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Bioquímica de Enfermagem

Relatório de laboratório

Proteínas: Precipitado
Nº de atividade 7

Cuenco, Lara Faith O.

Dela Torre, Sherieca L.
KamdonMohammad Yusuf A.
Armário nº 36; NurBio Lab C

1º Semestre, SY 2019-20
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JUSTIFICATIVA

A precipitação de proteínas é devido a uma ruptura das ligações de hidrogênio, ligações iônicas e às vezes
as ligações dissulfeto covalentes mais fortes. A precipitação é amplamente utilizada para a recuperação de produtos
de biomoléculas, especialmente proteínas. Os métodos de precipitação de proteínas são usados para a concentração
de proteínas diluídas em solução. O objetivo é purificar e concentrar proteínas ou proteínas contaminadas contidas em
diversas matrizes como tampões, detergentes ou em fontes naturais, como sangue, urina ou outros biofluidos.

Os métodos de precipitação de proteínas são usados rotineiramente para concentrar e eliminar moléculas
interferentes antes da eletroforese ou caracterização ou determinações quantitativas de proteínas. O mecanismo de
precipitação de proteínas é alterar o potencial de solvatação do solvente. A solubilidade do soluto é reduzida pela
adição de um reagente específico para manipular as forças eletrostáticas repulsivas entre as proteínas para favorecer
sua agregação.

Objetivos: •
Detectar a presença de uma proteína ou peptídeos
• Investigar os efeitos de ácidos fortes na solubilidade da proteína • Determinar
o efeito do excesso de reagentes na solução
• Identificar e observar o precipitado em cada teste que dará um resultado positivo

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INTERPRETAÇÃO DOS DADOS

Tabela nº 1

Nome das soluções de teste de teste Reagentes Nº de Gotas Efeito do Reagente em Excesso
Adicionado Adicionado a Produzir

Precipitado

A. Alcaloide 1% Albumina Ácido pícrico Precipitado em 2 gotas A cor tornou-se amarelo

Reagentes brilhante (indo neon) então o

precipitado desapareceu/dissolveu

10% tânico Precipitado formado em Precipitado formado. Quando todo o

ácido 1 gota reagente restante foi adicionado, no

fundo do tubo de ensaio,

há formação de coalhada

10% Precipitado formado em Tornou-se branco nublado, e as

Tricloroace 4 gotas pequenas partículas se dissolveram
ácido tic

20% (Não realizou) (Não realizou)

Ácido
tungstico

Discussão:

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Neste teste, quando a albumina foi adicionada aos reagentes que são o ácido pícrico, o ácido tânico a 10% e o ácido

tricloroacético a 10% deram resultados positivos. É porque em pH abaixo de seu pl, as proteínas estão presentes como íons

carregados positivamente. Os alcalóides neutralizam a carga positiva das proteínas e causam sua precipitação.

Tabela nº 2

Nome dos reagentes de soluções de teste de teste adicionados Resultado Explicação

B. Inorgânico 1% filtrado Conc. HCl Precipitado formado A cor tornou-se branca turva e
Ácidos Albumina em 1 gota o precipitado não se dissolveu

completamente

Conc. H2SO4 Precipitado formado em 7 gotas Formada em duas camadas, a parte

superior tem uma cor semelhante ao cobre

e a parte inferior é de cor branca

Conc. HNO3 Precipitado formado em 1 gota Tornou-se amarelo claro ou

de cor abacaxi e o precipitado

dissolvido

Discussão:

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Os ácidos inorgânicos, também chamados de ácidos minerais, são ácidos derivados de um ou mais
compostos inorgânicos. Esses ácidos inorgânicos são sem oxigênio ou oxoácidos. Com referência ao número
de átomos de hidrogênio, eles são mono-, di- ou tribásicos.

