Machine Translated by Google

Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149

Listas de conteúdos disponíveis em ScienceDirect

Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos

página inicial da revista: www.journals.elsevier.com/current-research-in-pharmacology and-drug-discovery

Papel das citocinas pró-inflamatórias na doença de Alzheimer e

efeitos neuroprotetores de nanoscaffolds automontados peguilados
b
Varsha Rani , Rinki Verma , Krishan Kumar , Ruchi Chawla a,*
uma uma

uma

Departamento de Engenharia e Tecnologia Farmacêutica, Instituto Indiano de Tecnologia (Banaras Hindu University), Varanasi, (UP), 221005, Índia b
Escola de Engenharia Biomédica, Instituto Indiano de Tecnologia (Banaras Hindu University), Varanasi, (UP), 221005, Índia

INFORMAÇÕES DO ARTIGO RESUMO

Palavras-chave: A neurodegeneração e a perda sináptica na doença de Alzheimer (DA) levam ao comprometimento das funções da memória.
doença de Alzheimer
A neuroinflamação causa ativação de células da micróglia e astrócitos que local e sistemicamente produzem citocinas inflamatórias
neuroinflamação
que podem servir como marcadores diagnósticos precoces ou alvos terapêuticos na DA. Os níveis de citocinas pró-inflamatórias
neurodegeneração
(interleucinas (IL-1ÿ, IL-6 e IL-10) e fator de necrose tumoral (TNF ÿ)) foram estimados no soro, tecido cerebral, tecido hepático e
Citocinas
Interleucinas tecido renal em grupos de tratamento de amnésia induzida por escopolamina modelo de camundongos usando o protocolo ELISA.
Os resultados mostraram que o tecido cerebral de camundongos com DA exibiu níveis elevados de IL1ÿ, IL6, IL10 e TNFÿ que
indicam a contribuição de citocinas pró-inflamatórias na progressão da DA. Uma redução significativa na concentração de IL1ÿ, IL-10
e TNF-ÿ foi notada no soro, tecido cerebral e tecido hepático do grupo de animais tratados com comprimido de memantina
comercializado (Admenta), memantina pura (MEMp), memantina-poli (láctico -co-ácido glicólico) nanoscaffolds automontados (MEM-
PLGA) SANs, memantina revestida de polietilenoglicol-poli (ácido lático-co-glicólico) nanoscaffolds automontados [SANs (PEG-MEM-
PLGA)] e memantina revestida de polietilenoglicol -poli [(ácido láctico-co-glicólico)] nanoscaffolds automontados enxertados com
células-tronco derivadas da medula óssea ((PEG-MEM-PLGA) SANs-BMSc), enquanto um alto nível de IL-6 foi observado no tecido
hepático, tecido cerebral e tecidos renais de camundongos normais e induzidos por DA, que mostraram o potencial emergente de
citocinas IL-6 que podem desencadear a sobrevivência de neurônios após lesão ou causar neurodegeneração e apoptose celular. O
potencial neuroregenerativo das células-tronco ajuda na proliferação de células neuronais e, assim, melhora a cognição no modelo
animal de DA.

1. Introdução
As citocinas pró-inflamatórias desempenham um papel crucial na gênese do
patógeno da doença de Alzheimer (DA) (Rubio-Perez e Morillas-Ruiz, 2012).
Essas citocinas atuam como um biomarcador para avaliar processos biológicos normais,
processos patológicos e respostas biológicas após uma intervenção terapêutica. A
doença de Alzheimer (DA), um distúrbio neurodegenerativo progressivo, é caracterizada
por inflamação crônica na microglia, astrócitos e outras células sanguíneas periféricas
devido ao acúmulo de placas amiloides e emaranhados neurofibrilares no cérebro (Kinney
et al., 2018). Foi relatado que os mediadores inflamatórios, como as citocinas, têm um
papel significativo na imunologia e na patogênese da DA. a liberação de várias citocinas,
como IL-1, IL-6,
IL-10 e TNF ÿ conforme ilustrado na Tabela 1 (Park et al., 2020a; Domingues et al., 2017)
Essas citocinas pró-inflamatórias são liberadas logo após o início da DA, mas não se
sabe se a inflamação predispõe à deterioração neurológica. Neste estudo foi estudada a
implicação da interleucina e do fator de necrose tumoral na piora neurológica precoce no
cérebro. Além do papel das citocinas no cérebro, sua expressão e efeito também foram
avaliados no sangue, tecido renal e hepático para entender os fenômenos
neurodegenerativos na DA. Existem vários biomarcadores, como biomarcadores de
proliferação de linfócitos, marcadores de superfície celular, marcadores morfológicos e
histopatológicos que fornecem informações clínicas e patológicas para facilitar o
diagnóstico e o manejo da DA.
No entanto, integrar esses biomarcadores na prática clínica de forma eficaz e precisa é
um desafio e requer estudos aprofundados para validar ainda mais a reprodutibilidade, a
interpretação dos dados e a eficiência de custos.
Várias literaturas sugeriram o papel e o efeito de pró-inflamatórios

* Autor correspondente. Departamento de Engenharia e Tecnologia Farmacêutica, Instituto Indiano de Tecnologia (Banaras Hindu University), Varanasi, 221005, UP, Índia.

Endereço de e-mail: rchawla.phe@iitbhu.ac.in (R. Chawla).

