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EUR. J. Immunol. 2020. 0: 1–4 DOI: 10.1002 / eji.201948481 1

Carta para o editor

[DOI: 10.1002 / eji.201948481] os números variaram consideravelmente entre os função reguladora, consistente com uma
HDs (Informações de Apoio, Tabela 1). Muitos origem Treg de TGFβ+LMPs [8].
fatores contribuem para isso em condições Em seguida, investigamos se o fenótipo e as
fisiopatológicas [1, 2]. A preparação e concentrações de TGFβ purificado+LMPs
armazenamento de pRBCs pode favorecer a afetaram LTs. Também comparamos esses
Micropartículas de sangue
produção de MP [3, 6]. A variabilidade dos números dados com os de MPs totais purificados,
são um componente da de MP, particularmente para LMPs, pode ser uma independentemente da origem. MPs
modulação imune característica chave dos efeitos imunomoduladores purificadas foram co-cultivadas com PBMCs,
após transfusões. para avaliar seus efeitos na linfoproliferação de
na transfusão de
Como as características das LMPs nunca células Tregs e Tfh (Informações de Apoio Fig.
glóbulos vermelhos foram estudadas, primeiro investigamos seu S5). Como o número de MPs variou entre os
fenótipo. Todas as moléculas HDs, investigamos se o número de MPs afetou
imunomoduladoras estudadas foram a linfoproliferação. TGFβ+LMPs pareceu facilitar
Microvesículas extracelulares (EVs) brotam da
detectadas, com variações entre HDs (Fig. a linfoproliferação de forma mais eficaz do que
membrana celular para o sangue. Existem dois
1A, Informações de Apoio Fig. S2). Não MPs totais (Fig. 2A). Além disso, em altas
tipos de EVs: exossomos (40-100 nm de
encontramos correlação da expressão de concentrações, MPs diminuíram a
diâmetro, a partir de compartimentos da
moléculas imunomoduladoras entre LTs e linfoproliferação sem mortalidade (Fig. 2A e B).
membrana intracelular) e micropartículas (MPs,
LMPs (Informações de Apoio Fig. S3). Essa Ainda não se sabe como as MPs induzem a
200-900 nm de diâmetro, produzidos por
falta de correlação sugere que a preparação linfoproliferação. MPs podem interagir com as
brotamento da membrana plasmática). MPs
e o armazenamento de pRBC podem afetar células de duas maneiras: por internalização ou
têm efeitos fisiológicos e imunomoduladores,
a expressão dessas moléculas [3-6]. fusão [1]. Um grande aumento no tamanho do
potencialmente afetando a saúde [1,2]. A
As LMPs expressaram várias moléculas, LT após a interação com MPs pode imitar as
transfusão de glóbulos vermelhos (pRBC) foi
consistentes com a coexpressão. Assim, alterações morfológicas que ocorrem nas
relatada para induzir imunomodulações
analisamos a coexpressão das moléculas células senescentes e interromper a
independentemente de leucócitos e citocinas
imunomoduladoras mais frequentes (Fig. linfoproliferação [10].
residuais [3]. As MPs são produzidas por vários
1B). CTLA-4 e TGFβ foram os mais
tipos de células, estão em pRBCs, são
coexpressos, sugerindo que as LMPs em MPs modulam a linfoproliferação e podem
transferidas durante a transfusão e podem
questão podem ter sido derivadas de Tregs afetar indiretamente a produção de
afetar os resultados da transfusão [3,4].
(Fig. 1B) [7]. imunoglobulinas. Investigamos o efeito de MPs
CD4+Os linfócitos T (LTs), que expressam
As citocinas são uma chave importante da purificados em coculturas de LTs purificados e
moléculas imunomoduladoras, são os
imunomodulação. Estudamos LMPs purificados linfócitos B (LBs) (Informações de Apoio Fig. S6).
principais reguladores da aloimunização [5].
por classificação por citometria de fluxo, para A produção de anticorpos foi significativamente
MPs herdam as propriedades de suas
investigar seu conteúdo e funções de citocinas aumentada por MPs, de maneira dose-
células de origem [1, 2]. Assim, LT MPs
(Informações de Apoio Fig. S4). Poucas citocinas dependente (Fig. 2C). MPs podem interagir
(LMPs) provavelmente induziriam
foram encontradas em MPs totais e em TGFβ- diretamente com LBs para promover a
imunomodulações durante a transfusão.
LMPs (Fig. 1C). No entanto, todas as citocinas produção de anticorpos ou indiretamente [1].
Muitos fatores sanguíneos afetam as
testadas estavam presentes, algumas com De fato, MPs podem conter mitocôndrias e sua
características do MP, potencialmente responsáveis
níveis elevados de TGFβ+LMPs (Figs. 1C e D). A metilação CpG pode promover a expressão de
pela variação entre HDs [1, 2]. Portanto,
presença de citocinas pró-inflamatórias (TNFα, TLR9 [1].
investigamos a variabilidade de MPs em pRBCs
IL-22, IL-1RA, IL-27, IL-31) e quimiocinas (MCP1, Esses achados sobre a ativação humoral
frescos. Usamos esferas de calibração para
SDF1), sugerem um papel dessas MPs nas in vitro levantam questões sobre o papel das
selecionar MPs e excluir exossomos (Informações
funções imunes [8, 9]. IL-27+LMPs sugerem MPs na transfusão. Resolvemos esse
de Apoio Fig. S1). Total de MP e LMP
uma problema purificando o total de MPs de

