EN3419 - TECNOLOGIA DE PRODUO DE ETANOL

Dalmo Mandelli (CCNH Qumica)

https://sites.google.com/site/ufabctecnologiaetanol/

Hidrlise da biomassa lignocelulsica

MADEIRA: ESTRUTURA E COMPOSIO QUMICA

A madeira um material heterogneo, basicamente constituda por tecidos formados por clulas com paredes celulares espessas, cujas formas e tamanhos variam de acordo com a espcie. A integridade estrutural destes tecidos atribuda lamela mdia, uma camada que mantm as clulas adjacentes unidas entre si

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W. Carvalho et al, Quim. Nova, 32 (2009) 2191

As madeiras podem ser agrupadas em duas categorias distintas: 1) As madeiras moles, ou de conferas, pertencem ao grupo das gimnospermas. Caractersticas folhagem na forma de agulha e a ausncia de frutos (sementes descobertas). As clulas que servem ao transporte de gua e nutrientes tambm provem suporte mecnico.

Ex: pinheiros da europa (P. pinaster, P. pinea, P. sylvestris, etc.), os abetos, os chamaciparis, as sequias, os cedros, os ciprestes, as araucrias (pinheirosdo-paran).
http://pt.wikipedia.org/wiki/Con%C3%ADfera plantasonya.com.br

2) As madeiras duras, ou de folhosas, pertencem ao grupo das angiospermas dicotiledneas. Caractersticas: folhas largas e sementes encerradas em frutos. Apresentam clulas especializadas especficas para transporte de gua e nutrientes e para prover suporte mecnico.

Exemplos: feijo, amendoim, soja, ervilha, lentilha, gro-de-bico, pau-brasil, ip, peroba, mogno, cerejeira, abacateiro, acerola, roseira, morango, pereira, macieira, algodoeiro, caf, jenipapo, girassol e margarida.
jardimdeflores.com.br

ESTRUTURA As madeiras de conferas so relativamente simples, sendo compostas praticamente por um nico tipo de clulas alongadas (2-5 mm) denominadas traquedeos.

Clulas transversais que compem o raio e canais de resina tambm so encontradas.

Confera
W. Carvalho et al, Quim. Nova, 32 (2009) 2191

Folhosa
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Micrografia da seo transversal do tronco de uma madeira

ESTRUTURA As madeiras de folhosas so mais complexas e apresentam maior diversidade de padres de organizao celular. Trs tipos bsicos de clulas so encontrados nesta categoria: aquelas que compem os vasos, as fibras e as clulas do raio, que constituem o parnquima radial. As clulas dos vasos (0,2-0,5 mm de comprimento) e as fibras (1,0-2,0 mm de comprimento) so as encontradas em maior quantidade.

Confera

Folhosa
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Micrografia da seo transversal do tronco de uma madeira

Em termos de ultraestrutura, a parede de cada clula formada por diversas camadas: parede primria (P), parede secundria externa (S1), parede secundria mdia (S2) e parede secundria interna (S3). Estas camadas so compostas por microfibrilas celulsicas orientadas no espao de forma definida, dependendo da camada.

Estrutura de uma fibra vegetal. A imagem de MEV se refere fibra de Eucalipto

R. Silva, S. K. Haraguchi, E. C. Muniz e A. F. Rubira, Quim. Nova, 32 (2009) 661

Os materiais lignocelulsicos so muito mais difceis de serem convertidos em etanol que acares, amidos e leos. A lignocelulose o material fibroso que forma a parede celular da arquitetura da planta. Consiste em trs componentes principais: celulose, hemicelulose e lignina.

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Celulose: polmeros de glicose de alta massa molar que so mantidos unidos de forma rgida como um feixe de fibras que origina a rigidez do material (40% em massa da lignocelulose). Hemicelulose: polmeros curtos de vrios acares que agem como uma cola entre os feixes de celulose (25% da lignocelulose). Lignina: macromolculas tridimensionais formadas de unidades propil-fenlicas encapsuladas e ligadas hemicelulose. D rigidez estrutura (20% da massa da lignocelulose).

R. Quintero-Ramirez, in Bioetanol de Cana-de-Acar P&D para Produtividade 11 e Sustentabilidade, L. A. B. Cortez (Ed.), Ed. Blucher-FAPESP, 2010

R. Quintero-Ramirez, in Bioetanol de Cana-de-Acar P&D para Produtividade e Sustentabilidade, L. A. B. Cortez (Ed.), Ed. Blucher-FAPESP, 2010

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CELULOSE As pores celulsicas e hemicelulsicas da biomassa, representando em torno de 40-50% e 20-30% do peso seco das plantas, respectivamente, so polissacardeos que podem ser hidrolisados a acares e fermentados.

Celulose

Hemicelulose
A. S. Magaton e D. Pil-Velos, Quim. Nova, 31 (2008) 1085. mat. Sup.

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CELULOSE A celulose um homopolissacardeo linear constitudo unicamente por molculas de glicose unidas entre si atravs de ligaes glicosdicas do tipo (14).

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CELULOSE A celulose um homopolissacardeo linear constitudo unicamente por molculas de glicose unidas entre si atravs de ligaes glicosdicas do tipo (14).

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CELULOSE Formam-se cadeias lineares que interagem umas com as outras atravs de ligaes de hidrognio.

Solomons et al, Organic Chemistry, Wiley, 7th Ed., 2000.

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Uma fibra de celulose pode consistir em aproximadamente 40 fitas paralelas de molculas de glicose unidas de uma maneira (14). Cada unidade de glicose em uma cadeia virada e mantida nessa posio por ligaes de hidrognio (linhas tracejadas) entre as cadeias.

As cadeias alinham-se lateralmente para formar lminas, e essas lminas em pilham-se verticalmente de tal forma que elas so alternadas por meia unidade de glicose. Os tomos de hidrognio que no participam nas ligaes de hidrognio foram omitidos para dar clareza.

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A estrutura resultante, denominada fibrila elementar, insolvel em gua e apresenta alto grau de cristalinidade

Solomons et al, Organic Chemistry, Wiley, 7th Ed., 2000.