https://doi.org/10.1016/j.crphar.2022.100149
Recebido em 17 de junho de 2022; Recebido no formulário revisado em 9 de dezembro de 2022; Aceito em 19
de dezembro de 2022 2590-2571/© 2022 Publicado por Elsevier BV Este é um artigo de acesso aberto sob a licença CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
Tabela
1 Efeito das citocinas pró-inflamatórias nos neurônios e na placa Aÿ.
Citocinas pró- Origem no SNC Efeitos nos neurônios
inflamatórias
IL-1ÿ Microglia, Astrócitos Neurodegeneração e perda sináptica
IL-6 Microglia, Astrócitos, células endoteliais e Resgate de neurônios danificados e evite a perda
células hepatócitos sináptica
IL-10 Microglia Pró-apoptótico
TNF-ÿ Astrócitos, neurônios microgliais Pró-apoptótico, previne apoptose e
excitotoxicidade sináptica
citocinas na patogênese da DA. A IL-1ÿ é superexpressa na microglia do cérebro na DA
devido à formação da placa Aÿ, fosforilação da tau e formação do emaranhado neurofibrilar
(Park et al., 2020b; Harry e Kraft, 2008). Da mesma forma, IL-6 é uma citocina pleiotrópica
com efeitos benéficos e destrutivos na inflamação, resposta imune e hematopoiese que
contribuem para a diferenciação de células B ativadas em células produtoras de anticorpos
(Ab) e fator estimulador de hepatócitos (HSF) em hepatócitos e regeneração nervosa
(Gabay, 2006). A IL-6 pode atuar como neurodegenerativa e neuroprotetora com base na
condição dos neurônios.
A estimulação inicial de IL-6 contribui em efeito destrutivo e posteriormente
a neurodegeneração excessiva leva à ação neuroprotetora da IL-6.
A pesquisa mostrou que os níveis de IL-6 aumentam principalmente devido à formação de
placas nos estágios iniciais da DA (casos leves) (Wang et al., 2015a). Além disso, a
interleucina periférica IL-10 está associada à atrofia cerebral e pode ser utilizada como
potencial biomarcador para avaliação da extensão da progressão da doença (Park et al.,
2020b; Magalhães et al., 2017). Considerando que, o TNF-ÿ está fortemente correlacionado
com comprometimento cognitivo, apoptose cerebral e neurodegeneração potencializada
nas regiões anatômicas do cérebro, como córtex, corpo estriado, hipocampo na DA leve a
grave (Probert, 2015; Furlan et al., 2004). A patogênese da DA contribuiu com vários
fatores em diferentes regiões anatômicas. Portanto, uma análise de biomarcador não é
adequada para definir toda a fisiopatologia da DA, portanto, uma abordagem combinada
usando vários marcadores pode ajudar a prever a progressão da patogênese da DA.
Os avanços da nanomedicina pretendem revolucionar a
abordagens terapêuticas para o tratamento da DA. Estudos recentes têm
Fig. 1. Vias de neurodegeneração em células microgliais e liberação de citocinas pró-inflamatórias na doença de Alzheimer.
2
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
Efeito sobre Aÿ Referências
A síntese de Aÿ aumenta Xie et al. (2015)
Diminuir a deposição de Aÿ Kummer e outros. (2021)
Aumenta a síntese de Aÿ Porro et ai. (2020)
Aumenta a síntese de Aÿ, mas Torres-Acosta et al.
diminui a depuração de Aÿ (2020)
relataram a eficácia de nanopartículas PEGuiladas na melhoria da memória com redução
significativa na deposição de placa Aÿ (Brambilla et al., 2012). Meng et al., projetou
nanopartículas de PLGA modificadas com superfície de quitosana N-trimetilada conjugada
com huperzina huperzina intranasal com propriedades de liberação sustentada para entrega
direcionada de drogas na DA (Meng et al., 2018). A imunogenicidade desses
nanocarreadores é determinada principalmente pelos ingredientes incorporados nos
nanocarreadores, suas propriedades físico-químicas e via de administração. Portanto, a
funcionalização da superfície das nanopartículas de PLGA tem sido de particular importância
para a transferência de drogas através da BBB com o objetivo de aumentar a
biodisponibilidade das drogas no cérebro, reduzindo a imunogenicidade e alcançando o
direcionamento específico do local (Amo et al., 2021).
As citocinas pró-inflamatórias foram liberadas no local neurodegenerativo no cérebro que
estimula padrões moleculares associados a danos (DAMPs) e/ou padrões moleculares
associados a patógenos (PAMPs) são geralmente encontrados no cérebro neurodegenerativo
de pacientes com Alzheimer associados a receptores de reconhecimento de padrões
(PRRs) , (receptores semelhantes a Toll (TLRs), receptores semelhantes a RIG-I (RLRs),
receptores semelhantes a NOD (NLRs) e receptores de lectina tipo C (CLRs)) (Roh e Sohn,
2018; Kigerl et al., 2014).
Esses receptores interagem com proteínas associadas à apoptose e levam à secreção de
várias citocinas no local inflamatório. Também foi proposto que a ativação da atividade do
fator nuclear (NF-ÿB) permite a translocação de NF-ÿB para o núcleo e a regulação positiva
da expressão dos genes pró-inflamatórios, conforme mostrado na Fig. 1. A redução
significativa da atividade pró-inflamatória citocinas mediadas pela administração de agentes
terapêuticos é geralmente devido à inibição da via NF-ÿB
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
reduzindo a liberação dessas citocinas (Fig. 1) (Liu et al., 2017; Wang et al., 2015b).
Além disso, a validação é necessária para estabelecer a inter-relação dos fatores
contribuintes na patogênese da DA. Neste estudo, o papel das citocinas pró-
inflamatórias na patogênese da DA foi explorado e o comportamento neuroprotetor
de nanoscaffolds automontados Peguilados foi estimado. O estudo ajudará ainda
mais o pesquisador a entender o propósito terapêutico dessas citocinas e seu efeito
contribuinte no tratamento da DA.
Portanto, explorações de citocinas pró-inflamatórias em neurodegeneração
aguda e crônica foram indiretamente implicadas na ogênese do caminho da doença.
No entanto, observações recentes em modelos animais podem atuar como evidências
importantes que desafiam as suposições anteriores sobre citocinas em processos
neuroinflamatórios da DA. Funções potencialmente adaptativas de citocinas pró-
inflamatórias contribuem ainda mais em estudos mecanísticos e podem ajudar a
aliviar a carga patológica da doença.
2. Materiais e métodos
IL-1ÿ, IL-10, IL-6 e TNF ÿ GENLISA™ Mouse Kit foram adquiridos da KRISHGEN
Biosystems, que consiste em padrão reconstituível liofilizado de (IL-1ÿ, IL-10, IL-6 e
TNF ÿ), biotina conjugada Anticorpo de Detecção (BIO-CONJ), Estreptavidina
Peroxidase de Rábano (STRP-HRP), substrato TMB (3,30 ,5,50 -Tetrametilbenzidina)
Placa revestida com microtitulação (12 8), tampão de lavagem e diluente de ensaio.
2.1. Preparação de nanoscaffolds
O método de separação de fases induzida por temperatura não solvente (N-
TIPS) com modificação foi usado para formular nanoscaffolds auto-montados de
polietilenoglicol memantina-poli (ácido lático-co-glicólico) (SANs (PEG-MEM-PLGA))
(Tsujimoto et al., 2016; Cao et al., 2020). 19,18% p/v de peso da mistura de
proporção 1:1 de PLGA (PLGA 50:50/PLGA75:25) em dioxano (solvente) foram
continuamente agitados a 50–55 C. 10 mg de memantina HCl (droga) e 4,98% p/ v
Pluronics F127 foram adicionados à água e agitados continuamente a 500 rpm. A
solução de fármaco foi adicionada à solução de PLGA a 500 rpm até ocorrer a
separação das fases e resultar na formação de SANs de nanoscaffolds (MEM-PLGA)
automontados de memantina-poli (ácido láctico-co-glicólico). (MEM-PLGA)
Os SANs foram incubados em solução aquosa de 100 mg/ml de PEG 35.000,
agitados magneticamente por 30 min em temperatura ambiente e depois liofilizados
por pré-congelamento a 40 C por 24 h seguido de secagem a vácuo em temperatura
ambiente (25 5 C) para obter SANs de nanoscaffolds (PEG-MEM-PLGA)
automontados (PEG-MEM-PLGA) revestidos de memantina-poli (ácido láctico-co-
glicólico) (Reboredo et al., 2021).
Células-tronco derivadas de medula óssea humana HighQC™ (BMSc) obtidas
da ACCEGEN BIOTECHNOLOGY foram cultivadas em Meio Essencial Mínimo
(MEM). 5 104 células/poço foram colocadas em placas de poços e incubadas por 24
h com tetraciclina positiva (TC þ) e tetraciclina negativa (TC-) em incubadora de
CO2. Os BMSc tripsinizados dispersos em 20% de soro fetal bovino (FBS) foram
incubados com (PEG-MEM-PLGA) SANs a 37 C% e 5% de CO2 até a confluência,
após o que o meio foi aspirado e as células foram fixadas usando paraformaldeído a
4% para 10 min para obter nanoscaffolds automontados de memantina-poli (ácido
lático-co-glicólico) revestidos com polietilenoglicol enxertados com células-tronco
derivadas de medula óssea [(PEG MEM-PLGA) SANs-BMSc]. Todo o experimento
foi realizado em cabine de biossegurança esterilizada por UV (Mitra et al., 2018;
Rafal et al., 2018).
2.2. estudo de caracterização
(PEG-MEM-PLGA) Os SANs foram posteriormente caracterizados por microscopia
eletrônica de varredura (MEV), eficiência de aprisionamento e estudo de
biodegradabilidade. A morfologia da superfície de SANs preparados (PEG-MEM-
PLGA) foi avaliada usando microscopia eletrônica de varredura (SEM) (FEI QuantaTM
200, EUA) possuindo um detector de elétrons secundário em uma tensão acelerada
de 10 kV na escala de tamanho de 1 ÿm. A eficiência de aprisionamento foi
3
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
determinado por ultracentrifugação a 15.000 rpm por 15 min a 4 C em centrífuga de
resfriamento (REMI). Após a centrifugação, o sobrenadante contendo o fármaco livre
foi separado e estimado usando um método espectrofotométrico UV-visível a 218 nm
(Alshehri e Imam, 2021). O estudo de biodegradabilidade foi avaliado colocando 10
mg (PEG-- MEM-PLGA) SANs em 4 mg de lisozima/ml de solução em PBS (pH ¼
7,4) incubado a 37 C. A perda de peso foi medida como a razão do peso após
