Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312

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Neurofarmacologia

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Magnésio de fi ciência induz ansiedade e desregulação do eixo HPA: modulação

por tratamento medicamentoso terapêutico
SB Sartori * , N. Whittle, A. Hetzenauer, N. Singewald
Departamento de Farmacologia e Toxicologia, Instituto de Farmácia e Centro de Biociências Moleculares de Innsbruck (CMBI), Universidade de Innsbruck,
Peter-Mayr-Strasse 1, A-6020 Innsbruck, Áustria

informações do artigo abstrato

Historia do artigo: Estudos pré-clínicos e alguns estudos clínicos sugerem uma relação entre a perturbação no magnésio (Mg 2 º)
Recebido em 29 de abril de 2011 homeostase e ansiedade patológica, embora os mecanismos subjacentes permaneçam amplamente desconhecidos.
Recebido de forma revisada em 16
Uma vez que há evidências de que Mg 2 º modula o eixo hipotálamo-hipófise adrenal (HPA), testamos se o aumento do
de julho de 2011
comportamento de ansiedade pode ser eliciado de forma confiável pelo Mg dietético 2 º de fi ciência e se Mg 2 º de fi A
Aceito em 18 de julho de 2011
deficiência está associada à função alterada do eixo HPA. Comparado com os controles, Mg 2 º de fi ratos cientes de
fato exibiram comportamento relacionado à ansiedade aprimorado em uma bateria de testes de ansiedade
Palavras-chave:
estabelecidos. O aumento do comportamento relacionado à ansiedade do Mg 2 º de fi camundongos cientes foram
Magnésio
sensíveis ao tratamento crônico com desipramina no teste de hiponeofagia e ao tratamento agudo com diazepam
Ansiedade
Eixo de tensão
no teste de exposição de braço aberto. Mg 2 º de fi A deficiência causou um aumento na transcrição do hormônio
Diazepam, inibidor seletivo da recaptação da liberador de corticotropina no núcleo paraventricular hipotalâmico (PVN) e níveis plasmáticos elevados de ACTH,
serotonina apontando para um ponto de ajuste aprimorado do eixo HPA. O tratamento crônico com desipramina reverteu a
Hormônio liberador de corticotropina identidade fi anormalidades ed do eixo de tensão. O mapeamento funcional da atividade neuronal usando c-Fos
ACTH revelou hiperexcitabilidade no PVN do Mg ansioso 2 º de fi ratos cientes e sua normalização através do tratamento com
Desipramina diazepam. No geral, o presente fi achados demonstram a robustez e validade do Mg 2 º de fi modelo de ciência como um
modelo de camundongo de ansiedade aumentada, mostrando sensibilidade ao tratamento com ansiolíticos e
antidepressivos. É ainda sugerido que as desregulações no eixo HPA podem contribuir para a hiperemocionalidade
em resposta à hipomagnesemia induzida pela dieta.
Este artigo faz parte de uma edição especial intitulada ' Ansiedade e depressão '.
2011 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

1. Introdução respeito, mudanças no magnésio (Mg 2 º) homeostase demonstrou contribuir para

Os transtornos de ansiedade são atualmente os transtornos
neuropsiquiátricos mais comuns nos EUA e na Europa ( Andlin-Sobocki et al., 2005;
Kessler et al., 2005 ) e representam um dos principais problemas de saúde do
mundo ocidental ( OMS, 2004 ) Na etiologia de um transtorno de ansiedade, a
ocorrência simultânea de vários fatores intrínsecos e extrínsecos, incluindo
aqueles relacionados a genes e meio ambiente, parece ser importante. Entre
estes, há evidências crescentes de um papel de “ pobre ” nutrição ( Popkin, 2006 ) no
desenvolvimento de algumas doenças psiquiátricas ( Coppen e Bolander Gouaille,
2005; Kroll, 2007 ), apesar de uma aparente supernutrição em nossas sociedades
industrializadas e globalizadas. Valores alterados de diversos micronutrientes,
incluindo eletrólitos, minerais e vitaminas, podem estar ligados a sintomas em
pacientes psiquiátricos ( Armstrong et al., 2007; Thys-Jacobs, 2000; Zender e
Olshansky, 2009 ) Nisso
* Autor correspondente. Fax: º 43 512 507 2931.
Endereço de e-mail: simone.sartori@uibk.ac.at (SB Sartori).
os transtornos afetivos, embora existam algumas inconsistências entre os estudos
(para revisão, ver Murck, 2002 ) Além disso, uma relação causal entre Mg 2 º e a
ansiedade é sugerida em camundongos com baixo nível de Mg plasmático 2 º níveis
que exibem aumento de comportamento relacionado à ansiedade e / ou
depressão, independentemente de esses níveis esgotados serem naturais ou
induzidos experimentalmente ( Laarakker et al., 2011; Singewald et al., 2004 ),
embora em humanos evidências equivalentes sejam escassas ( Jacka et al., 2009;
Seelig, 1994 ) Em apoio adicional a essa relação causal, Mg 2 º a suplementação
reduz o comportamento relacionado à ansiedade dos camundongos (ver por
exemplo Poleszak et al., 2004 ) Estimulado por estes
fi descobertas, foi recentemente sugerido que a hipomagnesemia é um possível
indicador fisiológico de ansiedade ( Laarakker et al., 2011 ) Na busca por
mecanismos neurobiológicos subjacentes à ansiedade anormal, pode ser que o
Mg 2 º é um jogador interessante, pois é um dos íons essenciais no cérebro que
afetam muitos processos intracelulares e interneuronais. Por exemplo, Mg 2 º demonstrou
modular a neurotransmissão glutamatérgica (por meio de um bloqueio
dependente de voltagem de receptores NMDA) ( Haddad, 2005 )

0028-3908 / $ e veja o assunto principal doi:

