Pfizer Bio Distribution

Página 1
Localização de mascaramento: Ajustando

Vacina de mRNA SARS-CoV-2 (BNT162, PF-07302048)
2.6.4 Resumo do estudo farmacocinético
ÍNDICE
LISTA DE MESAS ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. ........... 1
LISTA DE FIGURAS ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. ......... 1
Termos e abreviações usados nesta seção ..................................... ...... .................................................. ......... ............................ 2
1. Resumo ............................................... ....... ........................................... ...................... ............................ ..................................... .... 3
2. Método analítico .............................................. ........ .......................................... ....................... ........................... ...................................... ..... Quatro
3. Absorção ............................................ ... .................................................. ............ ...................................... ........................... ........ Quatro
4. Distribuição ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. .................................... ........Cinco
5. Metabolismo ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. .................................... ........ 7
6. Excreção ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. .................................... ........ 9
7. Interações medicamentosas farmacocinéticas ..................................... ........ .................................................. ....... ........................ 9
8. Outros estudos farmacocinéticos ............................................. ........ .......................................... ....................... ........................... ... 9
9. Discussões e conclusões ............................................. ..... ............................................. .................... .............................. .......... 9
10. Gráfico ............................................... ....... ........................................... ...................... ............................ ..................................... .... dez
Referências ................................................. ............... ................................... .............................. .................... ............................................. .. Dez
LISTA DE MESAS
Tabela 1 LNP encapsulado por RNA de luciferase por via intravenosa para ratos Wistar Han na dose de 1 mg de RNA / kg
Farmacocinética de ALC-0315 e ALC-0159 quando administrado por via oral ..................... ........ Quatro
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 LNP venoso encapsulado por RNA de luciferase em ratos Wistar Han na dose de 1 mg de RNA / kg
Concentrações plasmáticas e hepáticas de ALC-0315 e ALC-0159 quando administrados por via oral ..................... 5
Figura 2 In vivo em camundongos BALB / c administrados por via intramuscular com LNP encapsulado por RNA de luciferase
Luminoso ..................................... ............ .................................................. ... ....................................... 6
Figura 3 Via metabólica in vivo estimada de ALC-0315 em várias espécies animais ................................... ........................... 8
Figura 4 Via metabólica in vivo estimada de ALC-0159 em várias espécies animais ................................... ........................... 9
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 1
Página 2
Termos e abreviações usados nesta seção
Termo / Abreviação Expressões ou definições não abreviadas

ALC-0159 Lípido PEG adicionado a esta droga
ALC-0315 Amino lipídeo adicionado a esta droga
[3 H] -CHE [Colesteril-1,2- 3 H (N)] - colesteril hexadecil éter: radiomarcado [colesteril
Lil-1, 2-3 H (N)] éter hexadecílico

DSPC 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina: 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina
Rin
GLP Boas Práticas de Laboratório: Critérios para a realização de estudos não clínicos sobre segurança de medicamentos
LNP Nanopartícula de lipídeo: nanopartícula de lipídeo mRNA modificado com
modRNA nucleosídeo: RNA mensageiro de mRNA de nucleosídeo modificado: RNA
mRNA mensageiro
m/z m / z (m sobre z): Obtido pela divisão da massa de um íon pela unidade de massa atômica unificada (= Dalton).
A quantidade adimensional obtida pela divisão da quantidade adimensional obtida pelo valor absoluto do número de cargas do íon.
PEG Polietilenoglicol: Polietilenoglicol
PK Farmacocinética: Farmacocinética
RNA Ácido ribonucléico: Ácido ribonucléico

S9 Fração de sobrenadante obtida a partir de homogenato de fígado por centrifugação a 9000 g: homogenato de fígado
Fração de sobrenadante centrifugada a 9000 g

QUEM Organização Mundial da Saúde: Organização Mundial da Saúde
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 2
Página 3
1 Resumo
BNT162b2 (número de código BioNTech: BNT162, número de código Pfizer: PF-07302048) é uma chamada aguda grave.
Síndrome Respiratória Aguda Grave Coronavírus 2 (SARS-CoV-2) pico de glicoproteína (proteína S) de comprimento total
É um mRNA de nucleosídeo modificado (modRNA) que codifica contra a infecção por SARS-CoV-2.
O desenvolvimento está em andamento como a essência da vacina de mRNA. Ao formular BNT162b2, existem dois
Lipídios funcionais ALC-0315 (aminolipídio) e ALC-0159 (lipídio PEG) e dois lipídios estruturais por
mistura com DSPC (1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina) e colesterol