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Ligaes entre molculas de glicose

Interaes entre as cadeias lineares adjacentes para a formao da fibrila elementar

associao entre quatro fibrilas elementares adjacentes

A. S. Magaton e D. Pil-Velos, Quim. Nova, 31 (2008) 1085. mat. Sup.

Hemicelulose e lignina para a formao da microfibrila celulsica

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Ligaes entre molculas de glicose

Interaes entre as cadeias lineares adjacentes para a formao da fibrila elementar

Interaes entre as cadeias lineares adjacentes para a formao da fibrila elementar

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Ligaes entre molculas de glicose

Hemicelulose e lignina para a formao da microfibrila celulsica

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A. S. Magaton e D. Pil-Velos, Quim. Nova, 31 (2008) 1085. mat. Sup.

HEMICELULOSE A qualidade da celulose ou papel est diretamente relacionada composio qumica da madeira. Dentre seus constituintes, as hemiceluloses tm despertado grande interesse mundial nos ltimos anos, devido, principalmente, sua influncia nas propriedades da polpa celulsica produzida a partir de fibras da madeira. A maioria dos polissacardeos encontrados em paredes celulares vegetais pertence s celuloses, hemiceluloses ou classes de pectinas. Ainda que a celulose funcione como o componente rgido e sustentador de peso da parede celular, a rigidez da microfibra celulsica reforada dentro de uma matriz de hemiceluloses e pectinas.

W. Carvalho et al, Quim. Nova, 32 (2009) 2191 T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

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HEMICELULOSE O termo hemicelulose utilizado coletivamente para denominar grupos distintos de polissacardeos constitudos por acares pentoses (xilose e arabinose) e/ou hexoses (glicose, manose e galactose), cidos urnicos e grupos acetila.

Possui grande influncia nas propriedades da polpa celulsica obtida a partir de fibras da madeira

http://en.wikipedia.org/wiki/ File:Hemicellulose.png

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HEMICELULOSE O termo hemicelulose utilizado coletivamente para denominar grupos distintos de polissacardeos constitudos por acares pentoses (xilose e arabinose) e/ou hexoses (glicose, manose e galactose), cidos urnicos e grupos acetila.

cido urnico
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HEMICELULOSE Hemiceluloses so geralmente classificadas de acordo com o resduo de acar principal no esqueleto, como, por exemplo, xilanas (xilose), mananas (manose) e glicanas (glicose). Dependendo da espcie da planta, estgio de desenvolvimento e tipo de tecidos, vrias subclasses de hemiceluloses podem ser encontradas, incluindo glicuronoxilanas, arabinoxilanas, mananas lineares, glicomananas, galactomananas, galactoglicomananas, -glucanas e xiloglucanas.

Arabinoxilanas, glicuronoxilanas, xiloglicanas e mananas lineares so pouco hidratados e, com exceo das mananas lineares (que servem como componente de armazenamento de sementes), estabilizam a parede celular atravs de interaes de hidrognio com a celulose e ligaes covalentes com a lignina.

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HEMICELULOSE

Outras hemiceluloses como, por exemplo, galactoglicomananas, glicomananas, galactomananas e -glicanas so usadas como energia extracelular e sistema de armazenagem dos produtos brutos, alm de mecanismo de reteno de gua em sementes. As hemiceluloses provavelmente esto envolvidas na regulao da elongao e modificao da parede. Acredita-se que as interaes entre hemiceluloses e as microfibrilas de celulose sejam mais fortes do que as interaes entre as hemiceluloses e ligninas. A composio qumica e caractersticas estruturais das hemiceluloses variam amplamente atravs de espcies, localizaes sub-celulares e estgios de desenvolvimento. Geralmente as hemiceluloses esto quimicamente associadas ou reticuladas a outros polissacardeos, protenas ou ligninas.
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Composio de carboidratos das O-acetil-(4-Ometilglicurono) xilanas do Eucalyptus urograndis Entre as hemiceluloses, especial ateno tem sido direcionada estrutura das O-acetil-(4-O-metilglicurono)xilanas, que so as principais hemiceluloses do eucalipto

A. S. Magaton e D. Pil-Velos, Quim. Nova, 31 (2008) 1085

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Composio de carboidratos das O-acetil-(4-Ometilglicurono) xilanas do Eucalyptus urograndis

A. S. Magaton e D. Pil-Velos, Quim. Nova, 31 (2008) 1085

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As principais estruturas de cido carboxlico que ocorrem nos polissacardeos da madeira so os grupos de cidos glicurnicos, usualmente na forma dos cidos mono metil ter, 2-O-(4-metil--D-glicopiranosilurnico) e galacturnico. O contedo total de unidades de cidos urnicos presentes na madeira est em torno de 4-5% da madeira seca.

Enquanto as unidades de cido glicurnico predominam nas xilanas (hemiceluloses) presentes na madeira, as de cido galacturnico so constituintes das pectinas.

G. Ventorim et al, Qum. Nova, 32 (2009) 373.

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As principais estruturas de cido carboxlico que ocorrem nos polissacardeos da madeira so os grupos de cidos glicurnicos, usualmente na forma dos cidos mono metil ter, 2-O-(4-metil--D-glicopiranosilurnico) e galacturnico. O contedo total de unidades de cidos urnicos presentes na madeira est em torno de 4-5% da madeira seca.

Enquanto as unidades de cido glicurnico predominam nas xilanas (hemiceluloses) presentes na madeira, as de cido galacturnico so constituintes das pectinas.

G. Ventorim et al, Qum. Nova, 32 (2009) 373.

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http://www.msinstrumentos.com.br/ industrias/papel_e_celulose.htm

CURIOSIDADE: Os cidos hexenurnicos no so desejveis nos processos de branqueamento de celulose. Alm de consumirem os reagentes qumicos do branqueamento, causam um aumento na sua habilidade de quelar metais, comparado com seu precursor, o cido 4-O-metil glicurnico Conseqentemente levam a uma maior reverso de alvura

Adicionalmente os cidos hexenurnicos no so reativos no branqueamento alcalino com oxignio e perxido de hidrognio.
A. S. Magaton e D. Pil-Velos, Quim. Nova, 31 (2008) 1085

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Estrutura qumica parcial das O-acetil-(4-O-metilglicurono)xilanas

Caracterizado por: IV, RMN 1H e RMN13C (tcnica de correlao heteronuclear HSQC, para identificar hidrognios anomricos e separ-los daquelas dos demais hidrognios do anel piranosdico da xilose. CG-MS (aps metanlise e sililao): anlise de carboidratos Cromatografia de excluso por tamanho: massa molecular mdia e a polidispersividade.
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Celulose: polmeros de glicose de alta massa molar que so mantidos unidos de forma rgida como um feixe de fibras que origina a rigidez do material (40% em massa da lignocelulose). Hemicelulose: polmeros curtos de vrios acares que agem como uma cola entre os feixes de celulose (25% da lignocelulose). Lignina: macromolculas tridimensionais formadas de unidades propil-fenlicas encapsuladas e ligadas hemicelulose. D rigidez estrutura (20% da massa da lignocelulose).
http://pubs.acs.org/cen/coverstory/86/8633cover3.html