201110.1016
Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.
/ j.neuropharm.2011.07.027
 SB Sartori et al. / Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312
e neurotransmissão GABAérgica, e para afetar várias vias de transdução, incluindo
a da proteinkinase C (para revisão, consulte Murck, 2002 ) Além disso, Mg 2 º demonstrouminimizar o sofrimento animal, bem como o número de animais usados e foram aprovados pelo
controlar a atividade do eixo hipotálamo-hipófise adrenocortical (HPA) ( Murck e
Steiger, 1998 ), que é considerado o principal sistema de resposta ao estresse
(para revisão, consulte, por exemplo Young et al., 2008 ) No curso da ativação do
eixo HPA pelo hormônio liberador de corticotropina (CRH), sintetizado no núcleo
hipotalâmico paraventricular (PVN), o hormônio corticotropina adrenal (ACTH) é
liberado da hipófise anterior para a corrente sanguínea que, por sua vez, estimula
a secreção de corticosterona. A ativação do eixo HPA via CRH está envolvida na
geração de muitas mudanças autonômicas, hormonais e comportamentais
diferentes durante o estresse e desencadeia sintomas de ansiedade (para revisão,
consulte Lowry e Moore, 2006; Young et al., 2008 ) Foi sugerido que as
desregulações no sistema do eixo CRH-HPA podem contribuir para a ansiedade
patológica (para revisão, ver Charney e Drevets, 2008; Millan, 2003; Young et al.,
2008 )
Com base nesses dados, pode-se levantar a hipótese de que uma função
alterada do eixo HPA está subjacente ao aumento da ansiedade de Mg 2 º
de fi camundongos cientes que é provocado pelo Mg dietético 2 º restrição (quando
os camundongos são limitados a 10% de suas necessidades diárias), o que resulta
em uma redução de 45% do Mg plasmático 2 º níveis ( Singewald et al., 2004 ) Para
abordar essa possibilidade, exploramos inicialmente a robustez e a validade do
modelo induzindo hipomagnesemia de acordo com nosso protocolo anterior para
camundongos C57Bl / 6J ( Singewald et al., 2004 ) em duas cepas adicionais de
camundongos com níveis divergentes de ansiedade inata (camundongos C57Bl /
6N e BALB / c) (para revisão, ver, por exemplo Belzung e Griebel, 2001; Sartori et
al., 2011 ) e, em seguida, testou os efeitos de um benzodiazepínico clinicamente
estabelecido e de dois medicamentos antidepressivos, paroxetina e desipramina,
com efeito clínico estabelecido fi cácia em pacientes com transtorno de ansiedade
(para revisão, ver
Plag et al., 2009 ) e / ou com sensibilidade demonstrada em Mg 2 º
de fi ratos eficientes para reduzir o comportamento semelhante à depressão ( Singewald
et al., 2004; Whittle et al., 2011 ) O comportamento emocional de Mg 2 º de fi ratos
eficientes foram avaliados em uma bateria de testes de ansiedade, incluindo o fi teste
de campo, o teste claro / escuro, o teste de hipotermia induzida por estresse e o
teste de hiponeofagia, cada um dos quais se pensa que imita diferentes aspectos
da ansiedade humana e que diferem em sua sensibilidade para detectar as
propriedades ansiolíticas das drogas (para revisão, ver Crawley, 2000; Cryan e
Holmes, 2005; Dulawa e Hen, 2005; Vinkers et al., 2008 ) Nós então quanti fi marcadores
ed da função do eixo HPA, incluindo a expressão do gene CRH e os níveis
plasmáticos de ACTH em Mg experimentalmente ingênuo ou não estressado 2 º
de fi camundongos eficientes. Finalmente, a relevância funcional de processos de
transcrição potencialmente alterados no sistema HPA foi investigada em Mg 2 º de fi camundongos
uma zona de fronteira circundante. Os camundongos foram colocados individualmente na
eficientes usando mapeamento do gene cFos precoce imediato como um
marcador de ativação neuronal em resposta a uma situação que provoca
ansiedade. Em vez de abordar todos os objetivos em cada cepa, alocamos fi experimentos
c para a cepa C57Bl / 6N ou Balb / c (ver Métodos ) Assim, usando um número
reduzido de animais seguindo os princípios de bem-estar animal, este projeto
experimental permitiu revelar a maioria das informações complementares
àquelas obtidas em camundongos C57Bl / 6N (por exemplo, expressão de CRH no
PVN), adicionando outros aspectos (por exemplo, o em fl uência dos níveis de
ansiedade inatos com o uso da cepa Balb / c).
2. Métodos
2.1. Animais
Ratinhos machos C57Bl / 6N e BALB / c foram adquiridos a Charles River (Alemanha). Em
todos os experimentos foram usados animais adultos (8 semanas de idade no início do
experimento). Eles foram alojados em grupo (até 10 animais por gaiola) lado a lado em uma
temperatura (22 ° C) e umidade (50 ° C) e 60%) unidade de cuidado animal controlada sob um ciclo
claro / escuro de 12 h (luzes acesas às 07:00 h), e fornecida com pelotas
305
comida e água ad libitum. Todos os procedimentos experimentais foram planejados para
comitê de ética nacional sobre cuidados e uso de animais (Bundesministerium für Wissenschaft
und Forschung) em conformidade com as leis e políticas internacionais.
2.2. Dietas e tratamentos medicamentosos
Camundongos atribuídos a Mg 2 º de fi grupos cientes foram autorizados a acessar livremente
um mg de 0,005% 2 º contendo dieta (Ssniff Spezialdiäten, Alemanha), que fornecia cerca de 10% do
Mg diário 2 º requerimento ( Kantak, 1988 ) conforme descrito anteriormente ( Singewald et al., 2004 )
Os ratos de controle foram alimentados com um normal, 0,2% de Mg 2 º contendo dieta (Ssniff
Spezialdiäten, Alemanha) que oferece quatro vezes mais do que o Mg mínimo 2 º
requerimento ( Kantak, 1988 ), e daqui em diante são sempre referidos como “ controles ”. InMg 2 º
de fi O tratamento crônico em camundongos cientes com desipramina ou paroxetina foi
administrado na água de beber. A ingestão diária de drogas de aproximadamente 30 mg / kg de
desipramina (Sigma Aldrich) e 5 mg / kg de paroxetina (gentilmente fornecida pela
GlaxoSmithKline, Reino Unido), respectivamente, foi alcançada pela adaptação das concentrações
das drogas nas soluções de beber de acordo com o volume médio de bebida e peso corporal por
gaiola. No entanto, a dose individual obtida pode ter variado devido a variações nos
camundongos em termos de consumo de água e peso corporal. Foram mantidos sob a condição
experimental designada (dieta / tratamento medicamentoso) por pelo menos três semanas até a
conclusão dos experimentos. Diazepam (1mg / kg, dissolvido em puri fi água ed; Sigma,
Alemanha) ou veículo foram administrados ip a camundongos em suas gaiolas caseiras.
2.3. Experimentos comportamentais
Os camundongos foram deixados sem serem perturbados em suas gaiolas por três
semanas, desde o início da dieta e / ou tratamento crônico com drogas até o início dos
experimentos comportamentais. Após os animais terem se habituado à sala de testes por pelo
menos 24 horas, os experimentos comportamentais foram realizados entre 09:00 he 14:00 h. As
câmaras de teste foram cuidadosamente limpas com água da torneira e uma toalha úmida após
cada animal ter sido testado. Para diminuir o número de animais utilizados, os experimentos
comportamentais, com pelo menos dois dias de descanso entre cada um, foram realizados nos
mesmos animais a partir do teste de hipertermia induzida por estresse ( Lecci et al., 1990 ), a
abertura fi teste de campo ( Broadhurst, 1961; DeFries et al., 1974 ), o teste claro / escuro ( Crawley,
1981 ), e o teste de hiponeofagia ( Bodnoff et al., 1988 ) de acordo com os protocolos usados
anteriormente em nosso laboratório ( Busquet et al., 2009; Singewald et al., 2004; Tschenett et al.,
2003; Whittle et al., 2011 )
2.3.1. Hipertermia induzida por estresse
Os camundongos foram alojados individualmente por pelo menos 24 horas antes do teste.
Com o mouse em sua casa, uma sonda termistor lubrificada com glicerol conectada a um
termômetro digital (DM 852, Ellab, Dinamarca) foi inserida em seu reto e deixada lá até que a
temperatura ficasse estável por 20 s. A precisão do termômetro foi de 0,1 C. A temperatura retal
foi medida em cada camundongo em T 1, e então em T 2 10 minutos depois. Como a intubação da
sonda retal para avaliar a temperatura central demonstrou suf fi iniciar suficientemente uma
resposta ao estresse em camundongos ( Bouwknecht et al., 2007 ), a diferença entre as
temperaturas T 2 e T 1 foi considerado evidência de hipertermia induzida por estresse. No final do
teste de hipertermia induzida por estresse, os animais foram alojados em grupo novamente para
os seguintes testes.
2.3.2. Abrir fi teste de campo
A abertura fi campo consistia em uma caixa de plástico (41 41 41 cm) equipada com um
sistema de monitoramento de atividade automatizado (TruScan, Coulbourn Instruments, EUA). A
área do aberto fi campo, iluminado com 150 lux, foi dividido em uma zona central de 28 28 cm e
periferia da área aberta fi campo e permissão para explorá-lo por 10 min. Os seguintes
parâmetros relacionados à ansiedade foram registrados: entradas na zona central, tempo gasto
nela, número de empinamentos e a distância total percorrida.
2.3.3. Teste claro / escuro
A arena de teste claro / escuro (41 41 41 cm; TruScan, Coulbourn Instruments, EUA) foi
dividida em duas metades, compreendendo um compartimento aversivo branco iluminado com
400 lux em fl nível do chão e um compartimento escuro e seguro coberto por uma tampa preta
iluminada com 10 lux. Os compartimentos foram conectados por uma pequena abertura (7 7 cm)
localizada no centro da partição em fl nível do chão. Os animais foram colocados individualmente
no compartimento escuro de costas para a abertura e foram autorizados a explorar livremente o
aparelho por 10 min. Durante o período de teste de 10 min, o comportamento exibido por cada
camundongo foi registrado automaticamente e os seguintes parâmetros relacionados à
ansiedade quanti fi ed: a latência para o fi primeira entrada no compartimento iluminado, número
de entradas no compartimento iluminado, tempo gasto no compartimento iluminado, número de
empinamentos e distância total percorrida pelos ratos.
2.3.4. Teste de hiponeofagia
Este paradigma foi realizado abertamente fi arena de campo (veja acima) com iluminação ajustada
para 40 lux. Os ratos foram privados de comida, mas foram autorizados a beber água à vontade durante a
noite. Os animais foram colocados em um canto da arena e a latência que levaram para começar a
consumir aveia fl As marcas colocadas no centro da arena de teste foram registradas, bem como a distância
percorrida.
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2.4. Expressão de mRNA Prepro-CRH 3. Resultados

