LISTA DE EXERCÍCIOS - VERIFICAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS

Exercício 1) Um laboratório farmacêutico está desenvolvendo um método de

análise por HPLC para a determinação da concentração de um ingrediente ativo em
um medicamento. O método foi validado e os resultados obtidos para a precisão e
exatidão foram:

Precisão: desvio padrão relativo (RSD) = 1,2%, n = 10

Exatidão: recuperação = 97,5%, n = 5
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para precisão e exatidão?
Justifique sua resposta.

Resolução:
Precisão: o desvio padrão relativo (RSD) de 1,2% é menor que o limite máximo de
2,0% estabelecido pela farmacopéia, portanto, o resultado atende aos critérios de
aceitação para precisão.
Exatidão: a recuperação de 97,5% está dentro da faixa de 95-105% estabelecida pela
farmacopeia, portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para exatidão.
Conclusão: O método de análise por HPLC desenvolvido pelo laboratório
farmacêutico atende aos critérios de aceitação para precisão e exatidão.

Exercício 2) Um laboratório de controle de qualidade de uma indústria alimentícia

está validando um método de análise por HPLC para a determinação da
concentração de um conservante em um produto. O método foi validado e os
resultados obtidos para a linearidade e seletividade foram:

Linearidade: coeficiente de correlação (R²) = 0,997, intervalo de concentração

testado = 0,5 a 5,0 mg/L
Seletividade: não foi observada interferência de outros componentes do produto na
análise
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para linearidade e
seletividade? Justifique sua resposta.

Resolução:
Linearidade: o coeficiente de correlação (R²) de 0,997 indica uma correlação forte
entre as concentrações e as respostas do método. Além disso, o intervalo de
concentração testado está dentro da faixa de 80-120% da concentração alvo,
estabelecida pela farmacopeia. Portanto, o resultado atende aos critérios de
aceitação para linearidade.
Seletividade: a ausência de interferência de outros componentes do produto na
análise indica que o método é seletivo para a determinação do conservante.
Portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para seletividade.
Conclusão: O método de análise por HPLC desenvolvido pelo laboratório de controle
de qualidade da indústria alimentícia atende aos critérios de aceitação para
linearidade e seletividade.

Exercício 3) Um laboratório de microbiologia está validando um método de

contagem de colônias por membrana para a determinação de microrganismos em
alimentos. O método foi validado e os resultados obtidos para a precisão e
seletividade foram:

Precisão: desvio padrão relativo (RSD) = 2,5%, n = 5

Seletividade: o método foi capaz de detectar os microrganismos-alvo sem
interferência de outros microrganismos presentes nos alimentos.
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para precisão e
seletividade? Justifique sua resposta.

Resolução:
Precisão: o desvio padrão relativo (RSD) de 2,5% é menor que o limite máximo de
5,0% estabelecido pela farmacopeia, portanto, o resultado atende aos critérios de
aceitação para precisão.
Exatidão: a recuperação de 105% está dentro da faixa de 80-120% estabelecida pela
farmacopeia, portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para exatidão.
Conclusão: O método de análise microbiológica desenvolvido pelo laboratório
atende aos critérios de aceitação para precisão e exatidão.

Exercício 4) Um laboratório de controle de qualidade de uma indústria farmacêutica

está validando um método de detecção de endotoxinas bacterianas em produtos
injetáveis. O método foi validado e os resultados obtidos para a exatidão e robustez
foram:

Exatidão: recuperação = 85%, n = 3

Robustez: as variações nos parâmetros de pH e temperatura não afetaram
significativamente a detecção das endotoxinas.
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para exatidão e robustez?
Justifique sua resposta.
Resolução:
Sensibilidade: o limite de detecção de 10 UFC/g está abaixo do limite máximo de
100 UFC/g estabelecido pela legislação, portanto, o resultado atende aos critérios
de aceitação para sensibilidade.
Seletividade: a ausência de reação cruzada com outros microrganismos presentes
nos alimentos testados indica que o método é seletivo para a detecção dos
patógenos. Portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para seletividade.
Conclusão: O método de análise microbiológica desenvolvido pelo laboratório
atende aos critérios de aceitação para sensibilidade e seletividade.

