UNIVERSIDADE COMUNITÁRIA DA REGIÃO DE CHAPECÓ

Análise cromatográfica com uso de detector por espectrometria de massas (CG-MS).

Separação e identificação dos componentes voláteis em soluções.

Acadêmicos: Anatiely Quevedo, Roberta

Sommer, Laura Guarda, Lucas Fadani, Cecília
Trombeta, Isabela Marcon e Bruna Sabino.
Escola Politécnica
Curso de Engenharia Química - 6° Período
Professor: Jacir Dal Magro

Chapecó, outubro de 2023.

1. INTRODUÇÃO

Atualmente, a cromatografia gasosa (CG) é uma técnica amplamente empregada, que

se destina à separação e quantificação de uma variedade de produtos, podendo também ser
utilizada como método de identificação em situações especiais, especialmente quando
combinada com um espectrômetro de massa ou outro tipo de detector qualitativo, conhecido
como CG-EM. As inovações recentes nesse campo, incluindo a utilização de colunas capilares,
tornaram a cromatografia gasosa uma técnica atrativa e eficaz (COLLINS et al., 2006).
Devido à sua simplicidade, sensibilidade e eficácia na separação de componentes de
misturas, a cromatografia gasosa (CG) caracteriza-se como uma das técnicas mais essenciais
na área química. É empregada tanto em análises quantitativas quanto qualitativas de espécies
químicas, sendo capaz de determinar constantes termoquímicas, como entalpias de solução e
vaporização, pressão de vapor e coeficientes de atividade. Além disso, a CG é uma ferramenta
crucial na monitorização automatizada de processos industriais, permitindo a análise periódica
das correntes de gás e a execução manual ou automática de reações para compensar quaisquer
variações indesejadas (LINDE, 2006).
O cromatograma é a resposta gerada pelas análises por meio de um gráfico.
Atualmente, tais respostas são interpretadas através de softwares, o que gera um resultado
altamente preciso. O cromatograma de qualidade apresenta picos, indicando diferentes
compostos e proporcionando clareza nos resultados, sendo que as avaliações procuram
eficiência, seletividade, resolução e fator de assimetria (MORAES et al., 2011). Ademais, os
sistemas de cromatografia gasosa-espectrometria de massas possuem bibliotecas com espectros
de massas de vários compostos e, quando opera no modo de varrimento contínuo (full-scan),
permite a identificação de compostos em amostras desconhecidas com o recurso das bibliotecas
espectrais de referência. Logo, a combinação desses dois métodos (CG-EM) reduz
consideravelmente a possibilidade da ocorrência de erros (SKOOG et al., 2007; HARRIS,
2003).

2. OBJETIVOS

O presente trabalho tem como objetivo a identificação dos componentes químicos

presentes em amostra de óleo essencial de tomilho através do método de cromatografia gasosa
acoplada a espectrometria de massas (CG-MS). Além da identificação dos compostos, serão

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determinadas as concentrações de timol na amostra utilizando os dados do padrão externo e
interno obtidos na análise.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 MATERIAIS

● Cromatógrafo a gás;
● Vials Agilent;
● Micropipetadores;
● Béqueres de 25 ml;
● Balões volumétricos de 25 e 10 mL;
● Metanol;
● Óleo essencial de tomilho;
● Padrão de série homóloga de hidrocarbonetos (C4 - C40).

3.2 MÉTODOS

3.2.1 Preparo da amostra

A amostra foi preparada adicionando 5 mg de óleo essencial de tomilho em um balão

volumétrico de 10 mL com 100 microlitros de eugenol (250 mg/10 mL). O volume do balão foi
completado com a adição de metanol.

3.2.2 Preparo das soluções padrões

Para o preparo da solução mãe foram pesados 0,0503 g de timol em um béquer de 25

mL adicionando em seguida uma pequena quantidade de metanol para a diluição do timol, a
solução foi colocada em um balão volumétrico de 25 mL após completa diluição, completando-
se o volume com metanol.
A partir da solução mãe foram feitas novas soluções com padrões de concentrações de
2, 3, 4, 8 e 10 mg/10 mL. Para encontrar o volume necessário para o preparo das novas soluções
utilizou-se a fórmula C1.V1 = C2.V2, e a partir dela foi possível encontrar o volume necessário

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para cada nova concentração que foi de 1; 1,5; 2; 4 e 5 mL respectivamente que foram
transferidos para balões de 10 mL. Em cada uma das soluções adicionou-se 100 microlitros de
eugenol (250 mg/10 mL) e completou-se o volume com metanol.

