Microbiologia-I- Cultura de microrganismo
Introduçã o
 Crescimento microbiano - aumentando em
nú mero, nã o ao tamanho delas
 Microrganismos que crescem estã o aumentando
em nú mero e se acumulando em colô nias (grupos
de células grandes o suficiente para serem
visualizadas sem a utilizaçã o de um microscó pio)
de centenas ou milhares de células ou populaçõ es
de bilhõ es de células
 Muitas bactérias sobrevivem e crescem lentamente
em ambientes pobres em nutrientes, formando
biofilmes
 Podem formar biofilmes em cateteres uriná rios ou
em lentes de contato
 Sã o fontes frequentes de infecçõ es associadas aos
cuidados de saú de
 As populaçõ es microbianas podem se tornar
incrivelmente grandes em um período de tempo
bem curto
Entendendo as condiçõ es necessá rias para o crescimento
microbiano, podemos:
 Determinar como controlar o crescimento dos
microrganismos que causam as doenças e a
deterioraçã o de alimentos
 Aprender a como estimular o crescimento de
microrganismos benéficos e aqueles que queremos
estudar
 Fatores físicos e químicos para o crescimento
microbiano, os vá rios tipos de meios de cultura, a
divisã o da célula bacteriana, as fases do
crescimento microbiano e os métodos utilizados
para determinar o crescimento microbiano.
Fatores para o crescimento
 Os fatores necessá rios para o crescimento
microbiano podem ser divididos em duas
categorias principais: físicos e químicos.
 Físicos: temperatura, pH e pressã o osmó tica.
 Químicos: fontes de carbono, nitrogênio, enxofre,
fó sforo, oxigênio, elementos-traço e fatores
orgâ nicos de crescimento.
Fatores físicos - temperatura
 A maioria dos microrganismos cresce bem nas
temperaturas ideais para os seres humanos
 Contudo, certas bactérias sã o capazes de crescer
em extremos de temperatura
 Os microrganismos sã o classificados em três
grupos principais, com base na faixa de
temperatura que eles preferem:
 psicró filos (micró bios que gostam de frio)
 mesó filos (micró bios que gostam de
temperaturas moderadas) e
 termó filos (micró bios que gostam de calor).
 A maioria das bactérias cresce em uma faixa
limitada de temperatura, e há somente 30°C de
diferença entre as temperaturas má xima e mínima
de crescimento
 Grupo composto somente por psicró filos pode
crescer a 0°C, porém temperatura ó tima de
crescimento de aproximadamente 15°C
 A maioria desses microrganismos é tã o sensível a
temperaturas mais altas que nã o poderá crescer
mesmo em uma temperatura ambiente amena
(25°C)
 Encontrados essencialmente nas profundezas dos
oceanos ou em certas regiõ es polares, esses
microrganismos raramente causam problemas na
preservaçã o de alimentos
Psicrotró ficos - grupo que pode crescer a 0°C, tem
temperaturas ó timas de crescimento mais elevadas,
geralmente de 20 a 30°C, e nã o pode crescer em
temperaturas acima de 40°C
 Sã o mais comuns que os psicró filos e sã o os mais
prová veis de serem encontrados na deterioraçã o
de alimentos em baixa temperatura crescem
muito bem em temperaturas utilizadas em
refrigeradores
 Crescem pouco nas temperaturas extremas,
considerando sua faixa ideal
 Cada espécie bacteriana cresce a temperaturas
mínima, ó tima e má xima específicas
 A temperatura mínima é a menor temperatura na
qual a espécie pode crescer
 Ó tima de crescimento é a temperatura na qual a
espécie cresce melhor
 Má xima de crescimento é a maior temperatura na
qual o crescimento é possível
Refrigeraçã o - método mais comum de preservaçã o dos
alimentos nos domicílios
 Tem como base o princípio: as velocidades de
reproduçã o microbiana decrescem em baixas
temperaturas
 Embora os microrganismos sobrevivam mesmo
em temperaturas pró ximas do congelamento
(podem apresentar dormência total), eles
gradualmente diminuem seu nú mero
 Algumas espécies diminuem mais rapidamente do
que outras
 Os psicrotró ficos - nã o crescem bem em
temperaturas baixas, exceto quando comparados
com outros microrganismos; contudo, em
determinado período, eles sã o capazes de
deteriorar lentamente o alimento.
 A temperatura dentro de um refrigerador bem
ajustado - retarda muito o crescimento da maioria
dos organismos deteriorantes, impedindo
totalmente o crescimento da maior parte das
bactérias patogênicas
Mesó filos, com temperatura ó tima de crescimento de 25 a
40°C, sã o os mais comuns
 Se adaptaram a viver dentro dos corpos de animais
- têm uma temperatura ó tima pró xima daquela de
seus hospedeiros.
