Staphylococcus aureus
EXAMES BACTERIOLÓGICO
COCOS GRAM POSITIVOS DE INTERESSE MÉDICO
GÊNEROS STAPHYLOCOCCUS E MICROCOCCUS
STAPHYLOCOCCUS
• Características gerais:
Família Staphylococcacea
(Cocos Gram positivos) Arranjos (em cachos) e motilidade
negativa (sem flagelos)
As colônias do S. saprophyticcus algumas vezes podem se
comportar como amarelada pálida;
→Geralmente dentro desse gênero as colônias variam do
branco a amarelo dourado;
Apresentam sensibilidade variável a muitos agentes
antimicrobianos, produção de B-lactamases, resistência à
meticilina e oxacilina
Identificação primária → Catalase positiva diferenciar dos
Staphylococus e Micrococcus (+) de Streptococcus e
Enterococcus (-)
A)INFECÇÕES AGUDAS – invasão direta e destruição
tecidual. Podem ser:
Primárias – desenvolvimento na porta de entrada do micro-
organismo Ex.: celulite, infecções pós cirúrgicas,
piodermites, abscessos.
Secundárias – por disseminação hematogênica ou linfática
Ex.: enterocolite, meningite, endocardite, septicemia,
osteomielite.
B) TOXEMIAS – manifestações clínicas são decorrentes da
ação de toxinas.
Ex.: Síndrome da pele escaldada Síndrome do choque
tóxico Intoxicação alimentar estafilocócica;
→Doenças: produz pústulas, abscessos, furúnculos; Causa:
impetigo, artrite, cistite, osteomielite, meningite,
intoxicação alimentar, etc. (em todas as -ites)
➔ Sítios de infecção (amplos sítios de infecção)
Orofaringe, urina, sangue, feridas cirúrgicas, ponta de
cateter, dreno, abscessos, furúnculos ect.
•Habitat normal: pele, especialmente nariz e períneo.
•Transmissão: contato e vias aéreas (o espirro contamina o
ambiente)
Tratamento: Penicilinas beta-lactamases estáveis.
• Associação de: Oxacilina + Clindamicina ou Vancomicina +
Clindamicina (caso resistente a oxacilina)
Enzimas extracelulares
- Coagulase: Semelhante a protrombina, capaz de
transformar o fibrinogênio em fibrina. Resistência a
opsonização e a fagocitose. (um fator de virulência)
- Catalase: Conversão do peróxido de hidrogênio em água e
oxigênio.
- Nucleases: Hidrólise do DNA e RNA
- Estafiloquinase: Ação semelhante a estreptoquinase,
resultando em fibrinólise. Facilitam a disseminação da
infecção para os tecidos adjacentes.contrário da coagulase
- B-lactamases: Hidrolisa o anel beta lactâmico.[Penicilinas,
cefalosporinas e Monobactam e Azetreonam]
- Hialuronidase: Despolimeriza o ácido hialurônico existente
nos espaços intercelulares que condicionando uma
diminuição de viscosidade, propícia a difusão do micro- Toxina esfoliativa
organismo ou de suas toxinas.
(Toxina epidermolítica)
Staphylococcus aureus (Doenças Relacionadas a Toxinas)

Intoxicação Alimentar
(Enterotoxina)

Identificação laboratorial
Síndrome do choque tóxico
(Toxina da síndrome do →Cocos Gram positivos arranjados em cachos (ilhotas);
choque tóxico)
→Cor: amarelo doutorado;

→ Hemolisina: positiva para algumas cepas;

Única PTSAGs (pirogênicas toxina superantígenos) capaz de

passar através de mucosas.

Sinais e sintomas de SST

Envolvimento de 3 ou mais ‘’sistemas’’

Podem formar colônias acinzentadas a amareladas com

presença ou ausência de Beta-hemolise.

→Catalase: Positiva :Decompõe o peroxide de hidrogênio

em água e oxigênio.
→Critérios Laboratoriais (cultura negativa de sítios estéreis;
afastar leptospirose, sarampo ou febre das Montranhas
Rochosas).

→Critérios Laboratoriais Confirmatórios (isolamento do S.

aureus e a avaliação, em cepas isoladas, da presença da CATALASE POSITIVA (formação de bolhas pela presença de
TSST-1) oxigênio).

