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Artigo publicado: 22 de junho de 2022

A disseminação metastática do câncer de mama acelera durante

o sono

Zoi Diamantopoulou, Francesc Castro-Giner, Fabienne Dominique Schwab, Christiane

Foerster, Massimo Saini, Selina Budinjas, Karin Strittmatter, Ilona Krol, Bettina Seifert,

Viola Heinzelmann-Schwarz, Christian Kurzeder, Christoph Rochlitz, Marcus Vetter,

Walter Paul Weber & Nicola Aceto

Natureza 607, 156-162 (2022)

46k Acessos 4 Citações 2359 Métricas Altmétricas

Abstrato

A disseminação metastática do câncer é alcançada pela disseminação

hematogênica de células tumorais circulantes (CTCs). Geralmente, no entanto, a dinâmica

temporal que dita a geração de CTCs competentes para metástases é amplamente

descaracterizada, e muitas vezes assume-se que os CTCs são constantemente eliminados

de tumores em crescimento ou são eliminados como consequência de

1 observamos um padrão surpreendente e inesperado da dinâmica
insultos mecânicos. Aqui

de geração de CTC em pacientes com câncer de mama e modelos de camundongos,

destacando que a maioria dos eventos espontâneos de intravasamento de CTC ocorrem

durante o sono. Além disso, demonstramos que os CTCs em fase de repouso são altamente

propensos à metástase, enquanto os CTCs gerados durante a fase ativa são desprovidos de

capacidade metastática. Mecanisticamente, análise de sequenciamento de RNA de célula única de

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CTCs revela uma regulação positiva marcada de genes mitóticos exclusivamente

durante a fase de repouso em pacientes e modelos de camundongos, permitindo a
proficiência em metástases. Sistemicamente, descobrimos que os principais
hormônios do ritmo circadiano, como melatonina, testosterona e glicocorticóides,
ditam a dinâmica de geração de CTC e, como consequência, a insulina promove
diretamente a proliferação de células tumorais in vivo, mas de maneira dependente do
tempo. Assim, a geração espontânea de CTCs com alta propensão à metástase não
ocorre continuamente, mas está concentrada na fase de repouso do indivíduo afetado,
fornecendo uma nova justificativa para interrogação e tratamento controlados por
tempo de câncer propenso a metástases.

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Disponibilidade de dados

Os dados de RNA-seq foram depositados no Gene Expression Omnibus (GEO,

National Center for Biotechnology Information; número de acesso GSE180097).
Dados de transcriptômica processados, grandes conjuntos de dados e outros
arquivos necessários para reprodutibilidade estão disponíveis no repositório de
dados Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.6358987). Os arquivos do genoma de
referência humano (GRCh38), genoma de referência do camundongo (GRCm38),
anotação do gene humano (versão 35) e anotação do gene do camundongo (versão
M25) foram baixados do GENCODE (https://www.gencodegenes.org). Os conjuntos de
genes foram baixados do Molecular Signatures Database (MsigDB, v7.4, http://
www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/collections.jsp). Todos os dados são disponibilizados
pelo autor correspondente mediante solicitação razoável. Os dados de origem são
fornecidos com este artigo.

Disponibilidade do código

O código relacionado à análise de dados deste estudo foi depositado no GitHub

(https://github.com/TheAcetoLab/diamantopoulou-ctc-dynamics) e arquivado em
Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.6484917) . Descrições de como reproduzir os
fluxos de trabalho de análise (mostrando códigos e números de versão do pacote R)
e as figuras apresentadas neste artigo estão disponíveis em https://theacetolab.github.io/
diamantopoulou-ctc-dynamics.
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Referências

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Reconhecimentos
Agradecemos a todos os pacientes que doaram sangue para nosso estudo, bem como aos

médicos envolvidos e enfermeiros do estudo. Agradecemos aos membros e colaboradores do

laboratório de NA pelos comentários e discussões científicas. Agradecemos a J.

Massagué (Memorial Sloan Kettering Cancer Center) pela doação de mama LM2

células cancerosas; R. Anderson (Olivia Newton-John Cancer Research Institute) para

doação de células de câncer de mama de camundongo E0771.lmb; o Genomics Facility

Basel (D-BSSE da ETH Zurich) para geração de bibliotecas e sequenciamento de próxima

geração; P. Lorentz (Universidade de Basel) pelo apoio à microscopia; A. Offinger

(Universidade de Basel) e sua equipe, bem como a equipe EPIC (ETH Zurich) pelo apoio

no trabalho com animais; M. Sonderegger-Stalder e K. Degener (Hospital Cantonal Basel-

Land) pelo apoio com amostras clínicas.

