Trabalho Laboratorial C

Análise da quantidade de ferro da

ferritina

Licenciatura em Bioquímica
Química Bioinorgânica (Q2017)
Ano Letivo 2022/2023

PL2 Grupo 2
Alexandre Mendes
Guilherme Marques

Realizado a: 22/03 Entregue a: 27/03

Laboratório de Química Bioinorgânica Trabalho C

1. Resumo:
Com este procedimento experimental pretendemos calcular a quantidade de ferro presente
na ferritina, com recurso à espetroscopia eletrónica UV-Visível e o-fenantrolina como agente
quelante de ferro (II).
Para tal, realizou-se primeiramente um estudo espetrofotométrico do complexo [Fe(o-
fenantrolina)3] 2+ de modo a obter os seus λ max e Absmax. Seguidamente, de modo a descobrir o
valor do seu ε procedeu-se à construção de uma reta de calibração, onde se mediu a
absorbância de 6 soluções padrão de ferro (II) de concentrações distintas a um λ igual ao λ max
obtido anteriormente. Por fim, preparou-se duas amostras com a mesma quantidade de
ferritina para ler as suas respetivas absorvâncias e conseguir calcular-se a quantidade de ferro
nesta.

2. Parte Experimental:  
2.1 Reagentes:
Perigosidade e Condições
Reagentes Marca
de Manuseamento
Ácido diidroxifumárico ALDRICH
Irritante, inflamável
(DHF)[1] 99% Pureza

Tabela 1 - Reagentes merecedores de destaque utilizados durantes a realização do

procedimento experimental, bem como as suas respetivas marcas, perigosidade e condições de
manuseamento

Instrumentos Utilizados Modelo/Marca Incerteza Associada

Balança Analítica Scansoi ± 0,0001

UV 300 UV-Visible Spectrophotometer

Espectrofotómetro UV/Vis
Unicam

2.2 Instrumentação: 
Tabela 2 - Instrumentos utilizados ao longo do procedimento experimental e respetivas marcas
e incerteza associadas.

3. Procedimento Experimental:  
Todas as soluções do ponto 3.2 do procedimento experimental já se encontravam
previamente preparadas, exceto a solução aquosa de DHF 5 mmol/L. Esta foi preparada num
balão volumétrico de 25,00mL. Para o cálculo da massa necessária procederam-se aos
seguintes cálculos:
−3 −3 −4
n DHF =5× 10 ×25,00 ×10 =1,250 ×10 mol
−4
mDHF =1,250 ×10 ×148,07=0,01851 g
Porém, experimentalmente a massa de DHF pesada foi de 0,0183 g.

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Não houve quaisquer desvios relevantes em relação ao procedimento estabelecido no

protocolo para realização da tarefa 3.3. 

4. Resultados Experimentais:
4.1 Determinação de λmax e ε para o complexo [Fe(o-fenantrolina)3] 2+
De modo a descobrir λ max do complexo [Fe(o-fenantrolina)3]2+, efetuou-se o estudo
espetrofotométrico da solução de ferro(II) mais concentrada (solução 6) no intervalo de 400 a
800nm, sendo obtidos o respetivo espectro de absorção e os dados apresentados abaixo.

Gráfico 1 - Espectro de absorção para a solução com a maior concentração de Fe(II), num
intervalo de 400 a 800nm.
λmax (nm) 512
Absmax 0,802
Tabela 1 - Valores de λmax e Absmax obtidos para a leitura espectrofotométrica da solução 6.

Deste modo, descoberto o λmax do ferro procedeu-se à leitura da absorvância das soluções 1
a 6 de diferentes concentrações de ferro (II), para construir a reta de calibração e
posteriormente obter o valor da absortividade molar (ε).

Soluções
[Fe (II)]inicial Volume adicionado de Volume final da
padrão de [Fe (II)]final Abs512nm
(mol/L) Fe (II) (mL) solução (mL)
Fe(II)
1 0,00 0,00 0,018
2 2,00 1,60×10-5 0,200
3 2×10-4 3,00 25,00 2,40×10-5 0,240
4 4,00 3,20×10-5 0,354
5 5,00 4,00×10-5 0,382
6 6,00 4,80 ×10-5 0,549
Tabela 2 - Valores de absorvância obtidos, para um λ=512nm, para as soluções 1-6, e suas
respetivas concentrações de ferro(II).

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A partir dos valores de absorvância registados, realizou-se a construção da reta de

calibração, recorrendo à lei de Lambert-Beer.

Gráfico 2 - Representação gráfica da absorvância em função da [Fe 2+] para traçar a reta de
calibração e obter o valor de ε.