Em uma coorte separada da cepa C57Bl / 6N, os camundongos foram alimentados com a
dieta controle, o Mg 2 º dieta restrita, ou o Mg 2 º dieta restrita e tratamento crônico concomitante
com desipramina, conforme descrito acima, e foram deixados sem serem perturbados em suas
gaiolas por três semanas. Esses ratos experimentalmente ingênuos foram então sacrificados fi cedido
por inalação de dióxido de carbono em uma câmara saturada de acordo com as diretrizes de
bem-estar estabelecidas ( Hackbarth et al., 2000 ) e seus cérebros foram rapidamente removidos.
Seções congeladas consecutivas (12 m m) ao nível do PVN, amígdala central e Barrington ' Os
núcleos foram preparados em lâminas ( Paxinos e Franklin, 2001 ) e posteriormente processado
para hibridização in situ, conforme descrito anteriormente ( Keck et al., 2005; Sartori et al., 2004 )
Brie fl sim, um específico fi c, [ 35 Sonda de oligonucleotídeo marcada com S] (Microsynth, Balgach,
Suíça) dirigida contra as bases 64 e 111 do clone prepro-CRH de rato ( Jingami et al., 1985 )
mostrando alta homologia com o gene murino (número de acesso NM_205769.1) foi hibridizado
para seções do cérebro a 35 ° C durante a noite. Em seguida, as lâminas foram lavadas em
solução salina citrato de sódio, três vezes, a 55 C, seguidas de duas lavagens em temperatura
ambiente. Lâminas secas foram expostas a BioMax MR fi lm (Kodak, EUA) por 7 - 14 dias. A análise
quantitativa foi realizada em autorradiogramas digitalizados usando um software de análise de
imagem (AnalySIS, Soft Imaging Systems, Germany). Em duas seções por animal, os valores
médios de cinza das regiões de interesse foram determinados e convertidos em densidades
ópticas e, em seguida, em nCi / g equivalente de tecido usando autorradiografia [ 14 C]
-microscales (Amersham Biosciences, UK) corrigido para [ 35 S].
No início dos experimentos, camundongos C57Bl / 6N designados para dieta
controle, Mg 2 º de fi dieta adequada ou Mg 2 º de fi dieta adequada cronicamente
tratada com desipramina ou paroxetina não diferiu no peso corporal (peso
corporal médio de 22,5 0,1 g). Após três semanas nas condições experimentais
(dieta / medicamento), ganho de peso corporal
diferiu entre os grupos experimentais ( F 1,22 ¼ 31.520, P < 0,001). Dentro deste
período de tempo Mg 2 º de fi animais cientes ( º 5,1 1,1%) colocado
mais peso corporal do que os animais de controle ( º 2,4 0,8%; P < 0,05). Comparado
com o Mg 2 º de fi grupo inteligente, o ganho de peso corporal foi aumentado em Mg 2
º de fi ratos cientes tratados cronicamente com paroxetina ( º 10,9 1,0%; P < 0,001)
enquanto o Mg 2 º de fi ratos cientes tratados cronicamente com desipramina até
perderam peso (2,9 1,1%;
P < 0,001). Semelhante aos camundongos C57Bl / 6N, os pesos corporais não diferiram
entre os camundongos controle eMg 2 º de fi cientmice (peso corporal médio de
20,0 0,1 g) da cepa Balb / c no início dos experimentos. Três semanas alimentando
um Mg 2 º dieta restrita causou um aumento reduzido no peso corporal em
camundongos Balb / c (controle: º 11,8 1,3%: Mg 2 º

de fi cient: º 5,8 1,5 g; P < 0,01).

2,5. Radioimunoensaios 3.1. Efeito do Mg 2 º de fi tratamento antidepressivo crônico e de ciência no

comportamento relacionado à ansiedade em camundongos C57Bl / 6N
Pelo menos fi cinco dias após o último experimento comportamental, camundongos C57Bl /
6N atribuídos à dieta controle, o Mg 2 º de fi dieta adequada, ou o Mg 2 º de fi dieta adequada e
tratamento crônico concomitante com desipramina foram sacrificados com dióxido de carbono Usando o paradigma da hipertermia induzida por estresse (para revisão,
em uma câmara saturada ( Hackbarth et al., 2000 ) Trunc sangue foi coletado do sacri fi animais consulte Vinkers et al., 2008 ), comportamento relacionado à ansiedade de
cedidos em frascos revestidos com EDTA (Greiner Bio-one GmbH, Áustria) e centrifugados (3000 camundongos C57Bl / 6N atribuídos à dieta de controle, o Mg 2 º de fi cient, ou o Mg 2 º
rpm) por 10 min a 4 C. As amostras de plasma foram armazenadas a 20 ° C até a medição
de fi dieta adequada e tratamento paralelo crônico com paroxetina foram testados
ocorrer. As concentrações plasmáticas de ACTH e corticosterona foram determinadas usando kits
comercialmente disponíveis (MP Biomedicals, EUA), com uma variabilidade intra e interensaio de
( tabela 1 ) A temperatura corporal basal dos camundongos de controle foi baixa,
menos de 10% e um limite de detecção inferior de 6 pg / mL e 8 ng / mL, respectivamente. atingindo 35,8 0,2 C, o que indica que os animais não foram pré-esforçados nas
condições experimentais dadas. Houve um signi fi Não é possível diferença entre
ratos na temperatura corporal T 1
sob condições não estressadas ( F 1,22 ¼ 6,400, P < 0,01). A análise post-hoc
2.6. Expressão de c-Fos em resposta ao desafio emocional
subsequente designou aumento da temperatura corporal basal
30 min após a injeção ip de diazepam (1 mg / kg) ou veículo, os camundongos BALB / c foram em Mg 2 º de fi animais cientes comparados com controles e Mg tratados com
submetidos ao teste de exposição de braço aberto conforme descrito anteriormente ( Muigg et paroxetina 2 º de fi camundongos eficientes. O leve estresse de medir T 1 causou um
al., 2009 ) Durante o período de teste de 10 minutos em que os animais foram autorizados a aumento na temperatura corporal ( T 2) que nesta fase já não diferia entre os três
explorar livremente o braço aberto de um labirinto em cruz elevado, as entradas e o tempo gasto grupos experimentais. O aumento da temperatura corporal induzido pelo estresse
nos compartimentos proximal e distal do braço aberto, bem como a distância total percorrida
foi menor em Mg 2 º de fi camundongos mais eficientes do que no controle ou
foram automaticamente quanti fi ed pelo sistema de rastreamento Videomot (TSE Systems,
tratado com paroxetina de Mg 2 º
Alemanha). Duas horas depois, os camundongos foram profundamente anestesiados (200 mg /
kg de pentobarbital de sódio, ip) e perfundidos transcardialmente com solução salina seguida de fi ratos cientes ( F 1,21 ¼ 4.132, P < 0,05).
por solução de paraformaldeído (4% em solução salina tamponada com fosfato 0,1 M, pH 7,4) e
seus cérebros foram removidos. Seções coronais do cérebro (100 m m) no nível do PVN foram
processados para imunocitoquímica c-Fos usando um anticorpo primário anti-c-Fos policlonal de
tabela 1
coelho (1: 20.000; Santa Cruz Biotechnology, EUA), um anticorpo secundário anti-coelho de cabra
Efeito do Mg 2 º de fi ciência e tratamento crônico com paroxetina em medidas comportamentais
biotinilado (1: 200 ; Vector Laboratories, EUA) e um procedimento de avidinbiotina-peroxidase de
avaliadas em diversos testes de ansiedade em camundongos C57Bl / 6N.
rábano (kit Vectastain ABC, Vector laboratories, EUA) com 3,3 0- diaminobenzidina (Sigma,
Alemanha) como cromogênio de acordo com protocolos anteriores ( Muigg et al., 2009; Singewald Ao controle MgD MgD º PAR
et al., 2003 ) As células PVN contendo um produto de reação nuclear marrom-preto foram
Hipertermia induzida por estresse
consideradas células c-Fos-positivas e seu número foi contado bilateralmente em uma área de
T 1 (C) 35,8 0,2 36,5 0,1 * 35,6 0,2 ##
tecido representativa de
T 2 (C) 36,9 0,1 37,2 0,1 36,7 0,2
0,01 mm 2 com a ajuda de um microscópio de luz (Olympus BX-40) equipado com uma grade
T 2 T 1 (C) 1,1 0,1 0,7 0,1 * 1,2 0,1 #
ocular.
Abrir fi teste de campo

