Relatório - Aula Prática de Bioquímica

Introdução
Durante a aula, foi medida a quantidade de glicose presente no plasma
sanguíneo de um indivíduo através do processo de espectrofotometria, utilizando a
lei de Lambert-Beer.
A espectrofotometria é utilizada para medir a concentração de moléculas
(substrato) em uma determinada solução. Ela consiste em direcionar um feixe de luz
monocromático para determinada solução. As moléculas do substrato, por sua vez,
absorvem parte da luz incidente e o restante é transmitido. A absorção de luz é
dependente da concentração das moléculas absorventes e da espessura da
solução. Essas duas relações são combinadas na lei de Lambert-Beer, que pode
ser descrita pela equação:

Onde:
I0 = intensidade da luz incidente.
I = intensidade da luz transmitida.
ε = coeficiente de extinção molar, medido (em unidades de litros por
mol por centímetro).
c = concentração da substância absorvida (mol/L)
l = comprimento do caminho de luz da amostra absorvente de luz (em
centímetros)

O -log (I/Io) é denominado absorbância (A), e depende do coeficiente de

concentração e da concentração da substância. A partir dessas informações, pode-
se concluir que a relação entre A e a concentração da solução é linear crescente:

Desenvolvimento
Primeiramente, utilizando uma pipeta de 20uL, foi adicionado um reagente
específico para a medição da glicose na solução do plasma sanguíneo. Esse reagente é um
sistema enzimático que determina a glicose no sangue por método cinético ou de ponto final.
Primeiramente a glicose oxidase catalisa a oxidação da glicose, formando ácido glicônico e
peróxido de hidrogênio.

C6H1206 + O2 +H2O → C6H12O7+ H2O2

Após isso, o peróxido de hidrogênio reage com 4-aminoantipirina e fenol, com a ação
catalisadora da enzima peroxidase. Por meio de uma reação oxidativa de acoplamento, forma-
se a antipirilquinonimina vermelha.

2H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol → antipirilquinonimina + 4H2O

A intensidade da cor dessa substância é proporcional à concentração de glicose. Após isso, a

solução foi depositada no banho maria durante dez minutos, conforme as instruções e,
posteriormente, depositada em um recipiente com lentes que direcionam a luz. A seguir, foi
utilizado o Espectrofotômetro para calcular a absorbância da solução. Para calcular a taxa de
glicose, foi utilizada a Lei de Lambert-Beer, com a seguinte equação:

0 ,( A).100
Taxa de glicose =
0,368

Sendo 0,368 a absorbância de 100mg/dL da glicose no plasma sanguíneo.

Conclusão
No final do experimento, foram obtidas onze amostras da taxa de glicose no
sangue e da absorbância de suas respectivas soluções, com os seguintes
resultados:

Taxa de glicose(mg/dL) ↔ Absorbância

1. 238,04 0,876
2. 208,15 0,766
3. 250,27 0,921
4. 219,29 0,807
5. 226,35 0,833
6. 263,85 0,971
7. 217,11 0,799
8. 384,51 1,415
9. 241,57 0,889
10. 133,69 0,492
11. 243,47 0,896
Portanto, é perceptível que, em geral, o resultado apresentado pelas
diferentes amostras foi semelhante, com exceção da oitava e da décima amostra. A
média simples da taxa de glicose das onze amostras resultou em 238,75 mg/dL. A
média simples da absorbância de todas as soluções resultou em 0,878.