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Figura 1.Fenotipagem e conteúdo de citocinas de LMPs de pRBCs. (A) Expressão de 10 moléculas imunorreguladoras em LMPs por citometria de fluxo. Amostras
de HDs foram coletadas e coradas para LAG-3, CD40L, PD-L1 (dados de oito experimentos, com um doador por experimento) e TGFβ, PD1, CTLA-4, TRAIL, CD39,
TIM-3 e FasL ( dados de 19 experimentos, com um doador por experimento). As barras horizontais indicam a mediana. (B) Coexpressão de CD39+, TIM-3+, CTLA-4+,
FasL+, PD1+, TGFβ+, e TRILHA+por LMPs foi avaliada por citometria de fluxo no mesmo grupo de HDs (dados de 19 experimentos, com um doador por
experimento). A frequência média de expressão por LMPs é mostrada, para cada categoria, no histograma. (C) Total de deputados (uma=6 HDs), TGFβ-LMPs (uma=
5 HDs) e TGFβ+LMPs (uma=10 HDs) foram purificados a partir de pRBCs (10 experimentos, com um doador por experimento). 1×105As MPs foram classificadas com
base no fenótipo por citometria de fluxo e lisadas. Os níveis de 34 citocinas foram determinados com tecnologia Luminex. Os dados de um experimento com todos
os MPs purificados são mostrados. Um mapa de calor foi gerado para comparar as concentrações de citocinas entre MPs classificadas. As citocinas são
classificadas verticalmente, de acordo com as quantidades presentes no TGFβ+LMPs (mostrados em ordem decrescente). (D) Histogramas de média±Concentração
de citocina SD (pg / 105MPs) em TGFβ purificado+LMPs (10 experimentos, com um doador por experimento).

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Figura 2.Efeito das MPs na proliferação de LT e na resposta humoral. (A) PBMCs de seis HDs foram cocultivados com MPs totais selecionados ou TGFβ+LMPs por 6
dias, e a linfoproliferação foi avaliada por citometria de fluxo. Exemplo de histogramas mostrando a proliferação de células Tregs e Tfh (para o mesmo HD) com e
sem MPs totais alogênicos ou TGFβ+LMPs. A divisão celular foi avaliada com o CFSEeiSubpopulação LT (os dados são de um único experimento representativo de
seis experimentos com um doador por experimento). (B) A linfoproliferação Treg foi avaliada para quatro HDs e seis HDs, para células Tfh cultivadas sem MPs (♦),
ou com o total de MPs, na proporção de 1:20.000 (•),1: 2000 (-), 1: 200 (-) e 1:20 (-) (MPs: PBMCs). As barras horizontais indicam a mediana. (C) LT e células B de
memória foram purificadas por citometria de fluxo, para seis HDs. A produção de anticorpos foi estudada após 5 dias de cocultura com vários números de MPs
totais: NS (cinza), 1: 1 (preto), 10: 1 (vermelho) (MPs: linfócitos). Os dados apresentados são as médias de três HDs por grupo e são representativos de dois
experimentos independentes. (D) O efeito das MPs na resposta humoral foi investigado in vivo. Os camundongos receberam a proteína lisozima do ovo de galinha
(HEL) por injeção intravenosa, com ou sem MPs alogênicas purificadas (25.000 ou 400.000 MPs). A presença de anticorpos anti-HEL foi avaliada 28 dias após a
imunização, por cruzamento de fluxo. Os dados são mostrados para quatro camundongos por grupo e são representativos de dois experimentos independentes
(totaluma=8 camundongos por grupo). As barras horizontais indicam a mediana±SD.pos valores foram obtidos nos testes de Kruskal – Wallis e os testes post-hoc
de Dunn foram usados para comparações: *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,0001.

