Resumo dos Tópicos 19.
1 a
19.4 do Capítulo 19
19.1 Reações de transferência de elétrons em
mitocôndrias
A matriz mitocondrial, delimitada pela
membrana interna, contém o complexo da
piruvato-desidrogenase e as enzimas do ciclo
do ácido cítrico, a via de β-oxidação de ácidos
graxos e as vias de oxidação de aminoácidos –
todas as vias de oxidação de combustível,
exceto a glicólise, que ocorre no citosol. A
permeabilidade seletiva da membrana interna
segrega os intermediários e as enzimas das
vias metabólicas citosólicas daqueles dos
processos metabólicos que ocorrem na matriz.
No entanto, transportadores específicos
carregam piruvato, ácidos graxos e de coenzima Q, ou simplesmente Q) é uma
aminoácidos ou seus a-cetoácidos derivados
para dentro da matriz, para acesso à
maquinaria do ciclo do ácido cítrico. ADP e Pi
são especificamente transportados para dentro
da matriz quando ATP recém-sintetizado é
transportado para fora.
>> Os elétrons passam por uma série de
carregadores ligados à membrana
A cadeia respiratória mitocondrial consiste em
uma série de carregadores que agem
sequencialmente, sendo a maioria deles
proteínas integrais com grupos prostéticos
capazes de aceitar e doar um ou dois elétrons.
Ocorrem três tipos de transferência de elétrons
na fosforilação oxidativa: (1) transferência direta
de elétrons, como na redução de Fe3+ a Fe2+, (2)
transferência na forma de um átomo de
hidrogênio (H+ + e-), e (3) transferência como um
íon hidreto (:H-), que tem dois elétrons. O termo
equivalente redutor é usado para designar um
único elétron equivalente transferido em uma
reação de oxidação-redução. Além do NAD e
das flavoproteínas, outros três tipos de
moléculas carregadoras de elétrons funcionam
na cadeia respiratória: uma quinona hidrofóbica
(ubiquinona) e dois tipos diferentes de proteínas
que contêm ferro (citocromos e proteínas
ferro-enxofre). A ubiquinona (também chamada
benzoquinona solúvel em lipídeos, com uma
longa cadeia lateral isoprenoide. Os compostos
intimamente relacionados, plastoquinona (de
cloroplastos vegetais) e menaquinona (de
bactérias) desempenham papéis análogos
àquele da ubiquinona, carregando elétrons em
cadeias de transferência de elétrons associadas
a membranas. A ubiquinona pode aceitar um
elétron para se tornar o radical semiquinona (*
QH) ou dois elétrons para formar ubiquinol (QH2)
e, como os carregadores flavoproteínas, atuar na
junção entre um doador de dois elétrons e um
aceptor de um elétron.
Os citocromos são proteínas com absorção
caracteristicamente forte de luz visível, devido
aos seus grupos prostéticos heme contendo
ferro. As mitocôndrias têm três classes de
citocromos, designados a, b e c, distinguidos
por diferenças em seus espectros de absorção
de luz. Cada tipo de citocromo em seu estado
reduzido (Fe2+ ) tem três bandas de absorção
na faixa visível. A banda de comprimento de
onda mais longo é próxima de 600 nm em
citocromos tipo a, próxima de 560 nm no tipo b
e perto de 550 nm no tipo c. Para distinguir
citocromos intimamente relacionados dentro de
um determinado tipo, a absorção máxima exata
algumas vezes é utilizada nos nomes, como no
citocromo b562.
Em proteínas ferro-enxofre, o ferro está
ausente no heme, mas encontra-se em
associação com átomos de enxofre
inorgânico, ou com átomos de enxofre dos
resíduos de Cys na proteína, ou com ambos.
Esses centros de ferro-enxofre (Fe-S) variam
de estruturas simples, com um único átomo
de Fe coordenado com quatro grupos
Cys-SH, a centros Fe-S mais complexos, com
dois ou quatro átomos de Fe. Proteínas ferro-
-enxofre de Rieske (denominadas em
homenagem a seu descobridor, John S.
Rieske) são uma variação nesse tema, onde
um átomo de Fe está combinado com dois
resíduos de His em vez de com resíduos de
Cys. Todas as proteínas ferro-enxofre
participam de transferências de um elétron,
nas quais um átomo de ferro do aglomerado
ferro-enxofre é oxidado ou reduzido.