Nanopartículas lipídicas (LNP) que encapsulam BNT162b2 são formadas (doravante, "LNP encapsulado em BNT162b2").
ALC-0315 e ALC-0315 contidos no LNP para avaliar a farmacocinética não clínica do LNP encapsulado com BNT162b2 Estudos in
vivo e in vitro avaliando a absorção (PK), metabolismo e excreção de ALC-0159 e BNT162b2
Estudos de biodistribuição usando luciferase ou lipídios radiomarcados como um repórter alternativo
para foi realizado.
Com base no fato de que o desenvolvimento de vacinas com o objetivo de prevenir doenças infecciosas não requer avaliação de exposição sistêmica. (OMS,
2005; diretrizes de estudos não clínicos para vacinas preventivas de doenças infecciosas)1, 2, BNT162b2 Músculo LNP encapsulado Nenhum estudo PK interno foi
realizado. Além disso, dois outros tipos de lipídios (coleste) contidos neste medicamento
Rolls e DSPCs) são lípidos de ocorrência natural que se pensa serem metabolizados e excretados da mesma forma que os lípidos
endógenos. acessível. Além disso, o BNT162b2 é degradado pelas ribonucleases nas células que o absorveram, resultando em cargas de
ácido nucleico. Peça desculpas, a proteína S de BNT162b2 deve sofrer proteólise. De cima,
Considerou-se desnecessário avaliar novamente o metabolismo e a excreção desses componentes.
LNP (Luciferase) encapsulando o RNA que codifica a luciferase como um repórter alternativo para BNT162b2
O RNA de Lase é encapsulado em um LNP com a mesma composição lipídica que o LNP encapsulado em BNT162b2:
Em um estudo de PK em que LNP encapsulado por ZeRNA ") foi administrado por via intravenosa a ratos Wistar Han, plasma, urina, fezes e
Amostras de fígado foram coletadas ao longo do tempo e as concentrações de ALC-0315 e ALC-0159 em cada amostra foram medidas. A conclusão
Como resultado, ALC-0315 e ALC-0159 mostraram ser rapidamente distribuídos do sangue para o fígado. Além disso,
Cerca de 1% e cerca de 50% das doses de ALC-0315 e ALC-0159 são excretadas nas fezes como fármaco inalterado, respectivamente.
Todos eles estavam abaixo do limite de detecção na urina.
No teste de biodistribuição, LNP encapsulado por RNA de luciferase foi administrado por via intramuscular a camundongos BALB / c. Naquela
Como resultado, a expressão da luciferase foi observada no local da administração, e o nível de expressão foi inferior ao do fígado.
Também foi reconhecido. A expressão no local de administração da luciferase foi observada 6 horas após a administração e 9 dias após a administração. Desaparecido. A
expressão no fígado também foi observada 6 horas após a administração e desapareceu 48 horas após a administração. Além disso, a administração intramuscular de LNP
radiomarcado contendo RNA de luciferase a ratos para quantificar a biodistribuição
Na avaliação, a concentração de radioatividade foi a mais alta no local de administração. O fígado está mais alto, exceto no local de
administração. Foi bom (até 18% da dose).
Metabolismo de ALC-0315 e ALC-0159 em camundongos CD-1 / ICR, ratos Wistar Han ou Sprague Dawley,
In vitro usando macaco cynomolgus ou sangue humano, microssomas de fígado, fração S9 do fígado e hepatócitos
avaliado. Além disso, foram utilizadas amostras de plasma, urina, fezes e fígado coletadas no teste de farmacocinética de administração intravenosa em ratos acima.
Também examinamos o metabolismo in vivo. A partir desses estudos in vitro e in vivo, ALC-0315 e ALC-0159
foram adicionados às ligações éster e amida em todas as espécies animais testadas.
A solução mostrou que foi metabolizada lentamente.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 3
Página 4
A partir da avaliação farmacocinética não clínica acima, foi demonstrado que o LNP que atingiu o sangue circulante é distribuído no fígado. Além
disso, o metabolismo e a excreção fecal podem estar envolvidos no desaparecimento de ALC-0315 e ALC-0159, respectivamente.
Foi sugerido.
2 Método Analítico
Número do relatório: PF-07302048_06 _072424
Administração intravenosa de ratos sem teste GLP PK (M2.6.4.3), ALC-0315, que é um lipídio constituinte do LNP, e ALC-0159
Desenvolvemos um método LC / MS com desempenho adequado para quantificar a concentração. Ou seja, 20 µL
Plasma, homogenato de fígado (os homogenados são preparados usando seções coletadas de três partes do fígado e são usados. Diluir com
uma matriz em branco conforme apropriado), urina e homogenato fecal (como apropriado, farelo)
Diluir com kumatrix) Divida cada amostra com acetonitrila contendo uma substância de padrão interno (PEG-2000).
Após a proteína, ela foi centrifugada e o sobrenadante foi submetido à medição LC-MS / MS.
3 Absorção
Número do relatório: PF-07302048_06 _072424 , Tabela de resumo: 2.6.5.3
LNP encapsulado por RNA de luciferase masculina para estudar a farmacocinética de ALC-0315 e ALC-0159
Uma única dose intravenosa de 1 mg de RNA / kg foi administrada a ratos Wistar Han ao longo do tempo (pré-dose, pós-dose 0,1, 0,25,
Plasma esparso e fígado 0,5, 1, 3, 6 e 24 horas e 2, 4, 8 e 14 dias após a dosagem)
A amostragem foi realizada (3 animais / ponto de tempo). ALC-0315 e ALC-0159 no plasma e no fígado
A concentração foi medida e os parâmetros PK foram calculados (Tabela 1). ALC-0315 e ALC-0159 no sangue são lançados
Foi prontamente distribuído para o fígado 24 horas após a administração. Além disso, a concentração plasmática 24 horas após a administração é a mais alta no plasma.
Era menos de 1% da concentração (Figura1 ) A meia-vida de eliminação da fase terminal aparente (t½) está no plasma e no fígado. No mesmo nível, ALC-0315 levou 6 a 8
dias e ALC-0159 levou 2 a 3 dias. Pelos resultados deste teste, o fígado está no sangue. Foi sugerido que é uma das principais organizações que adotam o ALC-0315 e o
ALC-0159.
Os resultados do exame das concentrações urinárias e fecais de ALC-0315 e ALC-0159 realizados neste estudo são
M2.6.4.Descrito em Seção 6.
tabela 1 Injeção intravenosa de luciferase RNA- encapsulado LNP para dentro Wistar Han ratos em uma dose de 1 mg RNA / kg
Farmacocinética de ALC-0315 e ALC-0159 quando dado
Dosagem de material analítico de analito Gênero / N t½ (h) AUC inf AUC último Para o fígado
(mg / kg) (μg • h / mL) ( Μg • h / mL) Proporção de distribuição (%) uma
ALC-0315 15,3 Masculino / 3 b

139 1030 1020 60
ALC-0159 1,96 Masculino / 3 b
72,7 99,2 98,6 20
Calculado como [distribuição máxima no fígado (μg)] / [dose (μg)].
b. 3 animais em cada momento. Amostragem esparsa.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 4
Página 5
figura 1 Injeção intravenosa de luciferase RNA- encapsulado LNP para dentro Wistar Han ratos em uma dose de 1 mg RNA / kg
Concentrações plasmáticas e hepáticas de ALC-0315 e ALC-0159 quando dado
ALC-0315 em plasma ALC-0315 No fígado

