saindo primeiro devido a sua alta polaridade e fenol por último por causa da
baixa polaridade.

4. Compare, em termos de resposta (seletividade e sensibilidade), a detecção em

cromatografia líquida utilizando os detectores UV-Vis, MS e MS/MS.

UV-Vis:
 - Alta sensibilidade, consegue detectar a presença de compostos na faixa de
nano a picogramas;
- Só é possível detectar substâncias que absorvem luz visível ou ultravioleta,
por isso não é toda amostra que pode ser analisada por essa técnica.
MS:
- Alta sensibilidade, também consegue detectar na faixa de nano a
picogramas;
- Alta seletividade, detecção de íons que são formados a partir da amostra de
moléculas.
MS/MS:
- Muito alta sensibilidade, consegue detectar na faixa de nano a fentogramas;
- Alta seletividade, detecta amostras complexas e pode-se selecionar os íons a
serem detectados.

Referências:
https://cmscientifica.com.br/analises-por-hplc-ou-uhplc-como-escolher-a-melhor-colu
na/