Procedimento: em uma lâmina com a alça apropriada para

transferência de microrganismos, coloca na lâmina,
posteriormente adiciona a água oxigenada (peróxido de
hidrogênio), caso positiva há a formação de bolhas.
FORMAÇÃO DE BOLHAS indica ser a família
Staphylococcaceae (Ex.: Staphylococcus spp., Micrococcus
spp.)
SEM FORMAÇÃO DE BOLHAS indica ser a família
Streptococcaceae (Ex.: Enterococcus spp., Streptococcus
spp.).
OBS: CUIDADO AO RETIRAR COLÔNIAS CRESCIDAS EM
ÁGAR SANGUE PORQUE OS FRAGMENTOS PODEM SE
MISTURAR COM AS COLÔNIAS E PRODUZIR UM RESULTADO
FALSO-POSITIVO.
→ Coagulase: positiva (separa o S. áureos das outras
espécies deste gênero de importância médica )
Coagulase é uma proteína com atividade similar à
protombrina, capaz de converter o fibrinogênio em fibrina.
Podem ser encontradas em duas formas:
1. Coagulase fixa ou ligada ou conjugada (Clumping
factor): Verifica se o microrganismo possui a coagulase na
superfície da parede celular. O teste positivo ocorre dentro
de 15-20 segundos, e deve ser considerado negativo após
2-3 Minutos. (Procedimento: uma gota de soro em placa,
adicionar o microrganismo fazendo a suspenção,
posteriormente adiciona duas gotas de plasma de coelho
ou de humano , faz movimentos circulares até haver
aparecimentos de grumos, se depois de 2 – 3 minutos não
aparecer, indica coagulase negativa)
Positivo = aparecimento de grumos
2. Coagulase livre: É secretada extracelularmente e reage
com uma substância presente no plasma (Fator de reação
da coagulase-CRF) para formar um complexo que reage
com o fibrinogênio, formando fibrina.
Uma reação positiva é representada pela formação de um
coágulo de qualquer intensidade. A leitura do teste após
um tempo mais prolongado de incubação pode levar a
resultados falsos negativos devido a presença de
fibrinolisina ou estafiloquinase.
Positivo = formação de coágulo
Procedimento: em um tubo com meio BHI adicionar o
microrganismo, incuba um pouco para haver maior
quantidade indicada pela turbidez, e depois adicionar o
plasma no neste meio no mesmo volume do meio com
microrganismo. A reação é positiva pela formação de um
coagulo de qualquer intensidade. (A leitura não pode
passar de 24h, principalmente devido a produção da
estafiloquinase ou fibrinolisina que pode quebrar o coagulo
formado- dando uma reação falsa negativa)
[-- geralmente se faz a coagulase fixa, pois é mais rápida
sem necessidade de incubar, mas caso está for negativa e
persistir a suspeita de S. aureos faz a coagulase livre para
confirmar]
→Teste de aglutinação com látex: Detectam o fator de
agregação e a Proteína A.
Baseia-se na aglutinação simultânea da coagulase
(clumping factor) e da proteína A com as partículas róseas
de látex, sensibilizadas com proteínas plasmáticas antígeno-
específicas. Colônias estafilocócicas contendo coagulase
e/ou proteína A, quando misturadas às partículas de látex,
produzem aglutinação visível a olho nu dentro de 45
segundos.
→ Manitol: positivo
Meio ágar manitol salgado - Uma viragem do vermelho
original do meio para amarelo indica degradação do
manitol com formação de ácido. Tem como indicador de
ácido o vermelho de fenol.
Manitol positivo=colônias amarelas, meio amarelo
MO negativo para manitol pode crescer, mas não vira o
meio para amarelo, só intensifica a coloração avermelhada
do meio.
→ DNase: positivo
Meio agar Dnase - a enzima desoxiribonuclease irá
degradar o ácido nucléico (DNA).
Prova positiva - zona clara ao redor do crescimento
bacteriano (revelador o ácido clorídrico 1N). [o
microrganismo despolierizou o DNA ao redor do spot]
Procedimento: com a alça em argola faz o spot de
microrganismo no meio Agar Dnase, incuba a placa e após
24h, faz a leitura usando ácido clorídrico 1 N, e avaliamos
se ao redor do Spot há formação de uma região clara ou
límpida indicando que houve despolimerização do DNA,
sendo assim uma prova positiva. Caso não forme essa
região mais clara, indica prova negativa para Dnase. (como
o ácido usado é um ácido forte, não é muito utilizado nos
laboratórios)
Prova positiva - coloração róseo claro acrescentando ao
meio original azul de ortoluidina a 0,1%. A placa fica toda
azul, caso após a inoculação e crescimento se esta bactéria
for Dnase positiva, ao redor do crescimento fica rósea,
indicando uma prova positiva.
Staphylococcus epidermidis
Doenças: patógeno oportunista associado com sepse de
dispositivos (cateteres e prótese) e o mais frequente
encontrado em hemocultura.
Habitat normal: pele.
Transmissão: por contato.
Tratamento: frequentemente são multirresistentes
(penicilinas), susceptível a novobiocina (5μg) e polimixina.
Identificação Laboratorial
→Cocos Gram-positivos arranjados em cachos.
→Cor: branca
→Catalase: positiva
→Coagulase: negativa
→Manitol: negativo
→Dnase: negativo
Staphylococcus
saprophyticcus
Doenças: infecções do trato urinário. (se adere mais
facilmente a mucosa urinária)
Habitat: pele e mucosa geniturinária.
Transmissão: disseminação endógena para o trato urinário.
Tratamento: resistentes ao ácido nalidíxico e novobiocina.
Identificação Laboratorial
→ Cor: branca
→ Catalase: positiva
→ Coagulase: negativa
→ Manitol: negativo
→ Dnase: negativo
→ Novobiocina: resistente (5μg) – identificação S.
saprophyticus
São utilizados discos padronizados contendo 5μg de
novobiocina. A leitura é feita medindo-se o diâmetro do
halo de inibição ao redor do disco após incubação de 18-24
horas. Prova positiva (resistência) – Halo menor ou igual a
14mm.
Procedimento: semeio em uma placa com ágar sangue ou
ágar Mueller Hilton, com o disco de novabiocina, se
resistente não há a formação de halo, podendo indicar S.
saprophyticus, com formação de halo indica que é sensível
a este antibiótico.
IDENTIFICAÇÃO E DIFERENCIAÇÃO
Diferenciação entre os Staphylococcus: Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis e o Staphylococcus
saprophyticus.
Apenas o S. aureos pode apresentar hemólise, apenas o S.
saprophyticus apresenta resistência a novobiocina, o
crescimento positivo em manitol se dá principalmente por
S. aureus mas 11,89% de S. saprophyticus podem ser
manitol positivo. Apenas o S. saprophyticus é resistente a
polimixina, a Dnase é positiva apenas para S. aureus assim Staphylococcus seria o OF-Glicose (fermentativo) e oxidase
como a coagulase. E todos são catalase positivas. positiva.

A nov0biocina identidica o S. saprophyticus. Informação adicional: Os micrococos em geral crescem

mais lentamente. Após este período, as colônias de
DIFERENCIAÇÃO ENTRE MICROCOCCUS E micrococos têm de 1,0 a 2,0 mm de diâmetro, são opacas,
STAPHYLOCOCCUS marcadamente convexas com borda contínua e algumas
cepas produzem pigmento amarelado, rosado, alaranjado
ou bronzeado, outras esbranquiçadas ou branco-osso.

As colônias de estafilococos são geralmente de crescimento

mais rápido, com 1,0 a 2,0 mm de diâmetro após 24 h de
incubação, são usualmente lisas, butirosas e convexas, com
borda contínua e coloração branco-porcelana ou cinzas.

As colônias de S. aureus podem ter pigmento amarelo ou

A oxidase é positiva para Micrococcus e negativa para amarelo-alaranjado, podendo apresentar hemólise.
Staphylococcus. O OF-Glicose é Oxidativo para Micrococcus
➔ Lembrar que o S. saprophyticus é mais encontrado
e fermentativo para Staphylococcus. O Micrococcus é
em amostras de urina.
furazolidona resistente e bacitracina sensível, enquanto o
Staphylococcus é furazolidona sensível e bacitracina
resistente. GÊNEROS STREPTOCOCCUS E ENTEROCOCCUS
Características gerais:
A diferenciação dos Micrococcus e dos Staphylococcus
podem se faz pela oxidase OF-Glicose e pelos discos de Família Streptococcaceae
antibióticos furazolidona e bacitracina, e arranjo. Arranjos(em cadeias) e motilidade (motilidade negativa)

Cocos Gram Positivos Arranjados em cadeias ou em duplas (Diplococos)

Tamanho: Cerca de 0,5 a 0,75 μm de diâmetro, metade do

tamanho dos Staphylococcus.

Crescimento: Crescimento deficiente em meios sólidos ou

em Caldo. Necessita enriquecimento (Meio sangue+ ou
BHI).