>> Os carregadores de elétrons atuam em
complexos multienzimáticos
Complexo I: NADH à ubiquinona
O complexo I, também chamado de NADH:
ubiquinona-oxidorredutase ou
NADH-desidrogenase, é uma enzima grande,
composta por 42 cadeias diferentes de
polipeptídeos, incluindo uma flavoproteína
contendo FMN e pelo menos seis centros de
ferro-enxofre. O complexo I tem formato de L,
com um braço do L na membrana e o outro se
estendendo para a matriz. O complexo I catalisa
dois processos simultâneos e obrigatoriamente
acoplados: (1) a transferência exergônica para a
ubiquinona de um íon hidreto do NADH e de um
próton da matriz, expressa por
NADH + H+ + Q → NAD+ + QH2
e (2) a transferência endergônica de quatro
prótons da matriz para o espaço intermembrana.
O complexo I é, portanto, um bombeador de
prótons que utiliza a energia da transferência de
elétrons, e a reação que ele catalisa é vetorial:
ela move prótons em uma direção específica de
um local (a matriz, que se torna negativamente
carregada com a saída dos prótons) a outro (o
espaço intermembrana, que se torna
positivamente carregado).
Complexo II: succinato a ubiquinona
Embora menor e mais simples do que o
complexo I, ele contém cinco grupos prostéticos
de dois tipos e quatro subunidades proteicas
diferentes. As subunidades C e D são proteínas
integrais de membrana, cada uma com três
hélices transmembrana. Elas contêm um grupo
 heme, heme b, e um sítio de ligação para a
ubiquinona, o aceptor final de elétrons na reação
catalisada pelo complexo II. As subunidades A e
B se estendem para a matriz; elas contêm três
centros 2Fe-2S, FAD ligado e um sítio de ligação
para o substrato, o succinato. A via de
transferência de elétrons do sítio de ligação do
succinato a FAD e, então, pelos centros Fe-S
rumo ao sítio de ligação de Q, tem mais de 40 Å
de comprimento, mas nenhuma das distâncias
individuais de transferência de elétrons excede
cerca de 11 Å – distância razoável para uma
transferência rápida de elétrons.

Complexo IV: citocromo c para O2

Na etapa final da cadeia respiratória, o complexo
IV, também chamado de citocromo-oxidase,
carrega elétrons do citocromo c para o oxigênio
molecular, reduzindo-o a H2O. O complexo IV é
uma enzima grande (13 subunidades; Mr
204.000) da membrana mitocondrial interna. As
bactérias contêm uma forma bem mais simples,
com apenas três ou quatro subunidades, mas
ainda capaz de catalisar tanto a transferência de
elétrons quanto o bombeamento de prótons. A
comparação dos complexos mitocondrial e
Complexo III: ubiquinona para citocromo c
bacteriano sugere que três subunidades são
O complexo III, também chamado de complexo essenciais para a função.
de citocromo bc1 ou ubiquinona: citocromo
c-oxidorredutase, acopla a transferência de
elétrons do ubiquinol (QH2) para o citocromo c
com o transporte vetorial de prótons da matriz
para o espaço intermembrana. As
determinações da estrutura completa desse
enorme complexo e do complexo IV (a seguir)
por cristalografia por raios X, realizada entre
1995 e 1998, foram marcos no estudo da
transferência mitocondrial de elétrons,
fornecendo a base estrutural para integrar as
diversas observações bioquímicas das funções
dos complexos respiratórios.
A unidade funcional do complexo III é um
dímero, com as duas unidades monoméricas
de citocromo b circundando uma “caverna” no
>> A energia da transferência de elétrons
meio da membrana, na qual a ubiquinona fica
é eficazmente conservada em um gradiente
livre para se mover do lado da matriz da
de prótons
membrana (sítio QN em um monômero) para o
A transferência de dois elétrons do NADH, por
espaço intermembrana (sítio QP do outro
monômero), à medida que ela lança elétrons e meio da cadeia respiratória, para o oxigênio
prótons através da membrana mitocondrial molecular pode ser escrita como
interna. NADH + H+ + ½ O2 → NAD+ + H2O
Esta reação resultante é altamente exergônica.
