Disciplina: Morfofisiologia

Professor: Prof. Dr. Rodolfo de Paula Vieira

Tema do TBL: Tecidos do corpo humano e tecido epitelial.

Trabalho: Montar um mapa mental do artigo abaixo.

Estudo base para o TBL: Vieira RP, Toledo AC, Ferreira SC, Santos AB, Medeiros MC, Hage M,
Mauad T, Martins Mde A, Dolhnikoff M, Carvalho CR. Airway epithelium mediates the anti-
inflammatory effects of exercise on asthma. Respir Physiol Neurobiol. 2011 Mar 15;175(3):383-
9. doi: 10.1016/j.resp.2011.01.002. Epub 2011 Jan 12. PMID: 21236366.

“O epitélio das vias aéreas medeia os efeitos anti-inflamatórios do exercício na asma.”

Resumo

O epitélio das vias aéreas desempenha um papel importante na fisiopatologia da asma. O

exercício aeróbico diminui a resposta Th2 em modelos murinos de asma alérgica, mas seus
efeitos na estrutura e ativação do epitélio das vias aéreas na asma são desconhecidos.
Camundongos BALB/c foram divididos em grupo controle, exercício aeróbico, sensibilizado
com ovoalbumina e sensibilizado com ovoalbumina mais exercício aeróbico. A sensibilização à
ovalbumina ocorreu nos dias 0, 14, 28, 42 e o desafio com aerossol do dia 21 ao dia 50. O
exercício aeróbico começou no dia 22 e terminou no dia 50. As células totais e os eosinófilos
foram reduzidos no grupo sensibilizado com ovalbumina submetido ao exercício aeróbico. O
exercício aeróbico também reduziu o estresse oxidativo e nitrosativo e a expressão epitelial de
citocinas Th2, quimiocinas, moléculas de adesão, fatores de crescimento e receptor NF-kB e
P2X7. Adicionalmente, o exercício aeróbico aumentou a expressão epitelial de IL-10 em
animais sensibilizados e não sensibilizados. Esses achados contribuem para a compreensão dos
efeitos benéficos do exercício aeróbico para a inflamação alérgica crônica das vias aéreas,
sugerindo um papel imunorregulador do exercício no epitélio das vias aéreas.

1. Introdução

Estudos epidemiológicos demonstraram que a fumaça do tabaco contribui para o

desenvolvimento e aumento da gravidade da asma (Melgert e outros, 2004; Moerloose e
outros, 2005). Fumaça de cigarro exposição resulta em ataques e sintomas de asma mais
frequentes, comprometimento da função pulmonar e diminuição da eficácia do tratamento de
curto prazo. tratamento com corticosteroides inalatórios em pacientes virgens de esteroides
com asma (Althius et al., 1999; James et al., 2004; Siroux et al., 2000). Embora alguns ensaios
clínicos sugiram que os fumantes têm um risco menor de desenvolver sintomas de asma
quando comparados com não fumantes e ex-fumantes (Hjern et al., 2001; McWhorter et al.,
1989; Tsoumakidou et al., 2007), tais achados devem ser interpretados cuidadosamente
devido ao comportamento de alguns aspectos do asmático processo inflamatório (Churg et al.,
2006; Trimble et al., 2009). Estudos com modelos animais envolvendo fumaça de cigarro e
alergia asma têm mostrado resultados conflitantes, principalmente em relação à inflamação e
remodelação (Melgert et al., 2004; Min et al., 2007; Moerloose et al., 2005; Robbins e outros,
2005). Alguns estudos têm demonstraram que a exposição de curto prazo à fumaça ambiental
do tabaco em modelos experimentais de asma em camundongos induz níveis aumentados de
remodelamento das vias aéreas associado a um aumento de eosinófilos no fluido de lavagem
broncoalveolar (Min et al., 2007; Moerloose et al., 2005). No entanto, outros demonstraram
uma diminuição da inflamação células após exposição à fumaça de curto prazo em
camundongos alérgicos (Melgert e outros, 2004; Robbins e outros, 2005). A inflamação das
vias aéreas e a remodelação pulmonar são características distintas características observadas
na asma clínica e experimental, como bem como na exposição à fumaça do cigarro, e essas
características são claramente relacionados à obstrução do fluxo aéreo (Churg et al., 2006). A
patogênese de inflamação das vias aéreas e remodelação pulmonar em doenças pulmonares
envolvendo a exposição ao cigarro é um campo repleto de divergências (Jeffery, 2001).
Existem duas principais escolas de pensamento sobre o assunto: sustenta-se que a
remodelação pulmonar é uma resposta a repetidos lesões inflamatórias causadas pela
exposição à fumaça do cigarro e representa uma tendência para o desenvolvimento de
inflamação anormal reações a pequenos estímulos (Jeffery, 2001). Este ponto de vista explica
as mudanças na estrutura das vias aéreas como uma cicatrização exagerada processo por
células inflamatórias. Outra perspectiva é que o pulmão remodelação é um produto da
liberação excessiva de fatores de crescimento (por exemplo, TGF- e colágeno tipos I e III),
levando a um aumento do tecido fibrótico e da espessura muscular. Esses fatores de
crescimento poderia ser uma resposta direta aos agentes provocativos mediados por lesão
crônica ou reparo do epitélio das vias aéreas, mas não diretamente ditado pela resposta
inflamatória (Chapman, 2004; Churg et al., 2006; Gauldie et al., 2002; Kenyon et al., 2003;
Selman e outros, 2001). Esses achados sugerem que inflamação e fibrose podem ocorrer
independentemente (Chapman, 2004; Gauldie et al., 2002; Selman et al., 2001). Portanto,
concluímos que a exposição à fumaça do cigarro poderia causar efeitos opostos na inflamação
das vias aéreas, responsividade e remodelação pulmonar na asma. No presente estudo,
utilizamos um modelo experimental de inflamação alérgica em camundongos BALB/c para
investigar os efeitos de três semanas de exposição leve à fumaça do cigarro na inflamação
pulmonar e remodelação pulmonar quando ambos estímulos (ou seja, desafio com alérgenos e
fumaça de cigarro) são administrados simultaneamente.