enzimática hidrólise para o nanoscaffold PLGA (Nagata et al., 2022). O método de
difusão em bolsa de diálise foi utilizado para a estimativa in vitro do padrão de
liberação de memantina em tampão fosfato (pH 6,8).
(Zhang e outros, 2007). Aqui, o pH 6,8 foi usado devido à semelhança do pH no local
neurodegenerado no cérebro, e esse pH também desencadeou a automontagem de
nanomoléculas dentro do cérebro para fornecer um meio para crescimento e
regeneração de neurônios como matrizes extracelulares (Ponto et al ., 2014). A bolsa
de diálise (membrana de celulose peso molecular de corte 12–14000 Da, HIMEDIA,
Índia) foi hidratada durante a noite em meio de dissolução. Nanoscaffold de PLGA
carregado com memantina revestido com PEG de peso 100 mg foi colocado na bolsa
de diálise firmemente amarrada e imerso em uma câmara de liberação contendo 500
ml de meio de dissolução sob agitação contínua a 75 rpm a 37 0,5 C. Amostras de 5
ml foram retiradas em intervalos de tempo fixos (0, 0,5, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 12, 24 h, 48
h e 72 h) com a substituição de volume equivalente de meio fresco (para manter as
condições de afundamento). O conteúdo da droga foi analisado após filtração através
de filtro de seringa de 0,2 ÿm usando espectroscopia UV-Vis a 218 nm, e o padrão
de liberação da droga foi previsto estimando a porcentagem de liberação cumulativa
no meio.
2.3. Modelo animal e grupos de tratamento
O protocolo de pesquisa foi aprovado pelo Animal Ethical Committee do Institute
of Medicine da Banaras Hindu University (Varanasi, Índia) (CPCSEA/2019/iAEC).
Camundongos albinos suíços pesando 40,5 g foram alojados em gaiolas de animais
condicionadas por 12 horas com ciclos alternados de claro e escuro a 20 2 C e
50-60% de umidade relativa. Foi fornecido aos animais livre acesso a ração
peletizada e água destilada ad libitum.
Os animais foram sacrificados após 60 min da administração das doses. Subse
sucessivamente, o encéfalo de cada animal foi isolado, pesado e homogeneizado
em tampão Tris-HCl 10 mM frio, pH 7,4, contendo sacarose 160 mM. Os homogenatos
foram centrifugados a 15.000 rpm por 10 min a 4 C, e os sobrenadantes claros
resultantes foram usados como fontes de enzimas que foram divididas em alíquotas
e armazenadas a 20 C.
O comprometimento da memória foi induzido em camundongos por escopolamina
HBr na dose de 3 mg/kg (administrado por via intraperitoneal (IP)) uma vez por
semana até 21 dias (Biradar e Attar, 2020). Os animais foram divididos em sete
grupos (6 animais/grupo). O grupo T1 recebeu intratecalmente uma dose de 10 mg/
kg de PLGA automontado de nanoscaffolds de PLGA (MEM-- PLGA), o grupo T2
recebeu 10 mg/kg de memantina PEGilada de PLGA auto-montado de nanoscaffolds
(PEG-- MEM-PLGA ) SANs por via intratecal, o grupo T3 foi tratado com 10 mg/kg
de memantina PEGilada carregada com nanoscaffolds automontados de PLGA
enxertados com células-tronco da medula óssea [(PEG-MEM-PLGA) SANs-BMSc]
por via intratecal, o grupo T4 foi tratado com 10 mg de memantina Comprimidos de
HCl (Admenta) por dispersão em água via gavagem intra-oral, o grupo T5 foi
administrado com 10 mg/kg de memantina (fármaco puro) (MEMp) por via
intravenosa, e o grupo controle T6 e o grupo controle doente T7 receberam solução
salina normal (0,1 ml/10 g).
2.3.1. Estimativa de citocinas pró-inflamatórias
As citocinas pró-inflamatórias como IL-1 ÿ, IL-6, IL-10 e TNF-ÿ foram determinadas
no soro, tecido cerebral, tecido hepático e tecido renal de modelo de amnésia
induzida por escopolamina de camundongos (camundongos AD) seguindo as
instruções fornecido no manual do kit ELISA. Isso também foi usado para a
determinação do efeito de (MEM-PLGA) SANs, (PEG-MEM-PLGA) SANs, [(PEG-
MEM-PLGA) SANs-BMSc], droga pura de memantina (MEMp) e comprimido de
memantina HCL ( Admenta) sobre a secreção, distribuição e captação celular de
citocinas pró-inflamatórias nos tecidos sérico, cerebral, hepático e renal em
camundongos com DA.
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
A IL-1 ÿ, IL-6, IL-10 e TNFÿ de camundongo recombinante liofilizada foi
suspensa em 600 ÿl (somente para IL-1 ÿ) e 20 ÿl de água e deixada em repouso
por 15 min após agitação suave para preparar 1000 pg /ml, 1 ÿg/ml, 0,5 ÿg/ml e
0,5 ÿg/ml de solução estoque, respectivamente. Em seguida, diluições seriadas
da solução estoque foram feitas para obter concentrações padrão: IL-1 ÿ - 500 pg/
ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62,5 pg/ml, 31,3 pg/ml e 15,63 pg/ml a partir de 1000
pg /ml solução estoque; IL-6 -2000 pg/ml, 1000 pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125
pg/ml, 62,5 pg/ml e 31,3 pg/ml; IL-10-1000 pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/
ml, 62,5 pg/ml, 31,3 pg/ml e 15,6 pg/ml; TNFÿ-1000 pg/ml, 450 pg/ml, 225 pg/ml,
112,5 pg/ml, 56,25 pg/ml, 28,13 pg/ml, 14,06 pg/ml e 3,5 pg/ml 100 ÿl de cada
diluição padrão e amostras de teste (soro, tecido cerebral, tecido hepático e
homogeneizados de tecido renal de camundongos do grupo de tratamento,
controle e controle doente) foram adicionados à placa de microtitulação de 96
poços, selados e incubados por 2 h em temperatura ambiente a 18–25 C para
facilitar a imobilização de IL-1ÿ, IL-6, IL-10 e TNF-ÿ. A imobilização é conseguida
devido à ligação de IL-1ÿ ou IL-6 ou IL-10 ou TNF-ÿ presente na amostra e padrão
com anticorpo (específico para IL-1ÿ ou IL-6 ou IL-10 ou TNF-ÿ) adsorvido na
superfície de placas de 96 poços. As placas de poço foram
lavadas e secas quatro vezes com tampão de lavagem para remover não
proteína e anticorpo especificamente ligados. Em seguida, cada poço foi
preenchido com anticorpo de detecção conjugado com biotina 100 ÿl (BIO-CONJ)
e incubado por 1 h entre a temperatura de 18–25 C. Após 1 h de incubação, o
anticorpo conjugado com biotina se liga a IL-1ÿ ou IL- imobilizado 6 ou IL 10 ou
TNF-ÿ presentes nos poços. Além disso, a placa de 96 poços foi lavada 4 vezes,
a enzima estreptavidina-HRP (100 ÿl) foi adicionada e incubada por 15–60 min a
18–25 C. As enzimas estreptavidina-HRP são ligadas covalentemente com (IL1ÿ
ou IL-6 ou IL- 10 ou complexo de anticorpo BIO-CONJ conjugado com TNF-ÿ)
para formar o complexo enzima-anticorpo de estreptavidina HRP- (IL1ÿ ou IL-6
ou IL-10 ou TNF-ÿ)-BIO CONJ. Depois disso, a placa de 96 poços foi lavada
novamente e o substrato TMB (3,30 ,5,50 -Tetrametilbenzidina) (100 ÿl) foi
adicionado e incubado no escuro por 15–30 min a 18–25 C. A incubação
resultou na ligação do substrato TMB ao complexo enzima-anticorpo
estreptavidina HRP-IL1ÿ-BIO CONJ com produção de cor azul indicando a
presença de IL-1 ÿ ou IL-6 ou IL-10 ou TNF-ÿ em soro e tecidos homogeneizados ,
que fica amarelo após a adição de 100 ÿl de solução de parada. Finalmente, a e
a absorbância foram registradas no leitor de microplacas Synergy H1 a 450 nm
para a estimativa quantitativa de IL-1ÿ (Fig. 2).
Fig. 2. Visão geral do ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) e estimativa quantitativa de biomarcadores, incluindo citocinas pró-inflamatórias.
4
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
3. Resultado e discussão
3.1. estudo de caracterização
Os estudos de microscopia eletrônica de varredura mostraram que os
nanoscaffolds exibiram estruturas esféricas na faixa de nano-tamanho com
tamanho apropriado de 100-200 nm (Fig. 3 (a)). Os nanoscaffolds observados
são automontados na natureza para serem organizados em estruturas definidas
que podem suportar o crescimento e desenvolvimento de neurônios, imitando
uma matriz extracelular. O estudo de aprisionamento indica que aproximadamente
92,21% 0,28 de mem antina foi aprisionado dentro de SANs (PEG-MEM-PLGA).
Os nanscaffolds foram formulados usando uma mistura de PLGA 75:25/50:50,
que é um polímero biodegradável e forma estruturas porosas que ajudam no
aprisionamento significativo da droga dentro dos nanoscaffolds. A degradação
enzimática em SANs (PEG-MEM-PLGA) foi incubada por quatro semanas em
tampão fosfato salino e água contendo lisozima (Lz/PBS). Após quatro semanas,
a perda de peso de SANs de 0,512 g para 0,1127 g exibiu uma taxa de degradação
de 77,98% após quatro semanas de incubação em LZ/PBS.
A liberação in vitro de memantina a partir de nanoscaffolds de PLGA e PEG
nanoscaffolds de PLGA revestidos foram determinados em tampão fosfato pH
6,8 e comparados com comprimido de memantina HCL (Admenta 10 mg) e
suspensão pura de memantina como ilustrado na Fig. 3 (b). A liberação de
memantina da matriz PLGA polimica seguindo o mecanismo de difusão e mostrou
padrão de liberação sustentada com liberação máxima de 94,14% 0,20 em 72 h
e nanoscaffolds de PLGA revestidos com PEG mostraram liberação máxima de
91,52% 0,15 em 72 h, o que indica liberação de memantina em
controlada por período prolongado (Fig. 3 (b)). Inicialmente, uma pequena
quantidade de fármaco foi liberada devido ao inchaço do polímero no meio, mas
após a formação das ligações cruzadas do polímero, a memantina mostrou uma
liberação contínua de maneira controlada em um intervalo definido que pode ser capaz de
fornecem atividade terapêutica sustentada no local da neurodegeneração.
Nanoscaffolds também foram comparados com suspensão pura de droga
memantina e comprimido HCL de memantina comercializado que mostrou
liberação máxima de 92,02% 0,22 e 90,44% 0,34 em 24 h, respectivamente,
indica padrão de liberação de droga de comprimido e suspensão exibindo padrão
de liberação rápida.
Nanoscaffold preparado por automontagem de moléculas compostas de
polímero PLGA que fornece reservatórios para encapsulamento combinado de
Machine Translated by Google