Para o par redox NAD+/NADH, E’° é -0,320 V,
e, para o par O2/H2O, E’° é 0,816 V. O ΔE’°
para esta reação é, portanto, 1,14 V, e a
variação na energia livre padrão é
ΔG’° = -n ΔE’°
= -2(96,5 kJ/V x mol) (1,14V)
= -220kJ/mol (de NADH)
A maior parte dessa energia é usada para
bombear prótons para fora da matriz. Para
cada par de elétrons transferido para o O2,
quatro prótons são bombeados para fora pelo
complexo I, quatro pelo complexo III e dois pelo
complexo IV. A equação vetorial para o
processo é, portanto,
NADH + 11HN+ + ½ O2→ NAD+ + 10HP+ + H20
>> Espécies reativas de oxigênio são
geradas durante a fosforilação oxidativa
Espécies reativas de oxigênio podem provocar
sérios danos, reagindo com enzimas, lipídeos
de membranas e ácidos nucleicos e os
danificando. Em mitocôndrias que respiram
ativamente, de 0,1 até 4% do oxigênio utilizado
na respiração formam • O-2 – mais do que
suficiente para ter efeitos letais, a não ser que
o radical livre seja rapidamente descartado.
Fatores que diminuem a velocidade de fluxo de
elétrons pela cadeia respiratória aumentam a
formação de superóxido, talvez por
prolongarem o tempo de vida do • O-2 gerado
no ciclo Q. A formação de ERO é favorecida
quando duas condições são satisfeitas: (a) as
mitocôndrias não estão produzindo ATP (por
falta de ADP ou de O2) e, portanto, têm grande
força próton-motriz e elevada razão QH2/Q e
(b) e há uma alta razão NADH/NAD+ na matriz.
Nessas situações, a mitocôndria está sob
estresse oxidativo – há mais elétrons
disponíveis para entrar na cadeia respiratória
do que aquele número que pode
imediatamente atravessar até o oxigênio.
Quando o suprimento de doadores de elétrons
(NADH) é equiparado àquele de aceptores de
elétrons, existe menos estresse oxidativo e a
produção de ERO é muito reduzida. Embora a
superprodução de ERO seja obviamente
prejudicial, baixos níveis de ERO podem ser
usados pela célula como um sinal que reflete o
suprimento insuficiente de oxigênio (hipoxia),
desencadeando ajustes metabólicos.
19.2 Síntese de ATP
De que forma um gradiente de concentração de
prótons se transforma em ATP? Foi visto que a
transferência de elétrons libera e a força
próton-motriz conserva energia livre mais do que
suficiente (cerca de 200 kJ) por “mol” de par de
elétrons para impulsionar a formação de um mol
de ATP, que requer cerca de 50 kJ. Portanto, a
fosforilação oxidativa mitocondrial não impõe
nenhum problema termodinâmico. Mas qual é o
mecanismo químico que acopla o fluxo de
prótons com a fosforilação? O modelo
quimiosmótico, proposto por Peter Mitchell, é o
paradigma para esse mecanismo.
De acordo com o modelo, a energia
eletroquímica inerente à diferença de
concentração de prótons e à separação de
cargas através da membrana mitocondrial
interna – a força próton-motriz – impulsiona a
síntese de ATP, à medida que os prótons fluem
passivamente de volta à matriz, por meio de
um poro para prótons na ATP-sintase.
Quando mitocôndrias isoladas são suspensas
em um tampão contendo ADP, Pi e um
substrato oxidável como succinato, três
processos facilmente mensuráveis ocorrem: (1)
o substrato é oxidado (succinato produz
fumarato), (2) O2 é consumido e (3) ATP é
sintetizado. O consumo de oxigênio e a síntese
de ATP dependem da presença de um
substrato oxidável (nesse caso, o succinato),
assim como de ADP e Pi. Uma vez que a
energia da oxidação de substratos permite a
síntese de ATP nas mitocôndrias, seria
esperado que os inibidores da passagem de
elétrons para o O2 (como cianeto, monóxido de
carbono e antimicina A) bloqueassem a síntese
de ATP. Mais surpreendente é o fato de que o
contrário também é verdadeiro: a inibição da
síntese de ATP bloqueia a transferência de
elétrons em mitocôndrias intactas. Esse
 acoplamento obrigatório pode ser demonstrado
em mitocôndrias isoladas, fornecendo-se O2 e
substratos oxidáveis, mas não ADP. Nessas
condições, nenhuma síntese de ATP pode
ocorrer, e a transferência de elétrons para o O2
não prossegue.
