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Laboratório Algetec
ATIVIDADE PRÁTICA 1
Atividade proposta:
Tubo Eppendorf;
Tubo spin;
Hipoclorito de sódio;
Micropipeta;
Nanodrop (espectrofotômetro);
Água Mili-Q;
Notebook;
Álcool 96%;
PROCEDIMENTO
1. Segurança do experimento
Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse
sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas máscaras e óculos.
Feche as portas do armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre elas.
2. Etapa da Lise
Nesta etapa, você deverá pipetar 25 μl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipetar 200 μl
da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último, pipetar 200 μl do tampão lise S no tubo. Tampe o
Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15
min.
Para isto, siga as etapas ilustradas a seguir:
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdo digite o volume e, em seguida, clique em “OK”.
Posicione a pipeta no tubo de Proteinase K clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e,
em seguida, selecione “Colocar em Proteinase K”.
Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma
e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdo, em seguida, clique em “OK”.
Posicione a pipeta no tubo com a amostra de sangue clicando com o botão direito do mouse sobre a
mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Amostra de sangue”.
Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma
e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Posicione a pipeta no tampão de lise S clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma
e, em seguida, selecione “Colocar em Tampão de lise S”.
Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma
e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Tampe o tubo Eppendorf clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Homogeneíze o eppendoff no vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo.
Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Pular tempo”.
Retire o tubo do vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo.
Coloque o tubo na incubadora clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo.
Feche a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Ligue a incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar.
Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Pular tempo”.
Abra a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Retire o tubo da incubadora cliquando com o botão direito do mouse sobre a mesma.
3. Etapa da Ligação
Nesta etapa, você deverá pipetar 210 μl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneízar de novo no
Vórtex. Em seguida, pipete 640 μl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a
11.000 rpm por 1 minuto.
Para isto, siga as etapas ilustradas:
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdo, em seguida, clique em “OK”.
Posicione a pipeta no recipiente de álcool 96% pura clicando com o botão direito do mouse sobre a
mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Álcool 96%”.
Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma
e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Tampe o tubo Eppendorf clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Homogeneíze o eppendoff no vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo.
Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”.
Retire o tubo do vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdo, em seguida, clique em “OK”.
Posicione a pipeta no Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”.
Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Colocar em Tubo spin”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Ajuste a velocidade de rotação clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a seta para cima.
Ajuste o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a seta para cima.
Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa.
Ligue a centrífuga clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar.
Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”.
4. Etapa da Lavagem
Nesta etapa, você irá retirar o Eppendorf da centrífuga, descartar o tubo de coleta e colocar o tubo
spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 μl do tampão de lavagem SI no tubo spin e
centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá
utilizar 600 μl o tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo
da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
Abra a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa.
Retire o conjunto de tubos clicando com o botão direito do mouse sobre a centrífuga.
Retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e
selecionado o box “Retirar tubo spin”.
Descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e
selecionado o box “Descartar”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdo, em seguida, clique em “OK”.
Posicione a pipeta no tampão lavagem SI clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e,
em seguida, selecione “Colocar em Tampão lavagem SI”.
Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Colocar em Tubo spin”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa.
Posicione a pipeta no tampão lavagem SII clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e,
em seguida, selecione “Colocar em Tampão lavagem SII”.
Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Colocar em Tubo spin”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa.
Na sequência, repita os passos de centrífuga descritos acima. Ao finalizar a centrifugação, retire o
tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e
selecionado o box “Retirar tubo spin” e descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do
mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Descartar”. Lembre-se estas orientações já estão
descritas no roteiro.
Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa.
Na sequência, repita os passos de centrífuga descritos acima.
5. Etapa da Eluição
Nesta etapa, retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um
novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 μl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto
e centrifugue a amostra.
Ao finalizar a centrifugação, retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito
do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Retirar tubo spin” e descarte o tubo de
coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box
“Descartar”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Reajustar volume” para 200 μl (conforme já demonstrado) e posicione a
pipeta no tampão eluição S clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Colocar em Tampão eluição S”.
Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Colocar em Tubo spin”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Trocar ponteira”.
Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”.
Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre
ele.
Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre
ele.
Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a
tampa. Ligue a centrífuga clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar.
Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”.
Retire o conjunto de tubos clicando com o botão direito do mouse sobre a centrífuga.
Retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e
selecionado o box “Retirar tubo spin”.
Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Espectrofotômetro” ou através do atalho do teclado “Alt+7”.
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior
esquerdo, em seguida, clique em “OK”.
Posicione a pipeta na água ultra pura clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Colocar em Água Ultra Pura”.
Posicione a pipeta no espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e,
em seguida, selecione “Colocar em Espectrofotômetro”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Ligue o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar.
Selecione “Nucleic Acid” no notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela.
Selecione “Blank” no notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela.
Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Espectrofotômetro” ou através do atalho do teclado “Alt+7”.
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.
Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Reajustar volume”.
Posicione a pipeta no tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em
seguida, selecione “Colocar em Tubo de Coleta”.
Posicione a pipeta no espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e,
em seguida, selecione “Colocar em Espectrofotômetro”.
Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida,
selecione “Trocar ponteira”.
Feche o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre ele.
Visualize o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Notebook” ou através do atalho do teclado “Alt+8”.
Selecione “Measure” no notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela.
Checklist:
Observar e analisar as etapas realizadas nos procedimentos focando na compreensão da técnica
e reagentes.
Resultado: Aluno, você deverá entregar:
Um arquivo contendo as respostas para os questionamentos a seguir:
1. No que consiste a etapa de eluição da purificação?
2. Qual a diferença entre os tampões de lavagem SI e SII?
3. Na etapa de ligação, porque se utiliza o álcool 96%?
Referências:
WATSON, J. D. Biologia molecular do gene. 7. ed. Porto Alegre: Artmed, 2015.
MENCK, C. F. M. Genética molecular básica: dos genes aos genomas. 1. ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2017.
GRIFFITHS, A. J. F. Introdução à genética. 12. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2022.
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 2
Unidade: 4
Aula (White Label)/Seção (KLS): 4.1
SOFTWARE
ATIVIDADE PRÁTICA 2
Atividade proposta:
Analisar as lâminas do aparelho reprodutor feminino e masculino, bem como as características
de cada órgão como pênis, ductos genitais, glândulas acessórias, testículo, epidídimo e ovário.
Objetivos:
Observar as estruturas dos aparelhos reprodutores feminino e masculino;
Analisar as características de cada órgão como pênis, ductos genitais, glândulas acessórias, testículo,
epidídimo e ovário;
Identificar os tecidos presentes nestas estruturas.
Procedimentos para a realização da atividade:
Materiais necessários:
Microscópio óptico
Kit de lâminas;
Laminário;
Óleo de imersão;
Solução de limpeza (50% éter sulfúrico e 50% clorofórmio);
C2H6O (álcool etílico);
Cotonete;
Algodão;
Papel macio.
PROCEDIMENTO
1. Segurança do experimento
Higienize as mãos na pia e coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário
de EPIs: jaleco e luvas”.
2. Escolhendo a lâmina
Abra o laminário, selecione uma lâmina e mova para o microscópio. No laminário contém as seguintes
lâminas: testículo, epidídimo, próstata, vesícula seminal, pênis e ovário.
Visualize a lâmina na objetiva de 4, 10 e 40x pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o
revólver e movimentando o cursor à direita ou à esquerda.
Para visualização na objetiva de 100x coloque o óleo de imersão clicando com o botão esquerdo
do mouse no conta-gotas.
Visualize a lâmina na objetiva de 100x pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o
revólver e movimentando o cursor à direita ou à esquerda.
Retire a lâmina do microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse na lâmina de vidro.
Checklist:
Observar as lâminas específicas para o experimento;
Observar e analisar as principais características estruturais dos tecidos observados; Observar
e esquematizar as lâminas estudada.
Resultados da aula prática: Aluno, você deverá entregar:
Um arquivo contendo o desenho esquemático das estruturas observadas bem como a resposta para os
questionamentos a seguir:
1. Quais os órgãos envolvidos com o sistema reprodutor feminino e masculino?
2. Qual a importância das células de Sertoli e Leydig?
3. Quais os estágios de maturação dos folículos ovarianos?
Referências:
JUNQUEIRA, L. C. U. Biologia celular e molecular. 9.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2012.
GARTNER, L. P. Atlas colorido de histologia. 7. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2018.
PAWLINA, W. Ross histologia texto e atlas: correlações com biologia celular e molecular.
8. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2021.
SADLER, T. W. Langman, embriologia médica. 14. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2021.