2. Métodos

2.1. Animais e desenho experimental

Trinta e um camundongos machos BALB/c (20–25 g) do biotério da Faculdade de Medicina da

Universidade de São Paulo foram divididos em 4 grupos da seguinte forma: animais não
sensibilizados e expostos ao ar (controle grupo, n = 8); animais não sensibilizados e expostos
ao cigarro fumo (grupo CS, n = 7); animais sensibilizados e expostos ao ar (OVA grupo, n = 7); e
animais sensibilizados e expostos ao cigarro fumo (grupo OVA + CS, n = 9). Este estudo foi
aprovado pelo Conselho de Revisão de Estudos Humanos e Animais da Escola de Medicina da
Universidade de São Paulo. Todos os cuidados com animais e experimentais procedimentos
seguiram a Diretiva da UE, 2010/63/EU para diretrizes para experimentos com animais (Jornal
Oficial da União Européia União, 2010).

2.2. Modelo OVA

Utilizamos um protocolo OVA modificado de Vieira et al. (2007). Camundongos BALB/c foram
sensibilizados por injeção intraperitoneal (i.p.) de ovalbumina adsorvida em hidróxido de
alumínio (OVA) (50 g por camundongo) ou soro fisiológico (NaCl 0,9%) nos dias 0, 14 e 28.
Vinte e um dias após a primeira administração i.p. injeção, os ratos foram expostos a aerossol
OVA (1%) ou solução salina 3 vezes por semana durante 30 min pela manhã até dia 42 (Fig.
1A).

2.3. Exposição à fumaça de cigarro

Usamos um protocolo modificado de exposição à fumaça de cigarro de Biselli et al. (2011)

iniciando 21 dias após a primeira imunização e durando até o dia 42, como no protocolo OVA.
Camundongos CS e OVA + CS foram expostos à fumaça de cigarro por 30 minutos por dia e 5
dias por semana durante 3 semanas à tarde (Fig. 1A e B). A vazão foi fixada em 1,5 L/min, o
que produziu níveis de monóxido de carbono (CO) variando de 300 a 350 ppm e resultou em
níveis sanguíneos de carboxihemoglobina de 10%.