Entradas centrais ( n) 31,8 3,0 23,3 3,2 uma 17,6 3,3 **

2.7. Apresentação de dados e estatísticas Horário (s) central (is) 87,8 12 51,2 8,4 * 45,7 8,9 **
Rearings ( n) 25,7 3,2 18,4 2,7 uma 12,3 2,0 **
Os dados representam o erro padrão médio da média (SEM). Exato n- os números são dados Distância percorrida (cm) 2399 133 2060 132 1892 168
na tabela e fi gure legends. Variações em n- números entre testes e / ou ensaios são explicados
Teste claro / escuro
pela combinação de pelo menos dois conjuntos separados de experimentos usando diferentes n- números
Latência (s) 85,9 14 229 44 ** 224 25 **
e a retirada precoce de alguns animais para outros experimentos, em parte relatados em outro
Entradas na arena iluminada ( n) 10,9 1.0 8,8 1,4 6,4 1,2 *
lugar (por exemplo Whittle et al., 2011 ) A análise estatística foi realizada no STATISTICA 7.1 (Stat
Tempo gasto em rearings de arena 161 22 155 27 73,7 15 ** #
Soft, Inc., EUA). Em primeiro lugar, todos os grupos experimentais foram testados para
(s) iluminada (s) ( n) 17,9 1,9 17,9 2,3 9,2 1.2 ** ##
estatisticamente signi fi não é possível outliers usando o Grubb ' teste s. Os dados foram então
Distância percorrida (cm) 2539 120 2215 127 2199 87
testados para homogeneidade de variâncias usando Levene ' teste s. Se uma distribuição
paramétrica foi revelada, os dados foram analisados adicionalmente usando uma ANOVA de Os dados são apresentados como médias SEM. n ¼ 10 para grupos de controle e MgD, e n ¼ 10 ou
uma ou duas vias seguida por Fisher ' s Teste LSD quando permitido. Os dados não paramétricos 5 (no teste de hipertermia induzida por estresse) para MgD º Grupo PAR.
uma P < 0,08, * P < 0,05, ** P < 0,01 para MgD vs. camundongos de controle; # P < 0,05, ## P < 0,01
foram analisados estatisticamente usando um Kruskal e Teste ANOVA de Wallis seguido de Mann e
Whitney você testes. Signi estatístico fi cance foi definido em P < 0,05 enquanto não signi fi hipócrita MgD º Ratos PAR vs. MgD. MgD: Mg 2 º de fi ratos cientes; MgD º PAR: Mg 2 º de fi ratos cientes tratados
P os valores foram relatados como ns cronicamente com paroxetina.
 SB Sartori et al. / Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312 307

Figura 1. Efeito do Mg 2 º de fi ciência e tratamento crônico com paroxetina em medidas selecionadas relacionadas à ansiedade em camundongos C57Bl / 6N. A. Em ratos alimentados com Mg 2 º dieta restrita (MgD) o tempo
gasto no centro ansiogênico de um ambiente aberto fi O campo foi reduzido em comparação com os ratos alimentados com a dieta controle (controle), indicando aumento do comportamento relacionado à ansiedade. B. O
comportamento relacionado à ansiedade também foi elevado no teste claro / escuro, conforme indicado pelo aumento da latência para entrar no compartimento (ansiogênico) fortemente iluminado. Tratamento crônico
com paroxetina (MgD º PAR) não alterou o comportamento relacionado à ansiedade de Mg 2 º de fi ratos cientes nesses testes. n ¼ 10 por grupo experimental. Os dados representam significa SEM. * P < 0,05, ** P < 0,01 para Mg 2 º de
fi ratos cientes vs. controle.