A pesquisa no laboratório da NA é apoiada pelo European Research Council (101001652),

a área de foco estratégico de Saúde Personalizada e Tecnologias Relacionadas da ETH

Zurich (PHRT-541), o Future and Emerging

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Programa de Tecnologias da Comissão Europeia (801159-B2B), o

Swiss National Science Foundation (PP00P3_190077), o Swiss Cancer

League (KLS-4834-08-2019), a Basel Cancer League (KLbB-4763-02-2019), os dois cantões

da Basileia através da ETH Zürich (PMB-01-16), a Universidade

da Basileia e da ETH Zurique. ZD é um H2020 Marie Skÿodowska-Curie

Ações (101028567) Fellow.

Informação sobre o autor

Autores e Afiliações

Departamento de Biologia, Instituto de Ciências da Saúde Molecular, Instituto Federal Suíço de Tecnologia (ETH) Zurique, Zurique,
Suíça

Zoi Diamantopoulou, Francesc Castro-Giner, Massimo Saini, Selina Budinjas, Karin Strittmatter, Ilona Krol & Nicola Aceto

Departamento de Biomedicina, Universidade de Basel, Basel, Suíça

Fabienne Dominique Schwab

Departamento de Oncologia Ginecológica, Hospital Universitário Basel, Basel, Suíça

Fabienne Dominique Schwab, Viola Heinzelmann-Schwarz e Christian Kurzeder

Breast Care Center, University Hospital Basel, Basel, Suíça

Christiane Foerster, Christian Kurzeder e Walter Paul Weber

Departamento de Mama, Abdômen e Pelve, University Hospital Basel e University of Basel, Basel, Suíça
Christiane Foerster & Walter Paul Weber

Departamento de Hematologia e Oncologia, Hospital Cantonal Basel-Land, Liestal, Suíça

Bettina Seifert e Marcus Vetter

Departamento de Oncologia Médica, University Hospital Basel, Basel, Suíça

Christopher Rochlitz

Contribuições

ZD e NA desenharam o estudo, realizaram os experimentos e redigiram o manuscrito. FC-G.

realizou a análise computacional. MS gerou as células 4T1-CD90.1 e realizou a análise das

células imunes. SB realizou coloração de imunofluorescência. KS contribuiu para experimentos

com camundongos e tecidos de camundongos processados. Amostras de sangue processadas

pela IK. FDS, CF, BS, MV,

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CR, WPW, CK e VH-S. forneceu amostras de pacientes. Todos os autores leram,

comentaram e aprovaram o manuscrito em sua forma final.

autor correspondente

Correspondência para Nicola Aceto.

Declarações de ética

Interesses competitivos

NA é cofundador e membro do conselho da PAGE Therapeutics AG, Suíça, listado

como inventor em pedidos de patente relacionados a CTCs, consultor pago para o

Swiss Re Group, Bracco Group, Tethis SpA, Thermo Fisher e ANGLE plc , e acionista

da Novartis. CR é co-fundador da PAGE Therapeutics AG, Suíça. Todos os outros

autores declaram não

interesses competitivos.

Revisão por pares

Informações de revisão por pares

A Nature agradece a John Hogenesch, Sunitha Nagrath e outros revisores anônimos por

sua contribuição para a revisão por pares deste trabalho.

Informação adicional

Nota do editor Springer Nature permanece neutro em relação a

reivindicações jurisdicionais em mapas publicados e afiliações institucionais.

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Figuras e tabelas de dados estendidas

Dados estendidos Fig. 1 Tamanho do tumor e taxas de intravasamento de CTCs

durante as diferentes fases do ritmo circadiano. a, gráficos de pizza exibindo a

porcentagem média do total de CTCs, CTCs únicos, clusters CTC e clusters CTC-WBC

detectados durante a fase de repouso ou ativa em pacientes com câncer de mama (n = 30),

em camundongos NSG-LM2 (n = 6), Camundongos NSG-CDX-BR16 (n = 6), camundongos

NSG-4T1 (n = 4) ou camundongos BALB/c-4T1 (n = 6). b, Tempo cinético

análise mostrando contagens médias de CTC no NSG-LM2 (n = 3), NSG-4T1 (n = 3)

