MANUAL COM ORIENTAES PARA COLETA

E ENVIO DE MATERIAL

Laboratrio Ecolvet Anlises Veterinrias, Ambientais e de Alimentos.

Rua Quat, 78 Jardim San Remo Londrina PR
CEP 86062-580
Tel/Fax: (43) 3327 2373

2007

ndice
Apresentao

03

1. Orientaes Gerais

03

1.1 Coleta, Preparo e Remessa de Materiais para Diagnstico

03

1.2. Acondicionamento e Transportes de Amostras

04

1.3 Resultados

05

1.4 Sugestes

05

2. Procedimentos para Coletas

06

2.1 Coleta de Amostras de gua

06

2.2 Coletas de Amostras para Anlise Microbiolgica de Alimentos

07

2.3 Coleta de Amostras para Exame Bacteriolgico Veterinrio

08

2.4 Coleta para Exame Parasitolgico

09

2.5 Coleta para Exame Histopatolgico

10

2.6 Coleta para Exame Sorolgico

10

2.7 Coleta para PCR

12

3. Referncias

12

4. Anexos
I - Tabela Resumida

13

Apresentao
Este manual foi desenvolvido pelo Laboratrio Ecolvet com o objetivo de
orientar a coleta e envio de materiais para anlise, procurando de forma prtica e
simples sistematizar as formas de coleta, preparo e transporte de material biolgico
para diagnstico, proporcionando o recebimento de materiais para a realizao de
uma anlise segura. Informaes adicionais sobre o fluxo de amostras e saidas de
resultados

no Ecolvet podem ser obtidas atravs do Manual de Qualidade

no

documento IA-GE-007.
1.

Orientaes Gerais

1.1

Coleta, Preparo e Remessa de Materiais para Diagnstico

- Ao enviar o material, sempre identifique as amostras de forma clara e nica, com

etiquetas ou canetas de difcil remoo.

Figura 1( A e B ) Exemplos de identificaes das amostras com etiquetas individuais

- Na etiqueta deve constar informaes suficientes que identifiquem o material em

questo, (Ex: Descrio, Data de Coleta, Responsvel pela Coleta etc.).
- Deve-se tentar evitar contaminaes cruzadas entre amostras (preparar conjuntos
de amostras nicas, no misturar tubos com amostras diferentes, etc.), e sempre
utilizar de instrumentos estreis ou novos (frascos, seringas, agulhas, sacos
plsticos)
1.2.

Acondicionamento e Transportes de Amostras

- As amostras devem ser acondicionadas em embalagem seguras, livres de

vazamentos.

- Para o transporte, colocar as embalagens dentro de caixas de isopor com gelo

reciclvel ou garrafas de refrigerante congeladas, nunca colocar cubos de gelo soltos,
para evitar o acmulo de gua. Envolver as embalagens com jornal para preencher
espaos vazios e evitar impacto durante o transporte.
- Junto com o material, enviar o formulrio de entrada (conf. Anexo 2) devidamente
preenchido com as informaes das amostras. Ele deve ser anexado do lado de fora
da caixa de isopor ou, se envolvido por um saco plstico bem fechado, pode ser
transportado dentro da caixa de isopor.

Figura 2 ( A) - Maneira correta de envio de material, com todos os espaos preenchidos e utilizando
gelo reciclvel. (B) - Maneira incorreta de envio de material, com a amostra solta na caixa.
Para o envio correto, preeencher os espaos vazios com jornal e gelo reciclvel.

Figura 3 Formas de anexar o formulrio de envio da amostra (A) Colado na tampa do isopor, (B)
colado na lateral, e (C) desde que colocado dentro de um saco plstico bem lacrado, pode
ser enviado dentro do isopor.

- A embalagem externa (caixa de isopor, etc.) deve conter informaes mnimas,

como segue o modelo de etiqueta externa para embalagem, abaixo, mas no s
limitadas essas informaes:

DESTINO:
ECOLVET Laboratrio de Anlises Ltda
Rua Quat, 78 Jardim San Remo
Londrina Paran Brasil CEP 86.062-580
FONE / FAX: 0 XX 43 3327.2373
REMETENTE:
IDENTIFICAO:
ENDEREO:
CIDADE:
UF:
TELEFONE PARA CONTATO:

CEP:

RISCO BIOLGICO

RESPONSVEL TCNICO PELO ENVIO DO MATERIAL:

MD. VETERINRIO:
CONTATO > CELULAR:

1.3

CRMV:

Em
caso
de
contato
ou
derramamento,
comunicar
imediatamente o Mdico Veterinrio
responsvel pelo envio da amostra.