Todos os testes deram resultados positivos porque a adição de um excesso de ácido inorgânico, como
HCl, H2SO4 e HNO3 na albumina filtrada a 1%, rompe as pontes salinas que estabilizam a estrutura terciária
da solução de albumina. Quando uma molécula adquire uma grande carga positiva, os grupos ionizáveis
presentes se repelem e reduzem a disponibilidade da molécula de proteína para interagir com a molécula do solvente.

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Tabela nº 3

Nome do teste Soluções de teste Reagentes adicionados Resultados

C. Heller's 0,5% de albumina Conc. HNO3 Formado precipitado branco na junção

Teste

0,25% de albumina Nenhum precipitado se formou

0,12% de albumina Nenhum precipitado se formou

Discussão:

O teste de Heller é um teste químico que mostra que ácidos fortes causam a desnaturação de proteínas precipitadas, neste teste

albumina 0,5% deu resultado positivo. O ácido nítrico concentrado é adicionado a uma solução de proteína do lado do tubo de ensaio para formar

duas camadas. Um anel branco aparece entre as duas camadas se o teste for positivo. O teste de Heller é comumente usado para testar a

presença de proteínas na urina.

A desnaturação é um processo no qual proteínas ou ácidos nucléicos perdem a estrutura quaternária, estrutura terciária e estrutura secundária

que está presente em seu estado nativo, pela aplicação de algum estresse externo ou composto como um ácido forte, o ácido forte que foi usado

em este teste concentrou ácido nítrico.

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Tabela nº 4

Nome das soluções de teste de teste Reagentes Resultados

Adicionado

D. Álcool 1% Albumina 95% Álcool Formado pequeno precipitado branco

1% Gelatina Precipitado branco formado, mais da metade do tubo de ensaio,

parece um estado semi-sólido

1% Peptona Sem precipitado branco

Resultado teórico: precipitado amarelo-branco

1% Albumina 70% Álcool Precipitado de partículas pequenas

1% Gelatina Nenhum precipitado branco se formou

1% Peptona Nenhum precipitado branco se formou

Discussão:

Quando se adiciona álcool a 95% a albumina a 1% e gelatina a 1% coagula, da mesma forma que quando se adiciona álcool a 70%

a albumina a 1%. A adição de álcool nos reagentes reduz a constante dialética ou força iônica da solução aquosa. As moléculas de água que

formam um revestimento protetor em torno da proteína

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ligações de hidrogênio da molécula com as moléculas de álcool, resultando em uma atração eletrostática aumentada entre as moléculas

de proteína, então isso resulta em coalescer.

Com mais pesquisas feitas, descobriu-se que 1% de peptona quando adicionado com 95% de álcool deve formar

precipitado amarelo-branco.

Tabela nº 5

Nome do teste Sistema de teste em Reagentes usados Resultados com Teste de Biureto

E. Calor Tubo de ensaio 1 Albumina de ovo em pó e água A cor ficou violeta

destilada
(Misturado, aquecido e

filtrado)

Tubo de ensaio 2 Albumina de ovo em pó e água A cor ficou violeta

destilada
(Aquecida, misturada e

filtrada)

Discussão:

Para o teste de calor em precipitado de proteína, o aquecimento suave causa desnaturação reversível da proteína, mas no

tubo de ensaio 1 durante o processo de aquecimento a albumina de ovo em pó não se dissolveu. Quando adicionamos a solução de

biureto (5 gotas de NaOH a 10% e 3 gotas de sulfato de culpri a 1%) com os reagentes filtrados a cor passou do branco ao violeta. O

teste do biureto é um ensaio químico que detecta a presença de proteínas em uma amostra. O teste depende de uma mudança de cor

para confirmar a presença de proteínas. Se forem encontradas proteínas, a amostra ficará violeta. O teste do biureto utiliza uma mistura

ou reagente alcalino, composto de hidróxido de potássio e sulfato de cobre. A cor normal do reagente biureto é azul, o reagente fica

violeta na presença de ligações peptídicas, as ligações químicas que mantêm os aminoácidos juntos. As proteínas detectadas devem ter

pelo menos três aminoácidos, o que significa que a proteína deve ter pelo menos duas ligações peptídicas.

