Atividade: Comparação das colorações para Melanina (Fontana Masson vs

branqueamento da melanina vs Schmorl)

A melanina é um pigmento importante, que está presente em diversas células e tecidos
em condições normais, como a pele, os olhos, cabelo, cérebro, etc. Apresenta-se como
um pigmento preto/acastanhado nos tecidos sem coloração ou com as colorações de
rotina. Existem vários métodos para demonstrar a melanina baseados nas suas
características físicas e químicas.
Podemos apontar várias características importantes:
• A melanina e as células precursoras de melanina são capazes de reduzir tanto a
prata como uma solução ácida de ferrocianeto.
• É insolúvel na maioria dos solventes orgânicos.
• Em soluções alcalinas fortes dissolve-se.
• A melanina pode também ser branqueada por agentes fortemente oxidantes.

A melanina é uma substância com argentafinidade, ou seja, reduz o nitrato de prata a

prata metálica, sem utilização de um redutor externo. Este método, Fontana-Masson,
demonstra não só a melanina como também as lipofucsinas, os ceróides e o pigmento
da malária.
Outro método que utiliza a propriedade redutora da melanina é a técnica de Schmorl,
que permite indicar os locais de atividade redutora. Apesar de outras substâncias
também apresentarem resultados positivos com esta técnica, podemos assumir que
quando temos uma reação positiva nos encontramos na presença de melanina.
Na reação de Schmorl, a melanina vai reduzir o ferrocianeto com produção de uma
substância azul e sais de ferro. Ou seja, estas substâncias redutoras, como a melanina,
vão reduzir os iões férricos à sua forma ferrosa que por sua vez vai combinar com o
ferrocianeto de potássio para formar a reação de Azul da Prússia (ferrocianeto férrico).
Podemos também basearmo-nos na solubilidade e no branqueamento da melanina,
distinguindo-a das lipofucsinas que não são solúveis em solventes alcalinos fortes.
Para branquear a melanina usa-se, portanto, como solução de branqueamento, o agente
oxidante permanganato de potássio acidificado e, posteriormente, para retirar o excesso
de marcação, tratam-se os tecidos com ácido oxálico a 1%.
Protocolos:
Schmorl
1. Desparafinar e hidratar
2. Solução de trabalho de Ferricianeto – 5min
3. Lavar em água corrente – 5min
4. Contrastar com Kernechtrot – 2min
5. Lavar em água corrente – 2min
6. Desidratar e montar

Substâncias reduzidas – azul

Branqueamento da melanina
1. Desparafinar e hidratar
2. Tratar com a solução de branqueamento – 30min
3. Lavar em várias passagens de água destilada com muito cuidado
4. Remover o excesso, de cor castanha, do permanganato, com ácido oxálico a 1%
5. Lavar com muito cuidado em água corrente – 30min
6. Contraste com Kernechtrot – 5min
7. Lavar em várias passagens de água destilada com muito cuidado
8. Desidratar e montar

Solução de Branqueamento:
Ácido Sulfúrico – 0,3% (Ácido sulfúrico – 0,3 ml + Água destilada – 95 ml)
Permanganato de potássio acidificado - Aos 100 ml do ácido sulfúrico adicionar 0,3 g de
permanganato de potássio.