ALC-0159 No fígado
ALC-0159 no plasma
eu) )
/m /g
gμ gμ
µ µ
concentração( concentração(
Tempo decorrido (h) Tempo decorrido (h)
4 Distribuição
Número do relatório: R- -0072 , 185350, Tabela de resumo: 2.6.5.5A, 2.6.5.5B
Camundongos BALB / c fêmeas (3 camundongos) foram administrados com LNP encapsulado em RNA de luciferase para emitir luminescência de luciferase.
A biodistribuição de BNT162b2 foi examinada como um marcador alternativo. Ou seja, inclusão de RNA de luciferase
O LNP foi administrado por via intramuscular nos membros posteriores esquerdo e direito de camundongos em uma dose de 1 μg de RNA (2 μg de RNA no total). Depois disso, Le
Administração intraperitoneal de luciferina, um substrato luminescente, 5 minutos antes da detecção da luminescência da cipherase, cânhamo de isoflurano
Intoxicação, luminescência in vivo 6 e 24 horas após a administração usando o Xenogen IVIS Spectrum e 2,
Medindo nos dias 3, 6 e 9, a expressão da proteína luciferase no mesmo indivíduo foi estimada ao longo do tempo.
Avaliei a transferência. Como resultado, a expressão da luciferase no local de administração foi observada 6 horas após a administração e foi administrada.
Ele desapareceu 9 dias após o fornecimento. A expressão no fígado também foi observada 6 horas após a administração e desapareceu 48 horas após a administração. Era. Em
relação à distribuição para o fígado, uma parte do LNP encapsulado por RNA de luciferase administrado localmente atinge o sangue circulante e o fígado
Foi pensado para indicar que foi absorvido pelas vísceras. M2.6.4. Vida em ratos, conforme detalhado na Seção3
Quando administrado por via intravenosa com Lase RNA encapsulado LNP, o fígado é o principal ALC-0315 e ALC-0159.
Sugeriu-se que se trata de um órgão distribuído, o que resulta dos resultados deste estudo, que foi administrado por via intramuscular em camundongos. Foi uma combinação. Os
achados de toxicidade indicando lesão hepática foram observados no teste de toxicidade de dose repetida em ratos.
Não disponível ( M2.6.6.3 )
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 5
Página 6
Figura 2 em luminescência vivo em BALB / c camundongos administrados por via intramuscular com luciferase RNA- encapsulado LNP
Solução tampão LNP encapsulado por RNA de luciferase
Ratos Wistar Han machos e fêmeas marcados com [ 3 Éter H] -colesteril hexadecílico ([ 3 H] -CHE) LNP
LNP encapsulado por RNA de luciferase usando RNA de luciferase foi administrado por via intramuscular a uma dose de 50 µg de RNA e 15 minutos após a administração.
Sangue, plasma e tecido foram coletados de 3 homens e 3 mulheres em 1, 2, 4, 8, 24 e 48 horas cada.
A biodistribuição do LNP é avaliada medindo a concentração de radioatividade pelo método de contagem de cintilação líquida. Vale a pena. Tanto em
homens como em mulheres, a concentração de radioatividade foi mais alta no local de administração em todos os pontos de medição.
A concentração de radioatividade no plasma foi maior 1 a 4 horas após a administração. Além disso, foram observados principalmente o fígado, baço, glândulas
adrenais e distribuição aos ovários, e a maior concentração de radioatividade nesses tecidos foi de 8 a 48 após a administração. Já era tempo. A taxa de
recuperação de radioatividade total para doses diferentes do local de administração é a mais alta no fígado (até 18%). Significativamente menor no baço (1,0% ou
menos), glândula adrenal (0,11% ou menos) e ovário (0,095% ou menos) em comparação com o fígado
Ganhou. Além disso, a concentração média de radioatividade e o padrão de distribuição do tecido foram geralmente semelhantes entre homens e mulheres.
A distribuição da expressão in vivo do antígeno codificado por BNT162b2 é considerada dependente da distribuição de LNP. Para este teste
A composição lipídica do LNP encapsulado pelo RNA da luciferase é a mesma da preparação submetida de BNT162b2? Portanto, os
resultados deste teste são considerados para indicar a distribuição de LNP encapsulado em BNT162b2.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 6
Página 7
5 Metabolismo
Número do relatório: 01049-008 , 01049-009 , 01049- 010 , 01049- 020 , 01049-021 , 01049-022 ,
PF-07302048_05 _043725 , Tabela de resumo: 2.6.5.10A , 2.6.5.10B , 2.6.5.10C , 2.6.5.10D
Rato CD-1 / ICR, rato Wistar Han ou Sprague Dawley, macaco cynomolgus e fígado humano mi
Estabilização metabólica in vitro de ALC-0315 e ALC-0159 usando crossomo, fração S9 do fígado e hepatócitos
Sexo foi avaliado. Microssomas de fígado ou frações S9 do fígado de cada espécie animal com ALC-0315 ou ALC-0159 (120)
Incubar) ou adicionar aos hepatócitos (incubação de 240 minutos) e incubar
A proporção de fármaco inalterado após a vação foi medida. Como resultado, qual de ALC-0315 e ALC-0159
Também foi metabolicamente estável em espécies animais e sistemas de teste, com a proporção final de fármaco inalterado sendo superior a 82%.
Além disso, as vias metabólicas de ALC-0315 e ALC-0159 foram avaliadas in vitro e in vivo. Nesses estudos,
camundongo CD-1, rato Wistar Han, macaco cynomolgus e sangue humano, frações S9 do fígado
E os hepatócitos foram usados para avaliar o metabolismo in vitro. Além disso, plasma, urina e fezes coletados no teste de PK de rato. E as
amostras de fígado foram usadas para avaliar o metabolismo in vivo (M2.6.4. Item3) A partir dos resultados do teste, ALC-0315 e ALC-0159 são
metabolizados lentamente, com hidrólise das ligações éster e amida, respectivamente. Foi revelado que foi metabolizado por. Metabolismo
hidrolítico mostrado emBonecos3 e 4
Foi encontrado em todas as espécies animais avaliadas.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 7
Página 8 Localização de mascaramento: Ajustando
Figura 3 Via metabólica in vivo estimada de ALC-0315 em várias espécies animais
No sangue (Mo, R)
Em hepatócitos (Mo, R, Mk, H)

Fígado S9 (Mo, R, H)
Plasma (R)
No sangue (Mo, R)
Fígado S9 (Mk)
Plasma (R)
Fígado (R)
No sangue (Mo, R)
Fígado S9 (Mo, R, H)
Plasma (R)
No sangue (Mo, R)
Fígado S9 (Mk)
Plasma (R)
Urinário (R)
Fezes (R)
Fígado (R)
Glucuronida
Urinário (R)
H: humano, Mk: macaco, Mo: camundongo, R: rato
O ALC-0315 é metabolizado por meio da hidrólise do éster duas vezes consecutivas. Esses dois hidrólise
Primeiro produz um metabólito monoéster ( m / z 528) e, em seguida, um metabólito desesterificado duplo ( m / z 290). Será feito.
Este metabólito duplo desesterificado é posteriormente metabolizado no conjugado glucuronídeo (m / z 466). No entanto, este
conjugado de ácido glucurônico foi detectado apenas na urina no teste de PK de rato. Além disso, duas hidrólises. Também foi
confirmado que todos os produtos ácidos de eram ácido 6-hexildecanóico (m / z 255).
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 8
Página 9
Figura 4 Via metabólica in vivo estimada de ALC-0159 em várias espécies animais
No sangue (Mo, R)
No fígado S9 (Mo, R, Mk, H)