Exercício 5) Um laboratório de análises químicas está verificando o desempenho

de um método de absorção atômica para a determinação de chumbo em amostras
de água. Os resultados obtidos para a precisão e exatidão foram:

Precisão: desvio padrão relativo (RSD) = 1,5%, n = 5

Exatidão: recuperação = 95%, n = 3
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para precisão e exatidão?
Justifique sua resposta.

Resolução:
Precisão: o desvio padrão relativo (RSD) de 1,5% é menor que o limite máximo de
2,0% estabelecido pela farmacopeia, portanto, o resultado atende aos critérios de
aceitação para precisão.
Exatidão: a recuperação de 95% está dentro da faixa de 90-110% estabelecida pela
farmacopeia, portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para exatidão.
Conclusão: O método de absorção atômica desenvolvido pelo laboratório atende
aos critérios de aceitação para precisão e exatidão na determinação de chumbo em
amostras de água.

Exercício 6) Um laboratório de análises químicas está verificando o desempenho

de um método de absorção atômica para a determinação de zinco em amostras de
solo. Os resultados obtidos para a sensibilidade e seletividade foram:

Sensibilidade: limite de detecção = 0,2 mg/kg, n = 5

Seletividade: não foi observada interferência de outros elementos presentes nas
amostras de solo testadas
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para sensibilidade e
seletividade? Justifique sua resposta.
Resolução:
Sensibilidade: o limite de detecção de 0,2 mg/kg está abaixo do limite máximo de
1,0 mg/kg estabelecido pela legislação, portanto, o resultado atende aos critérios de
aceitação para sensibilidade.
Seletividade: a ausência de interferência de outros elementos presentes nas
amostras de solo testadas indica que o método é seletivo para a determinação de
zinco. Portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para seletividade.
Conclusão: O método de absorção atômica desenvolvido pelo laboratório atende
aos critérios de aceitação para sensibilidade e seletividade na determinação de
zinco em amostras de solo.

Exercício 7) Um laboratório de análises está verificando o desempenho de um

método de ELISA para a determinação de anticorpos contra o vírus da dengue em
amostras de soro. Os resultados obtidos para a precisão e exatidão foram:

Precisão: desvio padrão relativo (RSD) = 3%, n = 6

Exatidão: recuperação = 100%, n = 4
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para precisão e exatidão?
Justifique sua resposta.

Resolução:
Precisão: o desvio padrão relativo (RSD) de 3% é menor que o limite máximo de 5%
estabelecido pela farmacopeia, portanto, o resultado atende aos critérios de
aceitação para precisão.
Exatidão: a recuperação de 100% indica que o método é exato para a determinação
de anticorpos contra o vírus da dengue em amostras de soro. Portanto, o resultado
atende aos critérios de aceitação para exatidão.
Conclusão: O método de ELISA desenvolvido pelo laboratório atende aos critérios de
aceitação para precisão e exatidão na determinação de anticorpos contra o vírus da
dengue em amostras de soro.

Exercício 8) Um laboratório de análises está verificando o desempenho de um

método de ELISA para a determinação de um antígeno específico em amostras de
plasma. Os resultados obtidos para a sensibilidade e seletividade foram:

Sensibilidade: limite de detecção = 0,1 ng/mL, n = 3

Seletividade: não foi observada interferência de outras proteínas presentes no
plasma
Os resultados obtidos atendem aos critérios de aceitação para sensibilidade e
seletividade? Justifique sua resposta.

Resolução:
Sensibilidade: o limite de detecção de 0,1 ng/mL está abaixo do limite máximo de 1
ng/mL estabelecido pela literatura para o antígeno em questão, portanto, o resultado
atende aos critérios de aceitação para sensibilidade.
Seletividade: a ausência de interferência de outras proteínas presentes no plasma
indica que o método é seletivo para a determinação do antígeno em questão.
Portanto, o resultado atende aos critérios de aceitação para seletividade.
Conclusão: O método de ELISA desenvolvido pelo laboratório atende aos critérios de
aceitação para sensibilidade e seletividade na determinação do antígeno específico
em amostras de plasma.