2.4. mecânica respiratória

Quarenta e oito horas após o último desafio, os animais foram anestesiados com pentobarbital
sódico (50 mg/kg i.p.) e realizada traqueostomia. Os ratos foram então conectados a
umventilador para pequenos animais (flexiVent, Scireq, Quebec, Canadá) com o volume
corrente e frequência ajustados em 20 mL/kg e 2 Hz, respectivamente. Após 1 min, os animais
foram paralisados com pancurônio brometo (1 mg/kg), e o nível anestésico foi verificado
durante todo o procedimento. Medidas oscilatórias da mecânica pulmonar foram realizadas
para obtenção da resistência das vias aéreas (Raw), pequenas resistência das vias aéreas (Gtis)
e elastância do tecido (Htis) (Hantos et al., 1992).

2.4.1. Curva dose-resposta de metacolina

Diferentes concentrações de metacolina, variando de 6 a50 mg/mL, foram entregues por um

dispositivo ultrassônico durante 1 min (Respira Max, NS, LTDA, São Paulo, Brasil). Após 30 s,
respiração dados mecânicos foram coletados. Uma curva de resposta para bronquite
responsividade foi realizada imediatamente após a metacolina desafio, e líquido
broncoalveolar (BALF) e sangue foram coletados. Os animais foram eutanasiados por
exsanguinação rápida via a aorta abdominal enquanto anestesiado.

2.5. Medição de IgE sérica

A IgE sérica total foi medida usando um kit de ensaio imunossorvente (ELISA) (Pharmingen, San
Diego, CA) após protocolo do fabricante.

2.6. Contagem total e diferencial de células no lavado broncoalveolar fluido (BALF)

Os pulmões foram suavemente lavados com 3 instilações de 0,5 mL de solução salina

tamponada com fosfato (PBS, pH 7,2) via cânula traqueal. Total as células foram contadas em
uma câmara de hemocitômetro de Neubauerˇıs. Diferencial contagens de células de 300
células/animal foram obtidas após Diff Coloração rápida de BALF preparado em lâminas. Todas
as medições foram tomada de forma cega.

2.7. Ensaio Bio-Plex para IL-4, IL-5, eotaxina, IL-10, IFN-, GM-CSF e VEGF do tecido pulmonar

Um kit de ensaio de citocina 7-Plex de camundongo (Millipore Laboratories, Inc., Merck KGaA,
Darmstadt, Alemanha) foi usado para testar amostras para presença de 7 citocinas. O ensaio
foi lido no Bio-Plex sistema de matriz de suspensão. Os dados foram normalizados para a
quantidade de tecido de entrada.

2.8. Histologia e morfometria pulmonar

Os pulmões direitos foram fixados em formalina e embebidos em parafina. Cortes de cinco
micrômetros de espessura foram corados com picrosirius vermelho (PS) para fibras colágenas.
A imuno-histoquímica (IHC) foi realizada com anticorpos anti-IL4, anti-IL-5, anti-IL-10 e anti-
TGF-beta (Santa Cruz, CA), conforme descrito anteriormente (de Magalhães Simões et al.,
2005). Medições do conteúdo de colágeno e IHC positivo células foram realizadas com
software de análise de imagem (Image-Pro Plus, 4.5.0.29 para Windows, Media Cybernetics,
Silver Spring, MD) em imagens adquiridas de um microscópio de luz com uma câmera digital
conectada a um computador (Leica DMR; Leica Microsystems, Wetzlar GmbH, Wetzlar,
Alemanha). As análises foram feito de cinco imagens de uma via aérea cortada
transversalmente e suas adjacentes estrutura vascular. O conteúdo de colágeno foi medido
dentro de o espaço adventício entre a via aérea e o sangue adjacente vaso (espaço
peribroncovascular) como a área de colágeno dividida por o respectivo comprimento da
membrana basal (m2/ m = m). IL-4 e células IL-5-positivas também foram medidas no
peribroncovascular espaço, onde a infiltração por células inflamatórias neste modelo murino é
mais intenso (Vieira et al., 2007; Arantes-Costa e outros, 2008). Células positivas para TGF- - e
IL-10 foram medidas no bronchial epithelium, in the area between the basement membrane
and airway lumen. Cell density was assessed as the number of positive cells divided by the
respective basement membrane length (cells/m) in 5 bronchovascular structures at a ×400
magnification. All morphometric measurements were performed in a blinded fashion.

2.9. Statistical analyses

Comparisons among groups were performed by a one-way analysis of variance followed by

Tukey’s post hoc test (parametric data) or by a one-way analysis of variance on ranks followed
by Dunn’s post hoc test (non-parametric data). The significance level wasadjusted to 5% (p <
0.05). The correlation between the number of TGF--positive cells in the bronchial epithelium
and collagen fiber content was performed using Pearson’s correlation. For statistical analyses,
we used the Sigma Stat 3.5 Software (San Jose, CA).