Colônias puntiformes (pequenas ) Cor: Geralmente incolor

Para cocos Gram positivos, fazer catalase, se positiva com
e translúcido.
arranjo em tétrade, fazer oxidase, se positiva, fazer teste
com os antibióticos, verificando se é resistente para Identificação primária → Catalase negativa
furazolidona e sensível para bacitracina, pode-se completar
com OF-glicose (oxidativo), esses resultados indicam Streptococcus pyogenes
Micrococcus.
(β hemolítico grupo A)
Para cocos Gram positivos, fazer catalase, se positiva com
arranjo isolados, cachos, ou pares, fazer coagulase, se Identificação laboratorial:
positiva juntamente com manitol e Dnase também positiva,
- Cor: incolor, transparente
indica Staphylococcus aureus. Caso seja coagulase negativa,
fazer o teste de antibiótico com novobiocina, se resistente - Catalase: negativo
pode indicar Staphylococcus saprophyticus, caso seja - Bacitracina: sensível
novobiocina sensível, pode indicar Staphylococcus
- CAMP: negativo
epidermidis ou Staphylococcus coagulase negativa. Testes
que também indicam a positividade para o gênero - Hemólise: Beta (do grupo A)
- PYR: positivo
Bacitracina sensível
São utilizados discos padronizados contendo 0,04 unidades
de bacitracina(a quantidade é específica para S. pyogenes).
A leitura é feita medindo-se o diâmetro do halo de inibição
ao redor do disco, após período de incubação de 18-24
horas.
Prova positiva (sensibilidade) – Qualquer halo de inibição.
Prova negativa (resistência) – Sem formação de halo.
PYR (L-pirrolidonil-Beta-naftilamida)
Os Streptococcus do grupo A e Enterococcus produzem a
enzima L-pirrolidonil peptidase que hidrolisará a
naftilamida da molécula do PYR (L-pirrolidonil-Beta-
naftilamida), e utilizando o reagente P-dimetilamino
cinamaldeido ficará vermelho, indicando uma prova
positiva.
• Doenças: infecções das vias aéreas superiores (faringo-
amigdalites), pele (piodermites erisipela).
• Habitat: pele (erisipela) e trato respiratório superior.
• Transmissão: gotículas aéreas e por contato.
• Tratamento: Penicilina e Eritromicina.
Toxinas e Enzimas
Toxina eritrogênica, toxina escarlatínica ou toxina de Rick –
produzida por amostras de estreptococos isolados de casos
de escarlatina (doença infecciosa aguda, caracterizada por
angina/exantema).
A escarlatina é uma reação do organismo a toxinas
produzidas pelo Streptococcus pyogenes, geralmente
durante um episódio de faringite ou amigdalite.
A língua mostra-se tipicamente com uma cor muito
avermelhada e aspecto inchado e com as papilas vermelhas
= “língua em framboesa".
Estreptolisina S - é oxigênio-estável, não imunogênica,
responsável pelo halo de hemólise (é uma hemolisina) em
torno das colônias de S. pyogenes e pela morte de uma
parte dos leucócitos que fagocitam a bactéria.
Estreptolisina O - É oxigênio-sensível e
fortementeantigênica; conduz à formação da
antiestreptolisina (ASLO ou AEO). A determinação do título
do anticorpo contra a estreptolisina O é de grande valor
diagnóstico na febre reumática onde títulos superiores a
125 unidades são indicadores de infecção estrepcócica
recente.
Estreptoquinase (Fibrinolisina) - Tem a capacidade de
dissolver coágulos, pela transformação do plasminogênio
em plasmina. Sua ação é bloqueada pelo anticorpo
específico formado no decurso da infecção (anti-
estreptoquinase).
Desoxirribonuclease - Degrada o DNA. São formados
anticorpos contra a enzima no decorrer da infecção.
Hialuronidase - Dissolve o ácido hialurônico. É o
componente presumível do poder invasor dos
estreptococos (fator de difusão). Sua ação é bloqueada pelo
anticorpo no decurso da infecção.
Testes para identificação do Streptococcus pyogenes: faz a
catalase, deve ser negativa, bacitracina é sensível e o PYR é
positivo.
Streptococcus agalactiae
(β hemolítico grupo B)
Identificação laboratorial:
- Cor: incolor (sangue)
- Catalase: negativa
- Bacitracina: resistente
- Hidrólise do hipurato: positiva
- Hidrólise da esculina: negativa
- CAMP: positivo
→ CAMP positivo (Christie, Atkins, Munchen-Patterson)
Streptococcus beta hemolíticos do Grupo B elaboram um
composto semelhante à uma proteína denominado Fator
CAMP, capaz de agir sinergicamente com a beta lisina do
Staphylococcus aureus ocasionando uma intensificação na
hemólise, formando uma seta.
Procedimento: em uma placa com ágar sangue semeia na
horizontal o Staphylococcus aureus Beta lisina, e
perpendicular a esse primeiro semeio, semeia os
microrganismos teste. Incubar a placa, e no dia seguinte
identificar se houve uma intensificação da hemólise na
congruência em ter os semeio formando uma hemólise em
forma de seta.
Hidrólise do Hipurato
A hipuricase é uma enzima produzida pelos Streptococcus
do grupo B, que provoca a hidrólise do ácido hipúrico com a
formação de benzoato de sódio e glicina.
Pode-se verificar a hidrólise do hipurato, detectando o
benzoato de sódio usando cloreto férrico ou detectando a
glicina usando a ninhidrina.
Detectando benzoato de sódio usando cloreto férrico
O microrganismo é inoculado em caldo contendo Hipurato
de Sódio e incubado de 18 a 24 horas a uma temperatura
de 35oC. Após este período deve-se centrifugar o caldo e
separar o sobrenadante, adicionando-se a este 0,8 mL de
cloreto férrico. Após a adição deste reagente, irá formar um
precipitado que deve permanecer por mais de dez minutos,
indicando a presença de ácido benzoico e, portanto,
positividade do teste.
Detectando a glicina usando a ninhidrina.
O microrganismo deve ser inoculado com suspensão densa
no caldo Hipurato e colocado em Banho Maria por duas
horas a 35 oC . Após o período de incubação adicionar 5
gotas do reagente ninhidrina. Recolocar no Banho Maria
por mais 10 minutos e fazer a leitura. A glicina é
desaminada através do reagente de ninhidrina, que fica
reduzido durante o processo. Os produtos finais da
oxidação por ninhidrina reagem para formar um corante de
cor púrpura.
Doenças: meningite neonatal e sepse.
• Habitat normal: vagina.
• Transmissão: os bebês adquirem do organismo da mãe
contaminada ao nascer ou por contato entre bebês em
berçário, após nascimento.
• Tratamento: sensíveis a Penicilina, Cefalosporinas e
Eritromicina.
- Infecções graves (penicilina + gentamicina);
- Maioria das amostras são resistentes ao Cloranfenicol.
Comum na fazer pesquisas de ISTs e também de
Streptococcus agalactiae (por seu potencial e causar
meningite neonatal e sepse)
Testes para identificação: catalase negativa, Camp positivo,
hidrolise do hipurato positiva.
Streptococcus do Grupo
Viridans (α ou γ hemolítico)
Identificação laboratorial:
- Catalase: negativa
- Bile esculina: negativa
- Bile solubilidade: negativo
- Tolerância ao NaCl 6,5%: negativo
- PYR: negativo
- Optoquina: resistente
- Microbiota normal de orofaringe.
• Doenças: endocardite.
• Habitat normal: comensal da boca e intestino.
• Transmissão: passa para o sangue após exodontia.
• Tratamento: sensíveis às Penicilinas.
Atualmente no grupo viridans: 1) Mutans, 2) Salivarius, 3)
Anginosus, 4) Sanguinis e 5) Mitis. (não identifica-se no
laboratório normalmente)
Testes de identificação: tudo negativo apenas Optoquina
resistente.
 Streptococcus pneumoniae Bile Esculina: positiva
(α hemolítico )
A prova da Bile Esculina está baseada na capacidade de
Identificação laboratorial: certas bactérias, especialmente as do grupo D hidrolisar
esculina em presença de bile produzindo glicose mais
- Catalase: negativa
esculetina. A esculetina em presença de ferro (presente no
- Bile solubilidade: positiva meio) reage produzindo um escurecimento do meio de
- Optoquina: sensível ( halo maior ou igual a 12mm) cultura.