Os íons de cobre do reagente, com carga de +2, são reduzidos a uma carga de +1 na presença de ligações peptídicas causando a

mudança de cor.

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RESPOSTAS ÀS PERGUNTAS

1. O que é desnaturação?

RESPONDA:

A desnaturação é um processo no qual proteínas ou ácidos nucléicos perdem a estrutura quaternária , estrutura terciária e

estrutura secundária que está presente em seu estado nativo, pela aplicação de algum estresse externo ou composto como um ácido

forte, o ácido forte que foi usado em este teste concentrou ácido nítrico.

2. Por que a clara de ovo é usada como antídoto para envenenamento por chumbo ou mercúrio?

RESPONDA:

Depois que esses compostos metálicos forem ingeridos por uma pessoa, eles serão distribuídos a partir do estômago. A

clara do ovo é considerada um antídoto para o envenenamento por chumbo e mercúrio porque esses compostos metálicos, ao invés de

oxidar nossas proteínas e ácidos nucléicos em nosso corpo, serão oxidados pela albumina do ovo e serão isolados e provavelmente

retirados de nosso organismo. estômago.

3. Explicar o uso de ácido tânico e ácido pícrico no tratamento de queimaduras

RESPONDA:

O ácido tânico é usado para tratar queimaduras porque tem algumas vantagens em relação a outros tratamentos. Previne a

infecção, que é comum após queimaduras, e também reduz a quantidade de tecido cicatricial que se forma. Também reduz a mortalidade

do paciente por queimaduras.

Ácido pícrico, também chamado de 2,4,6-trinitrofenol, sólido cristalino amarelo pálido e inodoro que tem sido usado como

explosivo militar, como corante amarelo e como anti-séptico.

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4. O teste de coagulação por calor pode ser usado para detectar a presença de albumina na urina? Explique.

RESPONDA:

Sim, é um teste para medição de proteína na urina. O calor em um pH ácido coagula a albumina e a globulina,

e a quantidade de turbidez presente fornece uma estimativa qualitativa do grau de proteinúria.

Adicione algumas gotas de ácido sulfosalicílico e aqueça suavemente. Uma solução turva esbranquiçada ou turva

ou precipitado (coagulação) na solução indica a presença de albumina na amostra de urina. Sob condições patológicas como

a albuminúria, a albumina é encontrada na urina acima do nível normal.

5. Qual é mais eficaz como desinfetante – álcool 95% ou álcool 75%? Por quê?

RESPONDA:

O álcool a 75% é um desinfetante mais eficaz do que o álcool a 95% porque, o importante é que
apenas a solução de álcool isopropílico a 70% atua como desinfetante matando todos os microrganismos
da superfície. A solução de álcool isopropílico a 70% mata os microrganismos dissolvendo a membrana
plasmática da parede celular. A membrana plasmática de bactérias gram negativas consiste em uma fina
camada de peptidoglicon que é facilmente destruída pelo álcool.

A água desempenha um papel importante que costumava desnaturar as proteínas da membrana

celular e atua como um catalisador na reação. O tempo de contato do álcool com o organismo também
desempenha um papel importante. Uma solução de álcool a 70% demora mais tempo na evaporação da
superfície, aumentando o tempo de contato. Portanto, o álcool isopropílico 70% atende a ambos os
requisitos.

O álcool isopropílico 100% coagula as proteínas instantaneamente, criando uma camada de

proteína que protege as outras proteínas de coagulação adicional. Devido a isso, os micróbios não são
mortos, mas permanecem em estágio adormecido. Enquanto a solução de álcool isopropílico a 70%
penetra na parede celular a uma taxa mais lenta e coagula toda a proteína da parede celular e o
microorganismo morre.