Resultados

- Todos os resultados sero disponibilizados online no site www.ecolvet.com.br e

podero ser acessados pelos clientes atravs de login e senha pessoais e
intransferveis, entregues somente ao solicitante. de responsabilidade deste
gerenciar seu login e senha. Os laudos originais so enviados por correio ou entregue
em mos para o solicitante. O envio dos resultados apenas ser feito por fax, e-mail
ou entregue a outras pessoas mediante prvia autorizao do solicitante (vide
formulrio de acompanhamento).
1.4

Sugestes a serem utilizadas na hora da coleta (Em caso de dificuldade)

Na ausncia de:

Luva para Procedimento

O que pode se fazer:

Lavar muito bem as mos com gua e sabo e
fazer a assepsia com lcool 70%.
Colocar gua em garrafas PET e congelar;

Gelo comercial

Colocar gelo normal em saco plstico (deve ter um

volume bem grande mais ou menos 40 cubos)
Pegar um vidro com tampa ou outro material, lavar
bem com gua e sabo colocar em uma panela
grande, cobrindo com gua at 5 cm acima do
vidro ou outro material ( o vidro deve estar

Vidros e outros materiais estreis

destampado). Ferver durante 30 minutos, contados

a partir da ebulio. Deixar

esfriar um pouco e

com as mos limpas retirar o vidro ou outro

material e deixar esfriando. importante que todo
esse processo seja feito em ambiente limpo.

2.

Coleta de Amostras

2.1

Coleta de Amostras de gua de Consumo (torneiras, etc.)

2.1.1 Materiais Necessrios:

- Vidro estril (ou embalagem plstica estril)
- lcool 70%
- Algodo
- Luva para Procedimento
2.1.2 Procedimento:
Colocar as luvas para procedimento e fazer assepsia das mos com lcool
70%. Em seguida, com o algodo embebido em lcool 70%, limpar bem a boca da
torneira, inclusive a parte de dentro. Abrir e deixar a gua escoando durante 3
minutos. Coletar a amostra at obter um volume de no mnimo 500 mL. Preencher na
etiqueta os seguintes dados (local de coleta, gua clorada ou no clorada, data,
coletado pr, observaes adicionais ).
Encaminhar a amostra imediatamente para o laboratrio sob refrigerao.
Caso isso no seja possvel, acondicion-la em geladeira ou caixa de isopor com gelo
at o momento do envio.

Fig. 4 (1)- Passar um algodo ou gaze embebido em lcool 70% na torneira, inclusive na parte de
dentro, como mostra a figura 2. (3)- Deixar a torneira aberta durante 3 minutos. (4) - Coletar a
gua em frasco estril at preencher 2/3 do volume (de 300 a 400 mL), como mostra a figura
5.

2.2

Coleta de gua em Cisternas, Piscinas e Caixas dgua

2.2.1 Materiais Necessrios

- Cordo estril comprido e resistente (barbante grosso ou tipo de varal)
- Vidro de boca larga
- Luva para Procedimento
- lcool 70%
- Algodo
2.2.2 Procedimento
Colocar a luva e fazer a assepsia da mesma forma como foi indicada
anteriormente. Amarrar o cordo em volta da boca do vidro (Fig. 5) e mergulh-lo na
cisterna segurando-o pelo cordo. Fazer a coleta bem no centro da cisterna, evitando
coletar a gua das margens.
Procedimento para envio o mesmo indicado anteriormente.

Fig. 5 Frasco com um cordo (tipo de varal) amarrado ao redor da boca.

2.3

Coletas de Amostras para Anlise Microbiolgica de Alimentos

2.3.1 Materiais Analisados

- Amostras de alimentos em geral
- Farinhas de carne, penas, ossos, etc.
2.3.2 Materiais necessrios
- Embalagem plstica resistente nova ou frasco estril de boca larga
2.3.3 Coleta de amostras de alimentos acondicionados em embalagens individuais.

Amostras de alimentos acondicionados em embalagens individuais devem ser

enviadas ao laboratrio na sua embalagem original, fechada e intacta. O volume a ser
enviado deve ser igual ou maior do 100g ou 100ml. Se a embalagem unitria for
menor que a quantidade recomendada para o envio, recomenda-se coletar vrias
embalagens unitrias.
2.3.4 Coleta de amostras acondicionadas em embalagens no individuais.
No caso de alimentos contidos em embalagens grandes, difceis de serem
transportados at o laboratrio, deve-se coletar pores representativas da massa
total para frascos estreis ou sacos plsticos novos. recomendvel que no
manipule o alimento com as mos, mas se for o caso, lav-las bem com gua e sabo
ou utilizar luvas para procedimento.
2.3.5 Armazenamento e transporte da amostra
As amostras devem ser armazenadas em caixas isotrmicas refrigeradas com
temperatura em torno de 4C e mantidas por no mais que 48 horas at serem
processadas.
As amostras destinadas contra prova do diagnstico bacteriolgico devero
ser mantidas em temperatura de -10C por um perodo de 07 dias aps a data de
concluso da anlise, no prprio laboratrio Ecolvet, ou sob sua superviso. Aps
esse perodo, as amostras sero destrudas conforme os critrios e normas de
segurana biolgica.
2.4