→ Prova Bile Solubilidade

Detergentes fracos, como os sais biliares, desoxicolato de
sódio ou taurocolato de sódio têm a capacidade de lisar
seletivamente o S. pneumoniae em fase logarítmica do
crescimento. Estes sais ativam as enzimas autolíticas
(autolisinas) produzidas pelo pneumococo, acelerando a
reação lítica natural da bactéria.
Tolerância ao NaCl 6,5%: positiva
A prova de Bile Solubilidade pode ser realizada em meio
líquido (com o microrganismo em estudo crescido) ou em
O crescimento do microrganismo em
placa (com colônias isoladas do microrganismo) sendo
meio BHI(enriquecido) acrescido de NaCl
comumente realizada em placa.
6,5% com consequente turvação do meio
A turbidez de uma suspensão da bactéria em meio líquido indica uma prova positiva.
clareia visivelmente quando adiciona- se o reativo
desoxicolato de sódio ou taurocolato de sódio e as colônias
crescidas na superfície do meio desaparecem→ indicando
• Doenças: infecção do trato urinário, endocardite e sepse
positividade.
(raro).
• Habitat normal: intestino humano e animal.
Pode estar presente na boca, podendo infectar alguns
canais.
• Transmissão: endogenamente, ou cruzada em pacientes
• Doenças: pneumonia, otite, meningite, sepse. hospitalizados.
• Habitat normal: trato respiratório (garganta). • Tratamento: pode apresentar resistência múltipla a
• Transmissão: gotículas aéreas. penicilina e cefalosporinas, quando susceptíveis a penicilina
é em menor grau que os Streptococcus.
• Tratamento: Penicilinas.
Teste de identificação: tolerância ao NaCl 6,5% positivo e
Teste de identificação: Optoquina sensível e Bili
PYR positivo se bili esculina positivo.
solubilidade positiva.

Streptococcus Grupos C, F
Enterococcus Grupo D (α, β,
eG
hemólise ou não hemolítico –
γ) CARACTERÍSTICAS :
Identificação laboratorial:
• São beta hemolíticos .
- Catalase: negativa
• Oportunistas pele, nariz, garganta, vagina e trato GI.
- Bile esculina: positiva
• Podem causar: faringite, sinusite, otite, meningite,
- Bile solubilidade: negativa bacteriemia, endocardite.
- Tolerância ao NaCl 6,5%: positiva Critério fenotípico para identificação de Streptococcus ß
- PYR: positivo – igual o S. pyogenes Hemolíticos e Enterococcus

E. faecalis (mais frequente no Brasil 90%) e E. faecium com

5% a 10%.

O grupo A é bacitracina sensível e sulfametoxazol
trimetoprim resistente. O grupo B é resistente a bacitracina
e a sulfametoxazol trimetoprim. O Grupo D também é
resistente aos dois discos. E o Grupo C F G pode ser sensível
ou resistente a bacitracina mas é sensível ao
sulfametoxazol trimetoprim.
Quando for fazer cultura de orofaringe é importante fazer o
teste com o disco da bacitracina e do sulfametoxazol
trimetoprim. Pois os Gupos C F G estão presentes também
na orofaringe, para distinguir o Grupo A dos grupos C F G,
usa-se esses dois discos.
PROCEDIMENTO NA PLACA DE COM ÁGAR SANGUE
1 - Disco de bacitracina
2 - Disco de sulfametoxazol trimetoprim
3 - Camp Test
Linhas verticais – cepas teste
Linha horizontal – estria com cepa beta hemolítica de
Staphylococcus aureus
Podemos identificar o grupo A pelo teste da bacitracina
(sensível), o Grupo B pelo teste de Camp e o Grupo C F G
pelo sulfametoxazol trimetoprim.
Grupo A: beta-hemolíticos, Bacitracina sensível, teste de
CAMP negativo, PYR positivo, Bile esculina negativo,
crescimento em 6,5% NaCl negativo, Optoquina Resistente
e Bile solubilidade negativa.
Grupo B: beta ou gama-hemolíticos, Bacitracina resistente,
teste de CAMP positivo, PYR negativo, Bile esculina
negativo, crescimento em 6,5% NaCl variável, Optoquina
Resistente e Bile solubilidade negativa.
(O Grupo B geralmente são beta-hemoliticos, mas de 20-
30% pode não ter hemólise, importante na secreção
vaginal)
Grupo C F G: beta-hemolíticos, Bacitracina variável, teste de
CAMP negativo, PYR negativo, Bile esculina negativo,
crescimento em 6,5% NaCl negativo, Optoquina Resistente
e Bile solubilidade negativa.
Grupo D enterococcos: alfa, beta ou gama-hemolíticos,
Bacitracina resistente, teste de CAMP negativo, PYR
positivo, Bile esculina positiva, crescimento em 6,5% NaCl
positivo, Optoquina Resistente e Bile solubilidade negativa.
Grupo D não-enterococcos: alfa ou gama-hemolíticos,
Bacitracina resistente, teste de CAMP negativo, PYR
negativo, Bile esculina positiva, crescimento em 6,5% NaCl
negativo, Optoquina Resistente e Bile solubilidade
negativa.
Grupo viridans: alfa ou gama-hemolíticos, Bacitracina
variável, teste de CAMP negativo, PYR negativo, Bile
esculina variável, crescimento em 6,5% NaCl negativo
Optoquina Resistente e Bile solubilidade negativa.
Grupo Pneumococo: alfa-hemolíticos, Bacitracina variável,
teste de CAMP negativo, PYR negativo, Bile esculina
negativa, crescimento em 6,5% NaCl negativo Optoquina
sensível e Bile solubilidade positiva.
Cocos Gram positivos
↓
Inicialmente faz a catalase, se negativa, indica
Streptococcus, se a cultura apresentar beta-hemólise com
bacitracina sensível e PYR positivo é do grupo A. Se for
beta-hemólise com CAMP positivo, indica grupo B. Se for
beta-hemolise com bile esculina positiva, indica grupo D,
deve-se diferenciar os enterococcus que crescem em NaCl
6,5% e são PYR positivo dos não-enterococcus que não
crescem e são PYR negativo. E se for beta-hemólise e CULTURA DE OROFARINGE
sensível sulfametoxazol trimetoprim
Microrganismos geralmente patogênicos que podem
acometer a orofaringe.
Cocos Gram positivos
↓

OROFARINGE
Inicialmente faz a catalase, se negativa, indica
Streptococcus, se a cultura apresentar alfa ou gama- População transitória Normal
hemólise com bile esculina positiva, indica grupo D, deve-se ➔ Streptococcus α hemolíticos
diferenciar os enterococcus que crescem em NaCl 6,5% e ➔ Neisseria saprófitas
são PYR positivo dos não-enterococcus que não crescem e ➔ Staphylococcus coagulase negativa
são PYR negativo. Se a cultura apresentar alfa ou gama- ➔ Staphylococcus aureus (presente em pouco
hemólise com resistência a optoquina, indica Grupo quantidade geralmente, quando a imunidade baixa
viridans e se for sensível a optoquina, indica S. pode causar uma infecção)
pneumoniae. ➔ Haemophilus hemolyticus
➔ Dfiterióides
Algumas enterobactérias (transitório decorrente da dieta)
Anaeróbios (Bacterióides, Actinomyces)

Preparo do paciente para a coleta de secreção de

orofaringe
• Colher preferencialmente antes do desjejum e da higiene
oral.
• Caso não seja possível jejum mínimo de duas horas.