e BALB/c-4T1 (ZT0, ZT4, ZT20 n = 3; ZT12, ZT16 n = 4) camundongo com câncer de mama

modelos em um período de 24 horas. Os dados são apresentados como média ± sem c,

Gráficos mostrando o tamanho dos tumores primários dissecados em diferentes momentos de

camundongos NSG-CDX-BR16 (ZT0, ZT4, ZT16, ZT20 n = 4; ZT12 n = 3), NSG-LM2

(n = 3), camundongos NSG-4T1 (n = 3) e BALB/c-4T1 (ZT0, ZT4, ZT20 n = 3; ZT12,

ZT16 n = 4) camundongos. Os dados são apresentados como média ± sem d, imagens

de bioluminescência representativas de pulmões de camundongos NSG-CDX-BR16, NSG-

LM2 e NSG 4T1 tomadas em diferentes pontos de tempo (ZT0, ZT4, ZT12, ZT16, ZT20) (n = 3).

e, Gráficos de caixa mostrando a distribuição do número de CTCs únicos (P = 0,0043),

Agrupamentos CTC (P = 0,0087) e agrupamentos CTC-WBC (P = 0,0130) coletados em ZT4

ou ZT16 no modelo de camundongo NSG-CDX-BR16 (n = 6). Linhas centrais na caixa

representar a mediana; os limites das caixas representam o primeiro e o terceiro quartil; extremos

das linhas de bigode representam os valores mínimos e máximos observados.

Os dados são apresentados como média ± sem; * P < 0,05, ** P < 0,01 pelo teste de Mann

Whitney bilateral. f, Gráficos mostrando o tamanho dos tumores primários de NSG-CDX

camundongos BR16 (n = 6), NSG-LM2 (n = 6), NSG-4T1 (n = 4) e BALB/c-4T1 (n = 5)

dissecado em ZT4 ou ZT16. Os dados são apresentados como média ± sem g. Gráficos

mostrando o aumento médio da mudança de dobra das contagens de CTC isoladas em ZT4 ou

ZT16 de camundongos NSG-LM2, NSG-CDX-BR16, NSG-4T1 e BALB/c-4T1. h, gráficos de pizza

exibindo a porcentagem média de CTCs únicos, clusters CTC e clusters CTC-WBC detectados

durante a fase de repouso ou ativa em pacientes (n = 7), NSG-LM2

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(n = 6), camundongos NSG-CDX-BR16 (n = 6), NSG-4T1 (n = 4) ou BALB/c-4T1 (n = 6). Para todos os

painéis, n representa o número de camundongos biologicamente independentes

Dados de origem

Dados estendidos Fig. 2 A abundância de CTCs durante a fase de repouso é devido ao aumento do
intravasamento.

a, Gráficos de caixa mostrando a distribuição do número de CTCs coletados em ZT4 ou ZT16 via punção

cardíaca ou vaso de drenagem de tumor (TDV) no modelo de camundongo com câncer de mama NSG-CDX

BR16 (n = 4; P = 0,0286 para todos). b, Imagens de bioluminescência representativas de pulmões de

camundongos NSG-CDX-BR16 tomadas em diferentes pontos de tempo (ZT0, ZT4, ZT12, ZT16, ZT20) durante

um período de 24 horas (n = 4). c, Gráficos de caixa mostrando a distribuição do número de CTCs coletados

em ZT4 ou ZT16 via punção cardíaca ou TDV no modelo de camundongo com câncer de mama NSG-LM2 (n

= 4; P = 0,0286 para todos). d, Imagens de bioluminescência representativas de pulmões de camundongos

NSG-LM2 tomadas em ZT4 ou ZT16 (n = 4). e, Gráfico mostrando o tamanho dos tumores primários

dissecados de camundongos NSG-LM2 em ZT4 ou ZT16 (n = 4). f, Análise cinética de tempo mostrando

diferenças de mudança de dobra no número de células LM2

detectados na circulação após sua inoculação intravascular em diferentes

pontos de tempo do ritmo circadiano (ZT0, ZT4, ZT12, ZT16) (n = 3 exceto ZT4 onde n = 4). g, Gráficos

mostrando a porcentagem de depuração de CTC em diferentes pontos de tempo do ritmo circadiano (ZT0,

ZT4, ZT12, ZT16) 5 min após a inoculação intravascular de células LM2 (n = 3, exceto ZT4, onde n = 4).