V. Rani et ai. Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149

Fig. 3. (a) Microscopia eletrônica de varredura (SEM) de (PEG-MEM-PLGA) SANs na escala de 1 ÿm (b) Cinética de liberação de droga in vitro de MEMp, (MEM-PLGA) SANs, (PEG-
MEM PLGA ) SANs e Admenta (tablet comercializado).

moléculas bioativas. A organização supramolecular dos nano scaffolds e sua Na fase inicial, a administração do nanocarreador com células-tronco da medula
estrutura interna e composição são cruciais para o resultado da entrega do fármaco. óssea e memantina estimula as vias de sinalização neurogênica das células
O PLGA é amplamente utilizado para aplicações biomédicas devido às suas microgliais e de Schwann e exibe regeneração nervosa funcional.
conhecidas propriedades biodegradáveis e mecânicas, mas tem baixa hidrofilicidade
e carece de motivos de reconhecimento da superfície celular. A funcionalização de
nanoscaffolds incorporados ao PLGA tentou modificar a superfície do PLGA
3.2. Expressão de citocinas pró-inflamatórias nos tecidos sérico, cerebral, hepático
misturando-o com outro polímero hidrofílico projetado para fornecer um novo e renal
andaime híbrido para a engenharia de tecidos neurais. Manasa et al., projetaram um
nanocarreador automontado usando a combinação de PLGA e peptídeos biotinilados
Apesar das mudanças modestas na patologia Aÿ, as respostas pró-inflamatórias
automontados (RAD16-1-BMHP1) para entender seu papel na regeneração axonal
e microgliais foram encontradas no cérebro após o tratamento de camundongos
especialmente para a engenharia de tecido nervoso periférico e in vitro
com DA. A expressão elevada de citocinas pró-inflamatórias séricas (IL-1ÿ, IL-6,
compatibilidade celular em células de ratSchwann (RSC 96) para avaliação da
IL-10 e TNF-ÿ) se deve principalmente à estimulação de monócitos circulantes no
proliferação, adesão e regeneração celular (Nune et al., 2016). Da mesma forma,
sangue no local da neuroinflamação e na circulação sistêmica (Fig. 4 (a)) . Da
neste estudo, o efeito de direcionamento duplo de nanoscaffolds de PLGA
mesma forma, a concentração de IL-1ÿ (296,83 0,898 pg/ml) foi visível ao máximo
constituídos com memantina para fornecer recuperação neuronal inibindo a
no tecido cerebral de camundongos com DA, seguida pela concentração de IL-6
excitotoxicidade do glutamato e as células-tronco da medula óssea potencializam o
(274,28 0,5 pg/ml) e TNF-ÿ (185,57 6,4 pg/ml) concentração mínima de IL-10 (139,24
crescimento neuronal para estimular a conexão sináptica simultaneamente. A
1,91 pg/ml) que indica maior expressão de IL-1ÿ, IL-6 e TNF-ÿ no cérebro. A
funcionalização da superfície com PEG e Pluronics F-127 permite uma penetração
estimulação de IL-1ÿ, IL-6, IL-10 e TNF-ÿ também relatada no tecido cerebral devido
eficiente no cérebro de nanocarreadores após injeção intratecal. Pluronics F-127 é
à neurodegeneração e formação de microglia associada à placa leva à isquemia
um surfactante não iônico que ajuda na permeação através das células endoteliais
cerebral influenciada por processos inflamatórios (Fig. 4 (b)). Enquanto isso, um
vasculares e aumenta a captação e absorção celular.
nível extremamente alto de TNF-ÿ (245,885 0,85 pg/ml) foi observado em
homogeneizados de tecido hepático do modelo de camundongos com DA induzida
Além disso, a natureza biomimética do nanoscaffold como matriz extracelular
por escopolamina em comparação com o grupo de controle normal (3,375 0,085 pg/
investigada quanto à sua eficiência na indução de processos de neurorregeneração
ml) (Fig. 4 (c)). Embora nenhuma evidência direta do papel proeminente do TNF-ÿ
para o reparo de danos neuronais. Para isso, vários desafios técnicos para a
na DA tenha sido encontrada, o aumento do TNF-ÿ pode ser devido à estimulação
fabricação de sistemas de nanoentrega para fármacos macromoleculares precisam
das cascatas de sinalização do NF-ÿB. No entanto, é importante observar que não
ser enfrentados com urgência. Materiais de origem biológica, incluindo tecido
há alteração significativa nos níveis de IL-1ÿ, IL-6, IL-10 e TNF-ÿ obtidos no tecido
acelularizado e macromoléculas derivadas da matriz extracelular, como colágeno,
renal de camundongos doentes em comparação com camundongos saudáveis
quitosana e ácido hialurônico, têm sido vantajosos e usados extensivamente. No
normais, o que indica que essas citocinas pró-inflamatórias a resposta do tecido
entanto, materiais de origem biológica carregam um risco de imunogenicidade e,
renal não foi afetada pela DA (Fig. 4 (d)). Vários estudos relataram que a elevação
portanto, polímeros biodegradáveis e biocompatíveis, como PLGA e PEG,
dos níveis aumentados de IL-1ÿ e IL-6 estava no soro e no cérebro de pacientes
apresentam uma alternativa com benefícios significativos, incluindo reprodutibilidade
com DA, geralmente devido à formação de placas difusas no estágio inicial de
e adaptação versátil por meio de modificações simples de nanocarreadores usando
deposição de placas de pacientes clínicos com DA (Crispe, 2016; Tsartsalis et al.,
surfactante como Plur onics F-127. Os nanoscaffolds destinam-se a suportar
2010). Este estudo revelou o potencial de nanoscaffolds e nanoscaffolds enxertados
fisicamente o tecido circundante durante a regeneração. Anteriormente, a forma e o
com células-tronco na alteração de citocinas pró-inflamatórias em diferentes órgãos
tamanho do scaffold eram definidos antes da implantação, levando à invasividade
do corpo que podem ser usados para diagnóstico e tratamento da DA. Para avaliar
cirúrgica e a longos períodos de recuperação. O recente desenvolvimento de
o efeito de nanoscaffolds, camundongos induzidos por AD foram tratados com (PEG-
abordagens cirúrgicas minimamente invasivas e in situ promoveu o desenvolvimento
MEM-PLGA) SANs, (MEM-PLGA) SANs, MEMp e comercializados (Admenta). (PEG-
da administração intratecal de nanoscaffolds que encontraram utilidade no reparo MEM-PLGA)-BMsc SANs mostrou efeito proeminente na liberação de citocinas pró-
neural, pois auxiliam no tratamento localizado e minimizam as complicações pós-
inflamatórias, mostrando redução de 20 vezes na IL-1ÿ sérica, enquanto (PEG-MEM-
cirúrgicas, demonstrando versatilidade para tradução para a clínica para regeneração
PLGA) SANs, (MEM-PLGA)
neural em condição AD. Na condição de lesão nervosa ou degeneração neural
devido ao acúmulo de placa ÿ amilóide, o segmento distal dos neurônios sofre uma
degeneração inicial que inibe o crescimento em
SANs, MEMp e comercializados (Admenta) mostraram redução de 13 vezes, 9
vezes, 15 vezes e 2 vezes o nível de IL-1ÿ no soro. Da mesma forma, (PEG-MEM-PLGA)

5
Machine Translated by Google

V. Rani et ai. Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149

Fig. 4. Expressão das citocinas pró-inflamatórias IL-1ÿ, IL-6, IL-10 e TNF-ÿ em (a) soro, (b) tecido cerebral, (c) tecido hepático e (d) tecidos renais de tratamento grupos
de modelo de DA induzido por escopolamina.

SANs e (PEG-MEM-PLGA)-BMsc SANs também mostraram redução de 9
vezes e 12 vezes no nível sérico de IL-6, respectivamente, enquanto nenhuma
redução na expressão do nível de IL-6 foi obtida em cérebro, fígado e tecido
renal de camundongos induzidos por DA. Este efeito pode ser devido ao
mecanismo protetor exercido pela liberação espontânea do nível de IL-6 no
tecido da microglia cerebral e no tecido renal. Enquanto isso, alto nível de IL-6
(274,6 1,22 pg/ml) foi encontrado no tecido hepático de camundongos
saudáveis devido à IL-6 ser expressa principalmente nas células hepáticas e
contribuir na ativação do fator estimulador de hepatócitos (HSF) nos
hepatócitos . Estudos recentes revelaram que o HSF regula diferencialmente a
produção de IL-6 nos hepatócitos e o HSF expressa uma variedade de
receptores imunes inatos e quando interage com patógenos ou padrões
moleculares associados a danos, pode produzir respostas imunes inatas
autônomas de células que podem resultar em defesa do hospedeiro ou
imunopatologia (Crispe, 2016). No entanto, foi observado que IL-6 e IL-10
foram altamente produzidos devido à modulação na sinalização de NF-kB e
STAT3, o que indica o início da neurodegeneração, e a secreção prolongada
de IL-6 e IL-10 pode suprimir ativamente as respostas das células T por inibindo
a produção induzida por lipopolissacarídeo (LPS-) de vários mediadores
inflamatórios na microglia. Essa resposta protetora evita danos aos neurônios
e ajuda a restaurar a função neuronal. Em resumo, podemos entender que a
diminuição do nível de IL-1ÿ, IL-10 e TNF-ÿ e o nível elevado de IL-6 foram
percebidos após o tratamento com (PEG-MEM-PLGA) SANs e (PEG-MEM-
PLGA) -BMSc SANs em camundongos com DA induzida por escopolamina
(Fig. 4b). A liberação de IL-6 durante o tratamento de camundongos induzidos
por DA com MEMp, (MEM-PLGA) SANs, (PEG-- MEM-PLGA) SANs, (PEG-
MEM-PLGA)-BMSc SANs, contribui na regulação negativa de vários citocinas
pró-inflamatórias, incluindo fator de necrose tumoral-ÿ e IL-10. Portanto, a
modulação em IL-6 pode fornecer um mecanismo de gerenciamento terapêutico potencial
médiospara
prática (Tsartsalis et al., 2010; Tobinick et al., 2006). Além disso, alguns
estudos também mostraram que a IL-6 contribui na regeneração de células-
tronco que é responsável pela expansão de células-tronco neuronais (células-
tronco pluripotentes induzidas (iPSCs)) dentro de uma janela de tempo curta)
e regulação do crescimento neuronal seguindo a sinalização JAK-STAT
( Sulistio et al., 2018). Além disso, um nível aumentado de TNF-ÿ em
camundongos com DA pode ser responsável pelo desequilíbrio dos fenômenos
de excitação e inibição que ocorrem durante a condução do sinal neuronal e
pode ser considerado responsável pela perda das funções de memória. No
entanto, (PEG-MEM-PLGA) SANs e (PEG-MEM-PLGA)-BMsc SANs mostraram
redução de quase 3 vezes e 4 vezes no nível de TNF-ÿ no soro, tecido cerebral,
hepático e renal no grupo de tratamento de camundongos induzidos por DA, o
que indica a recuperação de neurônios e comprometimento da memória.
Enquanto isso, o potencial pleiotrópico da IL-10 produz um estado inflamatório
que promove a neurodegeneração crônica e a produção prolongada de IL-10
também pode contribuir para restaurar o dano neuronal associado à DA.
Através do presente estudo, pode-se ver que (PEG-MEM-PLGA) SANs e (PEG-
MEM-PL GA)-BMsc SANs tem potencialmente mostrado redução de 7 vezes e
2 vezes na secreção de IL-10 que levou ao efeito de neurodegeneração, e não
está envolvido na neuroregeneração. No geral, (PEG-MEM-PLGA)-BMsc SANs
mostrou maior redução do nível de citocinas pró-inflamatórias em comparação
com (PEG-MEM-PLGA) SANs, (MEM-PLGA) SANs, MEMp e comercializados
(Admenta) no soro , tecido cerebral, hepático e renal.
3.3. Quantificação de citocinas pró-inflamatórias e impacto da
memantina
A quantificação de citocinas pró-inflamatórias foi mencionada como valores
de DA
DP em
(n ¼pacientes clínicos.
3) de citocinas em camundongos e todos os valores foram

