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DETERMINAO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA DE KOMBUCHA

PREPARADO COM QUATRO DIFERENTES AUCARES COMERCIAIS

Luciene Sousa1; Elisa Espsito2

Estudante do Curso de Cincias Biolgicas; e-mail: bioluzinha@hotmail.com1


Professora da Universidade de Mogi das Cruzes; e-mail: elisa@umc.br2

rea do Conhecimento: Cincias Biolgicas e Biotecnologia

Palavras-chave: Consrcio Microbiano; Kombucha; Ao Antimnicrobiana

INTRODUO
Kombucha tem origem chinesa e conhecido h mais 5000 anos por suas propriedades
teraputicas (JAYABALAN et al., 2006), especialmente como desintoxicador do
organismo. Esta bebida inicialmente foi introduzida na Rssia por comerciantes
ocidentais que atribuam a ela muitas propriedades teraputicas, l kombucha tambm
ficou conhecido como Tea Krass. Atualmente esta bebida tem sido consumida em
mais de trinta paises. Desde 1852 esta bebida tem sido estudada intensivamente por
cientistas na Europa. As pesquisas visam identificar as propriedades desta bebida no
combate ao cncer e outras enfermidades. Instituies de pesquisas russas descobriram
que o consumo dirio de kombucha esta relacionado com uma extrema resistncia ao
cncer. (DUFRESNE & FARNWORTH, 2000; JAYABALAN et al., 2006).
Atualmente, muitas indstrias tm produzido a bebida para venda comercial. A
atividade antibacteriana de kombucha tem sido avaliada junto ao ch verde e ch preto
durante o seu perodo de fermentao. Todos estes chs apresentam uma srie de
benefcios a sade como, desintoxicao do organismo, reduo de colesterol, reduo
da presso sangunea, estmulo do sistema endcrino e do metabolismo do fgado,
dentre outras atribuies (DUFRESNE e FARNWORTH, 2000).

OBJETIVOS
Avaliar a ao antibacteriana do fermentado produzido a partir de kombucha inoculado
em ch verde e ch preto adoado com quatro diferentes acares comerciais: sucralose,
acar mascavo, cristal e sacarose.

METODOLOGIA
Foi utilizado um consrcio de microorganismos (fungos e bactrias) de origem
domstica, cedida gentilmente a Universidade de Mogi das Cruzes. Esta cultura foi
dividida em dezoito amostras que foram cultivados em um ch preparado com
metodologia baseada no experimento de Malbasa et al. (2008).

Preparao da cultura inicial.


Um sache de 3 gramas de folhas trituradas de ch preto da marca Preto Prenda fora
depositado em dois litros de gua fervente a temperatura de 100C por um perodo de 5
minutos; com a retirada do sache, a infuso formada foi esterilizada a temperatura de
120C a 1 atm por 15 minutos em autoclave. A seguir, a esta infuso foram
acrescentados 140 g. de acar sacarose da marca Caravela, finalizando a preparao do
ch. Com o resfriamento do ch em temperatura ambiente, os 2L foram distribudos em
24 Erlenmeyers de 125 mL (sendo em cada um depositado a quantidade aproximada
de 75ml), estes foram inoculados com fragmentos do biofilme inicial sendo
incubados a temperatura ambiente (em torno de 25 oC), durante 14 dias (Malbasa et al.
2008).
Preparao dos Substratos e Inoculao do biofilme.

Para realizao deste experimento foram preparados 8 tipos de ch para elaborao


diferencial de Kombucha, sendo eles identificados como: Ch preto com acar
refinado(CPAR), Ch preto com sucralose (CPSU), Ch preto com acar mascavo
(CPAM) Ch preto com acar cristal (CPAC); Ch verde com acar refinado
(CVAR), Ch verde com sucralose (CVSU) e Ch verde com acar mascavo (CVAM)
e Ch verde com acar cristal (CVAC). Todos os chs foram preparados com
ingredientes em medidas iguais (metodologia modificada de Malbasa et al. 2008). Cada
ch foi feito em triplicata para garantia de obteno de resultados precisos. E os
diferentes chs foram preparados conforme a ilustrao do Esquema 1.

Figura 1. Preparao do substrato.