Coleta de Amostras para Exame Bacteriolgico Veterinrio

2.4.1 Materiais Analisados

- rgos
- Suabes (cloaca, traquia, prop, arrasto)
- Ovos
- Aves vivas ou mortas
- Cama de Avirio
2.4.2 Materiais necessrios
- Tesoura e pina estreis (no caso de envio de rgos)
- Suabes
8

- Frascos de boca larga ou sacos plsticos novos

- Luva para procedimento
2.4.4 Procedimentos para Coleta de Material
-

rgos: Abrir a ave cuidadosamente, com tesouras e pinas (lembrando

sempre de usar luvas para procedimentos) e retirar os rgos inteiros. Armazenar em

frascos de boca larga ou sacos plsticos novos. Manter sob refrigerao.
-

Suabes de Cloaca e Traquia: Abrir o suabe no momento da colheita,

verificando em qual lado do pacote se encontra o cabo, e abr-la por este lado,
evitando tocar no algodo. Passar um suabe por ave,

cortar a extremidade que

estava em contato com as mos e mergulhar no frasco contendo o meio transporte

(gua peptonada para suabe de traquia e meio leite para suabe de cloaca, que so
adquiridos no Laboratrio Ecolvet). Os suabes sempre devem ser enviado em meio
trasporte e sob refrigerao para o Laboratrio Ecolvet.
-

Ovos:

Coletar de 10 a 15 ovos inteiros por lote. Enviar em caixas

especficas para ovos ou outro similar que os proteja bem evitando quebras.
-

Aves vivas ou mortas: No caso de aves vivas, coletar aquelas em incio de

manifestao clnica. Aves mortas devem ser mantidas sob refrigerao at o

momento do envio. Aquelas em estado avanado de decomposio no so
aproveitveis.
-

Cama de avirio: Coletar amostras de vrios pontos do galpo, totalizando no

mnimo kg por amostra. Armazenar em sacos plsticos novos e enviar para o

Laboratrio Ecolvet em temperatura ambiente ou sob refrigerao.
2.5

Coleta para Exame Parasitolgico

2.5.1

Materias Analisados

- Fezes
- Intestino
-Cama de Avirio
- Aves vivas
2.5.2 Materiais necessrios
- Frascos ou sacos plsticos

2.5.3 Procedimento de Coleta

Coletar em mdia 10g de fezes frescas (24 48 horas), coletadas de vrios
pontos.
Para amostras de intestino, coletar a poro final do intestino.
Cama de avirios, devem ser coletados de vrios pontos, em uma quantidade
de no mnimo 500g.
Aves vivas com incio de sintomas clinicos.
Enviar todas as amostras refrigeradas, com exceo das aves vivas que devem ser
enviadas sob temperatura ambiente..
2.6

Coleta para Exame Histopatolgico

2.6.1 Materiais Analisados

- rgos diversos
2.6.2 Materiais necessrios
- Frascos de boca larga
- Soluo de Formol 10% (100 ml de formaldeido a 37% e 900 ml de gua v/v)
2.6.3 Mtodo de Coleta
Coletar rgos ou fragmentos e acondicion-los rapidamente em frascos de
boca larga devidamente identificados contendo soluo de formol a 10%. O volume
ideal de formol para cada fragmento de em torno 10 vezes o volume do material.
Conserv-los em temperatura ambiente.
rgos como intestinos, traquia e esfago no devem ser abertos.
Obs: As condutas realizadas corretamente iro garantir qualidade ao teste.
2.7

Coleta para Exame Sorolgico

2.7.1 Materiais Analisados

- Soros (no hemolisados)
2.7.1 Materiais Necessrios
- frascos de vidro pequenos (de vacinas) ou canudos
- Eppendorfs
- Seringas
10

- agulhas
2.7.2 Mtodo de Coleta
Coletar sangue em frascos pequenos e deixar que se escorra por uma lateral
do recipiente formando um tapete. Manter os frascos inclinados a 45 em
temperatura ambiente. Aps passado de 3 a 18 horas h formao de cogulo e
separao do soro sanguneo, transfer-los para frascos ou Eppendorf

estreis.