N, N-ditetradecilamina
m / z 410
H: humano, Mk: macaco, Mo: camundongo, R: rato
Em ALC-0159, N, N -ditetradecilamina ( m / z 410) é produzido por hidrólise da ligação amida.
A via era a principal via metabólica. Este metabólito é encontrado no sangue de camundongos e ratos, bem como em camundongos e ratos.
Foi detectado em hepatócitos de macaco e humanos e frações S9 do fígado. Metabólitos de ALC-0159 de amostras in vivo Não confirmados.
6 Excreção
Estudo de PK de LNP encapsulado por RNA de luciferase intravenosa em ratos na dose de 1 mg de RNA / kg
(M2.6.4.Oas concentrações de ALC-0315 e ALC-0159 na urina e fezes coletadas ao longo do tempo foram medidas em (3).
Nem ALC-0315 nem ALC-0159 na forma inalterada foram detectados na urina. Por outro lado, nas fezes
Foram detectadas formas inalteradas de ALC-0315 e ALC-0159, a uma taxa de aproximadamente 1% por dose, respectivamente. Era cerca de
50%. Além disso,Figura3 Conforme mostrado em, um metabólito de ALC-0315 foi detectado na urina.
7 Interações farmacocinéticas de medicamentos
Não foram realizados estudos de interação farmacocinética com esta vacina.
8 Outros estudos farmacocinéticos
Nenhum outro estudo farmacocinético desta vacina foi realizado.
9 Discussão e conclusão
Os níveis plasmáticos e hepáticos de ALC-0315 foram mais elevados em estudos de PK em ratos 2 semanas após a dose
É reduzido para cerca de 1/7000 e cerca de 1/4, respectivamente, e a concentração de ALC-0159 é cerca de 1/8000, respectivamente.
E reduzido para cerca de 1/250. t½ é comparável no plasma e no fígado, ALC-0315 é de 6-8 dias, ALC-0159 é de
2-3 dias. O valor de t½ plasmático é que cada lipídio é distribuído no tecido como LNP.
Depois disso, considera-se que foi redistribuído no plasma durante o processo de desaparecimento.
Pouca forma inalterada de ALC-0315 foi detectada na urina ou nas fezes, mas no estudo de PK de rato
Metabólitos de monoéster, metabólitos de desesterificação dupla e 6-hexi de amostras fecais e de plasma coletadas em
O ácido ludecanóico foi detectado na urina e um conjugado de ácido glucurônico, um metabólito duplo desesterificado, foi detectado na urina. Este metabolismo O
processo é considerado o principal mecanismo de desaparecimento do ALC-0315, mas dados quantitativos foram obtidos para testar essa hipótese. Ausente. Por
outro lado, cerca de 50% da dose de ALC-0159 foi excretada nas fezes como fármaco inalterado. Experimento de metabolismo in vitro Em, foi lentamente
metabolizado por hidrólise da ligação amida.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 9
Página 10
Uma vez que a distribuição da expressão in vivo do antígeno codificado por BNT162b2 é considerada dependente da distribuição de LNP, LNP
encapsulado por RNA de luciferase administrado por via intramuscular a camundongos BALB / c como uma proteína repórter alternativa
A biodistribuição foi examinada. Como resultado, a expressão da luciferase foi observada no local de administração, e mais do que isso.
Embora o nível de expressão tenha sido baixo, também foi observado no fígado. A expressão no local de administração da luciferase é pós-administração
Foi observada a partir de 6 horas e desapareceu 9 dias após a administração. A expressão no fígado foi observada 6 horas após a administração e foi administrada.
Ele desapareceu 48 horas depois de dar. LNP encapsulado por RNA de luciferase administrado localmente circula no fígado.
Considerou-se que indicava que atingiu o sangue do anel e foi captado pelo fígado. Além disso, Lúciferer em ratos
Quando o corpo marcado com radioatividade do LNP encapsulado por ZeRNA foi administrado por via intramuscular, a concentração de radioatividade foi a mais alta no local de administração.
Indicado. Além do local de administração, foi mais elevado no fígado, seguido pelo baço, glândulas supra-renais e ovários.
A recuperação total da radioatividade para doses nesses tecidos foi significativamente menor do que no fígado. Este resultado é
Isso foi consistente com a expressão de luciferase no fígado no teste de biodistribuição em camundongos. Além disso, deve-se observar. Nenhum
achado tóxico indicando dano ao fígado foi encontrado no teste de toxicidade de dose repetida em ratos (M2.6.6.3 )
A partir da avaliação farmacocinética não clínica acima, foi demonstrado que o LNP que atingiu o sangue circulante é distribuído no fígado. Além
disso, o metabolismo e a excreção fecal podem estar envolvidos no desaparecimento de ALC-0315 e ALC-0159, respectivamente. Foi sugerido.
10 Gráfico
Os gráficos são mostrados no texto e na tabela de resumo.
Referências
1 Organização Mundial da Saúde. Anexo 1. Diretrizes para a avaliação não clínica de

vacinas. In: WHO Technical Report Series No. 927, Genebra, Suíça. Organização
Mundial da Saúde; 2005: 31-63.
2
Diretrizes de estudos não clínicos para vacinas preventivas de doenças infecciosas (nº 0527 do exame Yaksik)
No. 1, 27 de maio de 2010)
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 10
Página 11
2.6.5 Tabela de resumo do estudo farmacocinético
2.6.5.1. VISÃO GERAL DA FARMACOCINÉTICA Artigo de teste: BNT162b2
Tipo de estudo Sistema de Teste Item de teste Método de Instalação de teste Número do relatório
Administração
Farmacocinética de dose única
Dose única Rato (Wistar Han) codificação modRNA Bolus IV Pfizer Inc uma PF-07302048_06 _072424
Farmacocinética e luciferase
Excreção na urina e nas fezes formulado em LNP
de ALC-0159 e ALC-0315 comparável a
BNT162b2
Distribuição
Distribuição In Vivo Ratos BALB / c codificação modRNA Injeção IM bb R- -0072
luciferase
formulado em LNP
comparável a
BNT162b2
Distribuição In Vivo Rato (Wistar Han) codificação modRNA Injeção IM c 185350
luciferase
formulado em LNP
comparável a
BNT162b2 com
traços de
[3 H] -CHE como
rótulo não difusível
Metabolismo
Metabolismo In Vitro e In Vivo

Estabilidade metabólica in vitro Camundongo (CD-1 / ICR), ALC-0315 Em vitro 01049- 008
de ALC-0315 no fígado rato (Sprague Dawley e
Microssomas Wistar Han), macaco d
(Cynomolgus), e
microssomas de fígado humano
Estabilidade Metabólica In Vitro Rato (CD-1 / ICR), rato ALC-0315 Em vitro 01049-009
de ALC-0315 no Fígado S9 (Sprague Dawley),
macaco (Cynomolgus), d
e fígado S9 humano
frações
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 1
Página 12
Administração
de ALC-0315 em hepatócitos rato (Sprague Dawley e
Wistar Han), macaco d
(Cynomolgus), e
hepatócitos humanos
de ALC-0159 no fígado rato (Sprague Dawley e
Microssomas Wistar Han), macaco d
(Cynomolgus), e
microssomas de fígado humano
Estabilidade metabólica in vitro Rato (CD-1 / ICR), rato ALC-0159 Em vitro 01049-021
de ALC-0159 no fígado S9 (Sprague Dawley),
macaco (Cynomolgus), d
e frações S9 humanas de
Estabilidade metabólica in vitro camundongo (CD-1 / ICR), ALC-0159 Em vitro 01049- 022
de ALC-0159 em hepatócitos rato (Sprague Dawley e
Wistar Han), macaco d
(Cynomolgus), e
hepatócitos humanos
Biotransformação de Em vitro: ALC-0315 e In vitro ou Pfizer Inc e PF-07302048_05 _043725
ALC-0159 e ALC-0315 In Mouse CD-1, Wistar ALC-0159 IV (in vivo em
Vitro e In Vivo em Ratos Rato han, cynomolgus ratos)
macaco e humano
sangue, frações S9 do fígado
e hepatócitos
In vivo: Wistar Han masculino
ratos
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 2
Página 13
Administração
ALC-0159 = 2 - [(polietilenoglicol) -2000] -N, N-ditetradecilacetamida), um polietilenoglicol-lípido patenteado incluído de preferência na formulação LNP utilizada em
BNT162b2; ALC-0315 = (4-hidroxibutil) azanediil) bis (hexano-6,1-diil) bis (2-hexildecanoato), um aminolipídeo patenteado incluído preferencialmente na formulação LNP
usada em BNT162b2; IM = intramuscular; IV = intravenoso; LNP = nanopartículas lipídicas; S9 = Fração sobrenadante obtida do homogenato de fígado por centrifugação a
9000 g.
uma. La Jolla, Califórnia.
b. , Alemanha.
c. , Reino Unido.
d. , China.
e. Groton, Connecticut.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 3
Página 14
2.6.5.3. FARMACOCINÉTICA: Artigo de teste: modRNA que codifica a luciferase em LNP

