Universidade Tecnológica Federal do Paraná – UTFPR

Campus Pato Branco

Curso Superior de Bacharelado em Química

ROTEIRO PARA REALIZAÇÃO DE AULA PRÁTICA

EXTRAÇÃO E DETERMINAÇÃO DE CAFEÍNA EM ERVA-MATE UTILIZANDO

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA

Método para o preparo da curva de calibração de cafeína e preparo da amostra para

análise em equipamento

1. Preparo da curva de calibração de cafeína

1.1 Preparar uma solução estoque a partir dos padrões de cafeína, ácido clorogênico
e ácido cafeico na concentração de 500 mg L-1. O volume final desta solução deve ser de
25 mL;
1.2 A partir das soluções preparadas anteriormente, preparar soluções
intermediárias na concentração de 100 mg L-1. O volume final destas soluções deve ser
de 10 mL;
1.3 A partir das soluções intermediárias (100 mg L-1), preparar a curva de calibração
contendo os três padrões com as seguintes concentrações: 5,0 mg L-1; 10 mg L-1; 15 mg
L-1, 20 mg L-1 e 30 mg L-1. O volume final destas soluções deve ser de 2 mL e utilizada a
fase móvel do método (água:metanol / 70:30).
1.4 Filtrar os pontos da curva de calibração utilizando filtro PTFE 0,45 uM em vial.

2. Preparo da amostra
Método 1:
2.1 Retirar o sobrenadante (acondicionar em tubo falcon) e adicionar 15 mL da
mistura etanol:água (70:30 v/v) e manter a extração em capela até a próxima aula;
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2.2 Filtrar a amostra com auxílio de kitassato e bomba a vácuo. Unir os volumes
extraídos e avolumar a solução em balão volumétrico de 50 mL;
2.3 Filtrar a amostra utilizando membrana de 0,45 um de poro e acondicionar em
vial até o momento da injeção em sistema de cromatografia líquida.

Método 2:
2.4 A partir da amostra extraída e concentrada em copo de bécker, inserir 2 mL de
água; agitar constantemente por aproximadamente 3 minutos; transferir para balão
volumétrico de 10 mL e avolumar com água (reservar a solução para análise por CCD);
2.5 Diluir a solução preparada anteriormente 100 vezes (em duas etapas de 10x);
2.6 Filtrar a amostra diluída em vial e acondicionar sob refrigeração até o momento
das análises.

Após o preparo da curva de calibração e amostra, todas as soluções devem ser injetadas
em sistema de cromatografia líquida de alta eficiência utilizando método previamente
definido.