3. Resultados

3.1. CS atenua a inflamação eosinofílica induzida por OVA independente de IgE

A exposição ao OVA resultou em um aumento significativo na eosinófilos, neutrófilos,

linfócitos e macrófagos (Tabela 1). O aumento de neutrófilos, linfócitos e macrófagos no LBA
não foram observados no grupo que foi exposto tanto à ovalbumina e fumaça de cigarro
(grupo OVA + CS). Exposição ao cigarro a fumaça também atenuou o aumento de eosinófilos
induzido pela OVA exposição; portanto, o número de eosinófilos observados no BALF do grupo
OVA + CS foram significativamente maiores do que no grupo grupo CS, mas menor do que no
grupo OVA. Houve um aumento na IgE sérica total em ambos os grupos sensibilizados. grupos
de camundongos (grupos OVA e OVA + CS) em comparação com os grupos controle e CS (p <
0,001). A exposição à fumaça do cigarro não afetam esse aumento de IgE (Fig. 2).

3.2. Diminuição da elastância do tecido após a exposição CS em Camundongos desafiados

com OVA

A exposição ao OVA resultou em valores mais altos de elastância tecidual (Htis) em

comparação com os grupos controle e CS (p < 0,05) (fig. 3A). Os valores de Htis após o desafio
com metacolina foram significativamente maior no grupo OVA em comparação com o grupo
controle (p < 0,008 nas concentrações de 6, 12 e 25 mg/mL, e p < 0,05 em níveis basais e 50
mg/mL). Sem aumento significativo da pressão pulmonar resposta de elastância foi observada
no grupo OVA + CS em comparação com os grupos controle e CS. Não houve significativos
diferenças no Gtis (resistência das pequenas vias aéreas) ou Raw (resistência das vias aéreas)
entre os quatro grupos experimentais (Fig. 3B e C).

3.3. Efeitos da exposição a OVA e CS na expressão de citocinas

Os níveis de IL-4 no tecido pulmonar foram aumentados no grupo OVA quando comparado
com todos os outros grupos (p < 0,04) (fig. 4A). O grupo OVA também mostrou um aumento
significativo em IL-4-positivo células no compartimento peribroncovascular (p = 0,01 em
comparação com o grupo de controle, Fig. 4B). Não houve diferença significativa entre os
grupos OVA e OVA-CS (p = 0,06). A coexposição à fumaça do cigarro não aumentou os níveis de
IL-5 no tecido pulmonar ou o número de células IL-5 positivas no espaço peribroncovascular
(Fig. 4C e D, respectivamente). O OVA grupos mostraram um aumento significativo nos níveis
de IL-5 no tecido pulmonar quando comparado com todos os outros grupos (p = 0,004); no
entanto, essa diferença não pôde ser detectada na peribroncovascular espaço, apesar das
semelhanças gráficas (p = 0,06). A exposição à fumaça do cigarro não aumentou os níveis de
eotaxina no tecido pulmonar (Fig. 4E). O grupo OVA apresentou um aumento significativo na
eotaxina quando comparado com todos os outros grupos (p = 0,01). Em contraste, foi
observado um aumento nos níveis de IFN- no tecido pulmonar no grupo OVA + CS quando
comparado com todos os outros grupos (p = 0,001) (Fig. 4F). A Fig. 5 mostra um painel com os
níveis de IL-10 medidos no Bio-Ensaio Plex e o número de células positivas para IL-10 nos
brônquios epitélio (Fig. 5A e B, respectivamente). Houve um aumento Níveis de IL-10 nos
grupos CS, OVA e OVA + CS, com OVA + CS grupo significativamente diferente de todos os
outros grupos (p = 0,001). Os grupos CS e OVA também apresentaram diferenças significativas
em comparação com o grupo Controle (p < 0,05) (Fig. 5A). a abundância de células positivas
para IL-10 também aumentou nos grupos expostos à fumaça de cigarro quando comparados
com o grupo Controle (p < 0,05) (Fig. 5B).