FARMACOCINÉTICA APÓS UMA ÚNICA DOSE Número do relatório: PF-07302048_06 _072424
Espécie (estirpe) Rato (Wistar Han)
Sexo / Número de Animais Macho / 3 animais por ponto de tempo a
Condições de alimentação Jejuou

Método de administração 4
Dose modRNA (mg / kg) 1
Dose ALC-0159 (mg / kg) 1,96
Dose ALC-0315 (mg / kg) 15,3
Matriz de amostra Plasma, fígado, urina e fezes
Pontos de tempo de amostragem (h pós-dose): Predose, 0,1, 0,25, 0,5, 1, 3, 6, 24, 48, 96, 192,
Analito 336 ALC-0315 ALC-0159
Parâmetros PK: Média b Média b
AUC inf (µg • h / mL) c 1030 99,2

AUC último (µg • h / mL) 1020 98,6
t inicial ½ (h) d 1,62 1,74
Eliminação terminal t ½ (h) e 139 72,7
Fração estimada da dose distribuída ao fígado (%) f 59,5 20,3
Dose na urina (%) NC g NC g
Dose nas fezes (%) h 1.05 47,2
ALC-0159 = 2 - [(polietilenoglicol) -2000] -N, N-ditetradecilacetamida), um polietilenoglicol-lípido patenteado incluído de preferência na formulação LNP utilizada em
BNT162b2; ALC-0315 = (4-hidroxibutil) azanediil) bis (hexano-6,1-diil) bis (2-hexildecanoato), um aminolipídeo patenteado incluído preferencialmente na formulação LNP
usada em BNT162b2; AUC inf = Área sob a curva de concentração de fármaco no plasma de 0 a tempo infinito; AUC last = Área sob a curva de concentração de fármaco no
plasma de 0 ao último ponto de tempo quantificável; BLQ = Abaixo do limite de quantificação; LNP = nanopartícula lipídica; modRNA = RNA mensageiro modificado com
Nucleosídeo; PK = Farmacocinética; t ½ = meia-vida.
uma. Amostragem não serial, 36 animais no total.
b. Apenas os parâmetros PK médios são relatados devido à amostragem não serial.
c. Calculado usando a fase log-linear terminal (determinado usando 48, 96, 192 e 336 h para o cálculo de regressão).
d. ln (2) / constante de taxa de eliminação inicial (determinada usando 1, 3 e 6 h para cálculo de regressão).
e. ln (2) / constante de taxa de eliminação terminal (determinado usando 48, 96, 192 e 336 h para cálculo de regressão).
f. Calculado como segue: maior quantidade média no fígado (µg) / dose média total (µg) de ALC-0315 ou ALC-0159.
g. Não calculado devido aos dados BLQ.
h. Excreção fecal, calculada como: (µg média de analito nas fezes / µg média de analito administrado) × 100
PFIZER CON
PF
agID
e 4NTIAL
E
Página 15
2.6.5.5A. FARMACOCINÉTICA: ÓRGÃO Artigo de teste: modRNA que codifica a luciferase em LNP
DISTRIBUIÇÃO Número do relatório: R- -0072
Espécie (estirpe): Camundongos (BALB / c)
Sexo / número de animais: Feminino / 3 por grupo
condição de alimentação: Alimentado ad libitum
Veículo / Formulação: Injeção intramuscular de solução
Método de administração: salina tamponada com fosfato
Dose (mg / kg): 1 µg / perna escondida no músculo gastrocnêmio (2 µg no total)
Número de doses: 1
Detecção: Medição de bioluminescência
Tempo de amostragem (hora): 6, 24, 48, 72 horas; 6 e 9 dias pós-injeção
Ponto de tempo Sinal de bioluminescência média total (fótons / segundo) Sinal médio de bioluminescência em
o fígado (fótons / segundo)
Controle de buffer modRNA Luciferase em LNP modRNA Luciferase em LNP
6 horas 1,28 × 10 5 1,26 × 10 9 4,94 × 10 7

24 horas 2,28 × 10 5 7,31 × 10 8 2,4 × 10 6
48 horas 1,40 × 10 5 2,10 × 10 8 Abaixo da detecção um
72 horas 1,33 × 10 5 7,87 × 10 7 Abaixo da detecção um
6 dias 1,62 × 10 5 2,92 × 10 6 Abaixo da detecção um
9 dias 7,66 × 10 4 5,09 × 10 5 Abaixo da detecção um
LNP = nanopartícula lipídica; modRNA = RNA mensageiro modificado com nucleosídeo.
uma. No nível de fundo do controle de buffer ou abaixo dele.
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 5
Página 16
2.6.5.5B. FARMACOCINÉTICA: Artigo de teste: [ 3 Formulação de LNP-mRNA marcada com H] contendo

DISTRIBUIÇÃO DE ÓRGÃOS CONTINUADA ALC-0315 e ALC-0159
Número do relatório: 185350
Espécie (estirpe): Rato (Wistar Han)

Sexo / número de animais: Macho e fêmea / 3 animais / sexo / ponto de tempo (21 animais / sexo total para a dose de 50 µg)
condição de alimentação: Alimentado ad libitum
Método de administração: Injeção intramuscular

Dose: 50 µg [3H] -08-A01-C0 (lote # NC-0552-1)
Número de doses: 1
Detecção: Quantificação de radioatividade usando contagem de cintilação líquida
Tempo de amostragem (hora): 0,25, 1, 2, 4, 8, 24 e 48 horas após a injeção

Amostra Concentração média de lipídios totais (µg equivalente lipídico / g (ou mL)) % da dose administrada (homens e mulheres combinados)
(homens e mulheres combinados)
0,25 h 1h 2h 4h 8h 24 h 48 h 0,25 h 1h 2h 4h 8h 24 h 48 h
Tecido adiposo 0,057 0,100 0,126 0,128 0,093 0,084 0,181 - - - - - - -
Glândulas adrenais 0,271 1,48 2,72 2,89 6,80 13,8 18,2 0,001 0,007 0,010 0,015 0,035 0,066 0,106
Bexiga 0,041 0,130 0,146 0,167 0,148 0,247 0,365 0,000 0,001 0,001 0,001 0,001 0,002 0,002
Osso (fémur) 0,091 0,195 0,266 0,276 0,340 0,342 0,687 - - - - - - -