 A temperatura ó tima para a maioria das bactérias
patogênicas é de cerca de 37°C, e as estufas para
culturas clínicas, em geral, sã o ajustadas nessa
temperatura
 Incluem a maioria dos organismos deteriorantes e
patogênicos.
termó filas nã o sã o consideradas um problema de saú de
pú blica
Termó filos - capazes de crescer em temperaturas altas
 Muitos têm uma temperatura ó tima de
crescimento de 50 a 60°C - temperatura da á gua
que sai das torneiras de á gua quente
 Essas temperaturas também podem ser
encontradas no solo exposto ao sol e em á guas
termais, como as fontes termais
 Os endó sporos formados por bactérias termó filas
sã o anormalmente resistentes à temperatura e
podem sobreviver ao tratamento térmico
convencional aplicado aos alimentos enlatados
 Embora temperaturas elevadas de estocagem
possam causar a germinaçã o e o crescimento
Fatores físicos - pH
 PH refere-se à acidez ou alcalinidade de uma
soluçã o
 A maioria das bactérias cresce melhor em uma
faixa estreita de pH pró xima da neutralidade,
entre pH 6,5 e 7,5.
 Poucas bactérias crescem em pH á cido abaixo de 4
 Muitos alimentos, como os picles e muitos
queijos, sã o protegidos da deterioraçã o pelos
á cidos produzidos pela fermentaçã o bacteriana
 Algumas bactérias, chamadas de acidó filas, sã o
extraordinariamente tolerantes à acidez.
 Os fungos e as leveduras crescem em uma faixa
maior de pH que as bactérias, mas o pHi ó timo dos
fungos e das leveduras geralmente é menor que o
bacteriano, entre pH5 e 6
 A alcalinidade também inibe o crescimento
microbiano, mas raramente é utilizada para
preservar os alimentos
Fatores físicos - pressã o osmó tica
 Os microrganismos obtêm a maioria dos seus
nutrientes em soluçã o da á gua presente no seu
meio ambiente
 Requerem á gua para seu crescimento, sendo que
sua composiçã o é de 80 a 90% de á gua
 Pressõ es osmó ticas elevadas têm como efeito
remover a á gua necessá ria para a célula
 Ambiente hipertô nico - a á gua atravessa a
membrana celular para o meio com a concentraçã o
mais elevada de soluto
 Perda osmó tica de á gua causa plasmó lise, ou o
encolhimento do citoplasma da célula
 O crescimento da célula é inibido à medida que a
membrana plasmá tica se afasta da parede celular
 Adiçã o de sais (ou outros solutos) em uma soluçã o
-> o aumento na pressã o osmó tica -> utilizados
para preservar alimentos
 Peixe salgado, mel e leite condensado - removem a
á gua de qualquer célula microbiana presente e,
consequentemente, impedem seu crescimento
 Haló filos extremos - adaptaram tã o bem à s altas
concentraçõ es de sais, necessitam dos sais para o
seu crescimento. Chamados de haló filos
obrigató rios.
OXIGÊ NIO
-Organismos de á guas salinas, como o Mar Morto
 Haló filos facultativos - sã o mais comuns e nã o
requerem altas concentraçõ es de sais, mas sã o
capazes de crescerem em concentraçõ es salinas de
até 2%
 Uma concentraçã o que inibe o crescimento de
muitos outros organismos
 Algumas espécies de haló filos facultativos podem
tolerar até mesmo 15% de sal
 Ambiente hipotô nico - como na á gua destilada, a
á gua tende a entrar na célula, em vez de sair
Fatores químicos
CARBONO
 Além da á gua, um dos fatores mais importantes
para o crescimento microbiano
 Necessá rio para todos os compostos orgâ nicos
que constituem uma célula viva
 Metade do peso seco de uma típica célula
bacteriana é composta de carbono
 Os quimio-heterotró ficos obtêm a maior parte do
seu carbono de sua fonte de energia - materiais
orgâ nicos, como proteínas, carboidratos e lipídeos
Os quimioautotró ficos e os fotoautotró ficos
derivam seu carbono do dió xido de carbono
NITROGÊ NIO, ENXOERE E FÓ SFORO
 Além do carbono, os microrganismos necessitam
de outros elementos para sintetizar material
celular
 Síntese de proteínas requer quantidades
considerá veis de nitrogênio e enxofre
 Síntese de DNA e RNA também requer nitrogênio e
algum fó sforo
 O nitrogênio constitui cerca de 14% do peso seco
da célula bacteriana, e o enxofre e o fó sforo juntos
constituem aproximadamente 4%
 Muitas bactérias obtêm esses compostos da
decomposiçã o de material contendo proteína e
reincorporando os aminoá cidos em novas