Para os painéis “e”, “f” e “g”, os dados são apresentados como média ± sem Para os painéis 'a' e “c”, as

linhas centrais do quadro representam a mediana; os limites das caixas representam o primeiro e o terceiro

quartil; extremos das linhas de bigode representam os valores mínimos e máximos observados. * P < 0,05

pelo teste de Mann-Whitney bilateral. Para todos os painéis, n representa o número de camundongos

biologicamente independentes

Dados de origem

Dados estendidos Fig. 3 O ritmo circadiano e a melatonina regulam o

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intravasamento de CTCs.

a, Ilustração do desenho experimental para “b” e “e”. b, Gráficos de caixa mostrando o número médio de

CTCs isolados de NSG-LM2 (n = 5; CTCs únicos P = 0,0079, agrupamentos CTC P = 0,0079, agrupamentos

CTC-WBC P = 0,0317) e NSG-4T1 (n = 4; P = 0,0286 para todos) camundongos que foram mantidos em

condições de ciclo de luz padrão (12:12, LD) ou com jet-lag. A coleta de sangue foi realizada no ZT4. c,

Gráficos mostrando o decréscimo médio da mudança de dobra das contagens de CTC após o jet lag em

camundongos NSG-LM2 (n = 5) e NSG-4T1 (n = 4) mostrados em "b". d, Gráficos mostrando o tamanho dos

tumores primários dissecados de camundongos NSG-LM2 (n = 5) e NSG-4T1 (n = 4) mostrados em "b". Os

dados são apresentados como média ± sem e, gráficos de caixa mostrando a distribuição do número de CTCs

isolados de camundongos NSG-LM2 que estavam sendo afetados por jet lag (esquerda) ou mantidos em

condições de ciclo de luz padrão (direita) e foram tratados apenas com melatonina ou em combinação com o

seu antagonista luzindol. A coleta de sangue foi realizada em ZT4 ou ZT0. (n = 4, exceto controle e

camundongos tratados com melatonina em combinação com luzindol em ZT4 onde n = 5; ZT4 P = 0,0159

exceto aglomerados CTC-WBC tratados com

melatonina em combinação com lunzindol onde P = 0,0317; ZT0 P = 0,0286

exceto CTCs únicos tratados com melatonina em combinação com lunzindol onde P = 0,0091). f, Gráficos

mostrando o tamanho dos tumores primários dissecados de camundongos mostrados em “e”. Os dados são

apresentados como média ± sem g, imagens representativas de bioluminescência de pulmões de camundongos

NSG-LM2 que foram mantidos em condições de ciclo de luz padrão (12:12, LD) e foram tratados com

melatonina sozinha ou em combinação com luzindol. Para os painéis 'b' e “e”, as linhas centrais da caixa

representam a mediana; os limites das caixas representam o primeiro e o terceiro quartil; extremos das linhas

de bigode representam os valores mínimos e máximos observados. * P < 0,05, ** P < 0,01 pelo teste de Mann-

Whitney bilateral. Para todos os painéis, n representa o número de camundongos biologicamente independentes

Dados de origem
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Dados estendidos Fig. 4 A exposição à luz afeta o intravasamento de CTC. a, Análise

cinética de tempo mostrando contagens médias de CTC (CTCs únicos, agrupamentos CTC e agrupamentos

CTC-WBC) nos camundongos NSG-LM2 mantidos em ciclos claro-escuro (LD) alterados (LD 14:10, n = 3; LD

10: 10, n = 4, exceto ZT10 e ZT20 onde n = 3; LD 14:14, n = 4, exceto ZT14 onde n = 3). b, Gráficos de

pontos de dispersão mostrando a distribuição do número de CTCs únicos, agrupamentos CTC e agrupamentos

CTC-WBC isolados de camundongos NSG-LM2 que foram mantidos em ciclos de luz alterados (LD 14:10, n

= 3; LD 10:10, n = 4; LD 14:14, n = 4; P = 0,0286 para todos). * P < 0,05 pelo teste de Mann-Whitney bilateral.

c, Gráficos mostrando o tamanho dos tumores primários dissecados de camundongos NSG-LM2 mostrados

em "a". d, Imagens representativas de bioluminescência de pulmões de camundongos NSG-LM2 mostradas

em "a". e, Gráficos mostrando a análise cinética de tempo das contagens de CTC (CTCs simples, agrupamentos

de CTC e

Agrupamentos CTC-WBC) no BL/6-EO771.lmb (ZT4, ZT12, ZT16 n = 4; ZT0 n = 3)