Medula óssea 0,479 0,960 1,24 1,24 1,84 2,49 3,77 - - - - - - -
(fêmur)
Cérebro 0,045 0,100 0,138 0,115 0,073 0,069 0,068 0,007 0,013 0,020 0,016 0,011 0,010 0,009
Olhos 0,010 0,035 0,052 0,067 0,059 0,091 0,112 0,000 0,001 0,001 0,002 0,002 0,002 0,003
Coração 0,282 1.03 1,40 0,987 0,790 0,451 0,546 0,018 0,056 0,084 0,060 0,042 0,027 0,030
Local de injeção 128 394 311 338 213 195 165 19,9 52,6 31,6 28,4 21,9 29,1 24,6
Rins 0,391 1,16 2.05 0,924 0,590 0,426 0,425 0,050 0,124 0,211 0,109 0,075 0,054 0,057
Intestino grosso 0,013 0,048 0,093 0,287 0,649 1,10 1,34 0,008 0,025 0,065 0,192 0,405 0,692 0,762
Fígado 0,737 4,63 11,0 16,5 26,5 19,2 24,3 0,602 2,87 7,33 11,9 18,1 15,4 16,2
Pulmão 0,492 1,21 1,83 1,50 1,15 1.04 1.09 0,052 0,101 0,178 0,169 0,122 0,101 0,101
CONFIDENCIAL PFIZER
Página 6
Página 17
2.6.5.5B. FARMACOCINÉTICA: Artigo de teste: [ 3 Formulação de LNP-mRNA marcada com H] contendo

DISTRIBUIÇÃO DE ÓRGÃOS CONTINUADA ALC-0315 e ALC-0159
Número do relatório: 185350
Amostra Concentração total de lipídios (µg equivalente de lipídios / g [ou mL]) % da dose administrada (homens e mulheres combinados)
(homens e mulheres combinados)
0,25 h 1h 2h 4h 8h 24 h 48 h 0,25 h 1h 2h 4h 8h 24 h 48 h
Linfonodo 0,064 0,189 0,290 0,408 0,534 0,554 0,727 - - - - - - -
(mandibular)
Linfonodo 0,050 0,146 0,530 0,489 0,689 0,985 1,37 - - - - - - -
(mesentérico)
Músculo 0,021 0,061 0,084 0,103 0,096 0,095 0,192 - - - - - - -

Ovários 0,104 1,34 1,64 2,34 3,09 5,24 12,3 0,001 0,009 0,008 0,016 0,025 0,037 0,095
(mulheres)
Pâncreas 0,081 0,207 0,414 0,380 0,294 0,358 0,599 0,003 0,007 0,014 0,015 0,015 0,011 0,019
Glândula pituitária 0,339 0,645 0,868 0,854 0,405 0,478 0,694 0,000 0,001 0,001 0,001 0,000 0,000 0,001
Próstata 0,061 0,091 0,128 0,157 0,150 0,183 0,170 0,001 0,001 0,002 0,003 0,003 0,004 0,003
(homens)
Salivar 0,084 0,193 0,255 0,220 0,135 0,170 0,264 0,003 0,007 0,008 0,008 0,005 0,006 0,009
glândulas
Pele 0,013 0,208 0,159 0.145 0.119 0.157 0.253 - - - - - - -

Small intestine 0,030 0,221 0,476 0.879 1.28 1.30 1.47 0.024 0.130 0.319 0.543 0.776 0.906 0.835
Spinal cord 0,043 0,097 0,169 0.250 0.106 0.085 0.112 0.001 0.002 0.002 0.003 0.001 0.001 0.001
Spleen 0,334 2,47 7,73 10.3 22.1 20.1 23.4 0.013 0.093 0.325 0.385 0.982 0.821 1.03
Stomach 0,017 0,065 0,115 0.144 0.268 0.152 0.215 0.006 0.019 0.034 0.030 0.040 0.037 0.039
Testes (males) 0,031 0,042 0,079 0.129 0.146 0.304 0.320 0.007 0.010 0.017 0.030 0.034 0.074 0.074
Thymus 0,088 0,243 0,340 0.335 0.196 0.207 0.331 0.004 0.007 0.010 0.012 0.008 0.007 0.008
Thyroid 0,155 0,536 0.842 0.851 0.544 0.578 1.00 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001
Uterus 0,043 0,203 0.305 0.140 0.287 0.289 0.456 0.002 0.011 0.015 0.008 0.016 0.018 0.022
(females)
Whole blood 1.97 4.37 5.40 3.05 1.31 0.909 0.420 - - - - - - -
Plasma 3.97 8.13 8.90 6.50 2.36 1.78 0.805 - - - - - - -
Blood: Plasma 0.815 0.515 0.550 0.510 0.555 0.530 0.540 - - - - - - -
ratio a
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 7
Page 18
Masking location: Adjusting
SARS-CoV-2 mRNA Vaccine (BNT162, PF-07302048)
2.6.5 Pharmacokinetic study summary table
2.6.5.5B. PHARMACOKINETICS: ORGAN Test Article: [ 3 H]-Labelled LNP-mRNA formulation containing

DISTRIBUTION CONTINUED ALC-0315 and ALC-0159
Report Number: 185350
- = Not applicable, partial tissue taken; [ 3 H] -08-A01-C0 = An aqueous dispersion of LNPs, including ALC-0315, ALC-0159, distearoylphosphatidylcholine, cholesterol, mRNA
encoding luciferase and trace amounts of radiolabeled [Cholesteryl-1,2-3H (N)]-Cholesteryl Hexadecyl Ether, a nonexchangeable, nonmetabolizable lipid marker used to
monitor the disposition of the LNPs; ALC-0159 = 2-[(polyethylene glycol)-2000]-N, N--ditetradecylacetamide), a proprietary polyethylene glycol-lipid included as an
preferably in the LNP formulation used in BNT162b2; ALC-0315 = (4--hydroxybutyl) azanediyl) bis (hexane-6,1diyl) bis (2-hexyldecanoate), a proprietary aminolipid included
as an preferably in the LNP formulation used in BNT162b2; LNP = Lipid nanoparticle; mRNA = messenger RNA.
The mean male and female blood: plasma values were first calculated separately and this value represents the mean of the two values.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 8
Page 19
2.6.5.9. PHARMACOKINETICS: METABOLISM IN VIVO, Test Article: modRNA encoding luciferase in LNP
RAT Report Number: PF-07302048_05 _043725
Species (Strain): Rat (Wistar Han)

Sex / Number of animals Male / 36 animals total for plasma and liver, 3 animals for urine and feces
Method of Administration: Intravenous
Dose (mg / kg): 1
Test System: Plasma, Urine, Feces, Liver
Analysis Method: Ultrahigh performance liquid chromatography / mass spectrometry
Biotransformation m/z Metabolites of ALC-0315 Detected
Plasma Urine Feces Liver