proteínas sintetizadas e outros compostos
nitrogenados
 Muitas formas comuns de vida têm sistemas
metabó licos que requerem oxigênio para a
respiraçã o aeró bia
 Os microrganismos que utilizam o oxigênio
molecular (aeró bios) produzem mais energia a
partir dos nutrientes que os microrganismos que
nã o utilizam o oxigênio (anaeró bios)
 Os organismos que precisam do oxigênio para
viver sã o chamados de aeró bios obrigató rios
 Os aeró bios obrigató rios estã o em desvantagem -
o oxigênio é pouco solú vel na á gua de seu
ambiente
 Por isso, muitas das bactérias aeró bias têm
desenvolvido, ou mantido, a capacidade de
continuar a crescer na ausência do oxigênio -
anaeró bios facultativos
 Os anaeró bios facultativos podem utilizar o
oxigênio quando ele está presente, mas sã o
capazes de continuar a crescer utilizando a
fermentaçã o ou a respiraçã o anaeró bia quando o
oxigênio nã o está disponível
 Porém, sua eficá cia em produzir energia é
reduzida na ausência do oxigênio
 Um exemplo: Escherichia coli, encontrada no
trato intestinal de seres humanos
  Anaeró bios obrigató rios - sã o bactérias incapazes
de utilizar o oxigênio molecular nas reaçõ es de
produçã o de energia
 O gênero Clostridium, o qual contém espécies que
causam o tétano e o botulismo - utilizam os
á tomos de oxigênio presentes nos materiais
celulares; geralmente sã o obtidos da á gua
Cultura de microrganismo:
 Cultura- processo de propagaçã o de
microrganismo pelo fornecimento de condiçõ es
ambientais apropriadas
 Microrganismos em crescimento duplicam-se e
necessitam dos elementos presentes na
composiçã o química
 Os nutrientes devem proporcionar tais elementos
em uma forma metabolicamente acessível
 Além disso, necessitam de energia metabó lica para
sintetizar macromoléculas e manter gradientes
químicos essenciais através de suas membranas
 Fatores que precisam ser controlados durante o
crescimento- nutrientes, PH, temperatura, aeraçã o,
concentraçã o de sal e força iô nica do meio
O sucesso dos métodos de cutura é definido pela biologia do
organismo pelo local da infecçã o pela resposta imune do
paciente a infecçã o e pela quantidade do meio de cultura.
Ex:
 A bactéria Legionella é um importante pató geno
respirató rio, no entanto, nunca havia sido
cultivada em cultura até que se reconheceu que
para o isolamento do organismo era necessá rio o
uso de um meio suplementado com ferro e I-
cisteina
 Campylobacter, um importante pató geno entérico,
nã o foi isolado de amostras fecais até que os meios
altamente seletivos foram incubados a 42 C em
uma atmosfera de microarofilia
 Chlamydia, uma importante bactéria responsá vel
por doenças sexualmente transmissíveis, é um
pató geno intracelular obrigató rio que só pode ser
cultiva em células vivas (cultura de células)
Em muitas infecçõ es (ex: gastroenterite, faringte,
uretrite), o organismo responsá vel estará presente
entre muitos organismos (microbiota normal no local d
ainfecçã o)
Muitos meios de cultura têm sido desenvolvidos no
intuito de inibir o crescimento da microbiota normal e
facilitar a detecçã o dos organismos clinicamente
importantes
A imunidade inata e adaptativa do paciente pode
suprimir o pató geno- técnicas de cultura latamente
sensíveis sã o frequentemente necessá rias
Do mesmo modo, algumas infecçõ es sã o caracterizadas
pela presença de um nú mero relativamente pequeno de
organismo- a maioria dos pacientes sépticos apresenta
menos de um organismo por militro de sangue-
recuperaçã o desses organismos a partir de culturas de
sangue8 tradicionais requer a inoculaçã o de um grande
volume de sangue em caldos de enriquecimento
A qualidade dos meios deve ser cuidadosamente
monitorada- estã o funcionando de acordo com a
finalidade proposta
Meios de cultura:
 Soluçõ es de nutrientes para promover o
crescimento de microrganismos;
 Nã o existe um meio de cultura universal;
 Para obter sucesso no cultivo de
microrganismos é necessá rio o conhecimento
de suas exigêndas nutidionais, para que os
nutrientes sejam fornecidos na forma e
proporçã o adequadas.
Podem ser subdivididos em quatro categorias gerais.
 Meios enriquecidos nã o seletivos,
 Meios seletivos,
 Meios diferenciais e
 Meios especializados