ÿ/
ÿ e BL/ 6- Bmal1 -EO771.lmb (n = 3) modelos de camundongos com câncer de mama coletados via vaso de

drenagem tumoral (TDV) durante um período de 24 horas. f, Gráficos mostrando o tamanho ÿ/ dos tumores

primários dissecados de BL/6-EO771.lmb e BL/ 6-Bmal1

ÿ

Camundongos -EO771.lmb mostrados na Fig. 1d. g, Actogramas plotados mostrando a corrida

ÿ/ ÿ
atividade dos camundongos BL/6-EO771.lmb e BL/ 6- Bmal1-EO771.lmb com áreas escuras e claras

representando baixa e alta atividade, respectivamente. Para todos os painéis, os dados são apresentados

como média ± sem n representa o número de camundongos biologicamente independentes

Dados de origem

Dados estendidos Fig. 5 CTCs em fase de repouso têm potencial metastático aumentado. a, Imagens

de imunofluorescência representativas para Pan-CK em pulmões de camundongos injetados com CTCs

únicos, aglomerados de CTC e aglomerados de CTC-WBC coletados em ZT4 ou ZT16 de camundongos NSG-

LM2 (ZT4 n = 3, exceto aglomerados de CTC-WBC n = 2; ZT16 n = 4 para todos). Barra de escala = 100 ÿm.

b, Gráfico mostrando o tamanho das lesões metastáticas detectadas nos pulmões de camundongos injetados

com CTCs únicos,

Machine Translated by Google

Clusters CTC ou clusters CTC-WBC coletados em ZT4 ou ZT16 de camundongos NSG-LM2

(ZT4 n = 3, exceto clusters CTC-WBC n = 2; ZT16 n = 4 para todos; P = 0,0007). c, Imagens de

bioluminescência representativas de ossos de camundongos injetados com CTCs únicos, aglomerados

de CTC ou aglomerados de CTC-WBC coletados em ZT4 ou ZT16 de camundongos NSG-CDX-BR16. Os

camundongos não foram injetados com clusters CTC-WBC coletados durante a fase ativa, devido à sua

raridade. d, Gráfico mostrando sinal de bioluminescência normalizado obtido de ossos de camundongos

mostrados no painel “c” (CTCs simples n = 4; agrupamentos de CTC n = 5; P = 0,006). e, Imagens de

bioluminescência representativas de fígados de camundongos injetados com CTCs únicos ou CTC

clusters, coletados em ZT4 ou ZT16 de camundongos NSG-CDX-BR16. Os ratos não eram

injetados com clusters CTC-WBC coletados durante a fase ativa, devido à sua raridade. f, Gráfico

mostrando sinal de bioluminescência normalizado obtido do fígado de camundongos mostrado no painel

"e" (n = 5, exceto CTCs únicos coletados em ZT16, onde n = 4; P = 0,0301). Para todos os painéis, os

dados são apresentados como média ± sem; teste t bilateral não pareado * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P <

0,001. n representa o número de camundongos biologicamente independentes

Dados de origem

Dados estendidos Fig. 6 O ponto de tempo do isolamento de CTC é o principal determinante da

heterogeneidade da expressão gênica em CTCs. a, Mapa de calor mostrando o coeficiente de correlação

de Pearson de autovetores PC1-7 da expressão gênica com variáveis técnicas e biológicas em CTCs BR16-

CDX. Valores de P pelo teste de correlação de Pearson bilateral (*P < 0,01, **P < 0,001, ***P < 0,0001). b,

gráfico de dispersão mostrando a correlação da mudança de dobra entre a fase ativa e de repouso em CTC

único (eixo Y) versus clusters CTC e CTC-WBC (eixo X), usando genes com FDR ÿ 0,05 em qualquer um

dos dois conjuntos ( coeficiente de correlação de Pearson bilateral 0,57, valor P ÿ 2,22e-16).