Exercício 9) Um laboratório de análises está avaliando o limite de detecção de um

método de absorção atômica para a determinação de chumbo em amostras de
água. Foram preparadas soluções padrão com concentrações de chumbo de 0,5,
1,0 e 2,0 µg/L, e foram injetados 10 µL de cada solução no equipamento. A
absorbância medida foi de 0,002, 0,004 e 0,008, respectivamente. Determine o
limite de detecção do método e comente sobre sua adequação.

Resolução:
Para determinar o limite de detecção do método, pode-se utilizar a fórmula:
LD = 3 * (Desvio padrão do branco) / Inclinação da curva de calibração
O desvio padrão do branco é calculado a partir de várias medidas da absorbância do
branco (água ultrapura), e a inclinação da curva de calibração é determinada a partir
dos valores de absorbância das soluções padrão.
Para os dados fornecidos, o desvio padrão do branco foi de 0,001, e a inclinação da
curva de calibração foi de 0,002. Substituindo na fórmula, temos:
LD = 3 * 0,001 / 0,002 = 1,5 µg/L
Portanto, o limite de detecção do método é de 1,5 µg/L. Esse valor deve ser
comparado com o limite de quantificação (LQ) do método e com os limites
regulatórios aplicáveis para o determinado analito em água. Se o limite de detecção
for inferior ao limite regulatório e permitir a quantificação da substância em
concentrações de interesse para a análise, o método é considerado adequado.

Exercício 10) Um laboratório de análises está avaliando o limite de detecção de um

método de absorção atômica para a determinação de arsênio em amostras de solo.
Foram preparadas soluções padrão com concentrações de arsênio de 0,5, 1,0 e 2,0
µg/g, e foram injetados 50 µL de cada solução no equipamento. A absorbância
medida foi de 0,04, 0,08 e 0,16, respectivamente. Determine o limite de detecção do
método e comente sobre sua adequação.

Resolução:
Para determinar o limite de detecção do método, pode-se utilizar a fórmula:
LD = 3 * (Desvio padrão do branco) / Inclinação da curva de calibração
O desvio padrão do branco é calculado a partir de várias medidas da absorbância do
branco (solução de ácido nítrico), e a inclinação da curva de calibração é
determinada a partir dos valores de absorbância das soluções padrão.
Para os dados fornecidos, o desvio padrão do branco foi de 0,01, e a inclinação da
curva de calibração foi de 0,003. Substituindo na fórmula, temos:
LD = 3 * 0,01 / 0,003 = 10 µg/g

Exercício 11) Um método de cromatografia gasosa para análise de benzofenona foi

validado, e o limite de detecção (LD) foi estimado em 0,02 µg/mL. Uma amostra foi
preparada com uma concentração de 0,015 µg/mL de benzofenona e analisada pelo
método. Pergunta-se:

a) Qual é a relação sinal-ruído (S/N) da amostra?

b) A amostra foi detectada pelo método?
c) Qual é o limite de quantificação (LQ) estimado para este método?

Respostas:
a) S/N = (Sinal da amostra - Sinal do branco) / Ruído de fundo = (0,015 - 0) / ruído
de fundo. Não foi fornecido o valor do ruído de fundo, portanto não é possível
calcular S/N.
b) A amostra não foi detectada pelo método, uma vez que o sinal obtido (0,015
µg/mL) é menor que o LD do método (0,02 µg/mL).
c) O LQ é geralmente definido como três vezes o LD. Portanto, LQ = 3 x 0,02 µg/mL
= 0,06 µg/mL.

Exercício 12) Um método de cromatografia gasosa para análise de dióxido de

enxofre em ar ambiente foi validado, e o LD foi estimado em 0,5 ppm. Uma amostra
de ar foi coletada e injetada no cromatógrafo, e o sinal obtido foi de 0,8 ppm.
Pergunta-se:

a) Qual é a relação sinal-ruído (S/N) da amostra?

b) A amostra foi detectada pelo método?
c) Qual é o limite de quantificação (LQ) estimado para este método?

