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Métodos Analíticos para o Controle da Produção de Açúcar e Álcool – 5ª Edição - 2014

Método Fermentec – FTCQ – 10 / 001

Determinação de Compostos Fenólicos Totais em Açúcar

1. Princípio do Método

O método baseia-se na redução do ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico pelas hidroxilas

fenólicas em meio alcalino, produzindo um complexo de coloração azul que absorve entre
620 e 740 nm com um comprimento de onda máximo em 725 nm.

2. Material

2.1. Equipamentos

- Espectrofotômetro
- Balança analítica com 4 casas decimais
- Balança de precisão com 2 casas decimais
- Agitador magnético
- Cronômetro

2.2. Vidrarias e Outros

- Micropipeta de volume variável (100 - 1000 uL)

- Cubeta de 10 mm
- Funil de vidro com haste
- Balões volumétricos de 200, 250 e 1000 mL
- Pipetas volumétricas de 2 e 20 mL
- Beckers de 150 e 1000 mL
- Barras magnéticas de agitação
- Bastão de plástico ou vidro
- Homogeneizador de açúcar tipo “Y” ou similar
- Algodão
- Pisseta

3. Reagentes

- Ácido Cafeico – C9H8O4

- Phenol Reagent – Folin & Ciocalteau
- Hidróxido de Sódio p.a. – NaOH
- Água destilada ou deionizada

4. Preparo de Soluções

- Solução padrão estoque de Ácido Cafeico – 100 mg de P • L-1

Pesar 0,0250 g (± 0,0003 g) de Ácido Cafeico em becker de 150 mL, adicionar cerca de
100 mL de água previamente aquecida (ao redor de 80 ºC) e dissolver. Transferir

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quantitativamente o conteúdo do becker para balão volumétrico de 250 mL e completar o

volume com água. Homogeneizar.
Prazo de validade: 60 dias. Conservação: Freezer

- Solução padrão de trabalho de Ácido Cafeico – 5 mg de P • L-1

Transferir 10 mL de Solução Padrão Estoque de Acido Cafeico a 100 mg de P • L-1,
utilizando pipeta volumétrica, para balão volumétrico de 200 mL e completar o volume
com água. Homogeneizar.
Prazo de Validade: Preparo, uso na análise e descarte da solução.

- Solução de NaOH 2 N
Pesar 80,00 g (± 0,03 g) de NaOH p.a. em um becker de 1000 mL, adicionar cerca de 400
mL de água e dissolver o material com auxilio de agitador magnético (se necessário,
utilizar um banho de gelo para evitar um aquecimento excessivo da solução). Transferir
quantitativamente o material contido no becker para um balão volumétrico de 1000 mL e
completar o volume do balão com água. Homogeneizar.
Prazo de validade: 60 dias; Conservação: temperatura ambiente do laboratório (frasco
plástico).

5. Determinação

- Pesar 10,00 g (± 0,03 g) da amostra de açúcar a ser analisada, previamente

homogeneizada, em becker de 250 mL, adicionar aproximadamente 150 mL de água e
dissolver com auxilio de agitador magnético.
- Transferir quantitativamente a amostra de açúcar dissolvida, contida no becker de 250
mL para balão volumétrico de 200 mL e completar o volume com água. Homogeneizar.

- Utilizando micropipeta ou pipetas volumétricas, transferir 2 mL de :

- Amostra de açúcar diluído para 3 tubos de ensaio;

- Solução padrão de trabalho de Ácido Cafeico – 5 mg de P • L-1 para 3 tubos de
ensaio;
- água deionizada/destilada (prova em branco) para 3 tubos de ensaio.

- Utilizando micropipetas de volume variável, adicionar em cada um dos tubos 200 uL de

Phenol Reagente – Folin & Ciocaulteau e na sequência 400 uL da Solução de NaOH 2N.
- Homogeneizar os tubos de ensaio em agitador de tubos.
- Realizar leituras em absorbância no espectrofotômetro, com cubeta de 10 mm a 650
nm, não excedendo 5 minutos para evitar a formação de um precipitado que pode
comprometer os resultados.

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6. Cálculos

A concentração de Compostos Fenólicos Totais em Açúcar é expressa em miligramas por

quilo (mg • Kg-1).

Compostos Fenólicos Totais = 100 * ((La - Lb) / (Lp - Lb))

Onde :
La = médias das 3 leituras do extrato da amostra
Lp = média das 3 leituras da Solução Padrão de Trabalho de Ácido Cafeico – 5 mg de P • L-1
Lb = média das 3 leituras da prova em branco

7. Referências

a. Bonoli, M.; Verardo, V.; Marconi, E.; Caboni, M. F.; J. Agric. Food Chem. 2004, 52,
5195.

b. Singleton VL, Rossi JA. Colorimetric of total phenolics with phosphomolybdic-

phosphotungstic acid reagents. Am J Enol Vitic 1965; 16 (3): 144-6.

c. Brune M, Hallberg L, Skanberg AB. Determination of ironbinding phenolic groups in

foods. J Food Sci 1991; 56(1): 128-130.

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