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Celulose: polmeros de glicose de alta massa molar que so mantidos unidos de forma rgida como um feixe de fibras que origina a rigidez do material (40% em massa da lignocelulose). Hemicelulose: polmeros curtos de vrios acares que agem como uma cola entre os feixes de celulose (25% da lignocelulose). Lignina: macromolculas tridimensionais formadas de unidades propil-fenlicas encapsuladas e ligadas hemicelulose. D rigidez estrutura (20% da massa da lignocelulose). http://pubs.acs.org/cen/coverstory/86/8633cover3.html

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LIGNINA A lignina uma macromolcula sintetizada por via radicalar a partir de trs lcoois p-hidrxi-cinamlicos precursores: p-cumarlico, coniferlico e sinaplico.

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LIGNINA Quando degradadas a fraes de massas molares menores, podem ser utilizadas na fabricao de espumas de poliuretanas, resinas fenlicas e epxi, como fontes de fenol e etileno, e podem ser convertidas em fibras de carbono.

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Dependendo do grau de metoxilao do anel aromtico, a unidade bsica p-hidroxi-fenil (no metoxilada, derivada do lcool p-cumarlico), guaiacil (com uma metoxila, derivada do lcool coniferlico) ou siringil (com duas metoxilas, derivada do lcool sinaplico).

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http://www.quimicaederivados.com.br/index.php?sessao=reportagem&id=376&codigo_revis=495

Vrios tipos de acoplamento que podem ocorrer entre as unidades bsicas que constituem a lignina.

Estes do origem a ligaes como -O-4 e -O-4 (50-65%), -1 (9-15%), -5 (6-15%), 5-5 (2-9%) e - (2-5%).

W. Carvalho et al, Quim. Nova, 32 (2009) 2191

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Vrios tipos de acoplamento que podem ocorrer entre as unidades bsicas que constituem a lignina.

Estes do origem a ligaes como -O-4 e -O-4 (50-65%), -1 (9-15%), -5 (6-15%), 5-5 (2-9%) e - (2-5%).

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A proporo entre os componentes da parede celular (celulose, hemicelulose e lignina) depende da espcie vegetal e varia de camada para camada. Teor de lignina encontrado em madeiras de conferas (25-35%) superior quele encontrado em madeiras de folhosas (18-25%). Lignina responde por at 84% do peso da lamela mdia composta (LM + P).

A parede secundria interna (S3) constituda por at 87% de hemicelulose, com pouca ou nenhuma lignina. A parede secundria mdia (S2), usualmente mais espessa que as demais, apresenta em mdia 54% de celulose.

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 importante diferenciar os componentes da parede celular, polissacardeos e lignina, dos compostos estranhos fibra vegetal, os quais no so considerados essenciais estrutura da parede celular ou da lamela mdia. Alguns destes componentes so solveis em gua ou solventes orgnicos neutros, e so coletivamente denominados extraveis. Outros, como protenas e sais de cidos inorgnicos, por outro lado, podem ser completamente insolveis nos solventes utilizados para a remoo dos extraveis.

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Os extraveis so associados cor, cheiro e sabor. So constitudos por substncias de baixa massa molar envolvidas no metabolismo da planta. Quimicamente, consistem em acares, compostos aromticos, ceras, cidos graxos e resinas (terpenos, lignanas, estilbenos, flavonides), entre outros. Em geral perfazem de 2 a 8% da massa total em base seca.

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Estes compostos desempenham um papel importante no processo de biodegradao da madeira, pois podem atuar como mediadores que fomentam a reduo de ons metlicos como o Fe+3 e a atividade de enzimas como a mangans peroxidase. Por outro lado, tambm podem atuar como protetores da madeira contra o ataque de micro-organismos, devido atividade antimicrobiana exibida por vrios de seus constituintes.

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limoneno, um terpeno

Flavonides (polifenis)

Dibenzilbutano, uma lignana

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HIDRLISE DA CELULOSE

A obteno de etanol a partir de biomassa envolve duas etapas: 1) Hidrlise dos polissacardeos, gerando mono e dissacardeos. 2) Fermentao dos monos e dissacardeos em etanol. A hidrlise de celulose gera glicose e celobiose (um dmero de glicose). Por outro lado, a hidrlise de ligninas e hemicelulose gera acares e subprodutos (principalmente, difenis, derivados de fenilpropano, cetonas, furfural e cido actico), que muitas vezes inibem a fermentao microbiana.

T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

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Os processos hidrolticos no so triviais: Existem interaes complexas entre hemicelulose e celulose presentes nas paredes celulares dos vegetais e entre estes polissacardeos e ligninas. A natureza cristalina da celulose e, barreira fsica formada por ligninas ao redor das fibras celulsicas dificulta o acesso dos reagentes (catalisador e gua). Por esta razo, a biomassa sofre um pr-tratamento para separar a matriz de lignina, reduzir a cristalinidade da celulose e hidrolisar a hemicelulose, separando o hidrolisado da celulose, a qual sofre tratamento especfico para a obteno de glicose.

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Tipicamente, cadeias de celulose em parede celular primria de plantas tm graus de polimerizao (DP) na faixa de 5.000 a 7.500; O DP de celulose de madeira em torno 10.000, e a de celulose de algodo 15.000. T amb, os anis relativamente rgidos de glicose so todos encontrados em sua energia mais baixa, C4 mantido em conformao cadeira, no fazendo transies para outra conformao cadeira ou para vrias possveis formas barco-deformado.

Celulose

T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

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Com os anis nesta conformao, todos os grupos hidroxilas ligados por ligaes de hidrognio e os substituintes hidroximetilas dos anis de piranose so equatoriais, direcionados periferia do anel. J os prtons hidrofbicos alifticos esto em posies axiais, apontando tanto para cima quanto para baixo, em relao ao plano mdio dos anis.

Celulose

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Com os anis nesta conformao, todos os grupos hidroxilas ligados por ligaes de hidrognio e os substituintes hidroximetilas dos anis de piranose so equatoriais, direcionados periferia do anel. J os prtons hidrofbicos alifticos esto em posies axiais, apontando tanto para cima quanto para baixo, em relao ao plano mdio dos anis.

