Análise de líquido sinovial

Fonte: folheto serviço de reumatologia Padova

• Um dos exames mais importantes disponíveis na reumatologia

• Permite identificar o grau de inflamação e detetar a presença de cristais

Colheita da amostra
• Condições de assepsia
• Colocação da amostra em 2 tubos
o Com EDTA à para evitar a formação de coágulos e prevenir a facilitar a
contagem celular
o Tubo sem aditivos à para contagem diferencial de leucócitos e pesquisa
de cristais
o Frascos de culturas à se suspeita de artrite séptica

Material
• Microscópio com luz polarizada
• Polarizador
• Compensador vermelho
• Laminas e lamelas
• Pipetas
• Alizarine red, seringa e e filtro 0.22mm diâmetro
• Lâminas de TestsimpletsÒ (a lâmina já tem a coloração para identificar os
diferentes leucócitos e permitir a contagem diferencial)
• Óleo de imersão
• Azul de metileno e “potain” pipeta
• Câmara de contagem BurkerÒ

Aspeto macroscópico
• Volume
• Transparência
o Claro/transparente
o Translucido
o Turvo

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 • Cor
o A cor varia com o grau da inflamação
§ Incolor à bege/cor de palha à amarelo à dourado à
amarelo/esverdeado
§ Pode conter vestígios de sangue
• Viscosidade
o O teste da “corda”, que avalia o comprimento do filamento a cair a partir
de uma seringa
§ Baixa viscosidade se curto
§ Normal, se ~6 cm

Contagem total de células

- O número total de células expressa o número de leucócitos por milímetro cubico
- A contagem é realizada em microscópio ótico recorrendo a uma câmara Burker

Preparação das lâminas

- para diluir a amostra, retirar com uma pipeta “Potain” o liquido sinovial do tubo com
anticoagulante até perfazer 0,5
- com a mesma pipeta, introduzir a solução contendo em partes iguais solução salina a
0,3% e azul de metileno a 0,1% até perfazer 11
- agitar a pipeta invertendo-a, descartar as primeiras gotas e introduzir a mistura de
liquido sinovial com azul de metileno na camara de contagem

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 Como contar?
- a imagem mostra 9 quadrados grandes cada um dividido por linhas duplas que contém
16 quadrados pequenos
- contar as células em 2 dos 9 quadrados consecutivos e multiplicar o numero por 100
- as células sobrepostas as linhas so devem ser contadas em 2 das arestas
- todas as que estiverem dentro das linhas devem ser contabilizadas

Contagem diferencial
- a contagem diferencial ajuda a detectar a percentagem de células inflamatórias
- PMN: células granulares com núcleo multilobulado e grânulos citoplasmáticos
- Monócitos: células com núcleo volumoso/grande em posição central ou periférica,
frequentemente reniformes ou com um contorno nuclear convulto
- Linfócitos: núcleo de pequenas dimensões, redondo, com uma razão
núcleo:citoplasma alta

Numa preparação a fresco, a coloração supravital usando das lâminas

TESTSIMPLETSÒ (são lâminas pré-preparadas e prontas a usar contendo violeta de
cresil e azul de metileno. A colocação supravital é uma colocação fácil e rápida para
analisar a amostra) permite distinguir os leucócitos

Preparação
- colocar uma gota de liquido sinovial no centro da lamina
- cobrir com a lamela e colocar óleo de imersão por cima
- examinar a preparação com objetiva de 100x sob o óleo de imersão
- contar pelo menos 100 celulas consecutivas e distinguir a morfologia entre PMN,
monócitos e linfócitos

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 - expressar o numero total de células em %

Se as lâminas TestSimplets não estiverem disponíveis, a colocação May-Grunwald

Giemsa deve ser realizada:
- preparar um esfregaço fino numa lamina e deixar secar ao ar
- mergulhar na solução de May-Grunwald durante 5 minutos
- lavar com agua
- mergulhar em solução de Giemsa diluída a 1:10 em agua destilada durante 15 minutos
- lavar com agua e deixar secar
- examinar com objetiva a 100x de óleo de imersão
- contar pelo menos 100 celulas consecutivas e distinguir a morfologia entre PMN,
monócitos e linfócitos
- expressar o numero total de células em %

Classificação do liquido sinovial

Identificação de cristais
- é realizada usando uma preparação húmida debaixo de luz normal e depois debaixo
de luz polarizada em microscópio ótico, como descrito:
- limpar cuidadosamente a lamina com álcool
- colocar uma gota de liquido sinovial
- cobrir com lamela
- examinar ao m.o. primeiro com luz normal, depois com luz polarizada e
finalmente com compensador de luz vermelha

- A luz polarizada é obtida fazendo passar luz comum através de uma lente polarizada,
colocada entre a fonte de luz e a lâmina. Graças as suas propriedades birrefringentes,
os cristais aparecem brilhantes num campo escuro.

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 - Um compensador vermelho de 1º ordem, colocado em cima do polarizador, permite
distinguir os cristais de monourato de sódio (MSU) e os cristais de pirofosfato de cálcio
(CPP), com base na cor que exibem.
- O esquema representa a cor dos cristais de MSU e CPP sob luz polarizada. Os cristais
podem aparecer amarelos ou azuis dependendo da posição do seu eixo maior em
relação a posição do eixo do compensador.

- Os cristais de MSU geralmente têm forma de agulha, longos, extremamente brilhantes

sob luz polarizada e com cores vivas sob luz polarizada compensada. Quando o eixo
maior está paralelo ao eixo do compensador, são amarelos/alaranjados, ou azuis se
perpendiculares ao eixo.

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 - Os cristais de CPP têm forma romboide ou retangular. A sua birrefringência é fraca
sob luz polarizada e portanto as cores são débeis sob luz polarizada compensada.
Quando o eixo maior está paralelo ao eixo do compensador eles são azuis, quando
estão perpendiculares são amarelos/laranja.

- Cristais básicos de fosfato podem ser visualizados em preparações de vermelho de

alizarina. Esta coloração não é feita por rotina, dado ser um método muito sensível mas
pouco específico.
- Numa lâmina limpam misturar uma gota de liquido sinovial com uma gota de
solução filtrada de solução vermelha de alizarina a 2%
- Cobrir a lamina com a lamela e avaliar em ampliação de 400x
- se presentes os critais aparecem sob a luz polarizada comum como
precipitados vermelhos birrefringentes brilhantes, com forma redonda e em camadas
concêntricas.

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 Armazenamento de amostras
O liquido sinovial deve ser analisado tao cedo quanto possível após a sua colheita, para
assegurar a precisão da contagem total e diferencial de células.

O mais importante a relembrar:

- Exame citológico: o liquido pode ser armazenada a +4ºC durante 24/48h sem perda
celular significativa
- Deteção de cristais: pode ser armazenado a -20ºC por vários meses

Outras considerações:
- se pequena quantidade de liquido sinovial à dispensar tubo com anticoagulante, a
contagem celular de leucócitos pode ser realizada imediatamente após a artrocentese
usando a amostra colhida em um tubo sem aditivos
- em caso de ser apenas possível colher umas gotas de liquido sinovial devem ser
colocadas automaticamente numa lamina limpa, mesmo uma pequena quantida de
liquido é suficiente para identificar cristais.

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