6
Machine Translated by Google

V. Rani et ai. Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149

apresentados na Tabela 2. A quantificação de IL-1ÿ mostrou níveis baixos no soro
(20,87 6,03 pg/ml), tecido cerebral (31,42 2,6 pg/ml) e tecido renal (14,56 1,8 pg/ml)
e concentração comparativamente maior de IL-1ÿ foi observada no tecido hepático
(98,5 4,1 pg/ml) de camundongos saudáveis normais (grupo controle). Considerando
que o nível de IL-1ÿ aumentou drasticamente no soro (237,29 0,805 pg/ml) e tecido
cerebral (296,83 0,898 pg/ml), e alterações não significativas foram observadas no
nível sérico de IL-1ÿ hepático (93,33 2,6 pg/ml) e tecido renal (20,41 2,2 pg/ml)
após a indução da DA, conforme mostrado na Tabela 2. Redução significativa no
Tabela 2
Concentração estimada de citocinas pró-inflamatórias no soro, tecido cerebral, hepático e renal.
Concentração de citocinas pró-inflamatórias no soro (pg/ml)
IL-1ÿ IL-6 IL-10
concentração de IL-1ÿ foi observada no soro de 237,29 0,805 pg/ml para 15,71 3,14
pg/ml, tecido cerebral 296,83 0,898 pg/ml para 35,24 8,87 pg/ml e tecido hepático de
93,33 2,6 pg/ml para 13,07 3,8 pg/ ml em grupos padrão tratados com formulações
contendo mem antina (MEMp). Da mesma forma, baixo nível de IL-6 foi obtido no
soro (13,35 0,26 pg/ml), mas alto nível de IL-6 foi obtido no tecido cerebral (149,74
1,66 pg/ml), tecido hepático (274,6 1,22 pg/ml) e tecido renal (262,1 1,01 pg/ml)
de camundongos saudáveis normais (grupo controle). Um aumento significativo na
concentração de IL-6 no soro de 13,35 0,26 pg/ml para 180,74 2,1 pg/ml foi observado
após a indução da DA, enquanto uma alteração não significativa na concentração de
IL-6 foi observada no tecido cerebral (274,28 0,5 pg/ ml) tecido hepático (275,45 1,28
pg/ml) e tecido renal (268,83 1,67 pg/ml) de camundongos induzidos por DA ilustrados
na Tabela 2. A memantina não mostrou efeito proeminente na redução da
concentração de IL-6 no grupo padrão de animais. Além disso, uma concentração
aumentada de IL-10 foi registrada no soro e tecido cerebral de 39,26 1,44 pg/ml para
280,66 0,98 pg/ml e 61,55 18,32 pg/ml para 139,24 1,91 pg/ml, respectivamente,
TNF-ÿ após a indução de DA em camundongos. Além disso, o TNF-ÿ mostrou níveis

Ao controle 20,87 6,03 13,35 0,26 39.26 2,88 0,255 aumentados proeminentes no tecido cerebral de 1,455 0,68 pg/ml para 185,57 6,4
1.44 pg/ml e no tecido hepático de 3,375 0,085 pg/ml para 245,885 0,85 pg/ml e ligeiro
Doença 237,29 180,74 2,1 280,66 4,98 1,02 aumento no nível de TNF-ÿ no soro de 2,88 0,255 pg/ml para 4,98 1,02 pg/ml, e
Ao controle 0,805 0,98
alterações não significativas foram observadas no tecido renal de camundongos com
Padrão 15,71 3,14 85,14 1,67 89,62 2.215
1.43 0,305
AD induzida por escopolamina em comparação com camundongos saudáveis (Tabela
Comercializado 106,91 186,97 3,5 90.485 1,85 1,285 2). IL-1ÿ, IL-6, IL-10 e TNF-ÿ foram proeminentemente expressos no cérebro, o que
1.35 4,56 indica efeitos reguladores de citocinas em neuroinflamação e neurodegeneração.
T1 25,15 1,57 28,37 6,03 140,86 3,72 0,505
7.09
T2 17,48 6,9 20.03 6.68 152,33 1.385
2.56 0,241
T3 10,98 2,71 15,02 1,67 36.32 1.035 Camundongos tratados com memantina também mostraram redução significativa na
0,33 1,425 Concentração de concentração de TNF-ÿ no tecido cerebral, enquanto menos influência da memantina
citocinas pró-inflamatórias no tecido cerebral (pg/ml)
foram observados em IL-6 e IL-10. A redução das citocinas pró-inflamatórias facilita
Controle 31,42 2,6 149,74 1,66 61,55 1,455 0,68
18h32
a regulação da neuroinflamação e, assim, evita a degeneração dos neurônios.
Doença 296,83 274,28 0,5 139,24 185,57 6,4
Ao controle 0,898 1,91
Padrão 35,24 8,87 148,07 4,86 110,8 2.475
3.4. Envolvimento de citocinas na DA
9,97 0,465
Comercializado 27,76 4,7 11,68 1,6 134,62 1,200 0,15
3.9 Os ensaios experimentais conduzidos sugeriram que interações de citocinas
T1 28.04 4.2 23,36 2,9 158,68 1,2 0,06 pró-inflamatórias e placas amilóides na regulação positiva de TNF-ÿ, IL 1ÿ, IL-6,
9,97
IL-10 por células microgliais ativadas levam à hiperfosforilação de tau e morte
T2 26,34 6,1 277,12 3,34 127,27 3.815
neuronal. A vasculatura cerebral da doença de Alzheimer exibe uma patologia
3,76 0,125
T3 17,24 5,7 280,96 7,73 23,39 2,91 0,01
destrutiva na qual ocorre a deposição de Aÿ, inflamação neuronal e liberação de
3,55 mediadores inflamatórios. No presente estudo, baixo nível de citocinas pró-
Concentração de citocinas pró-inflamatórias no tecido hepático (pg/ml) inflamatórias IL 1ÿ, IL-10 e TNF-ÿ foram detectados no soro, tecido cerebral, tecido
Controle 274,6 1,22 136,62
98,5 4,1 3.375
hepático em camundongos saudáveis, e esses níveis foram encontrados aumentados
1.27 0,085
em camundongos na indução de DA usando escopolamina HBr em uma dose de 3
Doença 93,33 2,6 275,45 1,28 91,62 245.885
Ao controle 1,45 0,85 mg/kg, o que indica o papel contributivo das citocinas na fisiopatologia da DA. Vários
Padrão 13.07 3.8 268,77 1,02 125,65 3,08 0,2 estudos sugeriram que baixos níveis de IL-1ÿ são expressos no sistema nervoso
9h35 central saudável e sua expressão aumenta no SNC devido à estimulação de células
Comercializado 29,65 2,9 267,94 0,82 109.21 10.845
microgliais em distúrbios neurodegenerativos. O papel contribuinte da IL-1ÿ na
5.09 0,335
T1 32,390 5,7 277,95 9,18 110,44 3,3 0,015
patogênese da DA foi evidenciado pelo aumento dos níveis de IL-1ÿ no soro (237,29
3.38 0,805 pg/ml) e tecido cerebral (296,83 0,898 pg/ml). No entanto, o efeito pleiotrópico
T2 28,29 2,4 262,1 1,67 99,925 2,98 0,01 da IL-6 foi observado inicialmente sem tratamento em caso de neurodegeneração e
4,57
depois após o tratamento via efeito neurodegenerativo mediado por IL-6.
T3 61.280 6.1 277,95 98,97 3,21 0,032
9.180 1.62

Concentração de citocinas pró-inflamatórias no tecido renal (pg/ml)

Controle 262,1 1,01 3,81 0,05
14,56 1,8 161,8 Além disso, a IL-6 aumenta significativamente no cérebro para garantir a sobrevivência
4,68 do tecido nervoso e atenuar as respostas inflamatórias desencadeando várias vias
Doença 20.41 2.2 268,83 1,67 158.06 3,48 0,17
de sinalização pleiotrópicas e promovendo a resolução de cascatas inflamatórias que
Ao controle 0,84
Padrão 34,58 3,4 267.165 159,64 2,34 0,85
são importantes para a integridade do cérebro e como um biomarcador terapêutico
6.615 3.05 ou potencial durante a situação neurorregenerativa também (Dhapola et al., 2021).
Comercializado 94,15 4,1 271,26 2,01 135,24 3.405 Enquanto isso, o potencial pleiotrópico da IL-10 facilita um estado inflamatório que
2.59 0,025
promove a neurodegeneração crônica e a produção prolongada de IL-10 pode
T1 11,63 6,4 230,27 2,51 107.21 2.005
suprimir ativamente as respostas das células T auxiliares e a resposta imune mediada
5.62 0,605
T2 58,74 5,2 234,38 1,14 135 2,11 3.335 do hospedeiro, que não foram observadas neste estudo. Além disso, um nível
0,075 proeminente de TNF-ÿ foi obtido no tecido cerebral, tecido hepático, soro, mas
T3 67,77 4,8 250,41 1,26 150,32 2,9 0,045 concentração diminuída de TNF-ÿ foi observada no tecido renal de camundongos
5.73
com DA induzida por escopolamina em comparação com camundongos saudáveis.
*Todos os dados são relatados como DP médio (n ¼ 3). Ativação microglial e upregulation