Os pontos são coloridos de acordo com o conjunto de dados onde foram encontrados com um FDR ÿ

0,05 (ambos, CTC único ou clusters CTC e clusters CTC-WBC). o

Machine Translated by Google

linha vermelha tracejada representa a linha de regressão linear usando todos os pontos no

gráfico. c, gráfico de barras mostrando o número de genes expressos diferencialmente (mudança

absoluta de dobra
2 de log ÿ 0,5 e FDR ÿ 0,05) usando todas as amostras ('Todas'), usando CTCs
agrupados (agrupamentos CTC e agrupamentos CTC-WBC) e usando CTCs únicos. d, mapa de

calor mostrando a matriz de semelhança de pares de conjuntos de genes enriquecidos (análise

de enriquecimento de conjunto de genes (GSEA) valor P ajustado ÿ 0,001) usando expressão

diferencial entre CTCs de repouso e fase ativa de camundongos NSG-CDX BR16. As cores do

mapa de calor representam o coeficiente de similaridade de Jaccard usando o conjunto de genes

centrais em cada conjunto de genes. O mapa de calor à direita representa o valor P ajustado

pelo GSEA . e, Gráficos comparando o escore de enriquecimento normalizado (NES) e o valor P

ajustado (tamanho do ponto) obtido usando GSEA para conjuntos de genes mostrados em “d”.

Conjuntos de genes com um valor P ajustado ÿ 0,05 em cada conjunto de amostras são

destacados em vermelho. f, pontuação GSVA para conjuntos de genes de tradução (amarelo, n

= 5) e divisão celular (azul, n = 17) em CTCs obtidos do experimento de cinética de tempo NSG-

LM2. As linhas amarelas e azuis representam a média em cada ponto de tempo.

Os pontos individuais representam a pontuação de enriquecimento para cada amostra CTC.

Os fundos branco e cinza representam a luz do ambiente (período de descanso) e as condições

escuras (período ativo), respectivamente. Os valores de P do teste F ajustados obtidos de

limma são mostrados para cada conjunto de genes individual.

Dados estendidos Fig. 7 O estado de proliferação de tumores primários muda de maneira

dependente do ritmo circadiano. a, Imagens de imunofluorescência representativas de Ki67 e

Pan-CK em tumores primários de camundongos NSG-CDX-BR16, dissecadas em diferentes

pontos de tempo (ZT0, ZT4, ZT12, ZT16, ZT20) durante um período de 24 horas (ZT4, ZT12,

ZT16 n = 3; ZT0, ZT20 n = 2; P = 0,0270; barra de escala = 100 ÿm) (esquerda). O gráfico mostra

a intensidade de Ki67 em tumores de camundongos NSG-CDX-BR16 durante diferentes pontos

de tempo (direita).

Os dados são apresentados como média ± sem; teste t bilateral não pareado * P < 0,05. b,

Imagens de imunofluorescência representativas de Ki67 em CTCs coletadas em ZT4

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e ZT16 de camundongos NSG-LM2 e NSG-CDX-BR16. Barra de escala = 10 ÿm. c, Gráficos mostrando a

distribuição da intensidade de Ki67 em CTCs únicos (NSG-LM2 P =

0,0495; NSG-CDX-BR16 P = 0,0001) e agrupamentos CTC (NSG-LM2 P = 0,0223;

NSG-CDX-BR16 P = 0,0045) coletado em ZT4 e ZT16 de NSG-LM2 e

Camundongos NSG-CDX-BR16 (n = 3). As linhas centrais da caixa na caixa representam a mediana; os

limites representam o primeiro e o terceiro quartil; extremos das linhas de bigode representam os valores

mínimos e máximos observados. * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001 pelo teste de Mann-Whitney bilateral.

Para todos os painéis, n representa o número de camundongos biologicamente independentes

Dados de origem

Dados estendidos Fig. 8 Os CTCs derivados do câncer de mama não possuem um relógio
circadiano funcional.

a, Gráfico mostrando a distribuição de expressão de genes circadianos centrais em CTCs de camundongos

NSG-CDX-BR16. A mudança de dobra (FC, em escala logarítmica) e o valor 2P ajustado da análise de

expressão diferencial global são mostrados para cada gene. b, gráfico de densidade mostrando a distribuição

da expressão média (contagens de log por milhão) de genes em CTCs de camundongos NSG-CDX-BR16. 2
Os genes circadianos centrais são marcados no eixo X. c, qPCR para expressão de Bmal1 no fígado,

glândulas adrenais e tumor primário de camundongos NSG-LM2 (n = 3 para todos os pontos de tempo das

glândulas adrenais; n = 3 para todos os pontos de tempo do fígado e tumor, exceto ZT4 e ZT20 onde n = 4).