camundongos e transfundindo-os em camundongos Agradecimentos:Este trabalho foi apoiado 9Lopez-Cotarelo, P. et ai.,Tendências Immunol.2017.

com um antígeno (HEL) (Informações de Apoio Fig. S7). pelaEstabelecimento Français du Sang, 38: 927-941.

Os camundongos cotransfundidos com MPs alogênicos Inserm e Université Paris-Est. Gostaríamos 10Muñoz-Espín, D. et ai.,Molhado. Rev. Verruga. Cell Biol.

e antígeno apresentaram níveis mais elevados de de agradecer à instalação de citometria de 2014.15: 482–496.

anticorpos anti-HEL do que os camundongos fluxo do Institut Cochin e Denis Clay da

transfundidos apenas com antígeno (Fig. 2D). instalação de citometria de fluxo do Institut Abreviaturas:VE: microvesícula extracelular·

MPs de doadores de sangue, portanto, têm André Lwoff, Villejuif, França. deputado: micropartícula·LT: CD4+linfócito T·

funções imunorreguladoras. Esses resultados LIBRA: linfócito B·LMP: CD4+micropartícula de

sugerem que o fenótipo e o número de MPs linfócitos T·pRBCs: concentrado de glóbulos

podem estar associados a imunomodulações Conflito de interesses:Não declaramos nenhum vermelhos· HD: doador saudável

durante as transfusões, como mostrado em conflito de interesse comercial ou financeiro.

nosso modelo in vivo. Como o fenótipo das MPs Palavras-chave:Aloimunização-Vesículas extracelulares

pode mudar durante o armazenamento de
pRBC, um estudo prospectivo deve ser
realizado antes de generalizar esses resultados
para humanos [3].
Marion Klea Pinheiro1,2,3,4,
Maria Tamagne1,2,3,4,
Rahma Elayeb1,2,3,4
Muriel Andrieu5
França Pirenne1,2,3,4
e Benoı̂t Vingert1,2,3,4
sanguíneas-CD4+Resposta de células T
Referências
Correspondência completa:Dr. Benoı̂t Vingert,
EFS, 5 rue Gustave Eiffel, 94000 Créteil, França. e-
1Théry, C. et ai.,Molhado. Rev. Immunol.2009.9: 581–
593 mail: benoit.vingert@efs.sante.fr ; fax:
+ 33156721747
2Melki, I. et ai.,Plaquetas2017.28: 214-221.
,
3Danesh, A. et ai.,Sangue2014.123: 687-696. O histórico de revisão por pares deste artigo está
,
disponível em https://publons.com/publon/
4Baumgartner, JM et ai.,Geléia. Col. Surg.2009.
10.1002/eji.201948481
208: 110-119.

5Hendrickson, JE et ai.,Transfusão2009.49: Recebido: 28/11/2019

1Estabelecimento Français du Sang, Ile-de-France, 1678-1684. Revisado: 13/3/2020
França
2Instituto Mundial de Pesquisa Biomédica, 6Noulsri, E. et ai.,Transfusão. Apher. Sci.2017.56: Aceito: 29/4/2020
lnserm U955, Equipe Pirenne, Créteil, França 135-140. Artigo aceito online: 05/07/2020
3Laboratóriode Excelência GR-Ex, Paris, França
7Tanaka, A. et ai.,Célula Res.2017.27: 109-118.
4Universidade Paris-Est, Créteil, França

5Instituto Cochin, Citometria de Cochin e

-
8Banchereau, J. et ai.,Molhado. Immunol.2012.13:
Centro de Imunobiologia, Paris, França O detalhadomateriais e métodos para
925-931
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