Respostas:
a) S/N = (Sinal da amostra - Sinal do branco) / Ruído de fundo = (0,8 - 0) / ruído de
fundo. Não foi fornecido o valor do ruído de fundo, portanto não é possível calcular
S/N.
b) A amostra foi detectada pelo método, uma vez que o sinal obtido (0,8 ppm) é
maior que o LD do método (0,5 ppm).
c) O LQ é geralmente definido como três vezes o LD. Portanto, LQ = 3 x 0,5 ppm =
1,5 ppm.

Exercício 13) Um método de espectrometria de massas para análise de um

fármaco foi validado, e o limite de quantificação (LQ) foi estimado em 5 ng/mL. Uma
amostra foi preparada com uma concentração de 7,5 ng/mL do fármaco e analisada
pelo método. Pergunta-se:

a) Qual é a relação sinal-ruído (S/N) da amostra?

b) A amostra pode ser quantificada pelo método?
c) Qual é o limite de detecção (LD) estimado para este método?

Respostas:
a) S/N = (Sinal da amostra - Sinal do branco) / Ruído de fundo = (7,5 - 0) / ruído de
fundo. Não foi fornecido o valor do ruído de fundo, portanto não é possível calcular
S/N.
b) A amostra pode ser quantificada pelo método, uma vez que a concentração está
acima do LQ do método (5 ng/mL).
c) O LD é geralmente definido como três vezes o ruído de fundo. Portanto, é
necessário saber o valor do ruído de fundo para estimar o LD.

Exercício 14) Um método de espectrometria de massas para análise de um

metabólito em plasma foi validado, e o LQ foi estimado em 2 ng/mL. Uma amostra
de plasma foi preparada com uma concentração de 1 ng/mL do metabólito e
analisada pelo método. Pergunta-se:

a) Qual é a relação sinal-ruído (S/N) da amostra?

b) A amostra pode ser quantificada pelo método?
c) Qual é o limite de detecção (LD) estimado para este método?

Respostas:
a) S/N = (Sinal da amostra - Sinal do branco) / Ruído de fundo = (1 - 0) / ruído de
fundo. Não foi fornecido o valor do ruído de fundo, portanto não é possível calcular
S/N.
b) A amostra não pode ser quantificada pelo método, uma vez que a concentração
está abaixo do LQ do método (2 ng/mL).
c) O LD é geralmente definido como três vezes o ruído de fundo. Portanto, é
necessário saber o valor do ruído de fundo para estimar o LD.

Exercício 15) Um método microbiológico para determinação de coliformes totais em

água foi validado, e o limite de quantificação (LQ) foi estimado em 10 UFC/mL. Uma
amostra de água foi analisada pelo método, e foram encontradas 5 UFC/mL.
Pergunta-se:

a) A amostra pode ser quantificada pelo método?

b) Qual é a precisão do método para esta amostra?
c) Qual é o limite de detecção (LD) estimado para este método?

Respostas:
a) A amostra pode ser quantificada pelo método, uma vez que a concentração está
acima do LQ do método (10 UFC/mL).
b) A precisão do método para esta amostra pode ser avaliada através do cálculo do
desvio padrão (DP) das repetições. Se o DP for menor ou igual a 30% da média, o
método é considerado preciso. Por exemplo, se forem realizadas três repetições da
análise e os resultados foram 4, 5 e 6 UFC/mL, a média é 5 UFC/mL e o DP é 1
UFC/mL. Portanto, a precisão é adequada.
c) O LD é geralmente definido como três vezes o desvio padrão do branco.
Portanto, é necessário saber o valor do branco e o DP do branco para estimar o LD.