Os dados são relativos ao ponto de tempo com os níveis de expressão mais baixos de Bmal1 (ZT16; definido

como 1) e são apresentados como média ± sem n representa o número de camundongos biologicamente

independentes

Dados de origem

Dados Estendidos Fig. 9 Avaliação da pressão de interesse, imunovigilância

e apoptose em CTCs em diferentes momentos do ritmo circadiano. a, Imagens de imunofluorescência

representativas de Taz e Yap em CTCs

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coletados em ZT4 e ZT16 de camundongos NSG-LM2 e NSG-CDX-BR16. Parcelas

mostrando a distribuição da intensidade de Taz e Yap nos CTCs mostrados no mesmo painel (n = 3). Barra

de escala = 10 ÿm. b, Gráfico mostrando a distribuição de expressão de genes TEAD em CTCs de

camundongos NSG-CDX-BR16. A mudança de dobra (FC, em escala logarítmica) e o valor P ajustado da 2

análise de expressão diferencial global são mostrados para cada gene. c, Estratégia de fechamento para

determinar a frequência das populações de células indicadas nos painéis “d” e “e”. Os valores percentuais

referem-se à população parental considerada em cada painel. d, Gráfico mostrando a frequência de glóbulos

brancos (WBCs) de sangue periférico (PB) isolados durante o repouso (n = 8) ou fase ativa (n = 10) de

camundongos BALB/c-4T1. e, Gráfico mostrando a frequência de leucócitos infiltrados por tumor isolados

durante o repouso (n = 8) ou fase ativa (n = 10) de camundongos BALB/c-4T1. f, Imagens de imunofluorescência

representativas de caspase-3 clivada em CTCs coletadas em ZT4 e ZT16 dos camundongos NSG-LM2 e NSG-

CDX-BR16. Gráficos mostrando a distribuição da intensidade de caspase-3 clivada em CTCs mostrados no

mesmo painel (n = 3). Barra de escala = 10 ÿm. Para os painéis “a” e “f”, as linhas centrais da caixa

representam a mediana; os limites das caixas representam o primeiro e o terceiro quartil; extremos das linhas

de bigode representam os valores mínimos e máximos observados. ns: não estatisticamente significativo pelo

teste de Mann-Whitney bilateral. Para os painéis “d” e “e”, os dados são apresentados como média ± sem; ns:

não estatisticamente significativo pelo teste t bilateral não pareado. Para todos os painéis, n representa o

número de camundongos biologicamente independentes

Dados de origem

Dados estendidos Fig. 10 Expressão de receptores ativados por ligantes regulados pelo ritmo

circadiano. a, Gráficos de densidade mostrando a distribuição da expressão média (contagens de

log por milhão) de genes que codificam para receptores de hormônios, fatores de crescimento ou 2
moléculas regulados por circadianos em CTCs de camundongos NSG-CDX-BR16,
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Camundongos NSG-LM2 e pacientes com câncer de mama. Os genes para o receptor de glicocorticóide,

receptor de andrógeno e receptor de insulina são marcados no eixo X. b, Gráfico cinético de tempo mostrando

o perfil farmacocinético de camundongos tratados com dexametasona (n = 2). c, Gráficos mostrando o

tamanho dos tumores primários dissecados de camundongos NSG-LM2 tratados com dexametasona ou de

controle (n = 4). d, Gráficos mostrando o tamanho dos tumores primários dissecados de camundongos

tratados com testosterona (n = 5) ou controle NSG-LM2 (n = 4). e, Imagens de bioluminescência representativas

de pulmões de camundongos NSG-LM2 não tratados ou tratados com testosterona (esquerda).

Gráfico mostrando sinal de bioluminescência normalizado obtido de pulmões de camundongos NSG-

LM2 tratados com testosterona ou de controle (n = 3; P = 0,0005). f, Gráfico mostrando a concentração

plasmática de testosterona em camundongos de controle e tratados com testosterona (n = 3; P = 0,0237).

g, Gráficos mostrando os tumores primários dissecados de camundongos de controle ou tratados com

insulina em ZT4 e ZT16 (n = 8, exceto camundongos tratados com insulina em ZT16 onde n = 6). h, gráfico

mostrando plasma

concentração de insulina em camundongos controle e tratados com insulina (n = 5; P = 0,0321).