Animais da cepa C57Bl / 6N foram então testados ao ar livre tratamento antidepressivo crônico ( Bodnoff et al., 1989; Dulawa e Hen, 2005;
fi teste de campo e teste claro / escuro que se baseiam em uma con fl ict (para Gordon e Hen, 2004 ) Houve um signi fi grupo não posso
revisão ver por exemplo Cryan e Holmes, 2005 ) Na abertura fi teste de campo ( tabela efeito na latência para comer ( F 3,58 ¼ 11,828, P < 0,001) o alimento preferido
1 ), os grupos experimentais diferiram signi fi visivelmente em termos de número colocado no centro da arena de teste ( Figura 2 ) Mg 2 º de fi ciência
de entradas no centro de causou um aumento na latência para comer. InMg 2 º de fi O tratamento crônico com
desipramina em ratos conscientes reduziu a latência para comer em comparação
a arena de testes ( F 2,27 ¼ 5.021, P < 0,05), o tempo gasto lá ( F 2,26 ¼ 5,284, P < 0,05; Figura
1 ), bem como o número de criações com ratos não tratados, enquanto o tratamento de longo prazo com paroxetina
( F 2,27 ¼ 6,381, P < 0,01). Speci fi em comparação com camundongos alimentados com não afetou este parâmetro comportamental ( Figura 2 ) Mg 2 º de fi Tratamentos de
dieta controle, essas medidas foram menores em Mg 2 º de fi eficiente e ciência e antidepressivos de longo prazo não alteraram a atividade locomotora
geral, conforme indicado pelas distâncias percorridas a céu aberto fi teste de
Mg tratado com paroxetina 2 º de fi animais cientes. No teste claro / escuro ( tabela 1 ; Figura
1 ), observamos um signi fi Não é possível fazer diferença na latência para entrar no campo (ns; tabela 1 ), o teste claro / escuro (ns; tabela 1 ), e o teste de hiponeofagia
(ns; Figura 2 ) Todos juntos estes fi achados sugerem que cronicMg 2 º
compartimento aversivo e fortemente iluminado da luz / escuridão
câmara ( F 2,27 ¼ 7,122, P < 0,01) uma vez que esta latência foi aumentada em ambos de fi A deficiência foi ansiogênica e que a desipramina crônica, mas não o
os grupos alimentados com Mg 2 º dieta restrita ( Figura 1 ) Além disso, há tratamento com paroxetina, foi eficaz na redução da ansiedade neste modelo.
foi um signi fi efeito de grupo não pode ser em termos do número de entradas em
( F 2,27 ¼ 3.430, P < 0,05) e tempo gasto ( F 2,27 ¼ 5.045, P < 0,05) no compartimento 3.2. Efeito do Mg 2 º de fi tratamento de deficiência e desipramina na
iluminado da câmara de teste claro / escuro, e no expressão de mRNA prepro-CRH no cérebro de camundongos C57Bl / 6N
criando números ( F 2,27 ¼ 7.361, P < 0,01). Mg tratado com paroxetina 2 º
de fi ratos eficientes exibiram valores reduzidos em todos os três parâmetros Em camundongos C57Bl / 6N, a expressão de mRNA prepro-CRH, conforme
em comparação com o controle e Mg 2 º de fi grupos eficientes ( tabela 1 ) Em visualizado por hibridização in situ, foi alta no PVN e moderada na amígdala
seguida, submetemos todos os ratos C57Bl / 6N ao paradigma da hiponeofagia, central e Barrington ' núcleo s ( mesa 2 ), que está de acordo com estudos anteriores
um dos poucos testes que são sensíveis aos efeitos anxiolíticos de (por exemplo Keegan et al., 1994 ) Dentro

Figura 2. No teste de hiponeofagia, a latência para comer um alimento preferido colocado no centro da arena de teste e a distância percorrida são mostradas para camundongos C57Bl / 6N alimentados com a dieta
controle (controle; n ¼ 19), o Mg 2 º de fi dieta adequada (MgD; n ¼ 16), ou o Mg 2 º de fi dieta adequada e tratamento adicional de longo prazo com desipramina (MgD º DMI; n ¼ 12) ou paroxetina (MgD º PAR; n ¼ 16). Os dados
representam significa SEM. * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001 para Mg 2 º de fi ratos eficientes vs. controle, ### P < 0,001 para Mg tratado com droga 2 º de fi camundongos cientes vs. Mg 2 º de fi camundongos eficientes.
308 SB Sartori et al. / Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312

mesa 2 com a cepa C57Bl / 6N, Mg 2 º de fi a deficiência aumentou o comportamento relacionado à

Efeito do Mg 2 º de fi deficiência e tratamento crônico com desipramina na expressão de mRNA prepro-CRH
ansiedade em camundongos BALB / c, que foi revertido pelo tratamento com diazepam,
em camundongos C57Bl / 6N.
conforme indicado por signi fi efeitos dietéticos e medicamentosos não podem nas medidas “ porcentagem
Ao controle MgD MgD º DMI de entradas no distal ansiogênico
Hipotálamo paraventricular 325 18 450 28 *** 313 16 ### parte do braço aberto ”( dieta: F 1,35 ¼ 12.615, P < 0,01; medicamento:
núcleo F 1,35 ¼ 15.359, P < 0,001, Tabela 4 , Fig. 4 A) e “ distância total percorrida
Amígdala central 140 9,0 150 13 145 9,0
elled ”( dieta: F 1,35 ¼ 6.120, P < 0,05; medicamento: F 1,36 ¼ 33.519, P < 0,001;
Barrington ' núcleo s 164 9,0 168 16 162 7,0
Tabela 4 ) Além disso, diazepam signi fi afetou visivelmente o
Os dados expressos em nCi / g TE são apresentados como médias SEM. n ¼ 10 por grupo
porcentagem de tempo gasto no compartimento distal ( F 1,35 ¼ 10.352,
experimental para o núcleo hipotalâmico paraventricular e amígdala central, n ¼ 9 por grupo
P < 0,01) ( Tabela 4 )
experimental para o Barrington ' núcleo s. *** P < 0,001 para MgD vs. camundongos de controle,
### P < 0,001 MgD º Ratinhos DMI vs. MgD. MgD: Mg 2 º de fi ratos cientes; A exposição ao braço aberto de um labirinto em cruz elevado induziu a
MgD º DMI: Mg 2 º de fi ratos cientes tratados cronicamente com desipramina. expressão de c-Fos no PVN ( Fig. 4 B e C). ANOVA de duas vias revelou um signi fi não
pode haver interação medicamentosa com dieta em termos do número de células
o PVN um signi fi efeito de grupo não foi observado ( F 2,29 ¼ 12,486, c-Fos-positivas na porção magnocelular do
P < 0,001) como a abundância de prepro-CRHmRNA foi aumentada em PVN ( F 1,36 ¼ 20.8301, P < 0,001) enquanto houve um efeito dietético em
Mg 2 º de fi ratos cientes em comparação com ratos alimentados com a dieta sua porção parvocelular ( F 1,36 ¼ 4.187, P < 0,05; dados não mostrados). Speci fi cally,
controle ( P < 0,001), e o tratamento crônico com desipramina normalizou esse Mg 2 º de fi ciência aumenta o desafio emocional
efeito no Mg 2 º de fi ratos cientes ( P < 0,001) ( mesa 2 , Fig. 3 ) Em contraste com o PVN, induziu a expressão de c-Fos e o diazepam a normalizou em camundongos BALB /
a expressão do mRNA prepro-CRH não diferiu entre os grupos experimentais na c ( Fig. 4 B e C).
amígdala central (ns) ou no Barrington ' núcleo s (ns) ( mesa 2 )

4. Discussão

3,3. Efeito do Mg 2 º de fi ciência e tratamento com desipramina nos níveis plasmáticos de
ACTH e corticosterona em camundongos C57Bl / 6N
Em condições sem estresse, os níveis plasmáticos de ACTH ( H 2,46 ¼ 7,466,
P < 0,05), mas não os níveis de corticosterona (ns), diferiram entre
grupos experimentais da cepa C57Bl / 6N ( Tabela 3 ) Mg 2 º de fi-
animais cientes mostraram níveis plasmáticos aumentados de ACTH em
comparação com os controles alimentados com Mg normal 2 º contendo dieta ( P < 0,01). imediato foi aumentada no PVN em resposta a uma situação levemente
O tratamento crônico com desipramina diminuiu os níveis plasmáticos elevados
de ACTH de Mg 2 º de fi ratos cientes, que já não diferiam neste aspecto dos ratos de
controlo (ns).
3.4. Efeito do Mg 2 º de fi ciência e diazepam no comportamento relacionado à
ansiedade e expressão de c-Fos em resposta à exposição de braço aberto em
camundongos Balb / c
No presente estudo, mostramos que o Mg dietético 2 º a restrição aumentou
reprodutivelmente o comportamento relacionado à ansiedade em camundongos
e que esse efeito foi robusto em termos de diferentes cepas e paradigmas usados.
Mg 2 º de fi A deficiência foi associada a um aumento da transcrição de prepro-CRH
no PVN, a principal região de saída do eixo HPA, e níveis elevados de ACTH no
plasma apontaram para um sistema de estresse regulado positivamente. Na
verdade, em Mg 2 º de fi A expressão de camundongos cientes do gene c-Fos inicial
provocadora de ansiedade, indicando hiper-reatividade funcional desta área do
cérebro. Em paralelo com a reversão das mudanças comportamentais provocadas
pelo Mg 2 º de fi deficiência, as anormalidades observadas no sistema do eixo HPA
foram restauradas por tratamentos com drogas ansiolíticas e antidepressivas.
Esses dados suportam uma relação entre baixo Mg 2 º níveis e comportamento
relacionado à ansiedade e um eixo de estresse modulado.