Exercício 16) Um método microbiológico para determinação de bactérias aeróbias

mesófilas em alimentos foi validado, e o LQ foi estimado em 100 UFC/g. Uma
amostra de alimento foi analisada pelo método, e foram encontradas 50 UFC/g.
Pergunta-se:

a) A amostra pode ser quantificada pelo método?

b) Qual é a precisão do método para esta amostra?
c) Qual é o LD estimado para este método?

Respostas:
a) A amostra pode ser quantificada pelo método, uma vez que a concentração está
acima do LQ do método (100 UFC/g).
b) A precisão do método para esta amostra pode ser avaliada através do cálculo do
desvio padrão (DP) das repetições. Se o DP for menor ou igual a 30% da média, o
método é considerado preciso. Por exemplo, se forem realizadas três repetições da
análise e os resultados foram 45, 50 e 55 UFC/g, a média é 50 UFC/g e o DP é 5
UFC/g. Portanto, a precisão é adequada.
c) O LD é geralmente definido como três vezes o desvio padrão do branco.
Portanto, é necessário saber o valor do branco e o DP do branco para estimar o LD.

Exercício 17) Um método de HPLC foi desenvolvido para a quantificação de um

composto em amostras de produto acabado. Para avaliar a robustez do método,
foram realizados experimentos para verificar o efeito da variação da temperatura
ambiente na quantificação do composto. Foram analisadas amostras de produto
acabado contendo 100 ppm do composto em diferentes temperaturas (20, 25 e 30
graus Celsius). Os resultados obtidos foram:

Temperatura Celsius Concentração Média

20 99,6 ppm

25 100,3 ppm

30 99,8 ppm

Calcule a variação percentual da concentração média do composto em relação à

temperatura ambiente e avalie a robustez do método em relação a essa variação.

Resolução:
Para calcular a variação percentual da concentração média em relação à
temperatura ambiente, podemos usar a fórmula:

Variação percentual = [(valor final - valor inicial) / valor inicial] x 100%

Considerando a concentração média a 25 graus Celsius como valor inicial, temos:

Variação percentual a 20 graus Celsius = [(99,6 - 100,3) / 100,3] x 100% = -0,697%

Variação percentual a 30 graus Celsius = [(99,8 - 100,3) / 100,3] x 100% = -0,498%

Podemos observar que a variação percentual da concentração média em relação à

temperatura ambiente é pequena, menor que 1% em ambos os casos. Isso indica
que o método de HPLC é robusto em relação a essa variação de temperatura.
Exercício 18) Um método de HPLC foi desenvolvido para a quantificação de um
composto em amostras de produto acabado. Para avaliar a robustez do método,
foram realizados experimentos para verificar o efeito da variação do pH na
quantificação do composto. Foram analisadas amostras de produto acabado
contendo 100 ppm do composto em diferentes pHs (6, 7 e 8). Os resultados obtidos
foram:

pH Concentração Média

6 99,8 ppm

7 100,2 ppm

8 99,9 ppm

Calcule a variação percentual da concentração média do composto em relação ao

pH e avalie a robustez do método em relação a essa variação.

Resolução:
Para calcular a variação percentual da concentração média do composto em relação
ao pH, é necessário determinar a diferença entre as concentrações médias em cada
pH e a concentração média geral. A concentração média geral pode ser calculada
pela média aritmética das concentrações médias em cada pH:

Concentração média geral = (99,8 ppm + 100,2 ppm + 99,9 ppm) / 3 = 100 ppm

Agora podemos calcular a variação percentual da concentração média em relação

ao pH:

pH 6: ((99,8 ppm - 100 ppm) / 100 ppm) x 100% = -0,2%

pH 7: ((100,2 ppm - 100 ppm) / 100 ppm) x 100% = 0,2%
pH 8: ((99,9 ppm - 100 ppm) / 100 ppm) x 100% = -0,1%
Os resultados mostram que as variações percentuais da concentração média em
relação ao pH são relativamente baixas, variando de -0,2% a 0,2%. Isso sugere que
o método de HPLC é robusto em relação à variação do pH para a quantificação do
composto em amostras de produto acabado. No entanto, outras variáveis também
devem ser consideradas para uma avaliação completa da robustez do método,
como precisão, exatidão e repetibilidade.
Exercício 19) Desenvolva um método analítico por titulação ácido-base para
determinação da concentração de ácido acético em vinagre. O vinagre possui um
teor de ácido acético de aproximadamente 5%. Utilize uma solução padrão de
hidróxido de sódio (NaOH) 0,1 M como titulante e fenolftaleína como indicador.