COLETA DE SECREÇÃO DE OROFARINGE

Solicitar ao paciente que incline a cabeça para trás e abra
bem a boca. Usar foco de luz.
A língua é suavemente pressionada com uma espátula para
que se possa visualizar as fossas tonsilares e a faringe
posterior;
Pedir ao paciente que faça um “ah” (levanta a úvula e evita
ânsias de vômitos);
Evitar tocar na língua e na mucosa bucal. Procurar o
material nas áreas com hiperemia próximas aos pontos de
supuração ou remover o pus ou a placa, coletando o
material abaixo da placa.
Coletar dois swabs, um para confecção imediata da lâmina
de bacterioscopia (para o Gram) e outro para o cultivo,
transportado em meio de transporte adequado (Stuart).
 - Meio de Loeffler: aumenta a formação de grânulos
metacromáticos.
Seletivo:
- Ágar sangue com telurito de potássio e cistina (CT) -
colônias negras.
- Meio de Tinsdale: forma um halo acastanhado (marrom).

CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE Incubação: 24-48 horas a 37°C.

Pesquisa para (Corynebacterium diphtheriae)

Características:
- Bacilos Gram-positivos agrupados em letras chinesas ou
paliçada;
- Relativamente resistentes, podendo suportar calor, frio e CULTURA DE OROFARINGE
ressecamento
- aeróbio
- imóvel
- Não capsulado,
- Não esporulado
- Pleomórfico
- Produtor da toxina diftérica.
-Toxicidade é atribuída à exotoxina
- Receptor para a toxina nas células nervosas e cardíacas
A coleta é feita com dois Swabs um será utilizado para
- Bactéria não tem poder invasivo(o problema é a toxina
coloração de Gram e outro colocado no meio de transporte
produzida)
adequado como o (Stuart). No laboratório segui-se a
coloração de Gram com uma das amostras, e a outras é
colocado em caldo BHI OU TSB, incubação de 2 – 6 h a 37oC.
Depois faz o semeio no ágar sangue, no manitol, no EMB e
no Sabouranud (para fungos, se solicitado). O EMB isola os
Gram negativos que cresceram, no sangue. E o manitol é
Forma uma camada na orofaringe
importante para estudar os Staphylococcus, sendo possível
Reservatório isolar o Staphylococcus aureus.
É o próprio doente ou portador, sendo este último mais Após o isolamento, segue com as provas de identificação, e
importante na disseminação do bacilo, pela sua maior para o antibiograma se necessário.
frequência na comunidade e por ser assintomático.
Período de incubação
Em geral de 1 a 6 dias, podendo ser mais longo (10 dias).
Modo de transmissão
• Contágio direto com doentes ou portadores através de
secreções de rinofaringe.Transmissão direta, através de
objetos contaminados pelas secreções de orofaringe ou de
lesões em outras localidades.

IDENTIFICAÇÃO
Meios de cultura
Não seletivo:
- Ágar sangue: pequena zona de hemólise
HEMOCULTURA

SANGUE→ (isento de qualquer tipo de micro-organismo) Antes era conhecida como septicemia ou infecção
generalizada, na verdade, trata-se de uma inflamação
CORRENTE CIRCULATÓRIA→(bactérias penetram ) generalizada do próprio organismo contra uma infecção
que pode estar localizada em qualquer órgão. A
BACTERIEMIA→ Bactérias viáveis no sangue circulante
inflamação que surge em locais infectados não é provocada
pela bactéria, mas sim pela resposta imunológica do corpo.
A BACTERIEMIA PODE TER ORIGEM:
O termo sepse refere-se à condição pela qual a resposta do
Intravascular (Primária)
organismo ao agente infeccioso se manifesta, por meio de
1. Entrada direta na corrente sanguínea, via agulhas sinais e sintomas da doença, como a síndrome da resposta
infusões contaminadas, cateteres ou outros dispositivos inflamatória sistêmica (SRIS), independente da presença ou
vasculares . ou tendo origem no próprio sistema como na não de hemocultura positiva.
endocardite bacteriana, fístulas arteriovenosas, flebites
Os sintomas são produzidos tanto por toxinas microbianas
supurativas.
como por citocinas˟ produzidas por células inflamatórias.
Extravascular (Secundária)
A sepse está tradicionalmente associada a bactérias Gram
2. Ocorre através de drenagem de pequenos vasos negativas. Entretanto, sabe-se que as bactérias Gram
sanguíneos ou linfáticos, seguindo para a corrente positivas também podem causar uma síndrome séptica.
circulatória como consequência de um foco de infecção
Após lesões ou infecções graves, a resposta exacerbada e
definido em outro sítio do organismo. • São a maioria dos
persistente de citocinas Th1 pode contribuir para lesões em
casos.
órgão- alvo, levando à insuficiência de múltiplos órgãos e à
morte.
PORTA DE ENTRADA MAIS COMUM INCLUINDO
ORIGEM COMUNITÁRIA E HOSPITALAR SÃO:
Dispositivos intravasculares (19%),
Trato geniturinário (17%),
Respiratório (12%), infecções cirúrgicas da pele (5%),
Trato gastrintestinal (5%),
trato biliar (4%),
Abscessos intra-abdominal (3%),
Mistura de sítios (8%) e sítios incertos (27%).
Essas infecções representam:

Na suspeita de sepse grave ou choque séptico

MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS ( BACTERIEMIA )
• Presença de bactérias na corrente sanguínea
Consequente a uma infecção intravascular, pneumonia,
abscesso hepático, etc ou apenas representar a liberação
transitória de bactérias no sangue, tal como ocorre após
escovação vigorosa dos dentes por uma pessoa normal.
MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS ( SEPSE )
• Bactérias ou seus produtos (toxinas) estão causando
danos no hospedeiro.
independente do foco infeccioso, antes mesmo da
administração da terapia antimicrobiana empírica, deve-se
coletar para hemocultura. Vale ressaltar que não se espera
os resultados para iniciar a antibioticoterapia, mas quando
eles chegam, analisa-se se o antibiótico de amplo espectro
utilizado cobre o microrganismo causador do quadro do
paciente.
CULTURAS DE SANGUE
↓
Pede-se cultura de sangue quando há SUSPEITA DE
BACTERIEMIA CLINICAMENTE SIGNIFICATIVA
A)Septicemia clássica
• Síndrome clássica de septicemia (calafrio, febre,
prostração)
b)Na suspeita de endocardite bacteriana
c) No diagnóstico de certas infecções envolvendo vários
sistemas tais como: febres entéricas (salmoneloses),
leptospirose, brucelose, e febre de origem desconhecida.
Sinais e sintomas de septicemia devem incluir febre ou
hipotermia, arrepios, hiperventilação e subseqüente
alcalose respiratória, lesão de pele, mudança no "status"
mental e diarreia.
• Manifestações mais sérias incluem:
– Choque séptico
– Coagulação intravascular disseminada
– Falência dos órgãos.
Importância: a mortalidade da septicemia em pacientes
hospitalizados é de 40%, e a cultura que possibilita a
detecção dos microrganismos causadores é importante
para o valor diagnóstico e repercussão no prognóstico.
(deve-se sempre a fazer hemocultura antes dos antibióticos
)
CLASSIFICAÇÃO (PADRÃO CLÍNICO) - BACTEREMIA
1.Transitórias - rápida com duração de alguns minutos a
poucas horas.
Ex. a) após manipulação de algum tecido infectado
(abscessos, furúnculos e celulite).
b) procedimentos cirúrgicos que envolve tecidos
contaminados ou colonizado (cavidade oral, cistoscopia,
endoscopia, histerectomia vaginal e desbridamento de
queimaduras).
c) infecções agudas como pneumonias, meningite,
osteomielite, artrites sépticas.
2. Intermitente – ocorre em intervalos variáveis de tempo
com o mesmo micro-organismo.
Ex. processos infecciosos relacionados a abscessos intra-
abdominais, pélvicos, hepáticos, prostáticos ou outros, que
geralmente são causas comum de febre de origem
indeterminada.
3. Contínuas ou persistente
Ex. a) característica de endocardite infecciosa aguda e
subaguda e outras infecções intra-vasculares. (buscar por
hiperemia ou edema local)
b) primeira semana da febre tifoide, brucelose ou
leptospirose.
4. A bacteriemia de escape ( “breakthrough”)
Ocorre mesmo enquanto o paciente esteja recebendo
antibioticoterapia sistêmica apropriada (micro-organismo
sensível).
A) Quando se dá no início da terapêutica, geralmente deve-
se a concentrações insuficientes do antimicrobiano
atingidas na corrente sanguínea.
Nas estafilococcias é comum haver escape nos primeiros
dias de tratamento, mesmo sob condições adequadas de
antibioticoterapia.
B) Os episódios de escape que ocorrem tardiamente
geralmente se dão por drenagem inadequada do foco
infeccioso ou por debilidade das defesas do hospedeiro.
Na maioria das vezes, as bacteriemias são causadas por um
único micro-organismo. Contudo, em algumas situações,
caracterizam-se por etiologia polimicrobiana.
MICRO-ORGANISMOS CONTAMINANTES
FREQUENTES DE HEMOCULTURAS
Staphylococcus coagulase negativo (SCN)
Corynebacterium sp
Bacillus sp (exceto Bacillus anthracis)
Proprionibacterium acnes
Clostridium perfringens
Micrococcus
MICRO-ORGANISMOS CAUSADORES DE
BACTERIEMIA VERDADEIRA (> 90%
ESPECIFICIDADE)
Staphylococcus aureus
Streptococcus pneumoniae
Escherichia coli e outras enterobactérias
Pseudomonas aeruginosa
➔ Podem também causar bacteriemia
Streptococcus grupo viridans,
Enterococcus spp. e Staphylococcus coagulase negativo
(SCN) representam em média respectivamente 38%, 78% e
15% de bacteriemias verdadeiras.
FATORES QUE CONTRIBUEM PARA O INÍCIO DE
UMA INFECÇÃO DA CORRENTE CIRCULATÓRIA
Agentes imunossupressores (corticoides, quimioterápicos,
drogas citotóxicas).
Uso de antibióticos de largo espectro que suprime a
microbiota normal.
Procedimentos invasivos (cateteres e procedimentos
endoscópicos).
Procedimentos cirúrgicos extensivos.
Prolongada sobrevida de pacientes severamente doentes.
O risco é maior nas faixas etárias extremas e nos pacientes
portadores de doenças hematológicas, neoplasias, diabetes
mellitus, insuficiência renal em diálise, cirrose hepática,
imunodepressão e grandes queimaduras.
FRASCOS COM O MEIO DE CULTURA
Os caldos de hemocultura podem ser compostos por
diferentes opções de meios: caldo tríptico de soja, caldo
columbia, caldo infusão de cérebro-coração e caldo
tioglicolato.
As diferentes combinações de meios contém em sua
composição Polianetol Sulfonato de Sódio, vácuo e gás
carbônico em concentrações adequadas.
Quando for fazer a coleta fazer assepsia no braço ou região
da pulsão, e na tampa do frasco de coleta. Evitando
contaminação, lembrando que são meios muito ricos.
Esse primeiro meio é o mais usado na rotina;
Sistema Hemobac Trifásico Probac do Brasil
O sistema é composto por um laminocultivo com 3 fases
acoplado a parte superior de um recipiente contendo um
caldo enriquecido. Os frascos acoplados são incubados em
estufa própria que faz a inversão periódica do caldo sobre o
laminocultivo.
• Fase larga agar chocolate
• Fase dupla agar McConkey e agar Sabouraud
• Indicador: a viragem para rosa indica a presença
de CO2 produzido pelo microrganismo.
Sistema de coleta fechado
Todos os frascos BACTEC TM não necessitam de ventilação
e permitem o uso de sistema de coleta fechada. O emprego
do sistema de coleta fechada para hemocultura também
reduz a probabilidade de contaminação da amostra.
Detecção da fluorescência emitida por um sensor nos
frascos com meios de cultura. O sistema é de ultra
sensibilidade e monitora, em intervalos de 10 minutos, as
amostras de hemocultura, acelerando o tempo de detecção
e fornecendo alarmes tanto visuais quanto sonoros, no
caso de amostras positivas.
Sistema de Hemocultura Signal
Meio especialmente elaborado (Patente Européia 0124193
Al) com nutrientes para propiciar o desenvolvimento o
crescimento de organismos aeróbios, anaeróbios e
microaerófilos, formando com o metabolismo celular uma
pressão positiva.
A detecção dessa pressão é feita através
do dispositivo indicador de crescimento,
que é conectado ao frasco de meio após
a adição da amostra de sangue. A
pressão positiva no frasco desloca uma
quantidade de mistura sangue/caldo para
o dispositivo como um SINAL visual.
SISTEMAS AUTOMATIZADOS
• BacT/Alert Organon
• Bactec Becton Dickinson
• Sistema ESP DIFCO
ANTISSEPSIA DA PELE PARA A COLETA
A antissepsia adequada da pele é parte fundamental do
processo e é o fator que determina a probabilidade de uma
hemocultura positiva ser considerada contaminação ou
infecção.
1. Após a palpação, a pele é tratada com tintura de iodo a 1
ou 2%, clorexidine alcoólico 0,5% ou polivinil Pirrolidona
Iodo (PVPI) a 10%;
2. Limpar com álcool a 70% para remoção do excesso de
iodo.
3. As tampas dos frascos com meio de cultura devem seguir
a mesma orientação acima.
4. O sangue deve ser imediatamente colocado nos frascos e
os frascos enviados imediatamente ao laboratório.
A COLETA DEVE SER FEITA ANTES DO PICO FEBRIL, POIS A
BACTERIEMIA PRECEDE A FEBRE EM CERCA DE 1 HORA.
Coleta do material
1. Coletar no mínimo 2 e no máximo 4 amostras o mais
próximo possível do episódio febril, não coletar no pico
febril.
2. As amostras são coletadas por punção venosa, uma após
a outra em locais diferentes ou em intervalos de 20-60
minutos entre as coletas. 5 a 10 mL em adultos 3 a 5 ou 1a
4mL em criança
3. Proporção 1:10 sangue/meio de cultura (BHI, TSB,
Columbia e tioglicolato)
Obs.: pacientes em uso de altas doses de antibióticos, é
melhor a recuperação de micro-organismos se utilizarmos a
proporção de 1:5 sangue/caldo.
Em geral, nas infecções agudas, recomenda-se a coleta de
duas a três amostras (dois frascos por punção/amostra) em
curto espaço de tempo, ou seja, sequenciais ou dentro de 1
hora. A coleta de hemoculturas em intervalos maiores de 1
a 2 horas entre as amostras pode ser recomendada para
monitorar ou documentar bacteriemia contínua em
pacientes com suspeita de endocardite ou infecção
endovascular associada a dispositivos invasivos (ex.: cateter
vascular)
Informações importantes:
• Nunca colher em seringa com heparina para
posteriormente colocar no frasco (a heparina inibe
o crescimento de algumas bactérias).
• Evitar coletar de cateter se houver acesso venoso.
• Amostras coletadas no pico febril fornecem em
sua maioria resultados negativos.
• Cada mililitro de sangue a mais coletado aumenta
a positividade em média 3%.
• Em pacientes adultos é recomendado no mínimo 2
ou no máximo 4 amostras de SANGUE.
• Em crianças é recomendado 2 amostras de
SANGUE.
• Não se recomenda a troca de agulhas entre a
punção de coleta e distribuição do sangue nos
frascos de hemocultura.
• O volume ideal corresponde a 10% do volume
total do frasco de coleta.
ANTICOAGULANTE
POLIANETOL SULFONATO DE SÓDIO (SPS) 0,025 a 0,05 mL
Importante seu uso, pois:
--Ação inibidora para lisozimas.
--Certa ação inibidora frente a determinadas concentrações
de aminoglicosídeos e polimixinas.
--Pode ter alguma ação inibidora para algumas frações do
complemento.
--Inibe parcialmente a fagocitose.
TRANSPORTE
Nunca refrigerar o frasco;
Manter o frasco em temperatura ambiente e encaminhar o
mais rápido possível para o laboratório.
CULTIVO DA AMOSTRA
1. Mínimo de 7 dias de incubação a 35o C.
2. Realizar pelo menos 3 subcultivos durante este prazo.
a) Primeiro subcultivo com 24 horas
b) Segundo subcultivo com 48 horas
c) Terceiro com 7 dias
(logo que o frasco chegar ao laboratório colocá-lo
rapidamente na estufa, no tempo recomendado de
subcultivo tomar os cuidados com limpeza do tubo antes de
coletar o material com a seringa e agulha )
3. Observação diária (manhã e tarde) dos frascos
procurando evidências macroscópicas de crescimento
como: hemólise, turbidez, produção de gás, película de
crescimento etc.
→ Com o crescimento, deve-se identificar e fazer o
antibiograma.
4. Fazer antibiograma
→ só se libera hemocultura negativa após o subcultivo
realizado no sétimo dia, com a visualização negativa no
oitavo dia.
Obs: Para a semeadura colocar uma agulha na tampa
emborrachada do frasco e gotejar próximo à chama.
Semear e incubar cada placa por 24/48h em estufa 35oC.
ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO
1. Meios de cultura utilizados para realização dos
subcultivos.
--Agar Sangue(meio rico que permitirá o crescimento
amplo)
--E M B (Inibe os Gram positivos)
--Agar chocolate enriquecido (também cresce tudo)
--Agar thayer-Martin (para suspeita de Neisseria)
2. Realizar a identificação segundo esquema de Gram
positivo e Gram negativo.
Se o medido pedir pesquisa para fungos(utilizar o meio
sabouraud), se pedir pesquisa para anaeróbios (usar meio
tioglicolato), se pedir pesquisa para aeróbios (usar meio
BHI)
CULTURA DE PONTA DE CATETER
Quando a colonização de um cateter venoso puder ser
responsabilizada como o foco primário da septicemia a
extremidade distal do mesmo deve ser cultivada.
(apresentando a margem do cateter hiperemia, edema e
dor- sinais de inflamação)
De acordo com a metodologia de Maki um resultado de
cultura acima de 15 unidades formadoras de colônias deve
ser considerado positivo.
Metodologia
Deve ser feita a antissepsia com solução de iodo a a 1% a
2%, clorexidine alcoólico 0,5% ou PVPI (Polivinil Pirrolidona
Iodo) e o excesso removido com álcool a 70%.
A composição química e citológica do LCR se altera com
inflamações cerebrais ou de meninges, isto é, encefalite ou
meningite.
Nas meningites bacterianas o líquor se apresentar com
aspecto turvo, aumento no número de polimorfonucleares
(neutrófilos) (>1.000/mL), aumento da concentração de
proteínas (>100 mg/mL) e hipoglicorraquia.