Enunciando a lei de Lambert-Beer: Abs = L x ε x [Fe2+], sendo L=1 (passo ótico), o declive da
reta corresponderá a ε (absortividade molar de [Fe(o-fenantrolina) 3]2+).

εobtido (mol-1 L cm-1) εliteratura (mol-1 L cm-1) Erro (%)

10661 11100 3,95
Tabela 3: Valor de ε obtido através da interpretação da reta de calibração e a sua comparação
com o valor de literatura

4.2 Determinação da quantidade de ferro na ferritina

Para a determinação de ferro na ferritina preparou-se duas soluções de com 1mL de ferritina
e adicionou-se 2mL de ο-fenatrolina, para de seguida se ler a sua respetiva absorvância.

Solução Abs512nm Média

1 0,127
0,110
2 0,093
Tabela 4: Valores da absorvância das soluções 1 e 2, a 512nm.

A partir dos valores de absorvância obtidos é possível calcular a concentração de ferro(II),

com recurso da equação da reta do gráfico 2.

0,110=10661.¿
−5 3
¿ 1,00 ×10 mol /dm
n Fe
2+ ¿
=1,00 ×10−5 ×25,00 ×10 −3 =2,50 × 10−7 mol¿

m Fe 2+ ¿
=n Fe ¿
2+¿
×M ¿
Fe 2+¿= 2,50 ×10−7 × 55,84=1,40× 10− 5 g¿

[ferritina] = 0,5 mg/mL = 0,5 g/L

m ferritina =[ ferritina ] ×V ferritina usada=0,5 ×1,000 ×10 =0,0005 g

−3

mapoferritina =mferritina−m Fe 2+ ¿
=0,0005−1,396 ×10 −5 =4,860× 10−4 g ¿

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m apoferritina 4,860 ×10−4 −9

n apoferritina= = =1,025 ×10 mol
M apoferritina 474000
n Fe2+ ¿
2,50 ×10−7
= =244 átomos de ferro ¿
napoferritina 1,025 ×10−9

5. Discussão de Resultados:  
Para este trabalho experimental tinha-se como principal objetivo calcular a quantidade de
ferro na ferritina, tendo-se procedido para tal em primeiro lugar a um estudo
espectrofotométrico do complexo [Fe(o-fenantrolina)3]2+ de modo a descobrir o comprimento
de onda seria mais adequado para a leitura das absorvâncias das soluções com diferentes
concentrações de ferro(II). Este λmax foi muito próximo do estipulado pela literatura [3], sendo o
erro obtido de 3,95%.
Ao analisar a reta de calibração obtida através da medição das absorvâncias das várias
soluções de ferro(II), verifica-se que esta apresenta um erro pouco significativo. A equação da
reta corresponde então à seguinte equação: Abs = Ɛ x |Fe |, onde o declive é equivalente à
2+

absortividade molar, ou seja, a ε. Assim, a absortividade molar do ferro é igual a 10661 mol-1 L
cm-1. Este valor não está muito distante do valor de literatura [3] (11100 mol-1 L cm-1).
Finalmente, procedeu-se ao cálculo do número de átomos de ferro no núcleo de ferritina da
amostra fornecida, obtendo-se como resultado 244 átomos de ferro por molécula de ferritina.
Este valor encontra-se significativamente abaixo do valor esperado visto que a literatura [2]
propões que uma molécula de ferritina pode conter até 4500 átomos de ferro. Este valor pode
ser explicado devido ao facto de que a ferritina utilizada durante este procedimento não se
encontrava nas condições ideais de conservação, existindo momentos do mesmo em que esta
possa ter estado exposta ao meio ambiente ou sofrido desnaturação. Outro erro significativo
que pode ter influenciado este valor, para além de erros aleatórios de medição, foi a pequena
diferença massa de DHF pesada em relação à estipulada para a preparação da solução, o que
alterou a concentração da mesma e consequentemente, os ferros reduzidos disponíveis para
serem detetados durante a leitura de absorvâncias. De modo a melhorar estes resultados
talvez se pudesse ter aumentado as quantidades de ácido sulfúrico e DHF utilizados de modo a
que nos pudéssemos certificar que a proteína tinha sido completamente desnaturada e todo o
ferro tinha sido reduzido e libertado para a solução.
Assim, é possível concluir que o objetivo da atividade experimental foi alcançado com um
sucesso relativo, apesar da baixa quantidade de ferro obtida para uma unidade de ferritina.

6. Bibliografia e Webgrafia:  
[1] - https://www.sigmaaldrich.com/PT/en/sds/aldrich/200018
[2] - https://www.laboratoriorocha.com/exame/ferritina-349
[3]- P. Gameiro, L. M. Ribeiro, Trabalho prático C, Química Bioinorgânica sessões
laboratoriais. 2022-2023.

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