Celulose

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Com os anis nesta conformao, todos os grupos hidroxilas ligados por ligaes de hidrognio e os substituintes hidroximetilas dos anis de piranose so equatoriais, direcionados periferia do anel. J os prtons hidrofbicos alifticos esto em posies axiais, apontando tanto para cima quanto para baixo, em relao ao plano mdio dos anis. A estrutura resultante insolvel em gua e apresenta alto grau de cristalinidade

Solomons et al, Organic Chemistry, Wiley, 7th Ed., 20\00.

T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

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A estrutura cristalina da celulose foi primeiramente descrita por Mark e Meyer, em 1928 e existem vrio modelos de estruturas cristalinas.

A estrutura resultante insolvel em gua e apresenta alto grau de cristalinidade

Solomons et al, Organic Chemistry, Wiley, 7th Ed., 20\00.

T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

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Em todos os esquemas propostos de empacotamento cristalino, as cadeias so empilhadas emparelhando as faces hidrofbicas, as quais contribuem para a insolubilidade da celulose sob condies normais. Em umas das conformaes cristalinas, cada glicose est torcida em 180 em relao anterior e a seus anis subsequentes.

Assim os grupos exocclicos alcolicos primrios apontam alternadamente para a direita e para esquerda da direo da cadeia.

Figura. Celo-hexose mostrando a conformao planar e a torcida de 180 dos resduos de celobiose na celulose linear.

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A cadeia estabilizada por ligaes de hidrognio fortes ao longo da direo das cadeias, do grupo exocclico hidroxila alcolico primrio O6 ao grupo hidroxila alcolico secundrio O2 do resduo subsequente, e do grupo hidroxila O3 para o anel de oxignio O5 do prximo resduo de acar.

Estas ligaes de hidrognio ajudam a manter e reforar a conformao linear e plana da cadeia para alm da rigidez que poderia ser esperada para este tipo de ligao. importante notar que, para a maioria dos modelos de celulose cristalina, no h ligaes de hidrognio entre as cadeias em diferentes camadas do cristal (contradio com Solomons!)
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A cadeia estabilizada por ligaes de hidrognio fortes ao longo da direo das cadeias, do grupo exocclico hidroxila alcolico primrio O6 ao grupo hidroxila alcolico secundrio O2 do resduo subsequente, e do grupo hidroxila O3 para o anel de oxignio O5 do prximo resduo de acar.

Estas ligaes de hidrognio ajudam a manter e reforar a conformao linear e plana da cadeia para alm da rigidez que poderia ser esperada para este tipo de ligao. importante notar que, para a maioria dos modelos de celulose cristalina, no h ligaes de hidrognio entre as cadeias em diferentes camadas do cristal (contradio com Solomons!)
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Com todos os tomos de hidrognio alifticos em posies axiais e todos os grupos polares de hidroxilas em posies equatoriais, as partes superior e inferior das cadeias de celulose so hidrofbicas, enquanto que as laterais das cadeias so hidroflicas e capazes de fazer ligaes de hidrognio. Esta topologia extremamente importante para o empacotamento das cadeias nos cristais.

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Alm da celulose, as hemiceluloses como as -glucanas e xiloglucanas possuem um importante papel na estrutura e funo da parede celular. Elas esto envolvidas no suporte e reticulao da matriz celulsica atravs de ligaes de hidrognio com a celulose, com outras hemiceluloses e pectinas. Estruturalmente elas so similares celulose, pois seus esqueletos so formados por ligaes -glicosdicas. -glucanas consistem de misturas de resduos de -(1-3) e -(1-4) glicosdicas, enquanto que as xilanas so polissacardeos que possuem um esqueleto de -(1-4)-D-xilopiranose, com uma variedade de cadeias secundrias.

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A composio e ligao das cadeias secundrias determinam o tipo especfico de variao da xilana. Removendo estas cadeias secundrias geralmente se eleva a taxa de degradao por enzimas endoxilanases

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Os grupos laterais de xilanas podem ter um papel importante na ligao de ligninas com hemiceluloses. Grupos secundrios, especialmente substituintes acetilas, afetam propriedades fsico-qumicas e biodegradabilidade das hemiceluloses solveis ou presas matriz. A acetilao aumenta a solubilidade do polissacardeo em gua, desfavorecendo o estado agregado. J a presena de steres ligados a resduos de no-carboidratos faz com que as glucanases individuais no consigam liberar produtos de degradao uniforme, diminuindo a degradao enzimtica dos polissacardeos.

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O termo mananas indica um polmero linear de resduos com ligaes -(1-4)glicosdeas de manopiranosila. A estrutura e, logo, a degradao de mananas, so anlogas celulose. No entanto, mananas so encontradas em apenas algumas plantas particulares. Sua estrutura pode ser ramificada com diferentes combinaes de resduos de glicose e galactose, dando origem s muito mais comuns: glicomananas, galactomananas e galactoglicomananas.

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CELULASE

Celulases so enzimas que constituem um complexo capaz de atuar sobre materiais celulsicos, promovendo sua hidrlise. Estas enzimas so biocatalisadores altamente especficos que atuam em sinergia para a liberao de acares, dos quais glicose o que desperta maior interesse industrial, devido possibilidade de sua converso em etanol. Estas enzimas comearam a ser estudadas durante a Segunda Guerra Mundial.

A. M. de Castro e N. Pereira Jr., Quim. Nova, 33 (2010) 181

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A deteriorao de fardas, barracas, bolsas e demais objetos dos acampamentos, fabricados de algodo, chamou a ateno de soldados das foras armadas norte-americanas, instalados nas ilhas Solomon, no Pacfico Sul. Algumas organizaes, como a Quartermaster Corps, juntamente com as foras armadas, montaram laboratrios em busca de explicaes e solues imediatas para esse problema, que incluam a deteco de organismos agentes das deterioraes, seus mecanismos de ao e mtodos de controle.

A. M. de Castro e N. Pereira Jr., Quim. Nova, 33 (2010) 181

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Como resultado das pesquisas, uma linhagem, codificada como QM6a, de um fungo filamentoso, identificado posteriormente como Trichoderma viride, foi isolada e a esta foi atribuda a caracterstica de excretar enzimas capazes de degradar celulose. At 1953, j se haviam determinado que enzimas naturais, nomeadas celulases, constituem complexos de diversas molculas com distintas habilidades na degradao do substrato.