Para todos os painéis, os dados são apresentados como média ± sem; Para os painéis “e”, “f” e “h”, * P <

0,05, *** P < 0,001 pelo teste t bilateral não pareado. Para todos os painéis, n representa o número de

camundongos biologicamente independentes

Dados de origem

Informação suplementar

Resumo do relatório

41586_2022_4875_MOESM2_ESM.xlsx Tabela

complementar 1 Características clínicas de pacientes inscritos com câncer de mama. Para cada

paciente, a tabela mostra a idade do paciente, estágio inicial de AJCC, data do primeiro diagnóstico, estado

de ER, PR, HER2 e Ki67 do tumor primário. A tabela também mostra a presença de doença metastática no

momento da coleta de sangue.

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doação, bem como o número de CTCs únicos, clusters CTC e clusters CTC-WBC

detectados durante o repouso (04h00) ou período ativo (10h00) por 7,5 ml de sangue

periférico.

41586_2022_4875_MOESM3_ESM.xlsx
Tabela Complementar 2 Genes diferencialmente expressos em CTCs de camundongos

NSG-CDX BR16 durante a fase de repouso versus fase ativa. Tabela listando os genes

diferencialmente expressos comparando CTCs obtidos na fase de repouso (n = 65) versus

a fase ativa (n = 73) de camundongos NSG-CDX-BR16. Todos os genes avaliados estão

incluídos na tabela (n = 12.261). Os valores de mudança de dobra e P foram calculados

com a abordagem de quase verossimilhança de edgeR usando estimativas de dispersão

robustas. Para cálculo de mudança de dobra, amostras de fase ativa foram

usado no denominador.

41586_2022_4875_MOESM4_ESM.xlsx
Tabela Suplementar 3 GSEA de genes diferencialmente expressos em CTCs de

camundongos NSG-CDX-BR16 durante a fase de repouso versus fase ativa. Tabela

listando os conjuntos de genes enriquecidos (n = 138, valor P ajustado < 0,05) em CTCs

obtidos na fase de repouso versus ativa de camundongos NSG-CDX-BR16. A GSEA foi

realizada usando genes de classificação como entrada, de acordo com a mudança de

dobra conforme mostrado na Tabela Suplementar 2. Os valores de P foram obtidos usando a GSEA rá
ÿ10
método com um parâmetro eps de 1 ×10 .

41586_2022_4875_MOESM5_ESM.xlsx
Tabela suplementar 4 Lista de receptores ativados por hormônios, fatores de

crescimento ou moléculas regulados circadiano. Tabela listando os níveis de expressão

de genes para receptores ativados por hormônios regulados pelo ritmo circadiano, fatores

de crescimento ou moléculas em CTCs obtidos de camundongos NSG-CDX-BR16.

Mudança de dobra, valores de P e FDR foram extraídos dos resultados da análise de

expressão diferencial global e foram calculados com a quase-verossimilhança

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abordagem do edgeR usando estimativas de dispersão robustas.

Dados de origem

Dados de origem Fig. 1

Dados de origem Fig. 2

Dados de origem Fig. 3

Dados de origem Fig. 4

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 1

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 2

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 3

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 4

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 5

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 7

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 8

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 9

Dados de Origem Dados Estendidos Fig. 10

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acordo de publicação com o(s) autor(es) ou outro(s) detentor(es) de direitos autorais; O

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Sobre este artigo

Citar este artigo

Diamantopoulou, Z., Castro-Giner, F., Schwab, FD et al. A disseminação metastática de

câncer de mama acelera durante o sono. Natureza 607, 156-162 (2022).
https://doi.org/10.1038/s41586-022-04875-y

Recebido Aceitaram Publicados

10 de julho de 2021 16 de maio de 2022 22 de junho de 2022

Data de emissão

07 de julho de 2022

DOI

https://doi.org/10.1038/s41586-022-04875-y

Temas Câncer de mama • Metástase

Leitura adicional

Dormir, talvez espalhar

Anna Dart

Nature Reviews Câncer (2022)

Estas células cancerosas acordam quando as pessoas dormem

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Fred Kreier

Natureza (2022)

Células cancerosas se espalham agressivamente durante o sono

Harrison Ball e Sunitha Nagrath

Natureza (2022)

Obesidade e câncer

Emily J. Gallagher & Derek LeRoith

Revisões de câncer e metástase (2022)

Natureza (Natureza) ISSN 1476-4687 (online) ISSN 0028-0836 (impressão)

© 2022 Springer Nature Limited