Enviar ao laboratrio os soros refrigerados ou congelados, para o exame de sorologia

rpida (SARP para Mg, Ms e Pulorose) enviar somente soro resfriado,

nunca

congelado. Os materiais devem ser devidamente identificados (Empresa, lote, idade,

linhagem etc).

Fig.6 - (1) Exemplo de soros em timas condies e em (2) exemplo de soro no apropriado
(hemolisado)

2.8

Coleta para PCR

2.8.1. Materiais Analisados

- Suabes (cloaca, arrasto)
- Camas de avirio
- rgos
- Aves vivas
- Ovos
2.8.2 Materiais necessrios
- Suabes
- Sacos plsticos novos ou frascos de boca larga

11

2.8.3 Procedimento para Coleta

Materiais

Mtodo de coleta

Modo de Envio

coletados
Suabes de cloaca

Passar um suabe em cada animal e em seguida,

cortar a extremidade do suabe que estava em
contato com as mos e mergulhar em frascos
contendo meio transporte (adquirido no Laboratrio). Sob refrigerao
Pode-se tambm colocar os suabes dentro de um
saco plstico novo (sem o meio transporte) e lacrar
bem.

Suabes de traquia

Passar um suabe em cada animal e em seguida,

cortar a extremidade do suabe que estava em
contato com as mos e mergulhar em frascos
contendo meio transporte (adquirido no Laboratrio). Sob refrigerao
Pode-se tambm colocar os suabes dentro de um
saco plstico novo (sem o meio transporte) e lacrar
bem.

Suabes de prop

Vestir o prop e andar por todo o galpo. Retirar o

prop e colocar dentro de frascos com meio
transporte (adquirido no laboratrio) ou dentro de Sob refrigerao
sacos plsticos novos.

rgos internos

Retirar os rgos internos com cuidado, sem romplos e acondicionar em frascos estreis ou sacos Enviar congelados
plsticos novos.

Ovos

Coletar uma dzia de ovos inteiros

Temperatura Ambiente

Aves vivas

Aves preferencialmente no incio do sinal clnico.

Temperatura Ambiente

3.

Referncias

ABNT, 2001. Requisitos gerais para competncia de laboratrios de ensaio e

calibrao. NBR ISO/IEC 17025. jan/2001.
Ecolvet, 2007. Fluxo de Informaes, entrada de amostras e saida de resultados. Ecolvet
IA-GE-007. mai/2007.
GUERREIRO M.G. et al. Bacteriologia especial. Porto Alegre: Editora Sulina. 1ed., 1984.
HIRSH D.C., ZEE Y.C. Microbiologia veterinria.

Rio de Janeiro: Editora Guanabara

Koogan. 446p., 2003.

HOFFMAN R.P. Diagnstico de Parasitismo Veterinrio. Porto Alegre: Sulina, 156 pp.
1987.
12

4. Anexos
Anexo I Tabela Resumida, inclui ensaios realizados, tempo de anlise e modo de envio
Anlises

Material a ser coletado

Exames Microbiolgicos em Alimentos

Contagem de Mesfilos
Alimentos em geral, matriasprimas.
Contagem de Coliformes Totais
Alimentos em geral, matriasprimas, suabes de bancada,
manipulador, equipamentos, etc.
Contagem de Coliformes Fecais
Alimentos em geral, matriasprimas, suabes de bancada,
manipulador, equipamentos, etc.
Contagem de Estafilococos Coagulase
Alimentos em geral, matriasPositiva
primas, suabes de bancada,
manipulador, equipamentos, etc.
Contagem de Clostrdios Sulfito Redutores
Alimentos em geral, matriasprimas.
Contagem de Clostridium perfringens
Alimentos em geral, matriasprimas.
Contagem de Bolores e Leveduras
Alimentos em geral, matriasprimas.
Contagem de Pseudomonas aeruginosa
Alimentos em geral, matriasprimas.
Contagem de Psicotrfilos
Alimentos em geral, matriasprimas.
Contagem de Bacillus cereus
Alimentos em geral, matriasprimas.
Isolamento de Listeria monocytogenes
Alimentos em geral, matriasprimas.
Isolamento de Salmonella sp
Alimentos em geral, matriasprimas.
Sorotipagem de Salmonella sp
Cepas isoladas de Salmonella sp
Cultura Bacteriana Simples
Cultura Bacteriana Especial - Clostridium
perfringens

Exames Veterinrios
Aves vivas/mortas, rgos, suabes
em geral, ovos, fezes
Aves vivas/mortas, rgos
(intestino)

Tempo da
Anlise
(dias)
3
5

5
5

5
7
5
5
5
15

Cultura Bacteriana Especial - Pasteurella

sp
Cultura Bacteriana Especial - Salmonella
sp

5
5
15

Antibiograma

Aves vivas/mortas, rgos, cama

de avirio, ovos, etc.