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http://cthuang.bst.ntu.edu.tw/seminar/97slides/971Tze-Feng%20Tian-slides.pdf Nature Biotechnology 26: 553-560, 2008. Speaker: TzeFeng-Tian

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As enzimas do complexo celuloltico so hidrolases que clivam ligaes O-glicosdicas, sendo classificadas pela Enzyme Comission (EC) com a codificao 3.2.1.x, onde o valor de x varia com a celulase avaliada. A celulase na verdade um complexo enzimtico, cujas enzimas atuam sinergicamente e esto subdivididas em trs classes: a) endo-1,4--D-glucanases ou endoglucanases, que quebram as ligaes glicosdicas das cadeias de celulose criando novos terminais b) exo-1,4--D-glucanases ou celobio-hidrolases, responsveis pela ao nos terminais levando celobiose c) 1,4--D-glucosidades que hidrolisam a celobiose glicose.

Figura: celulase compsita formada por trs enzimas naturais

T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549 A. M. de Castro e N. Pereira Jr., Quim. Nova, 33 (2010) 181

http://www.wikienergia.pt/~edp/index.php?title=Novas_enzimas_ quebram_celulose_em_condi%C3%A7%C3%B5es_e_temperatu 66 ras_vari%C3%A1veis

As endo-1,4--glucanases ou 1,4-D-glucana-4-glucano-hidrolases (EC 3.2.1.4) atuam randomicamente nas regies amorfas da celulose e de seus derivados, hidrolisando ligaes glicosdicas -(1,4).

Representao esquemtica da ao cataltica do complexo enzimtico (celulase) sobre celulose com gerao de glicose

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As endo-1,4--glucanases ou 1,4-D-glucana-4-glucano-hidrolases (EC 3.2.1.4) atuam randomicamente nas regies amorfas da celulose e de seus derivados, hidrolisando ligaes glicosdicas -(1,4).

Representao esquemtica da ao cataltica do complexo enzimtico (celulase) sobre celulose com gerao de glicose

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Sua atividade cataltica pode ser medida atravs da diminuio da viscosidade do meio decorrente da diminuio de massa molar mdia de celulose ou derivados de celulose.

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As celobio-hidrolases (exo-1,4--Dglucanases, EC 3.2.1.91) atuam nos terminais redutores das cadeias de celulose, liberando D-celobiose, que pode ser detectada pelas tcnicas de HPLC ou CG.

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As celobio-hidrolases (exo-1,4--Dglucanases, EC 3.2.1.91) atuam nos terminais redutores das cadeias de celulose, liberando D-celobiose, que pode ser detectada pelas tcnicas de HPLC ou CG.

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As -D-glucosidases ou -Dglucoside gluco-hidrolases (EC 3.2.1.21) catalisam a liberao de unidades monomricas de D-glicose a partir da celobiose e celodextrinas solveis. A atividade cataltica pode ser medida atravs da anlise dos produtos por HPLC ou CG, ou mesmo por espectrofotometria.

celobiose

glicose
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http://cthuang.bst.ntu.edu.tw/seminar/97slides/971Tze-Feng%20Tian-slides.pdf Nature Biotechnology 26: 553-560, 2008. Speaker: TzeFeng-Tian

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V. Arantes e J. N. Saddler, Biotechnology for Biofuels 2010, 3:4

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O sistema da celulase de fungos foi largamente interpretado em termos de desenvolvimento substancial biolgico molecular e bioqumico para o fungo Tricoderma reesei

Este foi o primeiro fungo a ser utilizado na produo industrial de celulase, permanecendo ainda como a fonte mais utilizada.

De vrias maneiras, este sistema foi o sistema arqutipo desenvolvido de celulase. Muito da pesquisa subsequente neste campo focou em mutao/seleo de melhores descendncias para comercializao da enzima, incluindo converso em biomassa. Alm de celulases de fungos, h celulases produzidas por bactrias aerbicas e anaerbicas.
T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

http://en.wikipedia.org/wiki/Tr ichoderma_reesei

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Nomenclatura, substratos, massa molar mdia ponderal (Mw), ponto isoeltrico (pI) e teores relativos das celulases produzidas pelo T. reesei.

A famlia diz respeito classificao de enzimas com sequncias homlogas de aminocidos similares, as quais geram estruturas tridimensionais e stios ativos semelhantes e, portanto, mecanismos catalticos semelhantes.

d.d. - dados desconhecidos. a Abreviaes entre parnteses correspondem classificao das famlias das glicosil hidrolases. b Substratos para os quais as celulases so ativas. CM-celulose microcristalina (Avicel), CA-celulose amorfa, CMC-carboximetil celulose, HEC-hidroxietil celulose, 76 CC-celulose cristalina, CB-celobiose, CT-celotriose.

A arquitetura molecular das endoglucanases e celobio-hidrolases tem um papel importante nas respectivas atividades catalticas. Celobio-hidrolases CBHI apresentam terminais de pequenos glicopeptdeos, os quais se ligam celulose e grandes ncleos proteicos que carregam o stio ativo. De fato, a maioria das endoglucanases e celobio-hidrolases consiste de um grande ncleo proteico e um pequeno domnio ligante de celulose unidos por sequncias longas de aminocidos (at ~60 resduos).

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O domnio ligante tem a funo de aproximar o ncleo cataltico da superfcie da celulose. Os stios ativos das endoglucases esto expostos para fora da enzima, enquanto os stios ativos das celobio-hidrolases esto dentro de um tnel. No caso da CBHI do T. reesei, um tnel de 50 de comprimento e 10 stios ligantes de celulose garantem a permanncia da celulose dentro do tnel, enquanto ocorre a hidrlise

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A lignocelulose apresenta-se como um substrato ainda mais complexo para a ao da celulase do que celulose pura. H uma evidncia clara de uma relao entre o contedo de lignina e a reduo na hidrlise da celulose em substratos lignocelulsicos. Portanto imprescindvel o uso de pr-tratamentos no material, com o intuito de aumentar sua susceptibilidade ao agente de interesse, pela remoo da lignina e reduo da cristalinidade da estrutura celulsica. Os pr-tratamentos podem ser classificados em qumicos, fsicos ou biolgicos.