Um segmento distal de Aproximadamente 5 cm do cateter
é assepticamente cortado, colocado em frasco esteril e
seco, levado ao laboratório imediatamente.
O segmento é rolado ( 5 a 6 vezes) delicadamente sobre a
superfície de uma placa de ágar sangue, com o auxílio de
uma pinça.
A produção do LCR é diária, ao redor de 500 mL/dia.
O LCR é responsável pelo fornecimento de nutrientes,
excreção de produtos do metabolismo, manutenção da
homeostase e amortecimento do SNC.
SINAIS COMUM DE ALTERAÇÃO DO LCR

A placa deve ser incubada durante 18-24 horas a 35 graus. Sinais gerais: intensa dor de cabeça, náuseas, vômitos em
jato e febre e rigidez de nuca.
15 ou mais colônias é correlacionada com o fato do
cateter constituir a fonte de infecção. Segue-se para fazer esses testes:
As colônias isoladas devem ser identificas de acordo com os
sistemas de identificações.
Realizar o antibiograma.

CULTURA DO LÍQUIDO CÉFALO RAQUIDIANO

(LCR)

O QUE É O LCR?

O líquor (LCR), também conhecido como líquido

cefalorraquidiano, é um fluído corporal transparente,
incolor e límpido.(funciona como um amortecedor.)