Um Erlenmeyer contendo 2 L e 664 mL de gua, foi aquecido at a ebulio, nesta


temperatura, seu contedo foi dividido em dois Erlenmeyers, sendo em cada um
imerso um sache com aproximadamente 2 g, sendo um sache preenchido com folhas
trituradas de ch preto da marca Preto Prenda e outro preenchido com folhas verdes
secas da marca chavita, logo aps, os Erlenmeyers foram colocados em uma cmara de
fluxo laminar com luz germicida por 15 minutos. Oito amostras de acar, com
aproximadamente 23,50 g cada, tambm foram colocadas neste mesmo ambiente. Os
oito Erlenmeyers foram previamente esterilizados numa temperatura de 120C por 15
minutos. Num ambiente esterilizado (capela com fluxo laminar germicida) cada medida
de infuso foi dividida em quatro Erlenmeyers estreis; em seguida, cada um desses
Erlenmeyers recebeu o acrscimo de 23,33 g de acar diferenciado, resultando nos oito
diferentes chs: CPAR , CPSU, CPAM, CPC, CVAR, CVSU, CVC e CVAM.Estes
foram esvaziados, restando em cada um somente 10% do volume de lquido inicial e
uma cultura j crescida. Cada Erlenmeyer teve o acrscimo de aproximadamente 65ml
de um ch diferencial. Aps serem preenchidos, os Erlenmeyers foram novamente
tampados com um tampo de algodo, com esse procedimento, os grupos de
Erlenmeyers ento foram identificados como: KCPAR, KCPSU, KCPAM, KCPC,
KCVAR, KCVSU, KCVC e KCVAM e depositados em uma estufa a 28C por um
perodo de mais 14 dias.

Determinao da Atividade Antibacteriana


Para constatao de atividade antibacteriana em kombucha preparado com diferentes
acares foram utilizadas as seguintes linhagens de bactrias: Staphylococcus aureus
(ATCC25923), Streptococcus pyogenes (ATCC19615), Streptococcus pneumoniae
(ATCC49150) e Shigela flexniri (ATCC12022) e as bactrias adquiridas por doao do
Laboratrio de Analises Clinicas SANCET: Escherichea coli e Salmonella sp. Estas
bactrias foram pr-inoculadas em meio TSB por 24 horas. Aps este perodo, as
bactrias foram inoculadas em meio Mueller Hinton da marca Oxoid, e algumas placas
foram diferenciadas com o acrscimo de sangue nesse meio para o crescimento de
Streptococcus. No centro da placa foi feito um poo de 0,5 cm de dimetro (Figura 3 )
onde foi colocado o fermentado para teste de sua atividade antimicrobiana. As placas
inoculadas foram mantidas a 28C por 24 horas. Aps este perodo foram medidos os
halos de inibio formados (foi traado um quadrante e a medida do halo ser uma
mdia de 4 medidas).

Orifcio com aproximadamente 0,5 cm

Figura 2. Placa de Petri com meio de cultura bacteriana e um poo no centro.

RESULTADOS E DISCUSSO
Os quatro diferentes acares utilizados na preparao dos kombucha, exceto a
sucralose, foram metabolizados pelos microorganismos em simbiose, o que viabilizou a
produo de cidos que funcionam como um composto antibacteriano. A utilizao de
sucralose no preparo de diferentes kombuchas no viabilizou a produo de cidos pelos
microrganismos do biofilme, devido ao seu baixo valor nutricional que inviabiliza a
produo de energia metabolica. J os aucares refinado, mascavo e cristal (orgnico),
os quais contm sacarose, foram metabolizados pelos microorganismos existentes na
simbiose apresentando valores expressivos de ao antibacteriana. A Figura 3 mostra os
ensaios de atividade antibacteriana.
1,6

1,4
KCVAM
1,2
KCVAR
1
KCVSU
0,8 KCVAC

0,6 KCPAM
KCPAR
0,4
KCPSU
0,2 KCPAC
0
Escherichia coli Salmonella sp. Shigela flexniri Staphylococcus Streptococcus Streptococcus
aureus pneumoniae pyogenes

Figura 4. Medida da atividade antibacteriana dos chs adoados com diferentes


acares.

KCVAM kombucha de ch verde com acar mascavo; KCVAR kombucha de ch verde com acar
refinado; KCVSU- Kombucha de ch verde com sucralose; KCVC- kombucha de ch verde com acar
mascavo; KCPAM- Kombucha de ch preto com acar mascavo; KCPAR- Kombucha de ch preto com
acar refinado; KCPSU- Kombucha de ch preto com sucralose; KCPC- Kombucha de ch preto com
acar cristal.

CONCLUSES
Os chs adoados com os acares refinado, mascavo e cristal apresentaram expressiva
ao antibacteriana, contudo esta capacidade deve ser quantificada.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BALENTINE, D. A. Special issue: tea and health. Critical Reviews in Food Science
and Nutrition 1997, 8, 691692.

DUFRESNE, C; FARNWORTH, E. Tea, Kombucha, and health: a review. Food


Research International 33 (2000) 409421

JAYABALAN, R; MARIMUTHU, S.; SWAMINATHAN K. Changes in content of


organic acids and tea polyphenols during kombucha tea fermentation. Food
Chemistry 102 (2007)392 398.

MALBASA, R.; LONC, E.; DJURIC, M. Comparison of the products of Kombucha


fermentation on sucrose and molasses. Food Chemistry 106 (2008)1039 1045.