BIOTECNOLOGIA E BIOSSEGURANA NA PRODUO DE VACINAS E KITS DIAGNSTICO Produo comercial de vacinas e kits de diagnstico Amrico Martins CRAVEIRO1

As vacinas e kits de diagnstico so importantes ferramentas para diagnstico e preveno de um grande conjunto de doenas que afetam a espcie humana e as espcies animais. Existem ainda diversos soros para tratamento, como os anti-ofdicos, anti-rbico e anti-tetnico. Ao conjunto de vacinas, kits de diagnstico e soros denominamos produtos imunobiolgicos. Sempre que seja tecnicamente possvel e os estudos epidemiolgicos demonstrarem a importncia de uma dada doena ou de um dado agente etiolgico, a melhor forma de enfrentar o problema, sem dvida por medidas profilticas. Existem casos para os quais ainda no possvel, com o conhecimento cientfico disponvel, ter uma vacina eficiente. Do mesmo modo que isso no ainda vivel contra o vrus HIV, analogamente na rea veterinria no dispomos de vacinas eficientes contra tuberculose bovina, carrapatos que infestam bovinos ou ces, hemoparasitas, agentes causadores de mastite em gado de leite, etc. Desse vasto universo de possibilidades, este trabalho abordar aspectos relevantes a considerar na produo de vacinas para uso veterinrio. certo dizer que o desenvolvimento de vacinas para uso em animais segue as conquistas cientficas e tecnolgicas que pioneiramente foram alcanadas para a proteo da espcie humana. Atualmente o uso de vacinas em animais pode ser dividido nas seguintes classes: -Vacinas para animais de produo: aqui incluem-se vacinas aplicadas na forma injetvel, tpica para bovinos, sunos, ovinos e caprinos; vacinas injetveis ou administradas na gua, para peixes; vacinas administradas na gua ou via asperso, para aves -Vacinas para animais de companhia, onde se incluem ces, gatos e eqinos; so usualmente injetveis, mas existem tambm de aplicao nasal. -Vacinas para controle de animais silvestres que possam ser reservatrio de microrganismos patognicos ao homem, como o caso da raposa em relao raiva Uma vacina composta de diversos componentes: -Antgeno: responsvel por promover a resposta imune no organismo a ser protegido. muito comum uma vacina conter diversos antgenos, de modo que com um manejo simplificado dos animais, podemos deix-los protegidos contra diversas doenas. -Adjuv ante: uma substncia, como hidrxido de alumnio ou saponina, que aumenta a resposta imune -Conservantes ou estabilizantes: como por exemplo fenol e timerosal.
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Diretor de Gesto Tecnolgica - Valle S.A. Cinc. vet. trp., Recife-PE, v. 11, suplemento 1, p.123-125, abril, 2008

A. M. CRAVEIRO As vacinas podem ser classificadas como vivas ou inativadas. A vacina contra brucelose bovina, por exemplo, uma vacina viva liofilizada. A grande maioria das vacinas so inativadas, como por exemplo contra aftosa, raiva, botulismo, leptospirose, etc. No que tange tecnologia podem ser classificadas como convencionais (raiva, aftosa) ou recombinantes; diversas tecnologias esto disponveis ou em grande desenvolvimento para vacinas recombinantes, como: de DNA (encefalite eqina), vetorial (cinomose), deletada (rinotraquete infecciosa bovina), de sub-unidade (doena de lyme), etc. As vacinas disponveis comercialmente para uso veterinrio so para combate a doenas virais e bacterianas; quando se considera parasitas, ainda no verificamos produtos eficientes. A produo industrial de vacinas envolve uma srie de etapas que sero a seguir descritas. Para que se tenha uma produo eficiente, cada uma dessas etapas deve ser otimizada, para que o processo industrial resulte numa vacina com qualidade e preo competitivo. 1-Cepas: essencial dispor-se de cepas eficientes, ou seja que sejam alto-produtoras dos antgenos de interesse. Essas estirpes devem passar por programas de melhoramento gentico para serem cada vez mais eficientes. fundamental estruturar de modo adequado o Banco de Cepas, de modo a no perder as caractersticas requeridas dos microrganismos, visto que eles representam um patrimnio da empresa.