>>A ATP-sintase tem dois domínios
funcionais, Fo e F1
A ATP-sintase, também chamada de complexo
V, tem dois componentes distintos: F1, proteína
periférica de membrana, e Fo (o indicando
sensível à oligomicina), integral à membrana.
F1, o primeiro fator reconhecido como essencial
para a fosforilação oxidativa, foi identificado e
purificado por Efraim Racker e colaboradores
no começo da década de 1960.
Quando F1 é gentilmente extraído, as vesículas
“desnudas” ainda contêm cadeias respiratórias
intactas e a porção Fo da ATP-sintase. As
vesículas podem catalisar a transferência de
elétrons do NADH ao O2, mas não podem
produzir um gradiente de prótons: Fo tem um
poro para prótons por meio do qual os prótons
vazam tão rapidamente quanto são bombeados
pela transferência de elétrons, e sem um
gradiente de prótons as vesículas desprovidas
de F1 não podem produzir ATP. O F1 isolado
catalisa a hidrólise de ATP (o reverso da
síntese), sendo, portanto, originalmente
chamado de F1-ATPase. Quando F1 purificado
é adicionado de volta às vesículas, ele se
associa novamente com Fo, fechando seu poro
de prótons e restaurando a capacidade da
membrana de acoplar a transferência de
elétrons à síntese de ATP.
19.3 Regulação da fosforilação oxidativa
A fosforilação oxidativa produz a maior parte do
ATP fabricado em células aeróbias. A oxidação
completa de uma molécula de glicose a CO2
produz 30 ou 32 ATP. Em comparação, a
glicólise sob condições anaeróbias
(fermentação láctica) gera apenas dois ATP por
glicose. Claramente, a evolução da fosforilação
oxidativa proporcionou um grande aumento na
eficiência energética do catabolismo. A
oxidação completa até CO2 do derivado do
palmitato (16:0) ligado à coenzima A, que
também ocorre na matriz mitocondrial, produz
108 ATP por palmitoil-CoA. Um cálculo similar
pode ser feito para a produção de ATP a partir
da oxidação de cada um dos aminoácidos.
Portanto, as vias oxidativas aeróbias que
resultam na transferência de elétrons ao O2
acompanhada da fosforilação oxidativa são
responsáveis pela grande maioria do ATP
produzido no catabolismo, de forma que é
absolutamente essencial a regulação da
produção de ATP pela fosforilação oxidativa,
para se ajustar às necessidades celulares
flutuantes da demanda por ATP.
>> A hipoxia leva à produção de ERO e a
várias respostas adaptativas
Em células hipóxicas, existe um desequilíbrio
entre a chegada de elétrons a partir da oxidação
de combustíveis celulares na matriz mitocondrial e
a transferência de elétrons para o oxigênio
molecular, levando a uma maior formação de
espécies reativas de oxigênio. Além do sistema
da glutationa-peroxidase, as células têm outras
duas linhas de defesa contra as ERO. Uma é a
regulação da piruvato-desidrogenase (PDH), a
enzima que fornece acetil-CoA ao ciclo do ácido
cítrico. A segunda maneira de impedir a formação
de ERO é a substituição de uma subunidade do
complexo IV, conhecida como COX4-1, por outra
subunidade, COX4-2, que é melhor ajustada a
condições hipóxicas. Com COX4-1, as
propriedades catalíticas do complexo IV são
ótimas para a respiração em concentrações
normais de oxigênio; com COX4-2, o complexo IV
é otimizado para operar sob condições hipóxicas.
>> As vias produtoras de ATP são
coordenadamente reguladas
As concentrações relativas de ATP e ADP
controlam não somente as taxas de transferência
de elétrons e a fosforilação oxidativa, mas
também as velocidades do ciclo do ácido cítrico,
da oxidação do piruvato e da glicólise. Sempre
que o consumo de ATP aumenta, as velocidades
da cadeia transportadora de elétrons e da
fosforilação oxidativa aumentam.
Simultaneamente, a velocidade de oxidação do
piruvato pelo ciclo do ácido cítrico aumenta,
elevando o fluxo de elétrons na cadeia
respiratória. Esses eventos podem, por sua vez,
evocar um aumento na velocidade da glicólise,
aumentando a velocidade de formação de
piruvato. Quando a conversão de ADP em ATP
reduz a concentração de ADP, o controle pelo
aceptor diminui a transferência de elétrons e,
assim, a fosforilação oxidativa.