Resolução:
Passo 1: Preparação da solução padrão de NaOH 0,1 M
Pesar aproximadamente 4 g de NaOH em um balão volumétrico de 1 L.
Adicionar água destilada até o volume final e misturar bem.
Passo 2: Preparação da amostra
Pipetar 25 mL de vinagre em um erlenmeyer de 250 mL.
Diluir com água destilada até o volume final de 100 mL.
Passo 3: Titulação
Pipetar 25 mL da solução preparada de ácido acético em um erlenmeyer de 250 mL.
Adicionar algumas gotas de fenolftaleína como indicador.
Titular com a solução padrão de NaOH 0,1 M até a mudança de cor rosa para
incolor.
Anotar o volume de NaOH utilizado.
Passo 4: Cálculo da concentração de ácido acético
Calcular a quantidade de NaOH utilizada na titulação em mol (n).
Como a reação é 1:1, a quantidade de ácido acético é igual à quantidade de NaOH.
Calcular a concentração de ácido acético em mol/L (M) utilizando a equação: M =
n/V
Multiplicar a concentração encontrada por 60 (fator de conversão) para obter a
concentração em g/L.
Observações:
O fator de conversão 60 é utilizado para converter a concentração em mol/L para
g/L, pois a massa molar do ácido acético é de aproximadamente 60 g/mol.
É importante realizar a titulação em triplicata e calcular a média dos resultados para
obter maior precisão.

Exercício 20) Desenvolva um método analítico por titulação complexométrica para

determinação da concentração de cálcio em água. Utilize uma solução padrão de
ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) 0,01 M como titulante e eriocromo preto T
como indicador. A solução de água a ser analisada deve ser acidificada com ácido
nítrico antes da titulação. Verifique a faixa de pH e a estabilidade do complexo
formado entre o cálcio e o EDTA.

Resolução:
Reagentes:
Ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) 0,01 M
Eriocromo Preto T (indicador)
Água a ser analisada
Ácido nítrico concentrado (para acidificar a amostra)
Equipamentos:

Bureta
Erlenmeyer
Pipeta volumétrica
Agitador magnético
Procedimento:

Preparar uma solução padrão de EDTA 0,01 M, dissolvendo 3,722 g de EDTA em 1

litro de água deionizada.
Pipetar 25 mL da amostra de água a ser analisada em um Erlenmeyer de 250 mL.
Adicionar algumas gotas de ácido nítrico concentrado na amostra e aquecer até
ebulição para acidificar.
Adicionar 2-3 gotas de eriocromo preto T na amostra e agitar.
Titular com a solução padrão de EDTA 0,01 M, sob agitação constante, até a
mudança de cor da solução de vermelho para azul pálido.
Anotar o volume de EDTA gasto na titulação.
Repetir a titulação mais duas vezes para obter uma média.
Calcular a concentração de cálcio na amostra, utilizando a equação abaixo:
Concentração de Cálcio (mg/L) = (Volume de EDTA x Concentração de EDTA x
40,08) / Volume da amostra em mL

O fator de conversão de 40,08 é utilizado para converter de mmol/L para mg/L,

considerando que o cálcio tem um peso molecular de 40,08 g/mol.

Notas:

O pH ideal para a complexação do cálcio com EDTA é entre 10 e 11. Portanto, a

solução de eriocromo preto T deve ser ajustada para um pH alcalino, utilizando-se
hidróxido de sódio ou hidróxido de amônio.
O complexo cálcio-EDTA é estável em pH alcalino e é sensível a íons metais
pesados, como cobre e ferro. Portanto, é importante usar água deionizada para
preparar as soluções e limpar cuidadosamente os equipamentos de vidro antes da
análise.