3.4. CS induz a remodelação das vias aéreas em camundongos desafiados com OVA

A exposição à ovalbumina resultou em um aumento não significativo no conteúdo de fibras de

colágeno na área peribroncovascular (p = 0,06em comparação com o grupo de controle, Fig.
6). Apenas o OVA + CS grupo mostrou um aumento significativo do conteúdo de fibras de
colágeno na área peribroncovascular (p = 0,001 comparado com o outros três grupos). Os
painéis A–D mostram fotomicrografias representativas do conteúdo de colágeno nas
estruturas broncovasculares nos quatro grupos experimentais após coloração para colágeno
fibras. O grupo OVA + CS apresentou aumento significativo na abundância de células TGF-
positivas no epitélio brônquico (p < 0,005 em comparação com os grupos Controle e CS, Fig.
7A). Exposição isolada a OVA ou fumaça de cigarro não aumentou a densidade de células
positivas para TGF no epitélio. Além disso, havia uma forte correlação entre células epiteliais
positivas para TGF e conteúdo de fibras de colágeno peribroncovascular (Fig. 6) no OVA + CS
grupo (r = 0,91; p = 0,01). O ensaio de citocinas também mostrou um aumento nos níveis de
GM-CSF no grupo OVA + CS em comparação com todos os outros grupos (p = 0,004) (Fig. 7B).
Fumaça de cigarro a exposição também aumentou os níveis de VEGF, conforme indicado na
Fig. 7C. O grupo OVA + CS mostrou uma diferença significativa nos níveis de VEGF em
comparação com os grupos Controle e OVA (p = 0,03). O grupo CS mostrou um aumento
semelhante nos níveis de VEGF quando comparado com o camundongos controle (p = 0,01).

4. Discussão
No presente estudo, mostramos pela primeira vez que a via aérea epitélio está envolvido nos
efeitos anti-inflamatórios da exercício aeróbico em um modelo de asma, reduzindo tanto a
oxidação estresse nitrosativo e a expressão epitelial de Th2 citocinas, quimiocinas, moléculas
de adesão, fatores de crescimento e metaloproteases de matriz. Este estudo também
demonstra que parte da estes efeitos anti-inflamatórios parecem ser mediados por uma
redução expressão epitelial de NF-kB e do receptor purinérgico P2X7 e por uma expressão
epitelial aumentada de IL-10.

4.1. Alterações estruturais das células epiteliais na asma e exercício

Muitos tipos distintos de células epiteliais estão presentes no sistema respiratório humano.
epitélio, e com base em parâmetros ultraestruturais, funcionais e critérios bioquímicos, esses
tipos são classificados como basais, ciliados ou secretor (Spina, 1998). As células epiteliais
ciliadas são as predominantes tipo de célula dentro das vias aéreas, respondendo por mais de
50% todas as células epiteliais (Spina, 1998). No entanto, danos epiteliais e descamação, bem
como hiperplasia epitelial de células caliciformes e hiperprodução de muco foram descritos na
asma, contribuindo a uma tosse produtiva e obstrução das vias aéreas (Knight e Holgate, 2003;
Lumsden et al., 1984). Curiosamente, no presente estudo, o grupo controle apresentou
proporção semelhante de células ciliadas ao que foi descrito em seres humanos sem doença
respiratória. Além disso, alergia às vias aéreas induzida por OVA inflamação diminuiu a
proporção de volume de células ciliadas epiteliais células e aumentou a proporção de volume
de células caliciformes, um padrão que foi previamente descrito em pacientes asmáticos
(Knight e Holgate, 2003; Lumsden et al., 1984; Spina, 1998). Em No presente estudo, também
observamos que o exercício aeróbico (EA), em animais não sensibilizados ou sensibilizados,
aumentou o número de células epiteliais e diminuiu o número de células ciliadas em fluido
BAL, fenômenos anteriormente elegantemente demonstrados em não sensibilizados animais
Chimenti et al. (2007). Neste estudo, os autores também demonstraram que, embora o AE
tenha aumentado a apoptose de células epiteliais, o estímulo para a proliferação epitelial foi
maior, resultando em um balanço positivo ou renovação das células epiteliais das vias aéreas
(Chimenti e outros, 2007). Sobre os efeitos do EA nas vias aéreas células epiteliais de animais
com inflamação alérgica das vias aéreas, observaram que embora o AE diminuísse a hiperplasia
de células caliciformes, não modificam a produção de muco (Fig. 1B).