Em uma tentativa de obter evidências adicionais para uma possível relevância 4.1. Efeito do Mg 2 º de fi ciência e tratamento com antidepressivo crônico
funcional do aumento da expressão de mRNA prepro-CRH de PVN no Mg 2 º de fi Comportamento
em camundongos
relacionado à ansiedade aumentada induzido pela ciência, a expressão de c-Fos
foi usada para mapear a ativação neuronal no PVN em resposta ao desafio No presente estudo, a alimentação crônica de camundongos C57Bl / 6N com baixa
emocional leve da exposição do braço aberto. Como concentração de 2 º contendo comportamento de ansiedade aumentada por dieta no

Fig. 3. Esta fi figura mostra (A) autorradiogramas representativos e (B) quanti fi cátion da expressão do mRNA prepro-CRH no núcleo hipotalâmico paraventricular para camundongos C57Bl / 6N alimentados com a dieta
controle (controle; n ¼ 10), o Mg 2 º de fi dieta adequada (MgD; n ¼ 10), ou o Mg 2 º de fi dieta adequada após tratamento de longo prazo com desipramina (MgD º DMI; n ¼ 10); também fornece quanti fi cátion de não especificado fi c
hibridização. Os dados representam o SEM médio. * P < 0,05, *** P < 0,001 para Mg 2 º de fi ratos eficientes vs. controle e ### P < 0,001 para Mg tratado com desipramina 2 º de fi camundongos cientes vs. Mg 2 º de fi camundongos
eficientes.
 SB Sartori et al. / Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312 309

Tabela 3 apoio a esta ideia, o eixo HPA-estresse parece ser regulado positivamente em Mg 2 º de fi eficiente
Efeito do Mg 2 º de fi deficiência e tratamento crônico com desipramina em níveis plasmáticos de ACTH e
em comparação com camundongos de controle (ver abaixo).
corticosterona basais em camundongos C57Bl / 6N.
Durante o teste de exposição de braço aberto Mg 2 º de fi A ciência também aumentou o
Ao controle MgD MgD º DMI comportamento relacionado à ansiedade em camundongos BALB / c, uma cepa de camundongos
ACTH (pg / ml) 89,7 14,7 (19) 199 30,4 (19) ** 136 46,0 (8) com emocionalidade relatada como diferente ou mesmo oposta aos camundongos C57Bl / 6 ( Griebel
Corticosterona (ng / ml) 74,9 13,3 (30) 105 18,1 (30) 83,8 15,6 (21) et al., 2000 ) Este efeito coincidiu com uma distância percorrida atenuada que é considerada um

Os dados representam significa SEM. n e os números por grupo experimental são dados entre sinal de aumento da neofobia fl ectando “ característica ” ansiedade, observada particularmente em
parênteses atrás dos valores. ** P < 0,01 para MgD vs. camundongos de controle. MgD: Mg 2 º de fi ratos camundongos BALB / c (para revisão, ver Belzung e Griebel, 2001 ) Assim, parece que o Mg
cientes; MgD º DMI: Mg 2 º de fi ratos cientes tratados cronicamente com desipramina. dietético 2 º de fi a ciência aumentou ainda mais a ansiedade inata dessa linhagem. Além de reduzir
experimentalmente o Mg plasmático 2 º níveis, baixo Mg natural 2 º os níveis entre as linhagens de
camundongos também foram associados a um comportamento semelhante ao da ansiedade.
abrir fi teste de campo e claro / escuro em comparação com os controles. Esses fi as
Por exemplo, camundongos A / J caracterizados por maior comportamento relacionado à
descobertas estão de acordo com nossos resultados anteriores usando a sub-linha ansiedade em comparação com camundongos C57Bl / 6 têm menor Mg plasmático 2 º
C57Bl / 6J ( Singewald et al., 2004 ) que foram independentemente contra fi rmed por
Muroyama et al. (2009) . Além disso, incluímos outro teste de ansiedade, o teste de
hiponeofagia, que se refere à inibição da alimentação de roedores quando da
níveis ( Laarakker et al., 2011 )
exposição à novidade e que é um dos poucos testes disponíveis em termos de
Em seguida, testamos se era possível atenuar o aumento do comportamento
sensibilidade aos efeitos ansiolíticos crônicos, mas não tratamento com
relacionado à ansiedade do Mg 2 º de fi ratos cientes pela aplicação de
antidepressivo agudo (para revisão, ver Dulawa e Hen, 2005 ) Neste teste, as
farmacoterapias clinicamente eficazes. Aplicação do diazepam ansiolítico
medidas de comportamento relacionado à ansiedade também foram aumentadas
experimental e clinicamente estabelecido ( Aerni et al., 2004; Bentz et al., 2010;
em Mg 2 º de fi ratos cientes comparados com ratos alimentados com a dieta
Soravia et al., 2006 ; para revisão ver Millan, 2003 ) reverteu o aumento do
controle. Em contraste com nosso estudo anterior ( Singewald et al., 2004 ), o
comportamento relacionado à ansiedade de Mg 2 º de fi camundongos BALB / c
ganho de peso corporal foi aumentado em Mg 2 º de fi eficiente
cientes, enquanto foi ineficaz em camundongos controle, sugerindo eficácia fi cácia
do diazepam, particularmente em indivíduos com alta emocionalidade. Da mesma
em comparação com ratos de controle, excluindo o argumento de que a redução
forma, especi fi A cidade de ação do diazepam é descrita no modelo de
do apetite pode ter contribuído para o aumento da latência para alimentação.
camundongo HAB ( Kromer et al., 2005 ) e vários modelos de ratos psicopatológicos
Isso, no entanto, parece improvável, uma vez que a latência aumentada para
de ansiedade aumentada, incluindo os ratos HAB ( Liebsch et al., 1998 ) Além da
alimentação foi totalmente revertida pela desipramina, que é relatada por exercer
droga ansiolítica clássica diazepam, o tratamento crônico com desipramina
efeitos anoréxicos ou nenhuma mudança no ganho de peso corporal, em vez de
também reduziu o comportamento relacionado à ansiedade do Mg 2 º de fi camundongos
efeitos orexigênicos no início dos tratamentos ( Gobshtis et al., 2007; Sartori et al.,
C57BL / 6N cientes no teste de hiponeofagia (o presente estudo), embora não
2004; Yalcin et al., 2005 ) Na abertura fi teste de campo, teste claro / escuro e teste
tenha sido eficaz em alterar o comportamento semelhante a ansiedade ao ar livre fi
de hiponeofagia mostraram uma tendência para uma redução da locomoção
teste de campo e teste claro / escuro ( Singewald et al., 2004 ), cuja sensibilidade
induzida por ansiedade em Mg 2 º de fi ratos cientes em comparação com ratos
limitada aos efeitos ansiolíticos dos tratamentos antidepressivos crônicos é bem
alimentados com a dieta controle. No entanto, é improvável que o aumento do
conhecida (para revisão, ver Belzung, 2001 ) Efeitos ansiolíticos do tratamento
comportamento relacionado à ansiedade induzido por Mg 2 º de fi ciência está em fl uenciado
crônico com desipramina também foram relatados no zinco fi ratos cientes
por não especificado fi c efeitos na locomoção ou devido a uma deficiência motora
exibindo sinais de aumento do comportamento relacionado à ansiedade ( Whittle
geral asMg 2 º de fi os grupos eficientes e de controle não diferem na atividade
et al., 2009 ), bem como em roedores com níveis normais de ansiedade ( Bodnoff et
locomotora em suas gaiolas caseiras, bem como no teste do rotarod ( Singewald et
al., 1989, 1988; Merali et al., 2003; Santarelli et al., 2003 ) Modelos baseados em
al., 2004 ) No entanto, examinamos os efeitos ansiogênicos do Mg 2 º de fi ciência em
hiponeofagia em camundongos e ratos predizem os efeitos ansiolíticos de
um teste que é totalmente independente da locomoção, o teste de hipertermia
antidepressivos de uma maneira que é consistente com o curso de seus efeitos
induzida por estresse. Descobrimos que mesmo sob condições de estresse, a
em humanos (para revisão, ver Dulawa e Hen, 2005 ) No cenário clínico, a
temperatura corporal aumentou em Mg 2 º de fi camundongos eficientes em
imipramina, o pró-fármaco da desipramina, é usada no tratamento de transtornos
comparação com camundongos de controle, que pareciam limitar sua resposta
de ansiedade que incluem transtorno de ansiedade generalizada, transtorno de
hipertérmica à exposição ao estresse infantil. O aumento da temperatura corporal
pânico e transtorno de estresse pós-traumático (para revisão, consulte Plag et al.,
basal pode, portanto, apontar para um tipo de estado de estresse crônico
2009 ) O fi descobertas de efeitos ansiolíticos resultantes do tratamento com
induzido por Mg 2 º de fi ciência que causou um novo ponto de ajuste para a
diazepam e desipramina crônica em Mg 2 º de fi ratos eficientes reforçam ainda mais
temperatura corporal ( Keeney et al., 2001 ) Na verdade, a temperatura corporal
a validade do Mg 2 º de fi modelo de ciência do aumento do comportamento
basal elevada é relatada em animais cronicamente estressados ( Hayashida et al.,
relacionado à ansiedade em camundongos.
2010; Keeney et al., 2001 ), bem como em camundongos mutantes ( Guilloux et al.,
2011 ) exibindo sinais de aumento de comportamento relacionado à ansiedade e /
ou depressão. Em mais
Em contraste com a desipramina, o tratamento crônico com paroxetina não
afetou o comportamento relacionado à ansiedade no teste de hiponeofagia. Esta fi A
descoberta não se deve a uma possível subdosagem, uma vez que uma dose de 5
mg / kg de paroxetina demonstrou recentemente ser eficaz na redução do
Tabela 4
Efeito do Mg 2 º de fi deficiência e diazepam (1 mg / kg) no comportamento relacionado à ansiedade de
comportamento semelhante ao da depressão em Mg 2 º de fi ratos cientes ( Whittle et
camundongos BALB / c em resposta à exposição de braço aberto. al., 2011 ) Embora, ao nosso conhecimento, a paroxetina não tenha sido testada
até agora no teste de hiponeofagia, outro ISRS, fl uoxetina, provou exercer
Ao controle Mg 2 º de fi ciência
ansiólise após aplicação crônica, mas não aguda, em roedores ( Bodnoff et al.,
Veículo diazepam Veículo diazepam 1989; Dulawa et al., 2004; Santarelli et al., 2003 ), sugerindo que Mg 2 º de fi camundongos
Tempo em distal 11,3 2,7 15,7 1,3 2,2 0,8 * 15,7 4,6 ## cientes são insensíveis aos efeitos ansiolíticos do tratamento crônico com ISRS
compartimento (%) (paroxetina). Esta fi encontrar é de potencial interesse de pesquisa, como Mg 2 º
Distância 306 25 676 88 ### 162 39 512 70 ###
viajou (cm)
de fi camundongos cientes podem modelar uma proporção considerável de
Os dados são apresentados como médias SEM. n ¼ 10 por grupo experimental, com exceção do
grupo de controle tratado com veículo, onde n ¼ 9. * P < 0,05 para Mg 2 º de fi ratos eficientes vs. pacientes com um transtorno de ansiedade que não responde ao tratamento com
controle, ## P < 0,01, ### P < 0,001 para diazepam vs. tratamento com veículo. ISRS ( Liebowitz, 1997 ; para revisão ver Zamorski e Albucher, 2002 )
310 SB Sartori et al. / Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312