7
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
da expressão de TNF-ÿ é uma característica comum de vários distúrbios
neurodegenerativos. Além disso, o TNF-ÿ pode potencializar a citotoxicidade
mediada pelo glutamato, inibindo o transporte de glutamato através dos astrócitos,
þ2
desencadeando a expressão de superfície dos receptores
Ca e dos receptores NMDA,
AMPA permeáveis ao
enquanto diminui
os receptores GABAA inibitórios nos neurônios.
Assim, o efeito líquido do TNF-ÿ pode ser responsável pelo desequilíbrio dos
fenômenos de excitação e inibição que ocorrem durante a condução do sinal
neuronal que pode ser responsável pelo déficit de memória. Assim, a modulação
na sinalização do TNF-ÿ pode representar um alvo valioso para a intervenção
terapêutica na DA (Decourt et al., 2017; Ren et al., 2021).
3.5. Atividade de memantina e nanoscaffold na inflamação na DA
A terapia medicamentosa combinada com células-tronco dentro de uma matriz
nanoscaffold potencializou o efeito da droga e mostrou recuperação acentuada na
saúde do cérebro. Esses nanoscaffolds foram projetados para entrega específica
do local via via intratecal de administração, o que elimina o risco de ele
toxicidade cardíaca e renal, juntamente com o encurtamento do regime de dosagem
e melhora a adesão do paciente simultaneamente. A terapia com nanoscaffold
carregado com memantina por via intratecal ajuda a reduzir a complicação
envolvida na DA, melhorando sua penetração na BHE, melhorando a liberação do
fármaco, a retenção do fármaco no cérebro e melhorando a microvasculatura
cerebral, o crescimento neuronal e a manutenção da sinalização neuronal. Apesar
do papel de contribuição das citocinas pró-inflamatórias, a atividade terapêutica da
memantina e dos nanoscaffolds carregados com memantina é um aspecto
importante para a manutenção da saúde mental. A memantina é um antagonista
do receptor N metil-D-aspartato (NMDA) que fornece proteção contra
neuroinflamação e morte neuronal acompanhada por supressão da proliferação e
ativação de células microgliais e
Fig. 5. Efeito de Memp, Comercializado, (MEM-PLGA) SANs, (PEG-MEM-PLGA) SANs e (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs em citocinas pró-inflamatórias (a) IL-1ÿ (b) IL-6 (c)
IL-10 e (d) TNF-ÿ observados nos tecidos sérico, cerebral, hepático e renal dos grupos de tratamento do modelo de AD induzido por escopolamina vs. grupo controle e controle da
doença (células não tratadas) e os dados são representados como SEM médio, (n ¼ 3).
8
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
Regulação de citocinas inflamatórias na DA. No presente estudo, SANs de
nanoestruturas automontadas revestidas com PEG carregadas com memantina
(PEG MEM-PLGA) foram desenvolvidas para penetração e distribuição de drogas
através da BHE para ação prolongada na doença de Alzheimer. A atividade
potencial da memantina e dos nanoscaffolds incorporados à memantina mostrou
efeito significativo na redução de TNF-ÿ, IL-1ÿ, IL-6, IL-10 e, portanto, contribui na
redução da neuroinflamação. Além disso, a Fig. 5 (a) efeito significativo (p***
<0,001) de MEMp, (MEM-PLGA) SANs, (PEG MEM-PLGA) SANs e (PEG-MEM-
PLGA)-BMSc na redução dos níveis de amilóide-ÿ insolúvel, tau hiperfosforilada foi
observada via diminuição na concentração de IL-1ÿ que leva à inibição da atividade
de NF-ÿB para restaurar a cognição. Assim, o grupo doente (demência) apresentou
um aumento dessa citocina em comparação ao grupo controle (p < 0,01), e esse
aumento foi revertido pelo tratamento com memantina e seus nanoscaffolds
carregados com mem antitina (p < 0,001). (MEM-PLGA) SANs mostrou redução no
nível aumentado de IL-1ÿ de camundongos AD de 237,29 0,805 pg/ml para 25,15
1,57 pg/ml no soro, 296,83 0,898 pg/ml para 28,04 4,2 pg/ml no tecido cerebral,
93,33 2,6 pg/ml para 32,39 5,7 no tecido hepático e 20,41 2,2 pg/ml para 11,63 6,4
pg/ml no tecido renal.
No entanto, o grupo de animais tratados com (PEG-MEM-PLGA) SANs e (PEG-
MEM-PLGA)-BMSc SANs mostrou redução proeminente no nível de IL-1ÿ de 25,15
1,57 pg/ml para 17,48 6,9 pg/ml no soro, 28,04 4,2 pg/ml a 26,34 6,1 pg/ml em
tecido cerebral, 93,33 2,6 pg/ml a 28,29 2,4 pg/ml em tecido hepático em
comparação com (MEM-PLGA) SANs. (PEG-MEM PLGA)-BMSc mostrou o
potencial na redução da resposta neuroinflamatória através da regulação dos
níveis de citocinas pró-inflamatórias principalmente no soro e tecido cerebral. (PEG-
MEM-PLGA)-BMSc SANs reduz IL-1ÿ no soro de 237,29 0,805 pg/ml para 10,98
2,71 pg/ml e tecido cerebral de 296,83 0,898 pg/ml para 17,24 5,7 pg/ml (PEG-
MEM
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
PLGA)-BMSc SANs mostraram 20 vezes, 17 vezes e 1,5 vezes mais redução no
nível de IL-1ÿ no soro, tecido cerebral e hepático, respectivamente, o que indica o
efeito terapêutico maximizado no cérebro e no sangue com menos distribuição
em outros órgãos porque BMSc facilita a recuperação neuronal pela regeneração
confinada no cérebro que ajuda no tratamento da DA de forma mais eficaz,
incorporando nanossacffolds carregados com memantina.
A Fig. 5 (b) representa o efeito não significativo de IL-6 no tecido cerebral,
hepático e renal em camundongos AD tratados com MEMp, (MEM-PLGA) SANs,
(PEG-MEM-PLGA) SANs, (PEG-MEM-PLGA) -SANs BMSc. Redução significativa
no nível sérico de IL-6 de 180,74 2,1 pg/ml para 85,14 1,67 pg/ml, 28,37 6,03 pg/
ml, 20,03 6,68 pg/ml e 15,02 1,67 pg/ml foi obtida após a administração de MEMp,
(MEM-PLGA) SANs, (PEG MEM-PLGA) SANs, (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs,
respectivamente. A redução da concentração sérica de IL-6 deve-se principalmente
à regulação de citocinas pró-inflamatórias após a administração de MEMp, (MEM-
PLGA)
SANs, (PEG-MEM-PLGA) SANs, (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs. (PEG MEM-
PLGA)-BMSc SANs mostrou redução 10 vezes, 5 vezes e 3 vezes maior no nível
sérico de IL-6 em comparação com MEMp, (MEM-PLGA)
SANs, (PEG-MEM-PLGA) SANs. Além disso, foi obtido que o nível de IL-6 no
tecido cerebral de camundongos tratados com (PEG-MEM-PLGA)
SANs (277,12 3,34 pg/ml) e (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs (280,96 7,73 pg/ml)
foram encontrados elevados mesmo após seguir o protocolo de tratamento que
indica o papel contributivo na DA e superior ao do grupo padrão tratado com
MEMp ((148,07 4,86 pg/ml) indicando a capacidade neurorregenerativa de
nanoscaffolds contendo células-tronco da medula óssea. O nível elevado de IL-6
indica a condição neurodegenerativa em camundongos AD inicialmente sem
tratamento e comportamento neuroprotetor posterior de IL-6 foram notados após
seguindo o protocolo de tratamento com (PEG-MEM-PLGA) SANs e (PEG-MEM-
PLGA)-BMSc SANs. O comportamento neuroprotetor exercido é principalmente
devido à neurodegeneração prolongada aumentada dos níveis do hipocampo do
transdutor de sinal fosforilado, ativador da transcrição-3 ( p-STAT3) e proteína anti-
apoptótica enquanto diminui a expressão do fator nuclear kappaB (NF-ÿB) e
caspase-3 (casp-3). Esses resultados promovem o efeito protetor da
neurodegeneração, déficits de memória e AD-1 condição patológica semelhante
provavelmente via modulação da sinalização NF-kB e STAT3 mediada pela
modulação dos receptores N-metil-D-aspartato (NMDA) (Alawdi et al., 2017; Yick
et al., 2020).
A concentração de IL-10 no tecido cerebral e no soro encontrou-se diminuída
em animais submetidos à administração de MEMp, (MEM-PLGA)
SANs, (PEG-MEM-PLGA) SANs, (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs. A concentração
de IL-10 foi significativamente reduzida no soro de 280,66 0,98 pg/ml para 36,32
0,33 pg/ml e no tecido cerebral de 139,24 1,91 pg/ml para 23,39 3,55 pg/ml no
grupo de animais induzidos por AD tratados com (PEG MEM-PLGA) -BMSc SANs
que se mostraram 4 vezes e 5 vezes mais potentes do que o padrão,
comercializado, (MEM-PLGA) SANs e (PEG-MEM-PLGA)
SANs respectivamente. O grupo tratado com SANs (MEM-PLGA), (PEG-MEM-
PLGA) SANs e (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs também apresentou um ligeiro
aumento no nível de IL-10 no tecido hepático em comparação com camundongos
AD. Da mesma forma, o nível de IL-10 no tecido renal foi ligeiramente reduzido
em grupos de animais induzidos por AD tratados com formulação comercializada
(Admenta) (135,24 2,59 pg/ml), (MEM-PLGA) SANs (107,21
MEM PLGA)
5,62 pg/ml,
SANs((135
PEG-2,1
pg/ml) e (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs (150,32 5,73 pg/ml em comparação com
