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Reações de precipitação de
Proteína

Por Sandip Kanazaria

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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA
• A solubilidade da proteína depende da proporção e
distribuição da extremidade hidrofílica polar e não -
extremidade hidrofóbica polar em uma molécula de
proteína resultando em um momento de dipolo da proteína.

• Grupos polares iônicos de moléculas interagem

eletrostaticamente tanto dentro da mesma molécula
quanto com a molécula circundante tendendo a
formar agregados e solubilidade oposta.
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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA
• Em solução, a molécula de água polar interage com o
grupo polar de proteína tendendo a aumentar a
solubilidade. • A solubilidade da molécula de proteína
deve-se principalmente à mudança no tamanho, forma e
hidratação das partículas.
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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA
• A maioria das proteínas é solúvel em ácido
diluído e álcali.
• As proteínas são muito reativas e altamente específicas
no comportamento devido à presença de grupos ativos
em sua molécula.

• Por conterem tanto grupos ácidos quanto básicos em sua

molécula, atuam como anfólitos ou eletrólitos anfóteros.
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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA

pH ácido pH alcalino

Forma catiônica íon dipolo ou Forma Aniônica

íon hermafrodita
Proteína + Proteína -
+ Proteína -
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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA
• O ponto isoelétrico é o pH no qual a proteína
contém igual número de cargas positivas e
negativas e a proteína pode existir como íon
dipolar ou íon zwitter.
• No íon dipolar, a carga total é muito alta e líquida
carga é zero devido à presença de igual número de
grupos ácidos e básicos em sua molécula.
• Eles se dissociam como ácidos ou básicos dependendo
após o pH da solução.
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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA
• Se for adicionado ácido, atua como base e se for
adicionado álcali, atua como ácido. Essas
propriedades são máximas em pH isoelétrico.
• As proteínas podem ser precipitadas de
sua solução por uma variedade de
substâncias. • Tais reações que precipitam proteínas
de sua solução são chamados de reação de
precipitação .
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REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO DE

ALBUMINA
• As proteínas são polímeros de alfa-
aminoácidos de grande peso molecular e
formam soluções coloidais.
• As proteínas podem ser precipitadas por remoção
da camada de água (desidratação), desnaturação,
ajuste do pH isoelétrico ou pela neutralização da
carga presente na molécula de proteína .
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PRECIPITAÇÃO POR

ÁCIDOS MINERAIS FORTES

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1. TESTE DE ÁCIDO NÍTRICO DE HELLER

• Reagentes necessários-: Ácido nítrico concentrado.

• Reação- Quando a solução de proteína nativa
é tratada com HNO3 Concentrado, obtém-se
anel de precipitado branco devido à desnaturação
da proteína.
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TESTE INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO

1. Teste de ácido O anel ppt branco A albumina é

nítrico de Heller: Tome é obtido. precipitada por ácido
3ml de solução mineral forte
de albumina , em
seguida, adicione 3ml

conc. O tubo de ensaio

HNO3 pega, do lado
do tubo de ensaio e
não misture.

• Nota: O anel de precipitado branco é devido à desnaturação

da albumina por ácido mineral forte.
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2. PRECIPITAÇÃO POR ÍONS DE METAIS PESADOS

• Reagentes Necessários: - Acetato de chumbo e prata

nitrato.
• Reação: - As proteínas são precipitadas de sua
solução por íons de metais pesados. Esses íons
metálicos precipitam a proteína de sua solução. No
lado alcalino do pH isoelétrico, a proteína se dissocia
como ânion de proteína (Pr-) que se combina com íon
metálico positivo (cátion) para formar precipitado
insolúvel de proteinato de metal, como albuminato de
chumbo e albuminato de prata.
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TESTE
2. Teste de acetato de chumbo:
Colocar 3 ml de solução de
albumina no tubo de ensaio
e adicionar 2 gotas de
solução de Na2NO3 a 2%
e 1 ml de solução de acetato
de chumbo.
3. Teste de nitrato de
prata Pegue 3 ml de
solução de albumina no
tubo de ensaio e adicione 1
ml de solução de nitrato de prata.
INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO
O O precipitado branco é
precipitado obtido devido à formação
branco é obtido de albuminato de chumbo
portanto, a albumina é
precipitada por íons de
metais pesados.
O Precipitado branco é
precipitado obtido devido à formação
branco é obtido de albumina de prata,
portanto, a albumina é
precipitada por íons de
metais pesados
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3. REAÇÃO DE PRECIPITAÇÃO DE PROTEÍNA

POR ÁCIDO ORGÂNICO

• Reagentes necessários: Ácido sulfossalicílico,

ácido tricloroacético, reagente de Esbach e água
destilada.
• Reação: Esses ácidos orgânicos existem como íon
negativo, ou seja, ânion. Quando ácidos orgânicos são
adicionados à solução de albumina, as proteínas são
precipitadas de sua solução porque no lado ácido do pH
isoelétrico, a proteína se dissocia como cátion (proteína
+ íon) que se combina com ânions (proteína-íon) de
ácidos orgânicos para formar sal de proteína.
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TESTE INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO

4. Sulfossalicílico O O precipitado branco é

Teste de precipitado obtido devido à formação
ácido: Pegue 3 ml de branco é obtido de sulfosalicilato de
solução de albumina no tubo albumina
de ensaio, em seguida,

adicione 1 ml de ácido portanto, a albumina é

sulfossalicílico misture bem e observe. precipitada pelo ácido
orgânico.
5. Tricloroacético O O precipitado branco é
Teste de ácido: precipitado devido à formação de
Pegue 3ml de branco é obtido tricloroacetato de albumina.
solução de albumina em
tubo de ensaio, em Portanto, a albumina é
seguida, adicione 1 ml de precipitada pelo reagente
ácido tricloroacético misture bem e observe. alcalóide.
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TESTE INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO

6. Teste de O Portanto, a
Esbach: Pegue 3ml de precipitado albumina
solução de albumina amarelo é obtido precipitou de sua
em um tubo de ensaio solução por
e adicione volume igual Alcaloide
de Esbach reagentes.
reagente (1% de ácido
pícrico) para misturar
bem e observar.
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4. PRECIPITAÇÃO DE PROTEÍNAS POR SOLVENTES

ORGÂNICOS
• Reagentes necessários: álcool absoluto, acetona
e clorofórmio.
• Reação: Solvente orgânico como álcool, acetona e
clorofórmio quando adicionado à solução de albumina,
diminui a constante dielétrica do solvente e desloca
algumas das moléculas de água (desidratação)
associadas à proteína e diminui a concentração de água
Este efeito tende a diminuir a solubilidade da
proteína em solução devido à qual a proteína é
precipitada para fora de sua solução. • O mecanismo
de precipitação neste caso é por desidratação,
desnaturação e remoção de cargas.
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TESTE INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO

7. Precipitação Branca por O

Acetona: Tomar 3ml dealbumina precipitado
precipitada é obtida a solução
tubo deem
ensaio
um branco é obtido
adicionar 1ml de acetona a ela por desidratação,
misturar bem e observar. desnaturação por
acetona.
Portanto, a
albumina
precipitou de sua
solução por solventes
orgânicos
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5. PRECIPITAÇÃO POR SAL

• Reagente Necessário: Sulfato de Amônio.
• Reação: O composto de alto peso molecular pode ser
precipitado de sua solução pela adição de sal altamente
solúvel. Quando a solução de proteína é tratada com este
sal, a molécula de sal absorve água da solução de proteína
para sua própria solubilidade.
• Devido à qual a concentração efetiva de água necessária
para a solubilidade da proteína é diminuída e as proteínas
são facilmente precipitadas de sua solução em pH isoelétrico.
Este processo é chamado de salga. • O precipitado formado
é aparentemente devido a
neutralização e desidratação de moléculas e agregados
de moléculas em solução.
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TESTE INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO

8. Teste de meia Nenhum A albumina não é

saturação: Pegue 3 ml precipitado completamente
de solução de albumina branco é obtido precipitada de sua
em um tubo de ensaio e solução por meia
adicione igual quantidade saturação com sulfato
(3 ml) de solução saturada de amônio
de sulfato de amônio solução.
misture bem e
observe.
Em seguida, filtre Filtrado dá cor violeta
a solução e execute
Teste de biureto com o
filtrado
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TESTE INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO

9. Saturação total O A albumina

Teste: precipitado é
Pegue 5 ml de solução branco é obtido completamente
de albumina em um tubo precipitada de sua
de ensaio sature-o com solução por saturação
sulfato de amônio total com sulfato de amônio
cristais e observe. cristais.

Em seguida, Filtrado não dá cor violeta

filtre a solução e execute com teste de biureto
Teste de biureto com
o filtrado
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6. PRECIPITAÇÃO DE PROTEÍNAS
POR CALOR

Teste de coagulação por calor

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Teste de coagulação por calor

• Reagentes necessários: ácido acético a

1% • Reação: Quando a solução de albumina é aquecida,
O coágulo branco é obtido porque a albumina é
desnaturada pelo calor (a albumina é um coagulável
proteína). Após a adição de 1 gota de ácido acético a
1% , o coágulo aumenta porque o pH da solução de
albumina é deslocado para o ponto isoelétrico. Neste
pH a solubilidade é mínima e mais proteína é
precipitada de sua solução.
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TESTE
10. Calor
Teste de coagulação:
Encha 3/4 do tubo de
ensaio com solução de
albumina. Aqueça-o no
topo e observe. Em seguida,
adicione uma gota de ácido
acético e observe novamente.
INFERÊNCIA DE OBSERVAÇÃO
Obtém-se coágulo O coágulo branco é
branco ou turbidez ou obtido devido à
precipitado que aumenta desnaturação da
após a adição de 1 gota de albumina pelo calor, ou
ácido acético. seja, a albumina é uma
proteína coagulável.
A albumina é
precipitada da solução
por calor.
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Conclusão
1. A albumina é uma proteína simples.
2. A albumina é desnaturada por um ácido mineral forte.
3. A albumina é precipitada por íons de metais pesados.
4. A albumina é precipitada por ácidos orgânicos.
5. A albumina é precipitada por solventes orgânicos, ou
seja, álcool/acetona.
6. É completamente precipitado da solução por saturação
total com sulfato de amônio, mas não por meia saturação.

7. A albumina é coagulada pelo calor.

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