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2-Cultivo em escala de bancada: nesta etapa estabelecem-se as melhores condies ambientais para o mximo crescimento celular ou de produo do antgeno de interesse (protena). As condies a serem otimizadas, a depender se o processo conduzido na presena de oxignio (aerbio) ou na sua ausncia (anaerbio), so: temperatura, pH, potencial redox, concentrao da fonte de carbono, concentrao de macro-nutrientes, concentrao de micro-nutrientes. Algumas substncias geradas no metabolismo micro-biano, ao longo do processo fermentativo tambm podem precisar ter suas concentraes controladas, pois podem ser fortes inibidoras dos processo; aqui inclui-se o amnio, o lactato, etc. Para que se alcancem altas taxas de converso dos substratos no produto desejado, o tipo de biorreator onde ser conduzido o processo tambm pode ser um fator determinante da viabilidade do processo. Busca-se um comportamento cintico que assegure a mxima produo do produto de interesse, bem como que tal ocorra no menor tempo possvel; isso importante para que o volume dos equipamentos de produo, bem como o gasto com insumos sejam os menores possveis, de forma a contribuir para o menor custo de produo possvel. Os biorreatores podem ser muito diferentes, principalmente quando se compara a produo das vacinas virais com as bacterianas. Biorreatores, dotados de sistemas de agitao so normalmente empregados para a produo de vacinas bacterianas. A produo de vacinas virais mais complexa, pois tem-se que

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A. M. CRAVEIRO inicialmente produzir as clulas (de mamfero, tipo BHK, ou de insetos, como de Spodoptera frugiperda), para posteriormente infectar e promover a produo massiva de vrus. Diversos sistemas podem ser utilizados, desde biorreatores dotados de sistema de agitao, quando as clulas no precisam ficar ancoradas (caso da vacina anti-aftosa), ou sistemas ancorados (caso dos antgenos da vacina para proteo contra doenas do complexo respiratrio/reprodutivo), como garrafas roller, bandejas (cell factories), cubos (cell cubes) e biorreatores com micro-carregadores. 3-Cultivo em escala industrial Nesta etapa, faz-se ajustes do processo para que o aumento de escala efetuado no implique em perda de eficincia. Para tanto o prprio projeto do biorreator industrial deve ser feito mediante critrios adequados de escalonamento considerando relaes geomtricas, coeficientes de transferncia de oxignio, potncia para agitao fornecida ao meio lquido por unidade de volume, etc. 4-Inativao do agente Para vacinas inativadas necessrio proceder inativao do agente, o que pode ser feito por via qumica ou trmica. Em ambos os casos necessrio determinar a cintica de inativao, de forma a ter uma vacina incua. 5-Separao, purificao e concentrao do produto No basta produzir bem os antgenos de interesse. necessrio que as operaes unitrias utilizadas no processo sejam eficientes, para que no se

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perca parte do antgeno nessas operaes subseqentes. 6-Formulao Esta ltima etapa consiste em se adicionar o adjuvante e eventuais preservantes, de modo que a vacina tenha a mxima eficincia e seja estvel por longos (tipicamente 2 anos) perodos de armazenamento. As condies de armazenamento so de 2 a 8C Existem vrios tipos de adjuvantes comerciais utilizados em vacinas aquosas ou vacinas em emulso. Alguns deles so de tal modo eficientes que pode-se obter a resposta imune desejada, mesmo com quantidades muito pequenas de antgenos; isto tem evidentemente um grande impacto no custo da vacina produzida. 7-Controle de qualidade Os controles de qualidade so efetuados durante o processo de produo e tambm no produto final obtido. Os controles de processo incluem o pH, confirmao da inativao, quantificao do antgeno e pureza (ou seja a ausncia de outros microrganismos contaminantes). No produto final faz-se o pH, aspectos visuais, esterilidade/ pureza, inocuidade e teste de potncia. O teste de potncia feito atravs de mtodos imunoqumicos: -in vivo: realizados em animais de biotrio (camundongos, cobaios e coelhos) e nas espcies-alvo para as quais a vacina indicada. -in vitro: ELISAs, soro-neutralizao, Lf, ToBI, etc

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