Fig. 4. Efeito do Mg 2 º de fi tratamento de ciência e diazepam (1 mg / kg, ip) no comportamento e expressão de c-Fos no núcleo hipotalâmico paraventricular (PVN) de camundongos BALB / c após
exposição ao braço aberto de um labirinto em cruz elevado. A. Em ratos alimentados com Mg 2 º dieta restrita o comportamento relacionado à ansiedade foi elevado, conforme indicado pelo número de
entradas no compartimento distal (ansiogênico) do braço aberto. O tratamento com diazepam normalizou esse fenótipo ansioso. B. Em comparação com os controles tratados com veículo, a indução de
c-Fos foi aumentada na porção magnocelular do PVN em Mg 2 º de fi ratos cientes e foi revertida pelo tratamento com diazepam. C. Fotografia representativa (barra de escala ¼ 100 m m) mostrando o
delineamento das regiões PVN analisadas com a ajuda de um atlas do cérebro de camundongo ( Paxinos e Franklin, 2001 ) D. Magni alta fi fotografia de cátion mostrando células c-Fos-positivas na porção
magnocelular do PVN em todos os grupos experimentais. Os dados representam o SEM médio. n ¼ 10 por grupo experimental. * P < 0,05, *** P < 0,001 para Mg 2 º de fi ratos cientes vs. ratos de controle,
###
P < 0,001 para diazepam vs. veículo. 3V: terceiro ventrículo; DZP: diazepam; magno: porção magnocelular do PVN; parvo: porção parvocelular do PVN; V: veículo.

4.2. Mg 2 º de fi deficiência está associada à desregulação do eixo HPA, que é Os níveis plasmáticos de base de ACTH e de corticosterona foram relatados
modulada pelo tratamento terapêutico com drogas anteriormente em camundongos pouco agressivos e podem ser explicados pela
sensibilidade adrenocortical alterada ao ACTH ( Veenema et al., 2003 ) Em Mg 2 º

Em uma tentativa de obter informações sobre o (s) mecanismo (s) neurobiológico (s)
subjacente (s) ao aumento do comportamento relacionado à ansiedade do Mg 2 º de fi-
ratos cientes, seguimos uma abordagem baseada em hipóteses, em vez de usar
uma técnica imparcial (ver também German-Fattal et al., 2008 ) que foi usado
anteriormente em nosso laboratório, onde alterações de proteínas cerebrais
foram identificadas fi ed que foram correlacionados com o comportamento
alterado de Mg relacionado à depressão 2 º de fi ratos cientes ( Whittle et al., 2011 )
Mg 2 º modula vários mecanismos neurobiológicos, incluindo sistemas de
neurotransmissores e o eixo HPA (para revisão, consulte Murck, 2002 ) O eixo HPA
é um substrato interessante, pois é conhecido por desempenhar um papel no
processamento do estresse e na ansiedade normal e patológica (para revisão,
consulte Charney e Drevets, 2008; Millan, 2003; Young et al., 2008 ) Speci fi calmente,
como Mg 2 º reduz a atividade do eixo HPA ( Held et al., 2002; Murck e Steiger, 1998 ),
uma desinibição deste sistema durante o Mg 2 º de fi ciência pode ser postulada. A
fim de abordar essa hipótese, investigamos marcadores da atividade do eixo HPA,
incluindo a transcrição pré-pró-CRH e os níveis plasmáticos de ACTH, em
camundongos controle experimentalmente ingênuos ou não estressados, Mg 2 º
de fi ratos eficientes o fi descobertas de abundância elevada de mRNA prepro-CRH e ponto
de liberação de ACTH em direção a um ponto de ajuste regulado para cima do eixo HPA
durante Mg 2 º de fi deficiência que também é observada em alguns, mas não em todos os
pacientes com transtorno de ansiedade (para revisão, ver
Charney e Drevets, 2008; Young et al., 2008 ) e, portanto, sugere-se que isso
contribua para o aumento do comportamento relacionado à ansiedade de Mg 2 º de fi
camundongos eficientes. Em apoio adicional a isso, observamos aumento da
atividade neuronal no PVN de Mg 2 º de fi camundongos BALB / c cientes em
resposta ao braço aberto de um labirinto em cruz elevado que, embora seja
considerado levemente ansiogênico, é capaz de causar a liberação de hormônios
do estresse e induzir a ativação neuronal em roedores em comparação com uma
condição sem estresse ( Muigg et al., 2009; Nguyen et al., 2009; Salome et al., 2004 )
Curiosamente, embora a ativação neuronal induzida por estresse tenha mostrado
ser embotada em áreas corticais de camundongos Balb / c em comparação com
camundongos C57Bl / 6, a ativação de PVN é semelhante entre as duas cepas ( O ' Mahony
et al., 2010 ) apoiando o uso de camundongos Balb / c complementares aos
camundongos C57Bl / 6N no presente estudo. O fi Encontrando um PVN
super-reativo em Mg 2 º