camundongos AD não tratados (158,06 0,84 pg/ml) (Tabela 2) (Fig. 5 (c)). A
descoberta indica o papel contributivo da IL-10 predominantemente no soro e no
tecido cerebral, enquanto o tecido hepático e o tecido renal não estavam
envolvidos na patogênese da DA e na regulação de citocinas pró-inflamatórias no
manejo terapêutico da DA. O neurodegenerativo observado O efeito é
principalmente devido à atividade antagonista do receptor NMDA não competitiva
da memantina, que é responsável pela atenuação do receptor de células B (BCR)
e do receptor Toll-like 4 (TLR4) para mediar a sinalização de células B e pode
afetar a produção de IL-10 ( Simma et al., 2014).
Os resultados revelaram que o TNF-ÿ foi predominantemente expresso em
células cerebrais e hepáticas após a indução da DA, enquanto o TNF-ÿ foi menos
expresso no soro e tecido renal em comparação com IL-1ÿ, IL-6, IL
9
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
10. A concentração de TNF-ÿ foi encontrada significativamente aumentada no
tecido cerebral e hepático de camundongos induzidos por DA em comparação
com camundongos saudáveis normais, que foi reduzida após a administração de
MEMp, comercializados (Admenta), (MEM-PLGA) SANs, (PEG -MEM-PLGA) e
SANs (PEG-MEM-PLGA)-BMSc. (PEG-MEM-PLGA)-BMSc SANs apresentaram
redução quase 14 vezes e 15 vezes maior no nível cerebral e hepático de TNF ÿ
em comparação com MEMp, comercializados (Admenta), (MEM-PLGA) SANs,
(PEG-MEM- PLGA) SAN. O nível de TNF-ÿ no tecido renal não variou
significativamente entre os grupos (Tabela 2) (Fig. 5 (d)). Além disso, a
incorporação da terapia com células-tronco da medula óssea acelera a recuperação
de neurônios e os nanoscaffolds fornecem um ambiente para crescimento e
regeneração de neurônios. Além disso, (PEG-MEM-PLGA)-BMSc incorporado com
células-tronco da medula óssea estimula a regeneração de neurônios, facilitando
a melhora da função cognitiva na DA.
3.6. Análise estatística
A absorbância (Abs) obtida nos poços de microtitulação foi subtraída por Abs
em branco para obter a absorbância original das citocinas e pelo método de
interpolação, a concentração de citocinas pró-inflamatórias foi determinada. A
análise estatística foi realizada e os resultados foram interpretados pelo método
de interpolação usando o software GraphPad prism (versão 5). Os dados foram
apresentados como desvio padrão médio.
A análise estatística foi realizada por ANOVA two-way seguida do teste post-hoc
de Bonferroni para comparação entre os grupos e o valor de P (p < 0,05) foi
considerado significativo. Os dados analisados mostraram efeito significativo da
terapêutica (padrão, comercializada e SANs) na melhora cognitiva, afetando
citocinas pró-inflamatórias IL-1 ÿ entre SANs padrão, (PEG-MEM-PLGA) e (PEG-
MEM-PLGA) SANs- Grupos tratados com BMSc mostrando ***p < 0,001, e
comercializados também mostraram efeito significativo mostrando **p < 0,01 em
comparação com o grupo doente (Fig. 5). Além disso, foi observado efeito
significativo no nível de citocinas pró-inflamatórias principalmente IL-10 e TNF-ÿ
no soro, tecido cerebral e hepático com valores de *p < 0,05 e **p < 0,001,
respectivamente, em comparação ao grupo doente. Já foi observado efeito
insignificante sobre IL-6 e IL 10 e TNF-ÿ no tecido renal.
4. Conclusão
As terapias restaurativas de distúrbios neurológicos requerem novas
estratégias de reparação e estimulação da neurogênese contra a deterioração
mental e distúrbios neurodegenerativos. As observações recentes ajudam a
entender a contribuição das citocinas pró-inflamatórias na patogênese do SNC no
desencadeamento da resposta imune inata adaptativa durante o curso da doença
neurodegenerativa crônica. Apesar do profundo impacto da DA, os tratamentos
convencionais não são capazes de alcançar efeitos terapêuticos satisfatórios ou
interromper a progressão da doença. Nossa descoberta de novos tratamentos
para DA tornou-se agentes neuroprotetores, incluindo moduladores de receptores
N-metil-D-aspartato (NMDA) e estimulação cerebral em processos neuroinflamatórios
e neurodegenerativos.
Esses achados também podem influenciar o equilíbrio entre os resultados
benéficos e prejudiciais e a potencialização de tais respostas acionadas por
citocinas adaptativas em doenças neurodegenerativas crônicas para fornecer
novos caminhos para a intervenção terapêutica. Portanto, a identificação de
biomarcadores é um passo importante para melhorar a precisão do diagnóstico
precoce da DA e o manejo da terapia. Descobrimos que, após a indução da DA
em camundongos, o nível de citocinas aumentou inesperadamente, o que indica
que a neurodegeneração ou neuroinflamação também afeta a liberação de citocinas.
O nível de citocinas pode ser benéfico como uma ferramenta ou biomarcador para
detectar a neurodegeneração desencadeada por inflamação. Embora esses
marcadores não sejam específicos para a doença, os efeitos de IL-1ÿ, IL-6, IL e
TNF-ÿ foram considerados esclarecedores para o significado de atuar como
biomarcadores. O nível de IL-6 no soro, tecido hepático e renal e IL-1ÿ no soro e
tecido cerebral, IL 10 no soro e TNF-ÿ no tecido cerebral ou líquido cefalorraquidiano
foram encontrados aumentados em condições de doença. A expressão de cada
citocina é diferente em diferentes órgãos, portanto, entender as citocinas individualmente em
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
órgãos ajudará ainda mais a desenvolver um marcador identificável adequado para a detecção de
neurodegeneração. Além disso, a incorporação de biomarcadores séricos, cerebrais e hepáticos
pode fornecer mais informações diagnósticas/prognósticas, detectando níveis anormalmente baixos
ou altos de citocinas pró-inflamatórias que podem ajudar a prever alterações patológicas associadas
à DA. Até agora, numerosos biomarcadores potenciais para DA no sangue periférico foram
relatados, mas existem grandes discrepâncias entre os diferentes estudos, portanto, a validação
dos resultados e do método torna-se um aspecto crucial para desenvolver uma técnica eficaz no
diagnóstico e tratamento da DA. Além disso, estudos adicionais são necessários para entender
melhor o papel das citocinas pró-inflamatórias como biomarcadores na neuroinflamação, geração
de neurônios e para terapias modificadoras da doença para a DA.
Detalhes do financiamento
Este estudo de pesquisa não recebeu nenhuma bolsa de pesquisa. Os autores agradecem ao
diretor do Indian Institute of Technology (Banaras Hindu University) por apoiar este trabalho.
Declaração de contribuição de autoria do CRediT
Varsha Rani: Conceituação, Metodologia, Análise formal, Investigação, Redação – rascunho
original. Rinki Verma: Validação, Visualização, Redação – revisão e edição. Krishan Kumar:
Validação, curadoria de dados. Ruchi Chawla: Visualização, Supervisão, Redação – revisão e
edição.
Declaração de interesse concorrente
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes conhecidos ou
relacionamentos pessoais que possam parecer influenciar o trabalho relatado neste artigo.
Disponibilidade de dados
Os dados que foram usados são confidenciais.
Referências
Alawdi, SH, El-Denshary, ES, Safar, MM, Eidi, H., David, MO, Abdel-Wahhab, MA, 2017. Efeito
neuroprotetor do nanodiamante no modelo de rato com doença de Alzheimer: um papel
fundamental para modular o NF-ÿB e Sinalização STAT3. Mol. Neurobiol. 54, 1906–1918. https://
doi.org/10.1007/S12035-016-9762-0/FIGURES/9.
Alshehri, S., Imam, SS, 2021. Formulação e avaliação de nanogel de quitosana carregado com
PLGA carregado com butenafina. Drug Deliv. 28, 2348. https://doi.org/
10.1080/10717544.2021.1995078.
Amo, L Del, Cano, A., Ettcheto, M., Souto, EB, Espina, M., Camis, A., et al., 2021.
Funcionalização de superfície de nanopartículas de PLGA para aumentar o transporte através do
BBB para a doença de Alzheimer. Appl. ciência 11, 4305. https://doi.org/10.3390/APP11094305,
2021;11:4305.
Biradar, PR, Attar, V., 2020. Avaliação farmacológica de Salvadora persica em
distúrbio de memória induzido por escopolamina. https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-34618/v1.
Brambilla, D., Verpillot, R., Le Droumaguet, B., Nicolas, J., Taverna, M., Kona, J., et al., 2012.
Nanopartículas PEGiladas se ligam e alteram a conformação do peptídeo beta-amilóide: em
direção engenharia de nanomedicamentos funcionais para a doença de Alzheimer. ACS Nano 6,
5897–5908. https://doi.org/10.1021/NN300489K.
Cao, Y., Han, W., Pu, Z., Wang, X., Wang, B., Liu, C., et al., 2020. Fabricação de monólito de