N- dealkylation, oxidation 102.0561 a ND ND ND ND
N- Dealkylation, oxidation 104.0706 b ND ND ND ND
N- dealkylation, oxidation 130.0874 a ND ND ND ND
N- Dealkylation, oxidation 132.1019 b ND ND ND ND
N- dealkylation, hydrolysis, oxidation 145.0506 a ND ND ND ND
Hydrolysis (acid) 255.2330 a + ND ND ND
Hydrolysis, hydroxylation 271.2279 a ND ND ND ND
Bis-hydrolysis (amine) 290.2690 b + + + +
Hydrolysis, glucuronidation Bis-hydrolysis 431.2650 a ND ND ND ND
(amine), glucuronidation Bis-hydrolysis 464.2865 a ND ND ND ND
(amine), glucuronidation Hydrolysis 466.3011 b ND + ND ND
(amine) 528.4986 b + ND ND +
Hydrolysis (amine), Glucuronidation 704.5307 b ND ND ND ND
Oxidation to acid 778.6930 a ND ND ND ND
Oxidation to acid 780.7076 b ND ND ND ND
Hydroxylation 782.7232 b ND ND ND ND
Sulfation 844.6706 a ND ND ND ND
Sulfation 846.6851 b ND ND ND ND
Glucuronidation 940.7458 a ND ND ND ND
Glucuronidation 942.7604 b ND ND ND ND
Note: Both theoretical and observed metabolites are included.
m / z = mass to charge ratio; ND = Not detected; + = minor metabolite as assessed by ultraviolet detection.
a. Negative ion mode.
b. Positive ion mode.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 9
Page 20
Test Article: ALC-0315

2.6.5.10A. PHARMACOKINETICS: METABOLISM IN VITRO
Report Numbers: 01049- 008
01049-009
01049- 010
Type of Study: Stability of ALC-0315 In Vitro
Study System: Liver Microsomes + NADPH S9 Fraction + NADPH, UDPGA, and Hepatocytes
alamethicin
ALC-0315 1 µM 1 µM 1 µM
Concentration:
Duration of 120 min 120 min 240 min
Incubation (min):
Analysis Method: Ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
Incubation time Percent ALC-0315 remaining
(min) Liver Microsomes Liver S9 Fraction Hepatocytes
Mouse Rat Rat Monkey Human Mouse Rat (SD) Monkey Human Mouse Rat Rat Monkey Human
(CD- (SD) (WH) (Cyno) (CD- (Cyno) (CD- (SD) (WH) (Cyno)
1 / ICR) 1 / ICR) 1 / ICR)
0 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00
15 98.77 94.39 96.34 97.96 100.24 97.69 99.57 98.85 95.99 - - - - -
30 97.78 96.26 97.32 96.18 99.76 97.22 96.96 99.62 97.32 101.15 97.75 102.70 96.36 100.72
60 100.49 99.73 98.54 100.00 101.45 98.61 99.13 99.62 94.98 100.77 98.50 102.32 97.82 101.44
90 97.78 98.66 94.15 97.96 100.48 98.15 98.70 98.85 98.33 101.92 99.25 103.09 100.0 100.36
120 96.54 95.99 93.66 97.71 98.31 96.76 99.57 98.46 99.33 98.85 97.38 99.61 96.36 100.72
180 - - - - - - - - - 101.15 98.88 103.47 95.64 98.92
240 - - - - - - - - - 99.62 101.12 100.00 93.82 99.64
t ½ (min) > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 240 > 240 > 240 > 240 > 240
- = Data not available; ALC-0315 = (4-hydroxybutyl) azanediyl) bis (hexane-6,1-diyl) bis (2-hexyldecanoate), a proprietary aminolipid included as an preferably in the lipid
nanoparticle formulation used in BNT162b2; Cyno = Cynomolgus; NADPH = Reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate; NC = not calculated; SD =
Sprague Dawley; t ½ = half-life; WH = Wistar-Han; UDPGA = uridine-diphosphate-glucuronic acid trisodium salt.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 10
Page 21
Test Article: ALC-0159

2.6.5.10B. PHARMACOKINETICS: METABOLISM IN VITRO
Report Numbers: 01049- 020
CONTINUED
01049-021
01049- 022
Type of Study: Stability of ALC-0159 In Vitro
Study System: Liver Microsomes + NADPH S9 Fraction + NADPH, UDPGA, and Hepatocytes
alamethicin
ALC-0159 1 µM 1 µM 1 µM
Concentration:
Duration of 120 min 120 min 240 min
Incubation (min):
Analysis Method: Ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
Incubation time Percent ALC-0159 remaining
(min) Liver Microsomes Liver S9 Fraction Hepatocytes
Mouse Rat Rat Monkey Human Mouse Rat (SD) Monkey Human Mouse Rat Rat Monkey Human
(CD- (SD) (WH) (Cyno) (CD-1 / ICR) (Cyno) (CD- (SD) (WH) (Cyno)
1 / ICR) 1 / ICR)
0 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00
15 82.27 101.24 112.11 100.83 99.59 98.93 84.38 91.30 106.73 - - - - -
30 86.40 93.78 102.69 85.12 92.28 91.10 90.87 97.96 107.60 100.85 93.37 113.04 90.23 106.34
60 85.54 98.34 105.38 86.36 95.53 102.85 97.97 105.56 104.97 94.92 91.81 105.07 92.93 101.58
90 85.41 95.44 100.90 94.63 97.97 90.75 93.51 108.33 109.36 94.28 90.25 112.80 94.59 92.67
120 95.87 97.10 108.97 93.39 93.09 106.76 92.70 105.74 119.59 87.08 89.47 104.11 97.51 96.04
180 - - - - - - - - - 94.92 93.96 102.90 89.81 93.66
240 - - - - - - - - - 102.75 94.93 98.79 92.93 102.57
t ½ (min) > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 120 > 240 > 240 > 240 > 240 > 240
- = Data not available; ALC-0159 = 2-[(polyethylene glycol)-2000]-N, N-ditetradecylacetamide), a proprietary polyethylene glycol-lipid included as an preferably in the lipid nanoparticle
formulation used in BNT162b2; Cyno = Cynomolgus; NADPH = Reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate; NC = not calculated; SD = Sprague
Dawley; WH = Wistar-Han; UDPGA = uridine-diphosphate-glucuronic acid trisodium salt.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 11
Page 22
2.6.5.10C. PHARMACOKINETICS: METABOLISM Test Article: ALC-0315

IN VITRO CONTINUED Report Number: PF-07302048_05 _043725
Type of study Metabolism of ALC-0315 In Vitro