de fi ratos eficientes e Mg 2 º de fi camundongos cientes tratados cronicamente com
desipramina, a droga que demonstrou ser comportamentalmente ativa.
A abundância de prepro-CRHmRNA foi aumentada no PVN, a principal região
de saída do eixo HPA, de Mg 2 º de fi ratos cientes comparados com ratos de
controle. Além disso, os níveis plasmáticos de ACTH estavam elevados em Mg 2 º de fi
camundongos eficientes, indicando que o aumento na transcrição pré-pró-CRH se
traduziu em aumento da liberação de ACTH da pituitária, enquanto os níveis
plasmáticos de corticosterona não diferiram entre os grupos experimentais. Uma
divergência semelhante entre
de fi animais eficientes, portanto, demonstram relevância funcional do PVN na
mediação da hipersensibilidade. Esta reatividade excessiva do PVN pode ser
desencadeada pela taxa de transcrição aumentada de prepro-CRH. Como Mg 2 º de fi camundong
conscientes, camundongos HAB e ratos com alta ansiedade traço ( Kromer et al.,
2005; Liebsch et al., 1998 ), também mostram expressão aumentada de c-Fos no
PVN em comparação com suas contrapartes de baixa ansiedade (LAB) em resposta
à exposição de braço aberto ( Muigg et al., 2009; Salome et al., 2004 ) No PVN, os
níveis de CRH mostraram ser regulados positivamente por uma série de
estressores diferentes (para revisão, ver, por exemplo
 SB Sartori et al. / Neuropharmacology 62 (2012) 304 e 312 311

Holsboer, 2000 ), incluindo separação materna neonatal, um modelo animal
proposto de ansiedade e depressão (para revisão, ver
Sartori et al., 2011 ), e em ratos com alto traço de ansiedade ( Bosch et al., 2006 ) Em
linha com o presente fi achados, concentrações de CRH no cérebro fl uidos são
elevados no transtorno de estresse pós-traumático crônico relacionado ao
combate ( Baker et al., 1999; Bremner et al., 1997 ) No entanto, essas
anormalidades relatadas do eixo HPA são inconsistentes entre os estudos, pois,
por exemplo, as concentrações de plasma basal ou de cortisol na urina mostraram
estar aumentadas, inalteradas ou diminuídas em pacientes com transtorno de
ansiedade (para revisão, ver
Charney e Drevets, 2008; Young et al., 2008 ) Em Mg 2 º de fi Em camundongos
cientes, a aplicação do benzodiazepínico diazepam reduziu a hiper-reatividade do
PVN em resposta a um leve desafio emocional. A capacidade dos
benzodiazepínicos de diminuir a ativação neuronal induzida pelo estresse no PVN
foi demonstrada anteriormente em camundongos ( Imaki et al., 1995 ) e ratos ( Beck
e Fibiger, 1995; de Medeiros et al., 2005 ) Além disso, o tratamento crônico com
desipramina via água potável normalizou a superexpressão de CRH no PVN e os
níveis hormonais e atividade adrenocortical em veteranos de combate com transtorno de
estresse pós-traumático. Sou. J. Psychiatry 156, 585 e 588.
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níveis plasmáticos elevados de ACTH. Os antidepressivos tricíclicos mostraram

Bouwknecht, A., Olivier, B., Paylor, RE, 2007. A hipertermia induzida por estresse
atenuar a atividade do eixo HPA, que se acredita contribuir para suas ações paradigma como modelo animal fisiológico para ansiedade: uma revisão de estudos
ansiolíticas e antidepressivas (para revisão, consulte Holsboer, 2000 ) Ambos fi As farmacológicos e genéticos em camundongos. Neurosci. Biobehav. Rev. 31, 41 e 59.
Bremner, JD, Licinio, J., Darnell, A., Krystal, JH, Owens, MJ, Southwick, SM,
descobertas apoiam ainda mais a ideia de um envolvimento crítico do eixo HPA, e
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Mg 2 º de fi ciência. No entanto, deve-se notar que, devido a uma ligação comórbida Broadhurst, PL, 1961. Análise dos efeitos maternos na herança do comportamento.
existente entre ansiedade e depressão, não é possível fazer uma distinção clara Anim. Behav. 9, 129 e 141
Busquet, P., Khoi Nguyen, N., Schmid, E., Tanimoto, N., Seeliger, MW, Ben-Yosef, T.,
entre os mecanismos subjacentes apenas à ansiedade. Na verdade, Mg 2 º de fi camundongosMizuno, F., Akopian, A., Striessnig, J., Singewald, N., 2009. CaV1.3 L-type Ca2 º
cientes também são caracterizados por um fenótipo pró-depressivo que pode ser os canais modulam o comportamento semelhante à depressão em camundongos,

revertido por tratamentos antidepressivos crônicos, incluindo desipramina e
paroxetina ( Muroyama et al., 2009; Singewald et al., 2004; Whittle et al., 2011 )
Assim, pode ser que o eixo HPA regulado positivamente em Mg 2 º de fi ratos cientes
também é relevante para o comportamento semelhante ao da depressão
intensificado. Também em humanos, foi demonstrado que a depressão está
associada a um eixo HPA anormalmente elevado que é restaurado após a melhora
clínica (para revisão, ver
por exemplo Holsboer, 2000 )
Tomados em conjunto, o presente fi achados demonstram a robustez e
validade do Mg 2 º de fi modelo de ciência como modelo de comportamento
relacionado à ansiedade aprimorado e ainda suporta evidências emergentes em
humanos que reduziram o Mg 2 º os níveis estão associados a diferentes facetas do
comportamento de ansiedade ( Jacka et al., 2009; Seelig, 1994 ) Portanto, uma
relação inversa entre Mg 2 º e a ansiedade é sugerida por esses dados. Em termos
de ansiogênese induzida, o Mg 2 º de fi O modelo de ciência parece ser reproduzível
em todas as linhagens de camundongos, independentemente do nível de
ansiedade inata exibida. Finalmente, sugere-se que as desregulações no eixo HPA
podem contribuir para a hiperemocionalidade induzida pela hipomagnesemia
induzida pela dieta.
Reconhecimentos
Este trabalho foi financiado pelo Austrian Science Fund (FWF): P22931-B18 to
NS.
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