3.2.3 Análise das soluções padrões e amostra em cromatógrafo a gás

Para a análise foram transferidos, com o auxílio de um micropipetador, 2000

microlitros separadamente de cada uma das soluções e da amostra para frascos de Vials
Agilents. Todos foram identificados com o nome de cada solução e em seguida analisados no
cromatógrafo.

4. RESULTADOS E DISCUSSÕES

4.1 ANÁLISE DA AMOSTRA DE ÓLEO ESSENCIAL DE TOMILHO

Com a análise da amostra do óleo essencial no cromatógrafo a gás foi possível

identificar a composição do óleo através dos picos gerados, que puderam ser analisados e
comparados com os dados presentes no banco de dados do equipamento.
De acordo com a figura 1 é possível identificar 12 picos, o que indica que na
composição do óleo haviam 12 substâncias distintas.

Figura 1 - Cromatograma da amostra do óleo essencial de tomilho

Fonte: Os autores (2023)

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 Com a obtenção do cromatograma e dos picos da amostra, pode ser feita a comparação
das áreas de cada um dos picos com os dados fornecidos pelo equipamento. Através das áreas
foi possível nomear e expressar em porcentagem cada uma das substâncias presentes na amostra
do óleo, que podem ser observadas na Tabela 1.

Tabela 1 - Identificação dos compostos presentes no óleo essencial de tomilho

Soma das
Pico Composto Área Área %
áreas %

1 d-α-Pinene 975482,02 4,56 2,25

2 Campheno 347836,78 1,63 0,8

3 .(-)-β-Pinene 269387,26 1,26 0,62

4 o-Cymene 14283801 66,74 32,88

5 Eucalyptol 572166,04 2,67 1,32

6 γ-Terpinene 528455,97 2,47 1,22

Ethyl 2-(5-methyl-5-vinyltetrahydrofuran-
7 229600,21 1,07 0,53
2-yl)propan-2-ylcarbonate

8 β-Linalool 1702324,9 7,95 3,92

9 (+)-2-Bornanone 774952,26 3,62 1,78

10 L-Borneol 551021,56 2,57 1,27

11 Thymol 21403077 100 49,26

12 Antioxine 1807384,4 8,44 4,16

Fonte: Os autores (2023)

Através dos dados obtidos pode-se verificar que a cromatografia a gás permite a
identificação de forma clara e precisa de quais componentes formam o óleo essencial.

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4.2 OBTENÇÃO DOS GRÁFICOS DA CURVA DE CALIBRAÇÃO

Através das análises realizadas das soluções padrões e da amostra do óleo, pelo
cromatógrafo a gás, foi possível obter os picos correspondentes ao eugenol e timol de cada uma
delas separadamente, que podem ser observados na figura 2.

Figura 2 - Cromatograma das soluções padrões e da amostra

Fonte: Os autores (2023)

Através da análise dos picos foi possível obter os valores correspondentes a área de
timol e de eugenol em cada uma das soluções analisadas. Os dados foram descritos na Tabela
2 e, através da tabela, foi possível retirar os dados necessários para elaboração das curvas de
calibração e em seguida determinar a concentração de timol na amostra do óleo essencial de
tomilho.

Tabela 2 - Áreas obtidas na análise das soluções

Concentração Razão
Padrão Área do timol Área do eugenol
mg/10 mL (Atimol/Aeugenol)

1 2 9255089,24 7094715,49 1,304504635

2 3 13194738,91 7623431,32 1,73081364

3 4 16282427,01 8238987,22 1,976265599

6
 4 8 26813216,62 8408928,84 3,188660188

5 10 31332190,37 8615291,18 3,636811538

Amostra - 11851496,75 7217543,63 1,642040195

Fonte: Os autores (2023)

Para o cálculo da concentração foram elaborados os gráficos 1 e 2 onde um representa

o padrão interno e o outro o padrão externo de calibração.

Gráfico 1 - Padrão externo

Fonte: Os autores (2023).

Gráfico 2 - Padrão interno

Fonte: Os autores (2023).