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CONCLUSÃO

A precipitação de proteínas é o processo de separação de uma proteína de uma solução como um sólido,
alterando a solubilidade da proteína com a adição de um reagente. A precipitação de proteínas ocorre principalmente
por agregação hidrofóbica, seja por sutilmente romper a estrutura dobrada da proteína e expor mais do interior
hidrofóbico à solução, ou pela desidratação das conchas de moléculas de água que se formam sobre manchas
hidrofóbicas na superfície de proteínas adequadamente dobradas. . Uma vez que as proteínas começam a se agregar
em estruturas maiores, a quantidade de água por proteína cai, aumentando as diferenças de densidade entre as
proteínas e o soluto. Uma vez que esses agregados crescem o suficiente, e se forem suficientes, eles interrompem o
caminho da luz através da solução, dando-lhe uma aparência turva. Além disso, as diferenças de densidade tornam-
se grandes o suficiente para que os agregados sejam facilmente peletizados na centrífuga. Como esses métodos
dependem das moléculas de proteína “se encontrarem” em solução e formar esses agregados, a eficiência desse
método depende da concentração da proteína que está sendo precipitada – quanto menor a concentração, mais difícil
é formar agregados.

Para detectar a presença de proteínas em uma solução, existem diferentes testes que podem ser realizados.
As proteínas coagulam quando são desnaturadas, e a desnaturação das proteínas ocorre quando você as submete a
calor extremo e diferentes íons metálicos como Na+. Na precipitação por reagentes alcalóides, a adição de ácido
tânico, ácido pícrico e ácido tricloroacético em albumina precipitou as proteínas. Proteínas ou ácidos nucleicos perdem
a estrutura quaternária, estrutura terciária e estrutura secundária que está presente em seu estado nativo, pela
aplicação de algum estresse externo ou composto, como um ácido ou base forte, um sal inorgânico concentrado, um
solvente orgânico. A precipitação formada mostra que as proteínas que se tornaram insolúveis em água após algumas
gotas de ácido, e a adição de mais faz com que elas se tornem novamente solúveis em água.
O calor pode ser usado para romper ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas não polares. Isso ocorre porque
o calor aumenta a energia cinética e faz com que as moléculas vibrem tão rápida e violentamente que as ligações são
rompidas. As proteínas dos ovos desnaturam e coagulam durante o cozimento.

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REFERÊNCIAS

Proteínas: folheto de precipitado

Banco, E. (2019). Seattle Pi. Recuperado de: https://education.seattlepi.com/biuret-test-mean

biologia-4659.html

Alfa Aesar. (2019). Ácidos e Sais Inorgânicos. Recuperado de: https://www.alfa.com/en/inorganic-acids and-salts/

Inteligente. (2019). Recuperado de: https://brainly.ph/question/2107679

Respostas. (nd) Recuperado a partir de:

https://www.answers.com/Q/Why_is_eggwhite_used_as_an_antidote_of_lead_and_mercury_poisoning

Revólver. (nd). Teste de Heller. Recuperado de: https://www.revolvy.com/page/Heller%27s-test

Revólver. (nd) Desnaturação. Recuperado de: https://www.revolvy.com/page/Denaturation-(biochemistry)

Coelho. (nd) Precipitação Reações de Preteínas. Recuperado a partir de:

https://quizlet.com/8801657/precipitation-reactions-of-proteins-flash-cards/

Llyod, C. (sd) Herói do Curso. Recuperado de: https://www.coursehero.com/file/p1um7m6u/In precipitação-

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Deen, M, V. (2016, 5 de setembro). Linkado. Recuperado de: https://www.linkedin.com/pulse/why-70-ipa

100-mohamed-anvar-deen

Biossíntese. (2014, 4 de setembro). Recuperado de: https://www.biosyn.com/faq/what-is-protein

precipitação.aspx

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