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PR-TRATAMENTOS DE BIOMASSA

Do ponto de vista tecnolgico, os acares contidos nas fraes celulsica (glicose) e hemicelulsica (xilose, arabinose, glicose, manose e galactose) representam os substratos que podem ser utilizados para a produo de etanol por via fermentativa. Entretanto, a ntima associao entre as trs fraes principais (celulose, hemicelulose e lignina) tal que impe dificuldades para a recuperao dos acares constituintes na forma de monmeros com elevado grau de pureza

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Arquitetura da parede celular vegetal

L. Canilha, A. M. F. Milagres, S. S. Silva, J. B. Almeida e Silva, M. G. A. Felipe, G. J. M. Rocha, A. Ferraz e W. Carvalho, Revista Analytica, 44 (2009) 48. 81

A hidrlise da celulose glicose em meio aquoso catalisado pelas enzimas celulase possui uma taxa de rendimento muito baixa Uma das principais razes a estrutura altamente cristalina da celulose, a qual dificulta o acesso do substrato aos stios ativos. A dificuldade aumenta tambm porque celulase adsorve fisicamente sobre ligninas. Alm disso, a lignina restringe a hidrlise, pois esconde a superfcie celulsica impedindo o intumescimento das fibras. Logo, torna-se necessria uma etapa de pr-tratamento, tanto a fim de quebrar a estrutura cristalina da lignocelulose quanto a fim de remover a lignina, expondo as molculas de celulose e hemicelulose ao enzimtica.

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Normalmente, hidrlises enzimticas possuem um rendimento de acar menor que 20% Caso uma etapa de pr-tratamento seja utilizada, o rendimento pode alcanar at >90%. Atualmente, h uma grande quantidade de processos de pr-tratamento disponveis, podendo ser fsicos, qumicos, biolgicos ou de fracionamento por solvente.

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PR-TRATAMENTO FSICO

As operaes fsicas de pr-tratamento so baseadas na reduo do tamanho da partcula atravs de moagem, aumentando a performance da enzima pelo aumento da rea superficial e, em alguns casos, pela reduo do grau de polimerizao e cristalinidade da celulose.

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PR-TRATAMENTO QUMICO (CIDOS, ALCALINOS OU OXIDATIVOS)

As principais tecnologias de pr-tratamento esto representadas junto aos pr-tratamentos qumicos, incluindo pr-tratamentos cidos, alcalinos ou oxidativos. Neste tipo de processo, a maior parte dos pr-tratamentos difere nos tipos de qumica e mecanismos responsveis pelas modificaes estruturais e qumicas da parede celular, que resultam numa acessibilidade melhorada da enzima, alm de rendimentos maiores.

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Em pr-tratamentos catalisados por cidos a camada de hemiceluloses hidrolisada, enquanto que nos pr-tratamentos catalisados por bases, parte da lignina removida e a hemicelulose tem que ser hidrolisada pelo uso de hemicelulases. Uma das tecnologias de pr-tratamentos mais amplamente implementada a exploso a vapor, que tem sido aplicada com sucesso a diversos tipos de biomassa celulsica (madeiras macias e duras, alm de resduos agrcolas). Esse processo pode ocorrer com ou sem a presena de catalisadores qumicos (cido sulfrico, dixido de enxofre, hidrxido de sdio e amnia). Opera a altas temperaturas (160-290 C) e presso, durante um certo perodo de tempo (de alguns segundos at vrios minutos), antes que a presso seja liberada explosivamente.

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PR-TRATAMENTO BIOLGICO

Os pr-tratamentos biolgicos normalmente utilizam fungos e algumas bactrias (actinomicetes). Durante o processo, estes micro-organismos secretam enzimas extracelulares como lignina peroxidases e lacases que ajudam a remover uma quantidade considervel de lignina da biomassa. A empresa de pesquisa em biocombustveis Mascoma Corporation desenvolveu o bioprocessamento consolidado, no qual as celulases so produzidas pelo mesmo micro-organismo que fermenta os acares em etanol em uma nica etapa.

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PR-TRATAMENTO POR TRATAMENTO COM SOLVENTE

A categoria de pr-tratamento de fracionamento por solvente aplica o conceito da solubilizao diferencial. Ocorre o fracionamento dos vrios componentes da parede celular vegetal, incluindo a celulose, pelo rompimento das ligaes de hidrognio entre as microfibras. H muitos mtodos disponveis hoje em dia; os mais atraentes so os processos organosolv, fracionamento por cido fosfrico e os baseados em lquidos inicos.

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Uma comparao direta dos rendimentos resultantes de acar pelos mtodos de pr-tratamento conhecidos difcil devido s variaes de como os rendimentos so relatados e quais acares esto includos. As tabelas seguir sumarizam as vantagens e desvantagens de cada um deles.

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O uso de lquidos inicos como meio para dissoluo e hidrlise de biomassa caracteriza-se como um potencial pr-tratamento. Lquidos inicos so substncias compostas de ons e lquidas (<100 C) temperatura ambiente. O interesse nestes compostos, comumente anunciados como o meio verde e a alta tecnologia do futuro, est aumentando Estes compostos possuem baixssima presso de vapor, estabilidade trmica, alm das vrias propriedades ajustveis, como polaridade, hidrofobicidade e miscibilidade com solventes (pela modificao apropriada do ction e do nion).

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Especialmente na qumica de carboidratos e polissacardeos os lquidos inicos vm ganhando um espao especial. Por exemplo, alguns lquidos inicos hidroflicos como o cloreto de 1butil-3-metilimidazlio ([BMIM]Cl) e cloreto de 1-alil-3-(1-metil)imidazlio so excelentes solventes para celulose.