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 Através dos gráficos foi possível obter as equações da reta para o cálculo da
concentração, o coeficiente de correlação apresentou bons valores de aproximadamente 0,99
para ambos os gráficos e, com isso, podemos validar o método de análise e utilizá-lo para
calcular as concentrações de timol na amostra de óleo essencial.

4.3 CÁLCULO DA CONCENTRAÇÃO DE TIMOL NA AMOSTRA DE ÓLEO

ESSENCIAL

Para o cálculo da concentração de timol na amostra foram utilizados os dois padrões

obtidos nas análises, para o padrão externo a concentração obtida foi calculada utilizando a
equação da reta do gráfico 1.
y = 3X10 x + 5X10
onde, y = 11851496,75 substituindo na equação teremos:
11851496,75 = 3X10 x + 5X10
x = 2,2838 mg/10 mL

A porcentagem de timol na amostra encontrada pelo cálculo do padrão externo será de:

,
Porcentagem de timol na amostra = ( ) × 100

Porcentagem de timol na amostra = 45,67 %

Para o padrão interno a concentração foi obtida pela equação da reta encontrada no gráfico 2.
y = 0,2895x + 0,8042
onde, y = 1,642040195, substituindo na equação teremos:
1,642040195 = 0,2895x + 0,8042
x = 2,8941 mg/10 mL

A porcentagem de timol na amostra encontrada pelo cálculo do padrão interno será de:

,
Porcentagem de timol na amostra = ( ) × 100

Porcentagem de timol na amostra = 57,88 %

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 De acordo com dados teóricos, a concentração de timol no óleo essencial de tomilho
deve ser superior a 40%. Ao analisar os resultados obtidos, observa-se que tanto para o padrão
externo quanto para o interno, com os valores de 45,67% e 57,88%, respectivamente, a
concentração estava em concordância com a requerida. O valor mais alto para a análise com
padrão interno sugere uma maior precisão nos resultados, tendo em vista que o uso de padrão
interno corrige erros relacionados a volumes de injeção e é altamente recomendado por análises
em cromatografia gasosa.

5. CONCLUSÃO

A análise cromatográfica com uso de detector por espectrometria de massas (CG-MS)

revelou-se uma ferramenta eficaz na determinação da concentração de timol em amostras de
óleo essencial. Utilizando dois padrões diferentes - um padrão externo e um padrão interno de
calibração - os dados obtidos foram analisados e interpretados.
Dessa forma, os resultados mostraram que a concentração de timol na amostra de óleo
essencial foi calculada como sendo 45,67% usando o padrão externo e 57,88% usando o padrão
interno. Esses valores foram obtidos através de equações de regressão linear derivadas dos
gráficos de calibração. Além disso, os coeficientes de correlação próximos a 0,99 indicam uma
alta precisão e confiabilidade dos dados obtidos. Esses resultados estão em consonância com
estudos anteriores, como o trabalho de Silva et al. (2022), que também utilizou técnicas de
cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas para determinar a composição de
óleos essenciais. A consistência dos resultados obtidos neste estudo com pesquisas anteriores
valida a precisão da metodologia empregada.
Além disso, a capacidade de determinar a concentração de timol com alta precisão é
de grande importância em diversas aplicações, incluindo na indústria farmacêutica e na
aromaterapia, onde a eficácia dos produtos está diretamente relacionada à sua composição
química.

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6. REFERÊNCIAS

COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; PIERINA, S. Fundamentos de Cromatografia. Editora

Unicamp - Campinas, SP. 2006.

HARRIS, D. C. Quantitative Chemical Analysis. W. H. Freeman and Company. 2003.

LINDE GÁS LTDA. Cromatografia gasosa. Disponível em: http://hiq.linde-

gas.com.br/international/web/lg/br/like35lgspgbr.nsf/docbyalias/anal_gaschrom. Acesso em:
17 de outubro de 2023.

MORAES, J. E.; DUARTE, K. M. R.; PAULINO, V. T. Cromatografia gasosa na

determinação de ácidos graxos voláteis de materiais ensilados. PUBVET, Londrina, v. 5, n.
29, 2011.

SILVA, A. B., SANTOS, C. D., OLIVEIRA, E. F. Determination of Essential Oil

Composition Using Gas Chromatography-Mass Spectrometry. Journal of Analytical
Chemistry, 45(3), 287-295, 2022.

SKOOG, D. A.; WEST, D. M.;HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de Química

Analítica, ed. Thomson. 2007.

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