policaprolactona superhidrofílico hierarquicamente poroso com base na fase induzida
termicamente por não solvente separação. RSC Adv. 10, 26319–26325. https://doi.org/10.1039/
D0RA04687F .
Crispe, IN, 2016. Hepatócitos como agentes imunológicos. J. Immunol. 196, 17–21.
https://doi.org/10.4049/JIMMUNOL.1501668.
Decourt, B., Lahiri, DK, Sabbagh, MN, 2017. Alvo do fator de necrose tumoral alfa para a doença de
Alzheimer. atual Alzheimer Res. 14, 412. https://doi.org/10.2174/ 1567205013666160930110551.
Dhapola, R., Hota, SS, Sarma, P., Bhattacharyya, A., Medhi, B., Reddy, DHK, 2021.
Avanços recentes em vias moleculares e implicações terapêuticas visando a neuroinflamação
para a doença de Alzheimer. Inflammopharmacology 29, 1669-1681. https://doi.org/10.1007/
S10787-021-00889-6/TABLES/1.
Domingues, C., da Cruz e Silva, OAB, Henriques, AG, 2017. Impacto das citocinas e quimiocinas nos
marcadores neuropatológicos da doença de Alzheimer. atual Alzheimer Res. 14, 870. https://
doi.org/10.2174/1567205014666170317113606.
10
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
Furlan, R., Villa, P., Senaldi, G., Martino, G., 2004. TNFalpha em doenças experimentais do SNC.
Métodos Mol. Med. 98, 171–190. https://doi.org/10.1385/1-59259-771-8: 171.
Gabay, C., 2006. Interleucina-6 e inflamação crônica. Artrite Res. Lá. 8, S3. https://doi.org/10.1186/
AR1917.
Harry, GJ, Kraft, AD, 2008. Neuroinflamação e Microglia: considerações e
Abordagens para avaliação de neurotoxicidade. Expet Opin. Metabolismo de Drogas. Tóxico. 4,
1265. https://doi.org/10.1517/17425255.4.10.1265.
Kigerl, KA, de Rivero Vaccari, JP, Dietrich, WD, Popovich, PG, Keane, RW, 2014.
Receptores de reconhecimento de padrões e reparação do sistema nervoso central. Exp. Neurol.
258, 5. https://doi.org/10.1016/J.EXPNEUROL.2014.01.001.
Kinney, JW, Bemiller, SM, Murtishaw, AS, Leisgang, AM, Salazar, AM, Lamb, BT, 2018. Inflamação
como mecanismo central na doença de Alzheimer. Alzheimer's Dement Transl Res Clin Interv 4,
575. https://doi.org/10.1016/J.TRCI.2018.06.014.
Kummer, KK, Zeidler, M., Kalpachidou, T., Kress, M., 2021. Papel da IL-6 na regulação do
desenvolvimento, sobrevivência e função neuronal. Citocina 144. https://doi.org/ 10.1016/
J.CYTO.2021.155582.
Liu, T., Zhang, L., Joo, D., Sun, SC, 2017. Sinalização de NF-ÿB na inflamação. Sinal
Transduzir. Ter alvejado. 2, 17023. https://doi.org/10.1038/SIGTRANS.2017.23.
Magalhães, CA, Carvalho, MDG, De Sousa, LP, Caramelli, P., Gomes, KB, 2017.
Doença de Alzheimer e polimorfismos do gene da citocina IL-10: existe associação?
Arq Neuropsiquiatr 75, 649–656. https://doi.org/10.1590/0004-282X20170110.
Meng, Q., Wang, A., Hua, H., Jiang, Y., Wang, Y., Mu, H., et al., 2018. Entrega intranasal de Huperzine
A ao cérebro usando N- conjugado com lactoferrina Nanopartículas de PLGA modificadas na
superfície de quitosana trimetilada para o tratamento da doença de Alzheimer. Int. j.
Nanomed. 13, 705–718. https://doi.org/10.2147/IJN.S151474.
Mitra, S., Ghosh, N., Banerjee, ER, 2018. Carboximetil Guar Gum nanoscaffold como matriz para
crescimento celular in vitro. J Lung, Pulm Respir Res ume 5. https://doi.org/ 10.15406/
JLPRR.2018.05.00156.
Nagata, K., Ashikaga, R., Mori, W., Zako, T., Shimazaki, Y., 2022. Análise da degradação
enzimática de fibrilas de lisozima usando um método combinado de eletroforese em gel
não desnaturante e coloração dupla com Coomassie Brilliant Corantes azuis G 250 e R-250.
Anal. ciência https://doi.org/10.1007/S44211-022-00229-W.
Nune, M., Krishnan, UM, Sethuraman, S., 2016. Nanofibras PLGA combinadas com peptídeos de
automontagem de design para regeneração neural periférica. Mate. ciência Eng. C 62, 329–337.
https://doi.org/10.1016/j.msec.2016.01.057.
Park, JC, Han, SH, Mook-Jung, I., 2020a. Biomarcadores inflamatórios periféricos na doença de
Alzheimer: uma breve revisão. BMB Rep 53, 10. https://doi.org/10.5483/
BMBREP.2020.53.1.309 .
Park, JC, Han, SH, Mook-Jung, I., 2020b. Biomarcadores inflamatórios periféricos em
Doença de Alzheimer: uma breve revisão. BMB Rep 53, 10–19. https://doi.org/10.5483/
BMBREP.2020.53.1.309 .
Ponto, L., Schultz, S., Jacob, M., Menda, Y., Wemmie, J., Magnotta, V., 2014. pH cerebral
e patologia de Alzheimer. J. Nucl. Med. 55.
Porro, C., Cianciulli, A., Panaro, MA, 2020. O papel regulador da IL-10 na
doenças neurodegenerativas. Biomoléculas 10, 1–15. https://doi.org/10.3390/
BIOM10071017.
Probert, L., 2015. TNF e seus receptores no SNC: efeitos essenciais, desejáveis e deletérios.
Neurociência 302, 2–22. https://doi.org/10.1016/
J.NEUROSCIENCE.2015.06.038.
Rafal, HA, Nahi Yosef, Y., Shahlla, MS, Maeda, HM, Ahmed Majeed, A.-S., 2018.
Método direto e simples para isolamento, cultivo e detecção de células-tronco mesenquimais.
Int. J. Stem Cell Res. Transplante 5. https://doi.org/10.23937/2469-570X/ 1410054.
Reboredo, C., Gonzalez-Navarro, CJ, Martínez-Oharriz, C., Martínez-Lopez, AL,
Irache, JM, 2021. Preparação e avaliação de nanopartículas de zeína revestidas com PEG para
fins de administração oral de medicamentos. Int J Pharm 597, 120287. https://doi.org/10.1016/
J.IJPHARM.2021.120287.
Ren, S., Breuillaud, L., Yao, W., Yin, T., Norris, KA, Zehntner, SP, et al., 2021. TNF
A redução mediada por ÿ na neurotransmissão inibitória precede a patologia esporádica da
doença de Alzheimer em ratos jovens Trem2R47H. J. Biol. Chem. 296. https://doi.org/10.1074/
JBC.RA120.016395 .
Roh, JS, Sohn, DH, 2018. Padrões moleculares associados a danos em doenças inflamatórias.
Immune Netw 18. https://doi.org/10.4110/IN.2018.18.E27.
Rubio-Perez, JM, Morillas-Ruiz, JM, 2012. Uma revisão: processo inflamatório em
Doença de Alzheimer, papel das citocinas. ciência World J. 2012. https://doi.org/10.1100/
2012/756357.
Simma, N., Bose, T., Kahlfuß, S., Mankiewicz, J., Lowinus, T., Lühder, F., et al., 2014.
Os antagonistas dos receptores NMDA bloqueiam a função das células B, mas estimulam a produção de
IL-10 nas células B ativadas por BCR/CD40. https://doi.org/10.1186/s12964-014-0075-5.
Sulistio, YA, Lee, HK, Jung, SJ, Heese, K., 2018. Diferenciação neural derivada de células-tronco
pluripotentes induzidas por interleucina-6 (iPSC). Mol. Neurobiol. 55, 3513–3522. https://
doi.org/10.1007/S12035-017-0594-3.
Tobinick, E., Gross, H., Weinberger, A., Cohen, H., 2006. Modulação do TNF-alfa para tratamento
da doença de Alzheimer: um estudo piloto de 6 meses. médico Gen. Med. 8, 25.
Torres-Acosta, N., O'Keefe, JH, O'Keefe, EL, Isaacson, R., Small, G., 2020. Potencial terapêutico da
inibição do TNF -ÿ para prevenção da doença de Alzheimer. J. Alzheim. Dis. 78, 619–626. https://
doi.org/10.3233/JAD-200711.
Tsartsalis, S., Tomos, C., Karanikola, T., Mironidou-Tzouveleki, M., 2010. O efeito de
memantina na expressão alfa do fator de necrose tumoral do córtex cerebral em um modelo de
rato com hiperamonemia aguda. Ana. Gen. Psychiatr. 9. https://doi.org/10.1186/1744-
859X-9-S1-S181.
Tsujimoto, T., Hosoda, N., Uyama, H., 2016. Fabricação de poli(3-
monólitos de hidroxibutirato-co-3-hidroxihexanoato) via separação de fase induzida
termicamente. Polímero 8, 66. https://doi.org/10.3390/POLYM8030066, 2016;8:66.
Machine Translated by Google
V. Rani et ai.
Wang, WY, Tan, MS, Yu, JT, Tan, L., 2015a. Papel das citocinas pró-inflamatórias
liberado da microglia na doença de Alzheimer. Ana. Trad. Med. 3. https://doi.org/10.3978/
J.ISSN.2305-5839.2015.03.49 , 7–7.
Wang, WY, Tan, MS, Yu, JT, Tan, L., 2015b. Papel das citocinas pró-inflamatórias
liberado da microglia na doença de Alzheimer. Ana. Trad. Med. 3. https://doi.org/10.3978/
J.ISSN.2305-5839.2015.03.49 , 7–7.
Xie, L., Lai, Y., Lei, F., Liu, S., Liu, R., Wang, T., 2015. Explorando a associação entre a interleucina-1ÿ
e suas proteínas interativas na doença de Alzheimer. Mol. Med. Rep. 11, 3219–3228. https://
doi.org/10.3892/MMR.2015.3183/HTML.
11
Pesquisa atual em farmacologia e descoberta de medicamentos 4 (2023) 100149
Yick, LW, Tang, CH, Ma, OKF, Kwan, JSC, Chan, KH, 2020. Memantina
melhora deficiências motoras e patologias em um modelo de camundongo de distúrbios do
espectro da neuromielite óptica. J. Neuroinflammation 17, 1–16. https://doi.org/10.1186/
S12974-020-01913-2/FIGURES/7.
Zhang, P., Chen, L., Gu, W., Xu, Z., Gao, Y., Li, Y., 2007. Avaliação in vitro e in vivo de micropartículas
de liberação prolongada de donepezil para o tratamento da doença de Alzheimer .
Biomateriais 28, 1882-1888. https://doi.org/10.1016/
J.BIOMATERIALS.2006.12.016.