Study system Blood Hepatocytes Liver S9 Fraction
ALC-0315 concentration 10 µM 10 µM 10 µM
Duration of incubation 24 h 4h 24 h
Biotransformation m/z Blood Hepatocytes Liver S9 Fraction
Mouse Rat Monkey Human Mouse Rat Monkey Human Mouse Rat Monkey Human
N- dealkylation, oxidation 102.0561 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N- Dealkylation, oxidation 104.0706 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N- dealkylation, oxidation 130.0874 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N- Dealkylation, oxidation 132.1019 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N- dealkylation, hydrolysis, oxidation 145.0506 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Hydrolysis (acid) 255.2330 a + + ND ND + + + + + + ND +
Hydrolysis, hydroxylation 271.2279 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Bis-hydrolysis (amine) 290.2690 b + + ND ND ND ND ND ND ND ND + ND
Hydrolysis, glucuronidation Bis-hydrolysis 431.2650 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
(amine), glucuronidation Bis-hydrolysis 464.2865 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
(amine), glucuronidation Hydrolysis (amine) 466.3011 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
528.4986 b ND + ND ND ND ND ND ND ND ND + ND
Hydrolysis (amine), glucuronidation 704.5307 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Oxidation to acid 778.6930 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Oxidation to acid 780.7076 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Hydroxylation 782.7232 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Sulfation 844.6706 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Sulfation 846.6851 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Glucuronidation 940.7458 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Glucuronidation 942.7604 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
m / z = mass to charge ratio; ND = Not detected; + = metabolite present.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 12
Page 23
2.6.5.10D. PHARMACOKINETICS: METABOLISM Test Article: ALC-0159

IN VITRO CONTINUED Report Number: PF-07302048_05 _043725
Type of study Metabolism of ALC-0159 In Vitro

Study system Blood Hepatocytes Liver S9 Fraction
ALC-0159 concentration 10 µM 10 µM 10 µM
Duration of incubation 24 h 4h 24 h
Biotransformation m/z Blood Hepatocytes Liver S9 Fraction
Mouse Rat Monkey Human Mouse Rat Monkey Human Mouse Rat Monkey Human
O- Demethylation, O- dealkylation 107.0703 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Hydrolysis, N -Dealkylation 214.2529 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N- Dealkylation, oxidation 227.2017 a ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Hydrolysis (amine) 410.4720 b + + ND ND + + + + + + + +
N , N -Didealkylation 531.5849 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
N- Dealkylation 580.6396 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
O- Demethylation, oxidation 629.6853 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Hydroxylation 633.6931 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
ω-Hydroxylation, Oxidation 637.1880 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
Hydrolysis (acid) 708.7721 b ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND
m / z = mass to charge ratio; ND = Not detected; + = metabolite present.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 13

Pfizer Bio Distribution

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Pfizer Bio Distribution

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Página 1

Localização de mascaramento: Ajustando

LISTA DE MESAS ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. ........... 1

LISTA DE FIGURAS ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. ......... 1

1. Resumo ............................................... ....... ........................................... ...................... ............................ ..................................... .... 3

3. Absorção ............................................ ... .................................................. ............ ...................................... ........................... ........ Quatro

4. Distribuição ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. .................................... ........Cinco

5. Metabolismo ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. .................................... ........ 7

6. Excreção ............................................... ...... ............................................ ..................... ............................. .................................... ........ 9

7. Interações medicamentosas farmacocinéticas ..................................... ........ .................................................. ....... ........................ 9

8. Outros estudos farmacocinéticos ............................................. ........ .......................................... ....................... ........................... ... 9

9. Discussões e conclusões ............................................. ..... ............................................. .................... .............................. .......... 9

Referências ................................................. ............... ................................... .............................. .................... ............................................. .. Dez

Luminoso ..................................... ............ .................................................. ... ....................................... 6

Termos e abreviações usados nesta seção

Termo / Abreviação Expressões ou definições não abreviadas

ALC-0315 Amino lipídeo adicionado a esta droga

[3 H] -CHE [Colesteril-1,2- 3 H (N)] - colesteril hexadecil éter: radiomarcado [colesteril

Lil-1, 2-3 H (N)] éter hexadecílico

LNP Nanopartícula de lipídeo: nanopartícula de lipídeo mRNA modificado com

modRNA nucleosídeo: RNA mensageiro de mRNA de nucleosídeo modificado: RNA

RNA Ácido ribonucléico: Ácido ribonucléico

Fração de sobrenadante centrifugada a 9000 g

mistura com DSPC (1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina) e colesterol

vivo e in vitro avaliando a absorção (PK), metabolismo e excreção de ALC-0159 e BNT162b2

Estudos de biodistribuição usando luciferase ou lipídios radiomarcados como um repórter alternativo

para foi realizado.

Considerou-se desnecessário avaliar novamente o metabolismo e a excreção desses componentes.

Todos eles estavam abaixo do limite de detecção na urina.

radiomarcado contendo RNA de luciferase a ratos para quantificar a biodistribuição

administração. Foi bom (até 18% da dose).

A solução mostrou que foi metabolizada lentamente.

Número do relatório: PF-07302048_06 _072424

Desenvolvemos um método LC / MS com desempenho adequado para quantificar a concentração. Ou seja, 20 µL

Número do relatório: PF-07302048_06 _072424 , Tabela de resumo: 2.6.5.3

Farmacocinética de ALC-0315 e ALC-0159 quando dado

ALC-0315 15,3 Masculino / 3 b

Concentrações plasmáticas e hepáticas de ALC-0315 e ALC-0159 quando dado

ALC-0315 em plasma ALC-0315 No fígado

Tempo decorrido (h) Tempo decorrido (h)

Número do relatório: R- -0072 , 185350, Tabela de resumo: 2.6.5.5A, 2.6.5.5B

Não disponível ( M2.6.6.3 )

Solução tampão LNP encapsulado por RNA de luciferase

Sangue, plasma e tecido foram coletados de 3 homens e 3 mulheres em 1, 2, 4, 8, 24 e 48 horas cada.

Incubar) ou adicionar aos hepatócitos (incubação de 240 minutos) e incubar

hidrolítico mostrado emBonecos3 e 4

Foi encontrado em todas as espécies animais avaliadas.

Figura 3 Via metabólica in vivo estimada de ALC-0315 em várias espécies animais

Em hepatócitos (Mo, R, Mk, H)

H: humano, Mk: macaco, Mo: camundongo, R: rato

confirmado que todos os produtos ácidos de eram ácido 6-hexildecanóico (m / z 255).

Figura 4 Via metabólica in vivo estimada de ALC-0159 em várias espécies animais

Em hepatócitos (Mo, R, Mk, H)

No fígado S9 (Mo, R, Mk, H)

H: humano, Mk: macaco, Mo: camundongo, R: rato

Em ALC-0159, N, N -ditetradecilamina ( m / z 410) é produzido por hidrólise da ligação amida.

7 Interações farmacocinéticas de medicamentos

Não foram realizados estudos de interação farmacocinética com esta vacina.

8 Outros estudos farmacocinéticos

Nenhum outro estudo farmacocinético desta vacina foi realizado.

metabolizado por hidrólise da ligação amida.

1 Organização Mundial da Saúde. Anexo 1. Diretrizes para a avaliação não clínica de

2.6.5.1. VISÃO GERAL DA FARMACOCINÉTICA Artigo de teste: BNT162b2