Concentrao inibidora de Antimicrobiano

Aves vivas/mortas, rgos, cama

de avirio, ovos, etc.
Aves vivas/mortas, rgos

Inoculao de vrus em ovos embrionados

Sob refrigerao

Identificao Micolgica

Sob refrigerao

Cultura Bacteriana Especial - Haemophilus Aves vivas/mortas, rgos, suabe

sp
de traquia
Aves vivas/mortas, rgos, suabe
de traquia
Aves vivas/mortas, fgado, bao,
corao, ceco, fezes, ovrio, suabe
de cloaca.
Aves vivas/mortas, pulmo, rao,
matrias-primas, cama de avirio.

Modo de Envio

Temperatura
ambiente para
aves vivas e
refrigerao para
os demais.

30

13

Anlises

Material a ser coletado

Titulao de vacina em ovos embrionados

Vacinas

Diagnstico de Botulismo
Histopatologia

Mtodo de Willis
Mtodo de Baerman/Hoffman
Ocistograma/OPG

Intestino, inglvio
rgos em geral
Exames Parasitolgicos
Aves vivas/mortas, fezes, intestino,
cama de avirio
Aves vivas/mortas, fezes, intestino,
cama de avirio
Aves vivas/mortas, fezes, intestino,
cama de avirio

Escore de Leso + Raspado da Mucosa

Tempo da
Modo de Envio
Anlise
(dias)
10
Refrigerao ou
congeladas
5
Sob refrigerao
15
Formol 10% refrigerado
1
1
1

Temperatura
ambiente para
aves vivas e
refrigerao para
os demais.

1
Exames Ambientais

Contagem Bacteriana de Ambiente

Contagem Fngica de Ambiente
Exame Microbiolgico de Cama de
Avirios
Avaliao de Desinfetantes

Placas com meios de cultura

especficos para fungos e bactrias
(material requisitado no laboratrio)
Cama de Avirio
Desinfetantes
Exames em gua

NMP Coliformes Totais

NMP Coliformes Fecais
Contagem de Heterotrficos
Isolamento de Salmonella sp
Medida de pH
Cloro Livre
Alcalinidade

PCR para Bronquite Infecciosa

PCR para Anemia Infecciosa
PCR para Toxina de Clostridium
perfringens

7
Sob refrigerao
5
10
5

gua de abastecimento pblico,

poos artesianos, cisternas, minas,
piscinas, gua mineral.

Exames Sorolgicos
Sorologia Rpida para MG
Sorologia Rpida para MS
Sorologia Rpida para Pulorose
Soros no hemolisados
Inibio de Hemaglutinao para DNC
Inibio da Hemaglutinao para EDS
ELISA para Bronquite, Gumboro, Anemia,
Pneumovrus, Reovrus.
Exames de Biologia Molecular - PCR
PCR para Salmonella sp
Aves vivas/mortas,
rgos
- fgado, bao, corao,
PCR para Salmonella Enteritidis
ceco, fezes, ovrio
PCR para Salmonella Typhimurium
Suabe de cloaca
PCR para Mycoplasma sp
Aves vivas/mortas, traquia,
PCR para Mycoplasma gallisepticum
pumo, sacos areos, articulaes
PCR para Mycoplasma synoviae

5
3
5
1
1
1
1
1
1
3
3
3

Sob refrigerao

Refrigerao

Refrigerao ou
congelamento

3
3
3
3
3

e suabes de traquia.

Aves vivas/mortas, traquia,

pulmo, tonsilas cecais, rim

Aves vivas/mortas, timo, fgado,

bao, medula ssea.
Cepas de Clostridium perfringens,
cama de avirios, intestino

Temperatura
ambiente para
aves vivas e
congelados ou sob
refrigerao para
rgos, suabes e
aves mortas.

14

Anlises
Sexagem de Avestruzes

Necrpsia em Pssaros
Necrpsia em Frangos de Cortes
Necrpsia em Aves de Postura Comercial
Necrpsia em Avestruzes

Material a ser coletado

Penugem de avestruzes com o
bulbo.
Exames Patolgicos
Aves vivas/mortas

Tempo da
Modo de Envio
Anlise
(dias)
3
Sob refrigerao

1
1
1
1

Aves vivas Temp. ambiente

Aves mortas - Sob
refrigerao

15