Cloreto de 1-butil-3-metilimidazlio ([BMIM]Cl)

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HIDRLISE DE MATERIAL CELULSICO*

Todos os mtodos afirmam que o material deve ser antes mecanicamente quebrado ou modo, a fim de aumentar a rea superficial. Duas rotas so frequentemente empregadas para a hidrlise. A primeira o uso de hidrlise cida e a segunda a hidrlise enzimtica do material prtratado. Em ambos os casos, h vrios modos de operao; a escolha deve ser baseada em: a) qual o produto bruto que ser usado b) qual o organismo ser usado para a fermentao dos acares liberados c) economia

*T. L. Ogeda e D. F. S. Petri, Quim. Nova, 33 (2010) 1549

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Hemicelulose e celulose podem ser hidrolisadas a acares e fermentados microbianamente a vrios produtos como o etanol, ou serem convertidas quimicamente em outros produtos. As cadeias de hemicelulose so formadas por monmeros de arabinose ou xilose. A hidrlise da hemicelulose resulta em molculas de arabinose ou xilose (pentoses). A hemicelulose tambm pode sofrer ataques a posies intermedirias ao longo de seu esqueleto, liberando oligmeros feitos de muitas molculas de acares

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Estes oligmeros podem ser sucessivamente quebrados em oligmeros ainda menores, antes que uma molcula de um simples acar possa ser formada Tal quebra pode ser catalisada por enzimas conhecidas como hemicelulases A quebra pode ainda ser catalisada por cidos diludos, utilizando temperaturas de 100-200 C. Neste caso formam-se produtos de degradao, mas os rendimentos de acares de hemicelulose em soluo so muito bons. Apesar de tudo, a degradao dos acares liberados baixa o suficiente para recuperar cerca de 80-90% do mximo possvel de acares. Por outro lado, operaes sem a adio de cido limitam a recuperao dos acares de hemicelulose para 65% ou menos, com a maioria na forma de oligmeros.

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Em gua a hidrlise da celulose ocorre espontaneamente, porm, de forma bem lenta. cidos ou celulase catalisam a reao de gua com molculas de glucanas liberando mono, di e/ou trissacardeos.

A hidrlise cida inicia com a protonao do oxignio glicosdico com posterior quebra da ligao C1O.

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Em gua a hidrlise da celulose ocorre espontaneamente, porm, de forma bem lenta. cidos ou celulase catalisam a reao de gua com molculas de glucanas liberando mono, di e/ou trissacardeos.

O carboction gerado na etapa b estabilizado pela deslocalizao do par de eltrons existente sobre o oxignio do anel glicosdico, adjacente a C1.

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Em gua a hidrlise da celulose ocorre espontaneamente, porm, de forma bem lenta. cidos ou celulase catalisam a reao de gua com molculas de glucanas liberando mono, di e/ou trissacardeos.

O ataque nucleoflico da gua sobre C1 (etapa c) com regenerao do cido (etapas d-e) encerra a etapa de despolimerizao (se esta ocorrer no interior da cadeia da celulose, gerando novos terminais) ou de produo de glicose (quando ocorre hidrlise diretamente nos terminais).

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A hidrlise com cido concentrado feita a baixas temperaturas (cerca de 30 C) e resulta em rendimentos altos tanto de hexoses quanto de pentoses (85-90% da teoria), causando apenas uma limitada quantidade de produtos de degradao de acares. O uso de grandes quantidades de cido necessita de uma recuperao eficiente do cido. Esta uma das maiores desvantagens desde mtodo, j que a recuperao um processo que demanda energia, alm de ser uma etapa cara. Alm disso, a natureza corrosiva do cido requer o uso de ligas caras na construo de canos e trocadores de calor.

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cido diludo tambm foi usado com sucesso para a hidrlise de material lignocelulsico em escala comercial desde o comeo de 1930 (o processo Scholler ou Madison de percolao). O cido mais comumente utilizado o H2SO4, devido ao seu menor preo e poucos problemas com corroso quando comparado ao, por exemplo, HCl. O uso de concentraes baixas de cido (<1%) demanda o uso de altas T (180-230 C) para alcanar taxas de reaes aceitveis na hidrlise da celulose, alm de obter altos rendimentos de glicose. Entretanto, em T elevadas, as pentoses da hemicelulose, e numa extenso menor as hexoses, so rapidamente degradadas.

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A formao de produtos de degradao pode inibir a fermentao; portanto, a hidrlise com cido diludo dividida em duas etapas. 1) A hemicelulose, principalmente, hidrolisada em condies menos severas com T em torno de 170-190 C, e concentraes de cido de 0,5-1,2% (m/m). 2) Depois, os slidos restantes so removidos e tratados sob T maior na faixa de 200 a 230 C e em concentraes maiores de cido (at 2,5% m/m). Isto resulta em um rendimento total de 50-60% para a glicose e quase a 90% para acares da hemicelulose dos rendimentos tericos.

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Cadeias longas de celulose, quando aquecidas a altas T com H2SO4 diludo, quebram grupos mais curtos de molculas que liberam glicose e que, por sua vez, pode ser degradada a hidroximetil furfural. Geralmente, a maior parte da celulose cristalina, e condies extremas (altas T, altas concentraes de cido) so necessrias para liberar glicose destas cadeias fortemente associadas. Alm disso, o rendimento aumenta com a T, chegando at 70% a 260C. Entretanto, a gerao de alcatro e outros produtos secundrios difceis de lidar e o difcil controle do tempo de reao para rendimento mximo de glicose so grandes desafios comerciais.

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A hidrlise cida da hemicelulose similar da celulose, mas como ela amorfa, condies menos severas so necessrias para liberar seus acares. Vapor injetado diretamente biomassa para aquec-la rapidamente, e o cido actico contido nas cadeias de hemiceluloses pode gerar ons de hidrognio para promover a hidrlise. Apesar disso, neste caso, os rendimentos de acares de hemicelulose so limitados a cerca de 65% do mximo possvel. Por outro lado, adicionar H2SO4 ou outros cidos resulta em rendimentos mais altos e celulose mais digestiva a um preo menor.

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Por exemplo, rendimentos de 80-90% dos acares podem ser recuperados da frao da hemicelulose com temperaturas em torno de 160 C, tempos de reao de cerca de 10 min e nveis cidos de 0,7% Alm disso, aproximadamente 90% da celulose slida restante pode ser digerida enzimaticamente para produzir glicose. Estes altos rendimentos so vitais para baixos custos e tm motivado o uso de H2SO4 diludo na hidrlise cida para aplicaes a curto prazo.

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Apesar de considerada inovadora, a hidrlise com H2SO4 diludo cara; seu ambiente corrosivo demanda o uso de materiais de construo caros. Alm disso, produtos de degradao, como fragmentos de furfural e lignina, e compostos de biomassa solubilizada, como acido actico, devem ser removidos por serem inibitrios para fermentao microbiana. Industrialmente a converso enzimtica da celulose a etanol envolve operaes de pr-tratamento para retirar ligninas e expor celulose e hemicelulose ao ataque da celulase. Aps o pr-tratamento comeam as operaes de hidrlise e fermentao.