É produzido nos ventrículos cerebrais do nosso Sistema

Nervoso Central (SNC) e ocupa um espaço no cérebro e na AGENTES ETIOLÓGICOS DAS MENINGITES AGUDAS
medula espinhal. POR BACTÉRIAS E FUNGOS

LCR NORMAL ( Estéril e Aspecto aquoso e transparente)

LCR PATOLÓGICO (Hemorrágico; Ligeiramente turvo;

Purulento, turvo ou xantocrômico)

IMPORTÂNCIA
O exame do LCR é um passo indispensável no diagnóstico
da meningite bacteriana ou por fungos.
É um transudato.
Na faixa do crianças os adultos jovens e adultos (N. MICRO-ORGANISMOS MAIS ENCONTRADOS
meningitidis) é amis frequente.

PUNÇÃO NEISSERIA MENINGITIDIS

IDENTIFICAÇÃO PRIMÁRIA
Não há preparo específico para o exame do LCR. O paciente
pode alimentar-se normalmente e não deve estar fazendo Diplococos Gram negativos intra celular facultativo.
uso de medicação anticoagulante ou de drogas que
interfiram na coagulação sanguínea. (L3 –L4)

PUNÇÃO LOMBAR: Na execução o paciente é deitado e

colocado de lado, com o pescoço dobrado para baixo e as
pernas encolhidas (posição fetal) ou também pode ser feito
sentado com a cabeça abaixada. Identificação

Depois de introduzida a agulha, é preciso deixar que o Oxidade positiva.

líquido saia naturalmente, gota a gota, para recipientes Degradação de glicose e maltose no meio CTA (Cystine
próprios (frasco estéril SEM anticoagulante). Tripticase agar).

Pode haver redução da pressão intracraniana que gera dor
de cabeça quando de pé. O simples fato de permanecer
deitado com a cabeceira baixa após o exame por algumas
horas é o suficiente para evitar essa complicação.
Crescimento em agar chocolate.
Incubação a 35 - 37C em atmosfera de CO2 e umidade.
CULTURA LCR-- Identificação Neisseria menigitidis

Cuidados especiais
Após antissepsia correta da pele realizar a coleta em dois
tubos limpos e estéreis, bem vedados com tampa de
borracha ou tubo de rosca.
Um tubo destina-se aos exames microbiológicos e o outro à
citoquímica. Caso a coleta seja permitida apenas para um
tubo, o laboratório de microbiologia deve ser o primeiro a
manipula-lo.
O LCR deve ser enviado ao Laboratório de bacteriologia
imediatamente após a coleta, e mantido à temperatura Para identificação da Neisseria meningitidis: faz a oxidase
ambiente (ou na estufa a 35oC). Nunca refrigerar o LCR que é positiva, coloração de Gram, com diplococos Gram
quando este se destinar à cultura. negativos e reniforme, e degradação de glicose e maltose
no meio CTA.
Apenas o LCR para estudos virais deve ser refrigerado ou
congelado.
HAEMOPHYLUS INFLUENZAE
Centrifugar em tubo estéril e usar o sedimento.
IDENTIFICAÇÃO PRIMÁRIA: Cocobacilos ou bacilos Gram
A semeadura deve ser feita logo após a centrifugação.
negativos pleomórficos.

COLORAÇÃO DE GRAM
Após misturar completamente todo o sedimento, uma
alçada é colocada em uma lâmina nova desengordurada.
Aplicar uma segunda alçada sobre a primeira já seca. Isso
aumentará a concentração do liquor.
O sedimento nunca deverá ser espalhado sobre a superfície Identificação
da lâmina, já que este procedimento aumentará as
Imóveis, Oxidase positiva
dificuldades de visualizar pequenos números de micro-
organismos. Requerem os fatores: X (hemina) e V (NAD)
Fermentação de glicose, sacarose, lactose, xilose e manose
Presença de catalase
Crescimento em ágar chocolate (sangue de cavalo ou
coelho)
Crescimento em ágar HTM (antibiograma)
Pouco crescido em ágar sangue e não crescem em EMB ou
McConkey

PROVA DO SATELITISMO

Meio Agar sangue, se faz uma estria do staphylococcus

aureus Beta lisina, e faz perpendicularmente a esta
primeira estria, as estrias da bactéria em teste. Se houver
crescimento é H. influenzae, ocorrendo uma diminuição da
colônia a medida que se afasta da primeira estria de S.
aureus.
Se for Haemophilus influenzae: o crescimento ocorre entre
os discos dos fatores X e V.
Se for Haemophilus parainfluenzae: o crescimento é ao
redor do fator V.
Se for Haemophilus ducrey: o crescimento é ao redor do
fator X.

LISTERIA MONOCYTOGENES
IDENTIFICAÇÃO PRIMÁRIA: Bacilo Gram positivo,
pleomórfico. Intra celular facultativo

Fazer uma estria de Staphylococcus aureus;Colônias

minúsculas em gota de orvalho

IDENTIFICAÇÃO
Fermentação de ácido a partir da glicose
Hidrolise da esculina positiva
Hemólise beta.
CAMP positivo.
A diminuição do tamanho das colônias corresponde a uma
Motilidade típica em forma de guarda chuva.
diminuição do fator V (NAD) produzido pelos
Staphylococcus aureus. Identificação de Listeria monocytogenes

O fator X, ou hematina é fornecido pelos eritrócitos de

carneiro lisados circundando a estria do Staphylococcus
aureus.

Esses processos fornecem os dois fatores importante para

seu crescimento, mas a medida que se afasta da estria essa
disponibilidade diminui, assim como as colônias.

→ PROVA DE UTILIZAÇÃO DOS FATORES X (HEMINA) E V

(NAD)

Se semeia a placa com o microrganismo, coloca os discos

com os fatores importante para o desenvolvimento do H.
influenzae. Esse teste ajuda a diferenciar entre as espécies
de Haemophylus.
 Identificação: bile solubilidade positiva, alfa-hemolise e
optoquina sensível;
Kits comerciais

API-Listeria test (espécie)

API Coryne System ( gênero)

Sistema Automatizado

Vitek 2

Biologia molecular
Identificação: CAMP positivo, catalase negativa e Beta-
hemólise;
MEIO CROMOGÊNICO DE IDENTIFICAÇÃO
Usa o cromógeno X-glicosídeo para identificação presuntiva CULTURA DE LCR
de Listeria spp. Este cromogenio é clivada por beta-
glicosidase, que é comum a todas as espécies de Listeria .
Quando clivado forma um composto que em presença do
oxigênio atmosférico é oxidado e convertido no corante
azul.

Para cultura de LCR, o LCRdeve ser centrifugado, fazer

COCOS GRAM POSITIVOS (STREPTOCOCCUS,
PNEUMOCOCCUS E STAPHYLOCOCCUS)
coloração de Gram e Ziehl-Neelsen. Cultivar em meio ágar
sangue, EMB e Agar chocolate enriquecido, depois segue
para o esquema de identificação, caso positivo fazer o
antibiograma.
ESQUEMA DE IDENTIFICAÇÃO DE COCOS GRAM
POSITIVOS

ESQUEMA DE IDENTIFICAÇÃO DE NÃO

FERMENTADORES
ESQUEMA DE IDENTIFICAÇÃO DE
ENTEROBACTERIAS BATERIA MÍNIMA
TSI, SIM (SULFETO-INDOL-MOTILIDADEDE), CITRATO,
UREIA, LISINA, ORNITINA, FENILALANINA