4.2. Resposta imunomoduladora do epitélio das vias aéreas à alergia e exercício

Embora as funções do epitélio das vias aéreas tenham sido inicialmente descrito como
protetor, nos últimos anos, uma variedade de efeitos imunomoduladores foram atribuídos a
essas células, ou seja, secreção de citocinas, quimiocinas, radicais livres e crescimento fatores
(Bedard e Krause, 2007; Boots et al., 2009; Bove et al., 2007; Broide et al., 2005; Dugger e
outros, 2009; Forteza et al., 2005; Pantano et al., 2008; Rennard et al., 2005; van Wetering e
outros, 2007). No presente estudo, demonstramos que o EA em animais sensibilizados diminui
a expressão epitelial induzida por OVA de IL-4, IL-5, IL-13, CCL11, CCL5, moléculas de adesão
ICAM-1 e VCAM-1, iNOS e NF-kB. Além disso, o AE aumentou a expressão epitelial de
antiinflamatórios citocina IL-10 (Fig. 1). Esses resultados são extremamente relevante, pois o
EA reduz a expressão epitelial das principais proteínas envolvidos no processo inflamatório da
asma, que são relacionado com a migração eosinofílica e linfocítica para as vias aéreas bem
como à remodelação das vias aéreas (Lilly et al., 1997; Puxeddu e outros, 2006; van Wetering
et al., 2007; Wilson et al., 2001; Wong

e outros, 2006).
4.3. Resposta oxidativa e nitrosativa epitelial às vias aéreas inflamação e exercício

No presente estudo, também observamos que o EA reduziu a expressão epitelial de GP91phox

e 3-nitrotirosina e peribrônquica expressão de 8-isoprostano (Fig. 3A). Níveis aumentados de
espécies reativas de oxigênio (ROS) e nitrogênio (RNS) na asma têm sido relacionados com a
liberação de pró-inflamatórios e pró-fibróticos moléculas através da ativação de NF-kB (Bedard
e Krause, 2007). Curiosamente, nossos resultados demonstram pela primeira vez que AE reduz
a expressão de GP91phox e 3-nitrotirosina, que são marcadores de estresse oxidativo e
nitrosativo, respectivamente (Fig. 2A). Também demonstramos que o EA reduziu o acúmulo de
8-isoprostano na parede das vias aéreas, que é um importante marcador de dano
oxidativo/nitrosativo (Roberts e Morrow, 2000). A expressão reduzida de GP91phox, 3-
nitrotirosina e O 8-isoprostano é digno de nota, uma vez que essas moléculas estão envolvidas
em muitas respostas pró-inflamatórias nas vias aéreas asmáticas (Bedard e Krause, 2007).
GP91phox (também chamado de NOX2) é um subunidade de nicotinamida adenina
dinucleotídeo fosfato reduzido (NADPH) oxidase (NOX), e representa a principal fonte de ânion
superóxido durante a explosão oxidativa, enquanto 3- nitrotirosina é uma importante espécie
reativa de nitrogênio (Bedard e Krause, 2007). Aqui, nossos dados mostram claramente que o
AE tem um efeito direto na redução da formação de espécies oxidativas de oxigênio
(GP91phox) e também em espécies reativas de nitrogênio (3-nitrotirosina) síntese, efeitos que
não foram mediados pelo aumento da expressão de enzimas antioxidantes superóxido
dismutase 1 (SOD-1), SOD-2 e glutationa peroxidase (GPX) (Fig. 2B). Estes dados tornou-se
especialmente importante, uma vez que ROS e RNS induzem a liberação de fatores de
crescimento, metaloproteinases de matriz (MMPs), e liberação de citocinas (Bedard e Krause,
2007), respostas que também foram observadas no presente estudo (Fig. 2A e B). No entanto,
embora AE tenha reduzido a expressão de GP91phox, 3-nitrotirosina e 8-isoprostano em
animais sensibilizados com OVA, no presente estudo não fomos capazes de demonstrar que
tais efeitos de EA foram responsáveis para redução da inflamação eosinofílica.