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Quando a hidrlise ocorre sequencialmente fermentao a operao designada de SHF - Separate Hydrolysis Fermentation. O problema nesta operao que a glicose e celobiose permanecem no mesmo meio que a celulose e celulase e estes mono e dissacardeos inibem a ao da celulase. Embora os rendimentos possam ser melhorados adicionando grandes quantidades de celulase, esta estratgia aumenta o custo do processo. Para contornar este problema adiciona-se o micro-organismo fermentativo ao mesmo vasilhame onde esto sendo produzidos os acares.

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Desta forma, glicose e celobiose so rapidamente fermentadas a etanol, reduzindo o acmulo destes inibidores de celulase e de custos de equipamentos e de produo de etanol. A baixa concentrao de glicose livre e a presena de etanol tambm fazem com que seja mais difcil para micro-organismos invasivos tomarem o comando das reaes de fermentao, formando produtos indesejveis. Esta estratgia conhecida como processo de sacarificao simultnea e fermentao, SSF (Simultaneous Saccharification and Fermentation). Embora a T do processo SSF tenha que ser reduzida abaixo do timo, o desempenho melhor em termos de taxas, rendimentos e concentraes de etanol do que na hidrlise separada a altas T (que so timas para a hidrlise da celulose).

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Industrialmente o uso de celulases ainda proibitivo devido ao seu alto custo. De modo geral, a catlise enzimtica deve combinar eficincia e baixo custo. Uma maneira de fazer o processo enzimtico economicamente vivel imobilizar enzimas sobre substratos slidos, de tal forma que as propriedades catalticas sejam mantidas, alm de serem reutilizadas muitas vezes. O grande desafio que ao imobilizar a enzima, esta mantenha sua estrutura nativa.

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A fora motriz que dirige a adsoro de muitas protenas e enzimas o ganho entrpico devido s mudanas conformacionais, e a imobilizao pode assim desnaturar as macromolculas biolgicas. Em muitos casos, a imobilizao sobre substratos hidroflicos favorece a manuteno da estrutura nativa das biomolculas, porque a camada de hidratao mantida. Este comportamento j foi observado para hexoquinase, enolase, fosfatase, creatina fosfoquinase, peroxidases.

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Celulase tem sido imobilizada em diferentes substratos. Celulase ligada covalentemente superfcie externa de lipossomos modificados com grupos aldedos apresentou alta atividade enzimtica. Celulase imobilizada sobre microesferas e esponjas de quitosana puderam ser utilizadas 10 vezes consecutivas, e apenas depois de 8 (para microsesferas) e 9 (para esponjas) vezes que foi observada perda de 50% da atividade relativa. Celulase adsorvida sobre nanofibras de poli(lcool vinlico) apresentou atividade 65% superior da enzima livre, sendo reutilizadas 6 vezes com perda de 64% da atividade inicial.

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Celulase aderida sobre suportes de nylon ou quitina ou mesmo ligada covalentemente a espumas de poliuretano apresentou boa eficincia. A co-imobilizao de celulase e glicose isomerase em partculas de poliestireno modificado com trimetilamina permitiu a converso de celulose em glicose e frutose numa taxa molar de 60:40, retendo 50% da atividade inicial aps 5 ciclos de uso. Celulase adsorvida sobre lminas de silcio com camada nativa de SiO2 apresentou atividade 20% menor que a de celulase livre e pde ser reutilizada 6 vezes sem perda de atividade cataltica.

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Em geral, tanto celulases livres como imobilizadas apresentam maior atividade na faixa de temperatura de 60 a 70oC e pH entre 4,5 e 5. O aquecimento pode favorecer a diminuio da cristalinidade e a mobilidade da gua de hidratao, fatores que inibem a ao da celulase. Simulaes moleculares tm sido usadas para modelar a estruturao da gua adjacente a duas diferentes faces da celulose monoclnica e microcristalina.

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Molculas de gua adjacente foram encontradas na primeira camada de hidratao, devido s ligaes de hidrognio entre as hidroxilas das unidades glicosdicas e hidratao das superfcies hidrofbicas resultantes dos tomos de hidrognio alifticos (C6) axiais do topo das unidades de monmeros de glicose. As camadas altamente estruturadas de gua podem representar uma barreira substancial aproximao da celulase em direo superfcie (1,0,0) na hidrlise catalisada por enzimas, e pode inibir significantemente o escape de produtos solveis em hidrlise com cido diludo, contribuindo para as taxas lentas de hidrlise. J a face (1,1,0) induz muito menos estruturao e pode ser mais facilmente hidrolisada.

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A remoo de hemicelulose aumenta o rendimento da hidrlise enzimtica de celulose. Ligninas tambm devem ser removidas porque celulase adsorve sobre elas e impede o intumescimento das fibras de celulose.

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Todas as celulases principais do T. reesei tm aminocidos hidrofbicos expostos em sua superfcie, que podem interagir com a superfcie hidrofbica da lignina. Este tipo de adsoro no especfica de celulases pode causar inativao da enzima durante a hidrlise, reduzindo a eficincia do processo cataltico. Uma forma de minimizar este tipo de adsoro no especfica da celulase a adio de surfactantes ao meio reacional. Surfactantes no inicos (como o Tween ou Triton) favorecem a hidrlise, enquanto que surfactantes carregados desfavorecem a hidrlise.

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A biomassa um material complexo. Para a hidrlise de hemicelulose h enzimas especficas, como as xilanases ou mananases. Entretanto, no se sabe como a ao destas hemicelulases afeta o desempenho das celulases. Hemicelulases so produzidas por muitas espcies de bactrias e fungos, assim como por vrias plantas. Muitos micro-organismos produzem um padro mltiplo de hemicelulases para degradar o material vegetal eficientemente. Hoje, preparaes de hemicelulases comerciais so obtidas a partir dos fungos Trichoderma ou Aspergillus geneticamente modificados.

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Uma parte majoritria dos trabalhos publicados sobre hemicelulases lida com as propriedades e modos de ao, assim como com aplicaes das xilanases. Devido sua natureza complexa, a hidrlise enzimtica da xilana mais complicada do que a maioria dos polissacardeos vegetais, por causa das ramificaes das cadeias. Tipicamente, as ramificaes das xilanas so removidas e depois o esqueleto despolimerizado. Conforme os substituintes so removidos, a xilana pode se tornar menos solvel e formar agregados que impedem estericamente a continuao da degradao. A remoo simultnea dessas cadeias secundrias e a clivagem do esqueleto polimrico sinergicamente aumentam a taxa de degradao por enzimas endoxilanase.
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