4.4. Influência da sensibilização e exercício em células epiteliais fatores de crescimento,

metaloproteases e anti-metaloproteases

Curiosamente, também observamos que o EA reduz a expressão epitelial de fatores de

crescimento, fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF-1), receptor do fator de
crescimento epitelial (EGFr), endotelial vascular fator de crescimento (VEGF) e fator
transformador de crescimento beta (TGF-beta) em animais sensibilizados (Fig. 3A); todos esses
fatores são conhecidos por serem importantes mediadores da remodelação das vias aéreas na
asma (Bove e outros, 2007; Davies, 2009). Esses efeitos de AE em fatores de crescimento
expressão são muito relevantes porque os resultados do nosso grupo e outros demonstraram
que o EA reduz a remodelação das vias aéreas (Hewitt et al., 2009, 2010; Pastva et al., 2004,
2005; Silva e outros, 2010; Vieira e outros, 2007, 2008). Então, embora no presente estudo não
podemos estabelecer uma relação causal entre o downregulatory efeitos de AE na expressão
epitelial de fatores de crescimento com os efeitos antifibróticos de AE no modelo de asma (ver
Pastva e outros, 2004, 2005; Silva et al., 2010; Vieira et al., 2007, 2008), pode demonstrar pela
primeira vez que o AE pode exercer algum efeito sobre a expressão de fatores de crescimento
envolvidos na remodelação das vias aéreas processo na asma. Além disso, também
observamos que o EA reduz a expressão epitelial induzida por OVA da metaloproteinase da
matriz 12 (MMP-12), inibidor tecidual da metaloproteinase 1 (TIMP-1) e TIMP-2 (Fig. 3B).
Expressões aumentadas de MMP-12 (Dolhnikoff et al., 2009), bem como TIMP-1 e TIMP-2
(Chiba et al., 2007) foram demonstrados nas vias aéreas de ratos com vias aéreas alérgicas
inflamação e também de pacientes asmáticos, resultados que são de acordo com os achados
deste estudo. Expressão aumentada de metaloproteinases de matriz (MMPs) estão envolvidas
na degradação de diferentes matrizes de proteínas extracelulares (ou seja, colágeno, elastina,
lamininas e proteoglicanos), levando alguns tipos de células (ou seja, fibroblastos) para
responder à produção anormal de proteínas de extracelular matriz, causando fibrose (Chiba et
al., 2007; Davies, 2009; Dolhnikoff e outros, 2009). Então, os achados apresentados no
presente estudo sugeremque AE pode modular a expressão MMPs e TIMPs, e ainda estudos
são necessários para elucidar os mecanismos envolvidos na resposta.

4.5. Influência da sensibilização e do exercício no tecido epitelial expressão do receptor

purinérgico P2X7

Finalmente, avaliamos a expressão epitelial do receptor P2X7 (P2X7R) como um possível

mecanismo de AE regulando alergia inflamação e remodelação das vias aéreas. Descobrimos
que sensibilizados os animais apresentaram um aumento significativo na expressão epitelial de
P2X7R, enquanto AE reduziu sua expressão (Fig. 4), sugerindo um efeito inibitório de AE na
regulação positiva de P2X7R induzida por OVA. P2X7R é um receptor de membrana plasmática
e um gatedchannel/receptor de poro que é ativado por adenosina extracelular trifosfato (ATP)
e expresso em células epiteliais pulmonares (Burnstock e outros, 2010; Ferrari e outros, 2006;
Müller et al., 2010). P2X7R é envolvidos na regulação do sistema imunológico, incluindo o
controle de citocinas pró-inflamatórias (Ferrari et al., 2006). Um recente estudo demonstrou
que P2X7R é regulado positivamente e envolvido em o desenvolvimento de inflamação e
remodelação das vias aéreas (Muller e outros, 2010). No entanto, esta é apenas a primeira
demonstração de que AE reduz a expressão de P2X7R em animais com vias aéreas alérgicas
crônicas inflamação, e estudos posteriores usando animais P2X7Rknockout ou inibidores
específicos de P2X7R (ou seja, KN62) são necessários para melhor sob defendem o possível
papel de P2X7R nos efeitos anti-inflamatórios de EA na asma. Assim, no presente estudo não
podemos demonstrar a relação causal entre a expressão de P2X7R de redução de AE e seus
efeitos anti-inflamatórios.

Portanto, concluímos que o exercício aeróbico modula o resposta epitelial em um modelo

animal de asma, reduzindo a expressão epitelial de importantes agentes pró-inflamatórios e
mediadores pró-fibróticos, bem como pelo aumento da expressão de antiinflamatórios
citocina IL-10. No entanto, estudos adicionais visando para investigar uma relação causal entre
estes exercícios-redução expressão epitelial de moléculas pró-inflamatórias são necessárias.